(最新整理)細胞自噬預(yù)實驗

1、(完整)細胞自噬預(yù)實驗(完整)細胞自噬預(yù)實驗 編輯整理：尊敬的讀者朋友們：這里是精品文檔編輯中心，本文檔內(nèi)容是由我和我的同事精心編輯整理后發(fā)布的，發(fā)布之前我們對文中內(nèi)容進行仔細校對，但是難免會有疏漏的地方，但是任然希望（(完整)細胞自噬預(yù)實驗）的內(nèi)容能夠給您的工作和學習帶來便利。同時也真誠的希望收到您的建議和反饋，這將是我們進步的源泉，前進的動力。本文可編輯可修改，如果覺得對您有幫助請收藏以便隨時查閱，最后祝您生活愉快 業(yè)績進步，以下為(完整)細胞自噬預(yù)實驗的全部內(nèi)容。細胞自噬預(yù)實驗化學染色法1、 試驗?zāi)康耐ㄟ^化學染料吖啶橙（acridine orange，ao）染色木犀草素處理后的hepg2

2、細胞判斷木犀草素是否誘導(dǎo)hepg2細胞發(fā)生自噬。2、 試驗原理 3，6(二甲胺基）吖啶鹽酸鹽，分子式c17h19n3 hcl zncl2， 分子量438.12g/mol，是一種熒光色素,其檢測激發(fā)濾光片波長488nm,阻斷濾光片波長515nm。它與細胞中dna和rna結(jié)合量存在差別，可發(fā)出不同顏色的熒光，與dna結(jié)合量少發(fā)綠色熒光，與rna結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光.該染料具有膜通透性，能透過細胞膜,使核dna和rna染色。ao也可以滲透進入酸性細胞器，例如自噬溶酶體，發(fā)生自噬的細胞經(jīng)吖啶橙染色,在熒光顯微鏡下可觀察到紅黃色點狀體,稱為酸性小體，當ph值較低的時候，ao發(fā)出紅色熒光，且強度與

3、酸性程度相關(guān)。所以在ao標記的細胞中,酸性囊泡細胞器結(jié)構(gòu)可以通過熒光顯微鏡下觀察到。3、 試驗材料及試劑hepg2細胞株、dmem培養(yǎng)基（含10%fbs、100u青霉素和鏈霉素）、pbs、0。25%胰蛋白酶、吖啶橙（ao）、木犀草素、6孔板、載玻片、蓋玻片ao儲備液：準確稱量10mg吖啶橙融入10ml三蒸水中，配置成儲備液。實驗前取5.0ml pbs溶解10ulao儲備液,配置成染色液。4、 試驗方法1） 取對數(shù)期生長的細胞按15105個/ml的濃度接種在六孔板中，24h后加入終濃度為50um、100um、200um的木犀草素及100um的5fu，藥物處理48h。2） 藥物處理后，用pbs清洗2次,0。25的胰酶消化細胞制成細胞懸液。3） 將細胞懸液1000rpm離心3min，去掉上清，加入pbs把細胞濃度調(diào)節(jié)到1-10105個/ml，吹打混勻。4） 取300ul細胞懸液，加入染色液至終濃度為1ug/ml，37避光孵育15-30min5） 染色結(jié)束后用pbs清洗3次，1000rpm離心3min，渦旋震蕩混勻6） 最后一次離心后留下少量液體,取10ul染色后