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文檔簡(jiǎn)介
1、動(dòng)物病毒學(xué)重點(diǎn)相關(guān)資料說(shuō)明:紅色加下劃線(xiàn)的是羅老師最后上課說(shuō)的(基本上包 括),紅色的是老師平時(shí)上課時(shí)說(shuō)的要掌握的,大家對(duì)著 課件劃一劃吧,若有遺漏的,可以和我說(shuō)哈要強(qiáng)調(diào)的是DNA病毒和RNA病毒的分類(lèi)很重要:(如下)v具有分段基因組的病毒:正粘病毒科: 布尼病毒科: 砂粒病毒科呼腸孤病毒科: 雙RNA病毒科:v用于病毒的分離與培養(yǎng):細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物v病毒有兩種形式:一是存在于細(xì)胞外的具有感染性的病毒粒子, 二是存在于細(xì)胞內(nèi)的可以增值的基因組v天花是人類(lèi)歷史上第一個(gè)用疫苗消滅的傳染病。v根據(jù)病毒的宿主性質(zhì)將其分為:動(dòng)物病毒(animal virus)植物病毒(plant virus)細(xì)
2、菌病毒(bacteria virus), 即噬菌體(bacteriophage or phage)v病毒的結(jié)構(gòu)組成v衣殼(capsid):在病毒的結(jié)構(gòu)組成中,包圍著病毒核酸及其結(jié)合蛋白的蛋白質(zhì)鞘,由許多原體以次級(jí)鍵結(jié)合形成,具有保護(hù)病毒核酸的作用,同時(shí)也是病毒核酸由一個(gè)宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)宿主細(xì)胞的工具。v包膜(囊膜)(envelope):覆蓋在病毒核衣殼外的脂蛋白膜。其組成成分主要來(lái)自宿主細(xì)胞,是病毒的核衣殼在感染細(xì)胞內(nèi)穿越核膜或在感染細(xì)胞表面“出芽”時(shí)由細(xì)胞膜獲得。v病毒衣殼的對(duì)稱(chēng)形式1、二十面體對(duì)稱(chēng)(icosahedral symmetry) 2、螺旋對(duì)稱(chēng)(helical symmetr
3、y)3、復(fù)合對(duì)稱(chēng)殼體(complex symmetry)1、二十面體對(duì)稱(chēng)(icosahedral symmetry)5、3、2構(gòu)型,或5、3、2次軸對(duì)稱(chēng)二十面體對(duì)稱(chēng)有12頂、20面和30棱 以頂點(diǎn)為軸旋轉(zhuǎn)72,其形不變,要轉(zhuǎn)5 次復(fù)位 以面為中心,旋轉(zhuǎn)120,其形不變,要轉(zhuǎn)3次復(fù)位 以棱為中心,旋轉(zhuǎn)180,其形不變,要轉(zhuǎn)2次復(fù)位故又稱(chēng)5、3、2構(gòu)型,或5、3、2次軸對(duì)稱(chēng) DNA病毒:虹彩病毒、皰疹病毒、腺病毒、乳多空病毒、細(xì)小病毒、圓環(huán)病毒、非洲豬瘟病毒、嗜肝DNA病毒 RNA病毒:呼腸孤病毒、雙RNA病毒、小RNA病毒、杯狀病毒、戊肝病毒、披膜病毒、黃病毒、動(dòng)脈炎病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒2、螺旋對(duì)稱(chēng)
4、(helical symmetry)副流感病毒的破碎病毒粒子,箭頭所指為螺旋對(duì)稱(chēng)的核衣殼,右圖為模式圖 呈螺旋對(duì)稱(chēng)的多為有囊膜的病毒,在動(dòng)物病毒中螺旋對(duì)稱(chēng)的病毒均屬有囊膜的單股RNA病毒。彈狀病毒、布尼病毒、副粘病毒、正粘病毒、嵌沙樣病毒、絲狀病毒科、冠狀病毒3、復(fù)合對(duì)稱(chēng)殼體(complex symmetry) 由二十面體對(duì)稱(chēng)和螺旋對(duì)稱(chēng)兩部分組成有尾噬菌體,頭部呈二十面體對(duì)稱(chēng),尾部呈螺旋對(duì)稱(chēng)。 不規(guī)則的二十面體結(jié)構(gòu)T-偶數(shù)噬菌體,由兩個(gè)半個(gè)的二十面體通過(guò)一短六棱柱連接形成。 逆轉(zhuǎn)錄病毒包膜內(nèi)有一個(gè)二十面體對(duì)稱(chēng)的殼體,殼體內(nèi)還有由病毒RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成的,可能為螺旋對(duì)稱(chēng)的核糖核蛋白核心。 呼
5、腸孤病毒具有兩層殼體,內(nèi)殼體和外殼體均為二十面體對(duì)稱(chēng) 痘病毒衣殼無(wú)明顯的對(duì)稱(chēng)形式vRNA病毒:dsRNA:無(wú)囊膜分節(jié)段-呼腸孤病毒科(10-12節(jié)段)、雙RNA病毒科(2節(jié)段) ssRNA:正粘病毒(7-8節(jié)段),布尼病毒(3節(jié)段),砂粒病毒(2節(jié)段)v重疊基因(overlappinggenes):基因組特定序列能夠以二個(gè)或三個(gè)不同的框架閱讀,產(chǎn)生2種或3種有 不同氨基酸序列的蛋白質(zhì)。e.g. PPV、PRRSV作用:編碼更多的蛋白質(zhì),滿(mǎn)足復(fù)制和增殖的需要,遺傳節(jié)約的原則。v病毒蛋白質(zhì)的分類(lèi)根據(jù)是否存在于病毒粒子中分為:v 結(jié)構(gòu)蛋白(Structural protein)v 非結(jié)構(gòu)蛋白(Non
6、structural protein)v 結(jié)構(gòu)蛋白(Structural protein): 構(gòu)成一個(gè)完整的、形態(tài)成熟的病毒顆粒所必需的蛋白質(zhì)。 殼體蛋白 包膜蛋白 存在于病毒體中的酶v 非結(jié)構(gòu)蛋白(non-structural protein):由病毒基因組編碼,但并不結(jié)合于病毒顆粒中的蛋白質(zhì)。在病毒的復(fù)制和增殖過(guò)程中發(fā)揮一 定的作用。v國(guó)際病毒分類(lèi)委員會(huì)ICTV(International Committee on Taxonomy of Viruses)v國(guó)際病毒分類(lèi)與命名規(guī)則一般規(guī)則關(guān)于類(lèi)和病毒的命名規(guī)則關(guān)于種的規(guī)則關(guān)于屬的規(guī)則關(guān)于亞科的規(guī)則關(guān)于科的規(guī)則關(guān)于目的規(guī)則關(guān)于亞病毒因子的規(guī)則
7、關(guān)于書(shū)寫(xiě)的規(guī)則1、病毒分類(lèi)系統(tǒng):采用目、科、亞科、屬和種的等級(jí)制度,在種的命名尚不完善的 情況下,許多病毒可用國(guó)際通用的俗名。2、屬是一組具有某些共同特性的種。3、屬名以“Virus”結(jié)尾。E.g. Pestivirus:瘟病毒屬Coronavirus:冠狀病毒屬4、通過(guò)一個(gè)屬名的同時(shí)需通過(guò)一個(gè)代表種。5、亞科是一組具有某些共同特性的屬。 6、亞科名以“Virinae”結(jié)尾。E.g. Retrovirinae :反轉(zhuǎn)錄病毒亞科Spumavirinae:泡沫病毒亞科7、科是一組具有某些共同特性的屬(不管這些屬是否組成了亞科)。8、科名以“Viridae”結(jié)尾。E.g. Herpesviridae
8、:皰疹病毒科Adenoviridae:腺病毒科9、通過(guò)一個(gè)科名的同時(shí)需通過(guò)一個(gè)屬名。10、目是一組具有某些共同特性的科。11、目名以“Virales”結(jié)尾。目virales科viridae亞科virinae屬virus一些屬性不很明確的屬或暫定屬,用引號(hào)或后綴“-like viruses”表示,如Norwalk-like viruses。v國(guó)際上通用的流感病毒命名方法 Influenza virus 型別/宿主/分離地點(diǎn)/分離株序號(hào)/分離年代(血凝素亞型神經(jīng)氨酸酶亞型)2Influenza virus A/Hongkong/1/68(H3N ) H:hemagglutininN:neurami
9、nidaseInfluenza virus A/Chicken/Hubei/8/2004(H5N1)Influenza virus A/Duck/Hubei/4/2004(H5N1)v6個(gè)目:v病毒的長(zhǎng)期保存1、快速低溫凍存于病毒懸液內(nèi)加入滅活的動(dòng)物血清或其他蛋白質(zhì)保護(hù)劑和5%-10%的DMSO,迅速置-70或- 196保存。含病毒的組織材料可以直接低溫冰凍保存;或先浸入50%甘油生理鹽水中,再低溫保存。2、冷凍干燥加入保護(hù)劑,在真空條件下使冰凍的病毒懸液脫水。細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的基本原則緩慢降溫,快速解凍 v復(fù)制(replication):病毒感染敏感的宿主細(xì)胞后,在病毒核酸的控制下合成子代病毒
10、的核酸與蛋白質(zhì)等成分,然后在宿主細(xì)胞內(nèi)裝配成病毒顆粒,再以各種方式釋放 到細(xì)胞外,感染其它細(xì)胞,這種增殖方式稱(chēng)復(fù)制。v動(dòng)物病毒的復(fù)制周期分為5個(gè)主要階段: 吸附(Adsorption/Attachment) 侵入(Penetration) 脫殼(Uncoating) 病毒成分的合成(Synthesis of viral neucleic acid and protein) 裝配與釋放(Assembly and Release)v吸附蛋白(virus attachment protein, VAP):病毒表面能識(shí)別特異細(xì)胞受體的結(jié)構(gòu)蛋白。主要是殼體蛋白或包膜糖蛋白-有包膜的動(dòng)物病毒:流感病毒的H
11、A、副粘病毒的HN糖蛋白、彈狀病毒的C糖蛋白-無(wú)包膜的動(dòng)物病毒:脊髓灰質(zhì)炎病毒衣殼蛋白上的VP1多肽v動(dòng)物病毒的侵入方式:細(xì)胞內(nèi)吞(endocytosis)膜融合(membrane fusion)直接侵入(direct penetration)v 細(xì)胞內(nèi)吞(endocytosis):有囊膜或無(wú)囊膜的動(dòng)物病毒 機(jī)制:細(xì)胞膜先將病毒粒子包裹,再經(jīng)膜內(nèi)陷形成吞噬泡,吞噬泡通過(guò)離子泵降低其pH,激活病毒 囊膜與吞噬泡膜之間的膜融合或激活裂解囊泡的酶類(lèi),從而釋放出病毒粒子。e.g. influenza virus, poxvirus, polyomavirus, reovirus 內(nèi)吞之后:吞噬泡膜與病
12、毒囊膜融合或吞噬泡裂解v 膜融合(membrane fusion) 病毒囊膜與細(xì)胞膜的融合過(guò)程,在除去囊膜的同時(shí),將核衣殼導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)。有囊膜病毒的主要 侵入方式,由病毒的具有細(xì)胞融合活性的囊膜糖蛋白介導(dǎo)。v直接侵入(direct penetration)(移位)許多無(wú)囊膜病毒侵入細(xì)胞的方式,機(jī)理尚不清楚病毒吸附蛋白與細(xì)胞受體結(jié)合后,細(xì)胞膜的流動(dòng)性引起病毒衣殼蛋白的重排 和構(gòu)型變化,加之細(xì)胞膜上可能存在的水解酶的作用,從而導(dǎo)致病毒核酸進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中,侵入與脫殼同時(shí)完成。病毒衣殼直接進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。v病毒核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)的合成分成5個(gè)連續(xù)的階段:mRNA的早期轉(zhuǎn)錄mRNA的早期翻譯病毒核酸的復(fù)制mR
13、NA的再度轉(zhuǎn)錄(晚期轉(zhuǎn)錄)mRNA的再度譯制(晚期翻譯) v潛 伏 期 (latent period):病毒體吸附于宿主細(xì)胞(病毒體在培養(yǎng)基中消失)到受染細(xì)胞 釋放出子代病毒體(培養(yǎng)基中重新出現(xiàn)病毒體)所需的最短時(shí)間。v隱 蔽 期 (eclipse period):自感染性的病毒在細(xì)胞內(nèi)消失到細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)新的感染性的病毒 之間的時(shí)間。不同病毒的隱蔽期長(zhǎng)短不一,如痘病毒10h,脊髓灰質(zhì)炎病毒24h。v依賴(lài)于病毒的流產(chǎn)感染由缺損病毒引起缺損病毒(defective virus):基因組中一個(gè)或多個(gè)復(fù)制必需基因缺失或失活的病毒。u 缺損病毒的種類(lèi):干擾缺損病毒/顆粒(defective interfe
14、ring virus/particle,DI顆粒)衛(wèi)星病毒(satellite virus)條件缺損病毒(conditional defective virus)假病毒體(pseudovirion)干擾缺損病毒/顆粒 defective interfering virus/particle 干擾缺損病毒:在病毒感染時(shí)產(chǎn)生的一類(lèi)亞基因組缺失突變體。因失去了親代病毒基因組中的復(fù)制必需片段,所以不能單獨(dú)進(jìn)行復(fù)制,而必需在其同型的完全病毒(標(biāo)準(zhǔn)病毒)的輔助下,由完全病毒提供DI顆粒已喪失的、但又為復(fù)制所必需的基因功能才能復(fù)制。 標(biāo)準(zhǔn)病毒(standard virus,SV):與DI顆粒相關(guān)的完全病毒。
15、lDI顆粒的特點(diǎn):基因組缺損(亞基因組)依賴(lài)于同源的標(biāo)準(zhǔn)病毒復(fù)制干擾同源的標(biāo)準(zhǔn)病毒的復(fù)制具有與親代病毒相同的對(duì)稱(chēng)形式、形態(tài)特征、結(jié)構(gòu)蛋白和抗原性DI顆粒至少保留親代病毒基因組的: a)特異性的病毒復(fù)制酶的起始序列 b)病毒殼體化的起始識(shí)別序列l(wèi)DI顆粒的產(chǎn)生DNA病毒:DNA復(fù)制錯(cuò)誤、轉(zhuǎn)座子跳躍、同源重組等RNA病毒:模板轉(zhuǎn)換(RNA復(fù)制酶帶著未合成好的新生鏈脫離模板,然后重新結(jié)合新的模板 或原模板的新位點(diǎn)繼續(xù)合成新生RNA鏈)。l避免DI顆粒污染病毒制備物的方法用低感染復(fù)數(shù)(m.o.i)接種病毒和傳代對(duì)種子病毒進(jìn)行克隆純化(蝕斑純化)衛(wèi)星病毒(satellite virus)衛(wèi)星病毒:存在于
16、自然界中的一種絕對(duì)的缺損病毒,必須依賴(lài)輔助病毒才能復(fù)制,但其基 因組與輔助病毒的基因組無(wú)任何同源性。 l特點(diǎn):缺損基因組(存在于自然界的絕對(duì)缺損病毒,不是輔助病毒的缺損病毒)復(fù)制專(zhuān)一性地依賴(lài)于輔助病毒衛(wèi)星病毒和輔助病毒的基因組無(wú)同源性lExamples:腺聯(lián)病毒(adneo-associated virus, AAV)與腺病毒肝炎病毒(hepatitis delta virus, HDV)與乙型肝炎病毒(HBV)衛(wèi)星煙草壞死病毒(satellite tobacco necrosis virus, STNV)與TNV大腸桿菌噬菌體P4與P2v影響病毒表型的病毒間相互作用表型混合多倍體互補(bǔ)作用干擾
17、作用 v什么是干擾素?干擾素的性質(zhì)l 是一組由多種細(xì)胞在適宜誘生劑的作用下產(chǎn)生的具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和維持細(xì)胞自身穩(wěn)定等多種生物活性的糖蛋白,是一種重要的細(xì)胞因子。v病毒感染細(xì)胞的類(lèi)型根據(jù)病毒感染后細(xì)胞的表現(xiàn)不同分為:溶(殺)細(xì)胞性感染穩(wěn)定態(tài)感染整合感染1. 殺(溶)細(xì)胞性感染細(xì)胞在病毒感染以后,因代謝障礙而迅速死亡(破裂或溶解),大量感染性病毒釋出于細(xì)胞外的體液中,形成新一輪感染。主要由無(wú)包膜、殺傷性強(qiáng)的病毒感染引起,如:痘病毒、小RNA病毒。2. 穩(wěn)定態(tài)感染病毒感染細(xì)胞后,病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖,但并不嚴(yán)重影響細(xì)胞的生命活動(dòng),被感染細(xì)胞能 正常繁殖。病毒常以出芽的方式釋放或呈細(xì)胞到細(xì)胞的
18、傳播,如:PCV、CSFV、EB病毒、鼠類(lèi)的白血病病毒3. 整合性感染病毒感染細(xì)胞后,病毒核酸整合于細(xì)胞染色體內(nèi),并隨細(xì)胞的分裂而增殖,使細(xì)胞轉(zhuǎn)化 或惡性變。腺病毒、SV40等在容許細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生溶細(xì)胞感染而在非容許細(xì)胞內(nèi)形成整合性感染HIV先將病毒基因組RNA反轉(zhuǎn)錄成雙鏈DNA,并整合到宿主細(xì)胞基因組上3. 包涵(含)體形成(inclusion body)細(xì)胞被病毒感染以后,在細(xì)胞漿或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)的一些在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)的特殊結(jié)構(gòu)。病毒核酸和蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)集中合成和裝配成病毒粒子的場(chǎng)所(病毒工廠)1)包涵體的實(shí)質(zhì)(組成)病毒體或病毒組分:腺病毒、痘病毒、麻疹病毒。細(xì)胞的退行性產(chǎn)物:皰疹病毒。 某
19、些細(xì)菌及其毒素、某些化學(xué)藥物和重金屬鹽也可引起細(xì)胞類(lèi)似的組織學(xué)變化。2)包涵體的類(lèi)型不同病毒感染所形成的包涵體的形態(tài)、染色特性和存在部位各不相同:A. 痘苗病毒:胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體B. 單純皰疹病毒:核內(nèi)嗜酸性包涵體,細(xì)胞融合形成合胞體C. 呼腸孤病毒:胞漿內(nèi)核周嗜酸性包涵體D. 腺病毒:核內(nèi)嗜堿性包涵體E. 狂犬病病毒:胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體F. 麻疹病毒:核內(nèi)和胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體v細(xì)胞凋亡(1972年由英國(guó)Kerr教授首次提出)細(xì)胞為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主、有序性的細(xì)胞死亡形式。由細(xì)胞內(nèi)部 和外部刺激誘導(dǎo)所致。特點(diǎn):細(xì)胞變圓;胞漿濃縮;核染色質(zhì)聚集、分塊、位于核膜上;核仁裂解,核
20、固縮,形成凋亡小 體;細(xì)胞核內(nèi)的DNA被核酸內(nèi)切酶降解為約180-200bp整數(shù)倍的核酸片段,凝膠電泳圖譜呈梯狀(DNA ladder)。v病毒的致病性(病原性)和毒力病毒的致病性:是病毒長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的引起機(jī)體感染的潛在能力,是病毒“種”的 特征。毒力:某一特定毒株的致病性,是病毒“株”的特征。v機(jī)體病毒感染的類(lèi)型和發(fā)生機(jī)制(一)按病程長(zhǎng)短分:急性型亞急性型慢性型(持續(xù)性) 持續(xù)性感染指病毒感染機(jī)體后,病毒在機(jī)體內(nèi)持續(xù)存在,達(dá)數(shù)月或數(shù)年甚至終生但不一定持續(xù)增殖或持續(xù)引 起癥狀。1) 持續(xù)性感染的特點(diǎn):潛伏期長(zhǎng)病原體長(zhǎng)期存在病變和癥狀常與免疫病理或免疫缺陷有關(guān),發(fā)病常呈進(jìn)行性,預(yù)后大多不良
21、。自然感染的宿主范圍大多極窄,有遺傳傾向。2 ) 持續(xù)性感染的分類(lèi)慢性感染潛伏感染慢病毒感染慢性感染病毒在機(jī)體內(nèi)持續(xù)增殖,可不斷排出體外,常不引起臨床癥狀,但在機(jī)體免疫功能低下時(shí)發(fā) 病,癥狀長(zhǎng)期存在。如:慢性豬瘟、小鼠乳酸脫氫酶增高癥、人的乙肝、艾滋病特點(diǎn):不產(chǎn)生疾病,但有感染性病毒持續(xù)存在,如乙肝病毒的無(wú)癥狀健康帶毒者。在后期可能由于免疫病理或腫瘤并發(fā)癥而引起疾病,如馬傳染性貧血病毒、艾滋病、鼠類(lèi)、禽類(lèi)和貓的白血病病毒。潛伏感染在急性或隱性感染之后,病毒潛伏存在于一定的組織細(xì)胞中,在某些條件下,病毒在宿主細(xì)胞體內(nèi)重新增殖和擴(kuò)散,再次出現(xiàn)與初次感染癥狀極為相似或截然不同的急性發(fā)作,而且以后還會(huì)
22、反 復(fù)發(fā)生。如:人的水痘-帶狀皰疹病毒、偽狂犬病毒。慢病毒感染(長(zhǎng)程感染)指病毒有很長(zhǎng)的潛伏期,此時(shí)機(jī)體無(wú)癥狀,也分離不出病毒。以后發(fā)病呈慢性進(jìn)行性且最后轉(zhuǎn)歸 于死亡的一種病毒感染。與慢性感染的不同點(diǎn):疾病過(guò)程緩慢,但不斷發(fā)展而且無(wú)例外地死亡。引起慢病毒感染的病原體:常規(guī)病毒:如馬傳染性貧血病毒、山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒、人的麻疹病毒、人和猴的免疫缺陷病病毒。朊病毒:羊的癢疫、貂的傳染性腦病、鹿的慢性消耗性疾病、牛的海綿狀腦病、人的庫(kù)魯病和克一雅氏病等。3 ) 持續(xù)性感染發(fā)生的機(jī)制(1)病毒因素A、病毒基因組整合到宿主細(xì)胞DNA中。如:逆轉(zhuǎn)錄病毒、SV40B、病毒侵犯免疫細(xì)胞或在有掩護(hù)的部位或細(xì)胞
23、內(nèi)增殖。如皰疹病毒隱藏在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)、人和猴 免疫缺陷病毒侵入T4淋巴細(xì)胞。C、病毒抗原發(fā)生變異。馬傳染性貧血病毒D、干擾缺損顆粒(DI)的出現(xiàn)。水皰性口炎病毒(VSV) E、病毒無(wú)免疫原性。朊病毒(2)機(jī)體方面A、免疫耐受機(jī)體在胚胎或初生期感染某些病毒,免疫組織或細(xì)胞再次接觸該病毒抗原不產(chǎn)生抗體及細(xì)胞免 疫,或僅有低反應(yīng)性免疫應(yīng)答。B、只產(chǎn)生非中和抗體:小鼠淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、非洲豬瘟病毒C、干擾素產(chǎn)生能力低下:小鼠淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染、乙型肝炎病毒感染、PRRSV D、細(xì)胞免疫應(yīng)答低下:慢性乙型肝炎患者的T細(xì)胞對(duì)其特異性表面抗原及植物血凝素反應(yīng)偏低E、宿主細(xì)胞遺傳因素:不同品系對(duì)病毒的敏感性不同v疫苗的基本成分:抗原佐劑防腐劑穩(wěn)定劑/保護(hù)劑滅活劑vPCR的主要步驟:變性 通過(guò)加熱(90-95)使DNA模板雙鏈的氫鍵斷裂,雙鏈解離成單鏈DNA。退火 適當(dāng)降溫(42-62)使引物與其互補(bǔ)的模板在局部形成雜交鏈。延伸72,在DNA聚合酶和4種脫氧核糖核苷酸底物(dNTPs)
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