生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告-坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備

1、生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓名：班級(jí)：日期：同組者：實(shí)驗(yàn)序號(hào)：實(shí)驗(yàn)題目：坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?. 學(xué)習(xí)蛙類動(dòng)物雙毀髓的實(shí)驗(yàn)方法。2學(xué)習(xí)并掌握坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備方法。實(shí)驗(yàn)原理：兩棲類動(dòng)物的離體組織所需要的生活條件比較簡(jiǎn)單，易于控制和掌握。 因此在生理實(shí)驗(yàn)中常用蟾蜍的坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本來(lái)觀察興奮性、興奮過(guò)程、刺激強(qiáng)度、刺激頻率與肌肉收縮反應(yīng)的一些規(guī)律以及骨骼肌的收縮特性等。實(shí)驗(yàn)對(duì)象：蟾蜍實(shí)驗(yàn)器材：常規(guī)手術(shù)器械（粗剪刀、手術(shù)剪、眼科剪、手術(shù)鑷、眼科鑷）蛙板、蛙釘、探針、鋅銅弓、玻璃分針、培養(yǎng)皿、任氏液、滴管、手術(shù)線等。實(shí)驗(yàn)方法及步驟：1、破壞腦脊髓部位枕骨大孔。如果蟾蜍四肢松軟，呼吸消失，

2、表示腦脊髓已完全破壞，否則按上述方法再進(jìn)行搗毀。2、剪去軀干上部及內(nèi)臟在骶髂關(guān)節(jié)前1 cm處用金冠剪（粗剪）剪斷脊柱（可在下肢前端）。沿脊柱切口向下剪開兩側(cè)腹部皮膚至恥骨處，將頭、前肢、內(nèi)臟及腹部軟組織全部剪掉，放于污物盤，只保留下端脊柱和下肢。在腹側(cè)脊柱兩旁可看到腰骶神經(jīng)叢。注意切勿觸及或損傷坐骨神經(jīng)。3、剝后肢皮膚 左手持鑷子夾住脊髓斷端，右手捏住斷端邊緣，剝掉全部后肢皮膚。將標(biāo)本放于盛有任氏液的培養(yǎng)皿內(nèi)，將手和手術(shù)器械洗凈。4、分離兩腿 用金冠剪剪去尾骨桿（骶骨），沿脊椎中線將脊柱剪開，再沿恥骨聯(lián)合正中央剪開兩側(cè)大腿，使兩腿完全分離（切勿傷及神經(jīng)），將兩腿浸于任氏液中。5、游離坐骨神經(jīng)

3、取一后肢，腹面向上（背位），固定于蛙板上，沿脊柱側(cè)用玻璃分針輕輕勾起坐骨神經(jīng)，逐一剪去神經(jīng)分支至股端。用金冠剪剪斷脊柱，只保留一小段椎骨片與坐骨神經(jīng)相連。 將標(biāo)本改為背面向上（腹位）固定，用鑷子提起梨狀肌，剪斷，用玻璃分針將坐骨神經(jīng)小心勾至背部。再沿坐骨神經(jīng)溝（半膜肌和股二頭肌的肌間縫）分離坐骨神經(jīng)。用鑷子夾住與神經(jīng)相連的脊椎骨，提起神經(jīng)，用眼科剪將神經(jīng)分支及結(jié)締組織膜順序剪斷，將神經(jīng)一直游離到腘窩處。6、游離腓腸肌用鑷子夾住脊椎骨，將神經(jīng)搭在腓腸肌上，用剪刀將膝關(guān)節(jié)周圍的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪將膝關(guān)節(jié)上方的股骨刮干凈，暴露骨股并在距膝關(guān)節(jié)上1 cm處剪斷，分離腓腸肌的跟腱，用線結(jié)扎，然后

4、自跟腱的附著點(diǎn)剪斷，提起跟腱，將腓腸肌分離至膝關(guān)節(jié)處，將小腿其余部分剪掉。這樣就制備了一個(gè)附著在股骨上的腓腸肌并帶有支配腓腸肌的坐骨神經(jīng)的完整標(biāo)本。 7、標(biāo)本檢驗(yàn)左手用鑷子輕輕提起結(jié)扎神經(jīng)的線，右手用經(jīng)任氏液沾濕的鋅銅弓短暫輕觸坐骨神經(jīng)，如腓腸肌發(fā)生迅速的收縮反應(yīng)，則表明機(jī)能完好。將標(biāo)本置于任氏液中，穩(wěn)定其興奮性1520 min，即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。注意事項(xiàng)：在制備標(biāo)本時(shí)，避免過(guò)度牽拉神經(jīng)，不可用手或金屬器械觸碰神經(jīng)干。避免動(dòng)物皮膚分泌物（蟾酥、血液等）污染神經(jīng)和肌肉，也不要用水沖洗，以免影響組織機(jī)能。制備標(biāo)本時(shí)，要隨時(shí)用任氏液潤(rùn)濕神經(jīng)和肌肉，防止干燥。分離神經(jīng)時(shí)，一定要把周圍結(jié)締組織剝離干凈。實(shí)驗(yàn)

5、要迅速，以免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)影響標(biāo)本活性（興奮性）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：用經(jīng)任氏液沾濕的鋅銅弓短暫輕觸坐骨神經(jīng)，腓腸肌發(fā)生迅速的收縮反應(yīng)；用經(jīng)任氏液沾濕的鋅銅弓短暫輕觸腓腸肌，也發(fā)生迅速的收縮反應(yīng)。思考題：l 1剝?nèi)テつw的后肢，能用自來(lái)水沖洗嗎？為什么？答：不能。任氏液是等滲溶液，而且ph和一些基本離子也模擬了體內(nèi)的環(huán)境。用清水浸泡或沖洗的話細(xì)胞吸水過(guò)度會(huì)漲破。l 2金屬器械碰壓、觸及或損傷神經(jīng)及腓腸肌，可能引起哪些不良后果？金屬器械碰壓神經(jīng)與腓腸肌,會(huì)引起肌肉收縮,如果碰的較重,損傷部位及近端的神經(jīng)就死亡了,以后刺激只能從損傷處向肌肉處之間的部分.另外容易使標(biāo)本疲勞,失去活性。l 3如何保持標(biāo)本的機(jī)能正常？金屬器械不要碰及、損傷神經(jīng)或腓腸肌，保持濕潤(rùn)，常加任氏液，最好先泡一會(huì)。l 4 鋅銅弓刺激檢測(cè)標(biāo)本活性的原理是什么？Zn的金屬電勢(shì)比銅低，形成一定的電勢(shì)差（就相當(dāng)于有電壓），鋅銅弓是把一根鋅棒和一根銅棒一端焊在一起，另一段分開，則接觸樣本（例如神經(jīng)干）時(shí)，會(huì)引起樣本局部去極化，引發(fā)動(dòng)作電位。創(chuàng)新與探索：你認(rèn)為該標(biāo)本的制作方法有哪些需要改進(jìn)的地方？請(qǐng)說(shuō)出你的想法。答：我