凍干粉針劑等非最終滅菌的無(wú)菌制劑檢查要點(diǎn)

1、 凍干粉針劑等非最終滅菌的無(wú)菌制劑檢查要點(diǎn)凍干粉針劑等非最終滅菌的無(wú)菌制劑檢查要點(diǎn)防止微生物、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素、微粒污染廠房設(shè)備生產(chǎn)工藝無(wú)菌檢查物料和中間產(chǎn)品人員各個(gè)階段（包括滅菌前的各階段）都必須采取預(yù)防措施，以盡可能降低污染一、廠房廠房布局和建造潔凈度級(jí)別的標(biāo)準(zhǔn)關(guān)鍵操作區(qū)的空氣流向潔凈區(qū)的壓差潔凈區(qū)的清潔和消毒環(huán)境監(jiān)控（包括動(dòng)態(tài)監(jiān)控）HVAC系統(tǒng)的維護(hù)和監(jiān)控二、設(shè)備適用于產(chǎn)品的生產(chǎn)、清潔、消毒或滅菌盡可能采用密閉系統(tǒng)合理布置和安裝關(guān)鍵參數(shù)控制和記錄儀表的校準(zhǔn)設(shè)備的確認(rèn)、維護(hù)和維修設(shè)備的清潔、消毒或滅菌共用設(shè)備應(yīng)有防止交叉污染的措施設(shè)備應(yīng)在確認(rèn)的范圍內(nèi)使用三、工藝用水水處理設(shè)施及其分配系統(tǒng)的

2、設(shè)計(jì)、安裝和維護(hù)應(yīng)能確保供水達(dá)到適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。水系統(tǒng)的運(yùn)行不應(yīng)超越其設(shè)計(jì)能力注射用水的生產(chǎn)、貯存和分配方式應(yīng)能防止微生物生長(zhǎng)水源、水處理設(shè)施及水的化學(xué)和生物學(xué)污染狀況應(yīng)定期監(jiān)測(cè)，必要時(shí)還應(yīng)監(jiān)測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素。監(jiān)測(cè)結(jié)果以及所采取糾偏措施的記錄應(yīng)予歸檔四、生產(chǎn)工藝1、配制工序操作區(qū)的設(shè)置和潔凈度級(jí)別配制設(shè)備的選型配料處方稱量操作稱量記錄防止污染和交叉污染的措施2、過(guò)濾工序過(guò)濾器的安裝位置過(guò)濾器的相關(guān)信息過(guò)濾器完整性試驗(yàn)的方法過(guò)濾前后的完整性試驗(yàn)和記錄過(guò)濾器的更換、消毒或滅菌發(fā)現(xiàn)過(guò)濾器出問(wèn)題后的處理3、無(wú)菌灌裝工序關(guān)鍵操作區(qū)和生產(chǎn)設(shè)備清潔、消毒或滅菌動(dòng)態(tài)環(huán)境的監(jiān)控?zé)o菌灌裝用各類物料、器具的準(zhǔn)備或滅菌處

3、理生產(chǎn)用氣體人員的無(wú)菌操作裝量控制培養(yǎng)基模擬灌裝驗(yàn)證無(wú)菌檢驗(yàn)樣品的取樣檢查等其他活動(dòng)不能影響正常的生產(chǎn)4、凍干工序凍干產(chǎn)品的包裝形式、裝量?jī)龈僧a(chǎn)品的裝載方式和裝載數(shù)量?jī)龈晒に嚭颓€凍干工藝的驗(yàn)證凍干產(chǎn)品進(jìn)出冷凍干燥室的操作凍干機(jī)的滅菌凍干機(jī)關(guān)鍵參數(shù)控制和記錄儀表的校準(zhǔn)管路的連接凍干的記錄五、無(wú)菌檢驗(yàn)無(wú)菌室及環(huán)境監(jiān)控取樣計(jì)劃取樣量和檢驗(yàn)量培養(yǎng)基和菌種管理無(wú)菌檢驗(yàn)方法樣品表面消毒處理陽(yáng)性檢驗(yàn)結(jié)果的調(diào)查和處理六、物料物料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物料的來(lái)源物料的取樣和檢驗(yàn)物料的供應(yīng)商審計(jì)物料供應(yīng)商的變更七、中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制應(yīng)特別注意監(jiān)控中間產(chǎn)品微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素污染情況已配制的中間產(chǎn)品含量檢測(cè)極為關(guān)鍵澄清度檢查可

4、見(jiàn)異物檢查應(yīng)100檢查可制備含有可見(jiàn)異物的標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)操作人員進(jìn)行培訓(xùn)八、人員人員的培訓(xùn)人員的衛(wèi)生習(xí)慣體檢檔案和匯總潔凈區(qū)內(nèi)人員的工作服及穿著無(wú)菌操作粉針車間凍干粉針劑培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝模擬試驗(yàn)是對(duì)粉針車間使用F2000/12/600型灌裝機(jī)在局部百級(jí)工作環(huán)境中進(jìn)行凍干粉針劑灌裝過(guò)程中所采用的各種方法和各種規(guī)程防止微生物污染的水平可以達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的能力。通過(guò)檢查確認(rèn)找出粉針車間進(jìn)行凍干粉針劑灌裝作業(yè)過(guò)程中的控制要求，為今后對(duì)粉針車間進(jìn)行凍干粉針劑灌裝作業(yè)管理確定依據(jù)。凍干粉針劑培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案方案制訂： 制訂日期：方案批準(zhǔn)： 批準(zhǔn)日期：目 錄1.概括11.1目的 11.2范圍

5、11.3責(zé)任 12.確定可接受的合格標(biāo)23.培養(yǎng)基性能測(cè)試23.1微生物生長(zhǎng)性能試驗(yàn) 23.2培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn) 24 模擬分裝用無(wú)菌粉末24.1模擬分裝用無(wú)菌粉末應(yīng)具有的特性 24.2 無(wú)菌性試驗(yàn)34.3 抑菌性試驗(yàn)34.4 溶解性試驗(yàn)35 模擬分裝過(guò)程操作規(guī)程及操作人員控制36 操作過(guò)程及無(wú)菌環(huán)境控制與監(jiān)測(cè)46.1 模擬分裝使用西林瓶及膠塞無(wú)菌性檢測(cè)46.2 微生物控制與監(jiān)測(cè)46.3 塵埃粒子監(jiān)測(cè)57 取樣計(jì)劃及取樣點(diǎn)57.1 取樣計(jì)劃57.2 取樣點(diǎn)68 模擬分裝68.1 無(wú)菌粉針劑模擬分裝方法68.2 液體培養(yǎng)基制備及進(jìn)入無(wú)菌分裝區(qū)方法68.3 液體培養(yǎng)基分裝工具的選用及處理使用方法68

6、.4 無(wú)菌粉針劑模擬分裝試驗(yàn)78.5 液體培養(yǎng)基分裝79 微生物培養(yǎng)79.1 陰性對(duì)照79.2 陽(yáng)性對(duì)照79.3 試驗(yàn)樣品培養(yǎng)710 試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)811 驗(yàn)證制度及再驗(yàn)證時(shí)間安排812 確認(rèn)方案執(zhí)行日期91、概括 凍干粉針劑培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝模擬試驗(yàn)是在其他各個(gè)系統(tǒng)（諸如滅菌系統(tǒng)、公用系統(tǒng)、無(wú)菌環(huán)境保持系統(tǒng)、設(shè)備驗(yàn)證、設(shè)備清洗過(guò)程驗(yàn)證等）驗(yàn)證工作完成的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。采用培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝模擬試驗(yàn)方法進(jìn)行。1.1、目的用和實(shí)際生產(chǎn)工藝相同的條件與操作方法（包括生產(chǎn)環(huán)境），向凍干制品容器（西林瓶）內(nèi)灌裝經(jīng)除菌過(guò)濾器過(guò)濾的培養(yǎng)基，然后將此模擬制品在適當(dāng)條件下培養(yǎng)，以確認(rèn)工藝過(guò)程的可靠性。證明在凍干粉針劑灌裝

7、過(guò)程中所采用的各種方法和各種規(guī)程以防止微生物污染的水平達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的能力，或提供保證所生產(chǎn)產(chǎn)品的無(wú)菌性的可信限度達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的證據(jù)。1.2、范圍此驗(yàn)證方案適用于粉針車間凍干粉針劑灌裝過(guò)程驗(yàn)證。1.3、責(zé)任生產(chǎn)技術(shù)部、質(zhì)量保證部、QC化驗(yàn)室、粉針車間、設(shè)備部負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的執(zhí)行，主要工作內(nèi)容如下：、編訂及實(shí)施驗(yàn)證方案；、實(shí)施確認(rèn)并提供確認(rèn)資料；、匯編測(cè)試資料于最終報(bào)告內(nèi)；、協(xié)調(diào)參與驗(yàn)證過(guò)程的人員和部門，確保驗(yàn)證的各項(xiàng)要求；、將成功的結(jié)果及分裝過(guò)程的需求規(guī)范化，并制定相關(guān)文件待核準(zhǔn)下發(fā)。2、確定可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)警戒限：可信限為95%時(shí)污染概率大于0.05%；合格限：可信限為95%時(shí)污

8、染概率小于0.1%。分裝量與污染控制數(shù)關(guān)系表模擬分裝數(shù)量/瓶 污染控制數(shù)量/瓶 模擬分裝數(shù)量/瓶 污染控制數(shù)量/瓶30004742 0 47436294 小于162957751 小于2 77529151 小于33、培養(yǎng)基性能測(cè)試 模擬分裝試驗(yàn)采用胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基，通過(guò)下述試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基微生物生長(zhǎng)性能進(jìn)行確認(rèn)。首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備培養(yǎng)基并滅菌后備用。3.1 微生物生長(zhǎng)性能試驗(yàn)將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支試管中，在一半數(shù)量的試管中接種枯草桿菌，接種量為100CFU；在另一半數(shù)量的試管中接種白色念珠菌，接種量為100CFU。接種后蓋塞、封口，將接種有枯草桿菌的試管放于3035下培養(yǎng)7天，將

9、接種有白色念珠菌的試管放于2025下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少有50%以上接種的各試管的培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長(zhǎng)。3.2 培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn)將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支無(wú)菌試管中，蓋塞、封口。其中50支試管放于3035下培養(yǎng)7天，同時(shí)將另外50支試管放于2025下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)各試管培養(yǎng)基中應(yīng)無(wú)任何微生物生長(zhǎng)。4、模擬分裝過(guò)程操作規(guī)程及操作人員控制4.1、模擬分裝試驗(yàn)中使用的西林瓶和膠塞的清洗、滅菌，分裝設(shè)備的清洗、消毒，與產(chǎn)品接觸的分裝設(shè)備部件的清洗、滅菌、安裝過(guò)程必須遵循與實(shí)際生產(chǎn)操作相同的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。4.2、灌裝機(jī)灌裝速度保持與正常凍干粉針劑灌裝及半壓膠塞生產(chǎn)時(shí)的速度相

10、同。4.3、所有參加模擬試驗(yàn)的操作人員均應(yīng)經(jīng)過(guò)GMP、無(wú)菌操作、無(wú)菌更衣程序技術(shù)等相關(guān)知識(shí)的培訓(xùn)并經(jīng)考核合格。4.4、參加模擬試驗(yàn)的操作人員數(shù)及人員構(gòu)成應(yīng)嚴(yán)格控制，非規(guī)定的驗(yàn)證小組成員嚴(yán)禁在模擬試驗(yàn)過(guò)程中進(jìn)入模擬試驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)，模擬試驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)人員數(shù)不得超過(guò)5人，人員的進(jìn)入及退出應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作程序，減少不必要的人員進(jìn)入及退出次數(shù)?？蛇M(jìn)入模擬試驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)的人員名單如下：部門 姓名 部門 姓名設(shè)備部 質(zhì)量保證部 生產(chǎn)技術(shù)部 QC化驗(yàn)室 QC化驗(yàn)室 粉針車間 QC化驗(yàn)室 粉針車間 粉針車間 粉針車間 粉針車間 粉針車間 5、操作過(guò)程及無(wú)菌環(huán)境控制與監(jiān)測(cè) 進(jìn)行模擬試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)以下各項(xiàng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。5.1、模擬試驗(yàn)

11、使用西林瓶及膠塞無(wú)菌性檢測(cè)： 按第6條取樣計(jì)劃的規(guī)定要求，對(duì)模擬試驗(yàn)使用的西林瓶及膠塞進(jìn)行取樣，檢測(cè)其無(wú)菌性，合格標(biāo)準(zhǔn)為各樣品不得存在無(wú)菌性不合格情況。5.2、微生物控制與監(jiān)測(cè)：、在模擬試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)操作人員的無(wú)菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位的微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。其取樣方法、取樣頻率、取樣要求、取樣點(diǎn)分布見(jiàn)第6條取樣計(jì)劃。合格標(biāo)準(zhǔn)：手套全部檢出菌數(shù)2個(gè)、霉菌1個(gè)；一個(gè)操作人員雙臂、前胸的3個(gè)取樣點(diǎn)檢出菌數(shù)之和10個(gè)。、對(duì)無(wú)菌區(qū)墻壁、門、設(shè)備以及操作人員可能接觸的各種表面進(jìn)行無(wú)菌程度檢驗(yàn)。其取樣方法、取樣點(diǎn)、取樣頻率見(jiàn)第6條取樣計(jì)劃。在進(jìn)行取樣時(shí)其取樣面積應(yīng)保持在25cm2。合格標(biāo)準(zhǔn)：局部百

12、級(jí)區(qū)全部檢出菌數(shù)3個(gè)、霉菌1個(gè)；萬(wàn)級(jí)區(qū)全部檢出菌數(shù)10個(gè)、霉菌2個(gè)，地面檢出菌數(shù)25個(gè)、霉菌3個(gè)。、對(duì)空氣中微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，其取樣方法、取樣點(diǎn)、取樣頻率見(jiàn)第6條取樣計(jì)劃。合格標(biāo)準(zhǔn)：局部百級(jí)區(qū)全部檢出菌數(shù)1個(gè)；萬(wàn)級(jí)區(qū)全部檢出菌數(shù)10個(gè)、霉菌3個(gè)；、微生物數(shù)量監(jiān)測(cè)試驗(yàn)所采用的培養(yǎng)基應(yīng)為經(jīng)過(guò)無(wú)菌及微生物生長(zhǎng)性能檢驗(yàn)合格的培養(yǎng)基。、污染調(diào)查、微生物鑒別方法、污染發(fā)生時(shí)應(yīng)采取的措施執(zhí)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。5.3塵埃粒子監(jiān)測(cè) 按第6條取樣計(jì)劃的規(guī)定要求，對(duì)灌裝室進(jìn)行空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)，其監(jiān)測(cè)結(jié)果應(yīng)能證明關(guān)鍵區(qū)域空氣質(zhì)量達(dá)到百級(jí)潔凈區(qū)的空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。6、取樣計(jì)劃及取樣點(diǎn)6.1取樣計(jì)劃：監(jiān)測(cè)項(xiàng)目 取樣方法 取樣頻

13、率 取樣要求模擬試驗(yàn)西林瓶無(wú)菌檢查 隨機(jī)取樣 每灌裝500瓶取樣一次 每次取樣10支模擬試驗(yàn)使用膠塞無(wú)菌檢查 隨機(jī)取樣 每灌裝500瓶取樣一次 每次取樣10枚操作人員無(wú)菌性檢查 棉簽擦拭法 模擬試驗(yàn)開(kāi)始前，試驗(yàn)進(jìn)行一半時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)束后，分別對(duì)操作人員進(jìn)行取樣監(jiān)測(cè) 取樣時(shí)，被取樣的操作人員應(yīng)離開(kāi)分裝機(jī)，在灌裝室的一角將雙臂平伸，靜止不動(dòng)，取樣人員按棉簽擦拭取樣法在最短時(shí)間內(nèi)取樣。每次對(duì)同一操作人員進(jìn)行取樣監(jiān)測(cè)時(shí)，其取樣點(diǎn)應(yīng)不相同無(wú)菌灌裝區(qū)無(wú)菌性檢查 棉簽擦拭法 模擬試驗(yàn)開(kāi)始前，試驗(yàn)進(jìn)行一半時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)束后，分別根據(jù)取樣點(diǎn)要求對(duì)無(wú)菌區(qū)進(jìn)行取樣監(jiān)測(cè) 根據(jù)取樣點(diǎn)要求取樣，取樣面積固定，每次取樣面積為2

14、5cm2。每次應(yīng)選擇不同位置取樣，其重點(diǎn)為操作者可能接觸的各種表面?？諝馕⑸飻?shù)量監(jiān)測(cè) 沉降平皿法 每小時(shí)取樣一次 根據(jù)取樣點(diǎn)分布圖布置培養(yǎng)皿，各取樣點(diǎn)每小時(shí)更換取樣皿進(jìn)行檢測(cè)。灌裝機(jī)附近設(shè)置四個(gè)以上的取樣平皿連續(xù)暴露取樣。另有一個(gè)平皿應(yīng)放置于微生物監(jiān)測(cè)室情況最差的部位。 浮游菌采樣 每30分鐘監(jiān)測(cè)一次 取樣操作時(shí)應(yīng)由專人進(jìn)行塵埃粒子監(jiān)測(cè) 粒子計(jì)數(shù)器 每30分鐘監(jiān)測(cè)一次 監(jiān)測(cè)應(yīng)由專人按標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行6.2 取樣點(diǎn)：、操作人員無(wú)菌性檢查取樣點(diǎn)：操作人員的無(wú)菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位。、無(wú)菌灌裝區(qū)無(wú)菌性檢查取樣點(diǎn)：其取樣重點(diǎn)為無(wú)菌灌裝區(qū)內(nèi)墻壁、門、設(shè)備表面以及操作人員可能接觸的各種表面。

15、每次取樣應(yīng)包括：一側(cè)內(nèi)墻壁，無(wú)菌灌裝區(qū)內(nèi)門把手，膠塞清洗機(jī)開(kāi)門螺旋，灌裝機(jī)上塞料斗，西林瓶滅菌烘干隧道出口處理瓶轉(zhuǎn)盤，灌裝機(jī)控制面板，物料周轉(zhuǎn)桶、周轉(zhuǎn)托盤等處。、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測(cè)沉降平皿法取樣點(diǎn)：取樣點(diǎn)見(jiàn)附件凍干粉針劑培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝模擬試驗(yàn)空氣微生物監(jiān)測(cè)沉降平皿取樣點(diǎn)分布圖。、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測(cè)浮游菌測(cè)試取樣點(diǎn)：按無(wú)菌灌裝區(qū)面積等分進(jìn)行取樣，每個(gè)測(cè)試點(diǎn)距離1米，測(cè)試點(diǎn)距內(nèi)墻面0.5米，另外在分裝面、膠塞清洗機(jī)膠塞出口處、西林瓶滅菌烘干隧道出口處分別增加一個(gè)測(cè)試點(diǎn)。、塵埃粒子監(jiān)測(cè)取樣點(diǎn)：按無(wú)菌灌裝區(qū)面積等分進(jìn)行取樣，每個(gè)測(cè)試點(diǎn)距離1米，測(cè)試點(diǎn)距內(nèi)墻面0.5米，另外在分裝面、膠塞清洗機(jī)膠塞出口處

16、、西林瓶滅菌烘干隧道出口處分別增加一個(gè)測(cè)試點(diǎn)。7、模擬灌裝7.1 凍干粉針劑模擬灌裝方法： 凍干粉針劑模擬灌裝方法采用將一定量的無(wú)菌液體培養(yǎng)基通過(guò)灌裝機(jī)灌裝于西林瓶中并進(jìn)行半壓膠塞，然后在凍干機(jī)內(nèi)進(jìn)行凍干試驗(yàn)并進(jìn)行全壓膠塞，壓鋁蓋密封。模擬試驗(yàn)量為5000瓶。7.2 液體無(wú)菌培養(yǎng)基制備方法：將經(jīng)過(guò)第3項(xiàng)檢測(cè)合格的培養(yǎng)基在配制室內(nèi)按每30g加1L注射用水的比例配制50L液體培養(yǎng)基備用。7.3 無(wú)菌粉針劑模擬灌裝試驗(yàn)：7.3.1 模擬灌裝試驗(yàn)用西林瓶數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000支無(wú)菌西林瓶。7.3.2 模擬灌裝試驗(yàn)用膠塞數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000枚無(wú)菌膠塞。7.3.3 模擬灌裝試驗(yàn)用鋁蓋

17、數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000枚鋁蓋。7.3.4 模擬灌裝試驗(yàn)用周轉(zhuǎn)盤數(shù)量：按生產(chǎn)工藝對(duì)周轉(zhuǎn)盤進(jìn)行清潔消毒，以每只周轉(zhuǎn)盤裝量290支計(jì)算，準(zhǔn)備25只潔凈周轉(zhuǎn)盤備用。7.3.5 模擬灌裝試驗(yàn)灌裝量：每支西林瓶灌裝7ml液體培養(yǎng)基。7.3.6 液體培養(yǎng)基的除菌過(guò)濾：對(duì)在配制間配制好的液體培養(yǎng)基按正常生產(chǎn)工藝要求進(jìn)行除菌過(guò)濾并存放于無(wú)菌儲(chǔ)罐內(nèi)。7.3.7 灌裝機(jī)灌裝速度：灌裝機(jī)灌裝及半壓膠塞速度為260瓶/分。7.3.8 模擬灌裝試驗(yàn)操作流程：按凍干粉針劑生產(chǎn)工藝流程進(jìn)行。7.3.9 模擬灌裝試驗(yàn)灌裝過(guò)程要求：在進(jìn)行模擬灌裝試驗(yàn)時(shí)，當(dāng)灌裝進(jìn)行至一半時(shí)，使設(shè)備空轉(zhuǎn)一小時(shí)以上再繼續(xù)進(jìn)行模擬灌裝試驗(yàn)，完

18、成剩余的試驗(yàn)制品的灌裝。7.3.10 根據(jù)5.1項(xiàng)及6項(xiàng)要求，在每臺(tái)灌裝機(jī)分裝完成500瓶時(shí)，隨機(jī)抽取未分裝的西林瓶及膠塞10枚供檢測(cè)使用。7.3.11 凍干模擬試驗(yàn)：培養(yǎng)基灌裝半壓膠塞以后，將半壓膠塞的樣品瓶轉(zhuǎn)移到凍干機(jī)內(nèi)，進(jìn)行凍干的模擬試驗(yàn)。試驗(yàn)中，冷凍溫度不得低于3。凍干時(shí)間設(shè)定為24小時(shí)，抽真空、全壓塞后按生產(chǎn)工藝要求進(jìn)行鋁蓋密封作業(yè)。至此供試品已全部制備完成。7.3.12 取樣原則：由于培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)分為兩個(gè)階段進(jìn)行，因此將全部樣品分為四個(gè)不同時(shí)間段進(jìn)行樣品標(biāo)示，即第一階段灌裝試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)、第一階段灌裝試驗(yàn)結(jié)束時(shí)、第二階段灌裝試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)、第二階段灌裝試驗(yàn)結(jié)束時(shí)四個(gè)時(shí)間。其標(biāo)記法為“1-

19、1”、“1-2”、“2-1”、“2-2”。標(biāo)記點(diǎn)為周轉(zhuǎn)盤。8、微生物培養(yǎng)8.1 陰性對(duì)照： 在模擬灌裝過(guò)程中，使用20支潔凈試管灌裝7ml培養(yǎng)基，密封后進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)用培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn)。其20瓶陰性對(duì)照品應(yīng)均不得長(zhǎng)菌。8.2 陽(yáng)性對(duì)照： 為確認(rèn)無(wú)菌灌裝容器中培養(yǎng)基的促菌生產(chǎn)能力，取低濃度菌接種于進(jìn)行挑戰(zhàn)性陽(yáng)性試驗(yàn)用的4支對(duì)照試管中，2瓶接種濃度100個(gè)微生物/0.1ml的枯草桿菌芽孢；另2瓶接種濃度100個(gè)微生物/0.1ml的白色念珠菌。接種后將接種枯草桿菌芽孢的西林瓶放于3035下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的西林瓶放于2025下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少需有1支容器被證實(shí)有菌生產(chǎn)。如2個(gè)容器內(nèi)均沒(méi)有菌

20、增殖，則應(yīng)在確認(rèn)試驗(yàn)操作有誤后，重復(fù)試驗(yàn)1次，此次試驗(yàn)應(yīng)在2個(gè)容器內(nèi)均有菌生產(chǎn)的情況。8.3 試驗(yàn)樣品培養(yǎng)： 模擬灌裝生產(chǎn)的全部樣品在適宜的溫度下培養(yǎng)14天，先在較低溫度（2025）下培養(yǎng)7天，然后在較高溫度（3035）下培養(yǎng)7天，較低溫度與較高溫度一般相差10。在第三天和第七天之間至少觀察培養(yǎng)基灌裝品的微生物的生產(chǎn)情況一次，并且在檢測(cè)期間的最后一天至少再觀察一次，并對(duì)污染的瓶中的微生物進(jìn)行總結(jié)其特點(diǎn)。若發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)明確記錄樣品號(hào)及數(shù)量，同時(shí)應(yīng)檢查鋁蓋、膠塞的密封情況；若有破損應(yīng)記錄并檢查其破損原因。對(duì)于微生物污染的樣品應(yīng)進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，鑒別的內(nèi)容至少應(yīng)包括菌落、細(xì)胞形態(tài)學(xué)及革蘭染色特性等。9、試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)無(wú)菌模擬灌裝試驗(yàn)結(jié)果的主要指標(biāo)之一是微生物污染水平，如果試驗(yàn)結(jié)果證明其污染水平超過(guò)規(guī)定的合格限度（參見(jiàn)第2項(xiàng)規(guī)定），則應(yīng)立即停止生產(chǎn)，調(diào)查并記錄污染產(chǎn)生的原因。在調(diào)查結(jié)束并采用相應(yīng)的措施后應(yīng)重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng)基無(wú)菌