RNAi技術(shù)專題講座PPT

1、logo rnai技術(shù)技術(shù) 主講人：方中明主講人：方中明 rna的分類的分類 typesfunction ribosomal rna (rrna) messenger rna (mrna) transfer rna (trna) heterogeneous nuclear rna (hnrna) small nuclear rna(snrna) small nucleolar rna (snorna) small cytoplasmic rna ribozyme microrna (mirna) small interfering rna (sirna) non-coding rna (ncr

2、na) component of ribosome template of protein synthesis transfer amino acid premature mrna participate the splicing and transfer of hnrna, includes spliceosomal rna process and modify rrna recognize the protein sorting signal catalytic rna usually endogenous, induce degradation of targeted mrna usua

3、lly exogenous, induce degradation of targeted mrna all rna other than mrna, priorly functional rna longer than 200nt rnai技術(shù)技術(shù) 一、一、rnai的發(fā)現(xiàn)的發(fā)現(xiàn) 三、三、rnai的作用機(jī)制的作用機(jī)制 二、二、rnai的的概念概念 四、四、rnai的特點(diǎn)的特點(diǎn) 五、五、rnai的技術(shù)應(yīng)用的技術(shù)應(yīng)用 六、六、rnai的發(fā)展前景的發(fā)展前景 rnai技術(shù)技術(shù) andrewfirecraigmello 2006年諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng)年諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng) 一、一、rnai的發(fā)現(xiàn)的發(fā)現(xiàn) 1998年年

4、andrew fire和和craig mello等人首次證實(shí)雙鏈等人首次證實(shí)雙鏈 rna分子可誘導(dǎo)同源目標(biāo)分子可誘導(dǎo)同源目標(biāo)mrna降解，導(dǎo)致特定基降解，導(dǎo)致特定基 因表達(dá)沉默，并將其命名為因表達(dá)沉默，并將其命名為rna干擾干擾 2001年年tuschl，phil sharp等人在等人在nature上首次證實(shí)上首次證實(shí) 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中存在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中存在rnai機(jī)制機(jī)制 2002年年science加州大學(xué)里弗塞德分校的加州大學(xué)里弗塞德分校的shou- wei ding等人首次證明動(dòng)物細(xì)胞利用等人首次證明動(dòng)物細(xì)胞利用rna沉默來抵沉默來抵 御病毒侵染御病毒侵染 2006年年eugene koo

5、nin等人又證明原核生物里存在類等人又證明原核生物里存在類 似于真核生物似于真核生物rna干擾系統(tǒng)的干擾系統(tǒng)的rna沉默機(jī)制沉默機(jī)制 v被science雜志評(píng)為2001年的十 大科學(xué)進(jìn)展之一，并名列2002年十大 科學(xué)進(jìn)展之首。 rnai（rna interference ） rnai（rnai interference, rna干擾干擾)是指在進(jìn)是指在進(jìn) 化過程中高度保守的、由雙鏈化過程中高度保守的、由雙鏈rna(double- stranded rna，dsrna)誘發(fā)的、同源誘發(fā)的、同源mrna高高 效特異性降解的現(xiàn)象。是一種轉(zhuǎn)錄后水平的基效特異性降解的現(xiàn)象。是一種轉(zhuǎn)錄后水平的基 因沉默

6、因沉默 。 二二、rnai的概念的概念 rnai現(xiàn)象的普遍性現(xiàn)象的普遍性 rnai普遍存在于水稻、煙草、果蠅及人等幾乎所普遍存在于水稻、煙草、果蠅及人等幾乎所 有真核生物中；有真核生物中；rnai能高效的特異阻斷基因的表能高效的特異阻斷基因的表 達(dá)，在線蟲和果蠅體內(nèi)，達(dá)，在線蟲和果蠅體內(nèi)，rnai能達(dá)到基因敲除的能達(dá)到基因敲除的 效果效果 直接向細(xì)胞導(dǎo)入長(zhǎng)雙鏈直接向細(xì)胞導(dǎo)入長(zhǎng)雙鏈rna(dsrna)rna(dsrna)， 在細(xì)胞質(zhì)核酸酶在細(xì)胞質(zhì)核酸酶dicerdicer的作用下可將長(zhǎng)的作用下可將長(zhǎng) 雙鏈雙鏈rnarna降解為降解為21-23bp21-23bp的小分子干擾的小分子干擾 rnarn

7、a（sirnassirnas） 這些這些sirnassirnas結(jié)合其他元件形成結(jié)合其他元件形成“rnarna誘誘 導(dǎo)沉默復(fù)合物導(dǎo)沉默復(fù)合物”(riscs)(riscs)，并引導(dǎo)，并引導(dǎo) riscsriscs結(jié)合到與之互補(bǔ)的結(jié)合到與之互補(bǔ)的mrnamrna序列上，序列上， 降解對(duì)應(yīng)的降解對(duì)應(yīng)的mrna mrna 導(dǎo)致對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)水平下降，最終導(dǎo)致 目標(biāo)基因表達(dá)沉默(見圖，線路1，藍(lán) 色) 非哺乳動(dòng)物細(xì)胞非哺乳動(dòng)物細(xì)胞rnai技術(shù)路線技術(shù)路線 轉(zhuǎn)錄水平轉(zhuǎn)錄水平 轉(zhuǎn)錄后水平轉(zhuǎn)錄后水平 rnai作用機(jī)制的兩種水平 三、三、rnai作用機(jī)制作用機(jī)制 哺乳動(dòng)物細(xì)胞哺乳動(dòng)物細(xì)胞rnairnai技術(shù)路線技術(shù)路

8、線 直接制備19-23bp左右的sirnas，將sirnas轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng) 物細(xì)胞(線路2，紅色) 或是將短發(fā)夾結(jié)構(gòu)rna(shrnas)的dna表達(dá)載體轉(zhuǎn)入 細(xì)胞，表達(dá)產(chǎn)生shrna，經(jīng)過dicer切割后得到 sirna(線路3，黃色) 最后sirnas和其他元件組合成為rna誘導(dǎo)的沉默復(fù)合 物riscs，在sirna指引下識(shí)別對(duì)應(yīng)的mrna序列并降解 mrna，從而使特定基因表達(dá)沉默 rnai技術(shù)機(jī)制路線圖 sirna誘導(dǎo)的基因沉默 病毒基因、人工轉(zhuǎn)入基因、轉(zhuǎn)座子等外源性基因隨病毒基因、人工轉(zhuǎn)入基因、轉(zhuǎn)座子等外源性基因隨 機(jī)整合到宿主細(xì)胞基因組內(nèi)，并利用宿主細(xì)胞進(jìn)行機(jī)整合到宿主細(xì)胞基因組內(nèi)，并

9、利用宿主細(xì)胞進(jìn)行 轉(zhuǎn)錄時(shí)，常產(chǎn)生一些轉(zhuǎn)錄時(shí)，常產(chǎn)生一些dsrna。 宿主細(xì)胞對(duì)這些宿主細(xì)胞對(duì)這些dsrna迅即產(chǎn)生反應(yīng)，迅即產(chǎn)生反應(yīng)， 作用機(jī)制作用機(jī)制 其胞質(zhì)中的核酸內(nèi)切酶其胞質(zhì)中的核酸內(nèi)切酶dicer將將dsrna切割成多個(gè)具切割成多個(gè)具 有特定長(zhǎng)度和結(jié)構(gòu)的小片段有特定長(zhǎng)度和結(jié)構(gòu)的小片段rna（大約（大約2123 bp），）， 即即sirna。 sirna在細(xì)胞內(nèi)在細(xì)胞內(nèi)rna解旋酶的作用下解鏈成正義鏈解旋酶的作用下解鏈成正義鏈 和反義鏈，繼之由反義和反義鏈，繼之由反義sirna再與體內(nèi)一些酶（包再與體內(nèi)一些酶（包 括內(nèi)切酶、外切酶、解旋酶等）結(jié)合形成括內(nèi)切酶、外切酶、解旋酶等）結(jié)合形成r

10、na誘導(dǎo)誘導(dǎo) 的沉默復(fù)合物的沉默復(fù)合物（rna-induced silencing complex， risc)。 vrisc與外源性基因表達(dá)的與外源性基因表達(dá)的mrna的同源區(qū)進(jìn)行特的同源區(qū)進(jìn)行特 異性結(jié)合，異性結(jié)合，risc具有核酸酶的功能，在結(jié)合部位具有核酸酶的功能，在結(jié)合部位 切割切割mrna，切割位點(diǎn)即是與，切割位點(diǎn)即是與sirna中反義鏈互中反義鏈互 補(bǔ)結(jié)合的兩端。被切割后的斷裂補(bǔ)結(jié)合的兩端。被切割后的斷裂mrna隨即降解隨即降解 ，從而誘發(fā)宿主細(xì)胞針對(duì)這些，從而誘發(fā)宿主細(xì)胞針對(duì)這些mrna的降解反應(yīng)的降解反應(yīng) 。 vsirna不僅能引導(dǎo)不僅能引導(dǎo)risc切割同源單鏈切割同源單鏈m

11、rna，而，而 且可作為引物與靶且可作為引物與靶rna結(jié)合并在結(jié)合并在rna聚合酶聚合酶 (rna-dependent rna polymerase，rdrp）作用）作用 下下合成更多新的合成更多新的dsrna，新合成的，新合成的dsrna再由再由 dicer切割產(chǎn)生大量的次級(jí)切割產(chǎn)生大量的次級(jí)sirna，從而使，從而使rnai的的 作用進(jìn)一步放大，最終將靶作用進(jìn)一步放大，最終將靶mrna完全降解。完全降解。 vdicer (dcr）：是rnaase 家族中的一員，主要 切割dsrna或者莖環(huán)結(jié)構(gòu)的rna前體成為小rnas 分子。對(duì)應(yīng)地，我們將這種小rnas分子命名為 sirnas和mirna

12、。dicer有著較多的結(jié)構(gòu)域，最先 在果蠅中發(fā)現(xiàn)，并且在不同的生物體上表現(xiàn)出很 高的保守性。 vmicrorna (mirna）：是含有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的mirna 前體，經(jīng)過dicer加工之后的一類非編碼的小rna 分子（21-23個(gè)核苷酸）。mirna，以及 miriscs（rna-蛋白質(zhì)復(fù)合物）在動(dòng)物和植物中 廣泛表達(dá)。因之具有破壞目標(biāo)特異性基因的轉(zhuǎn)錄 產(chǎn)物或者誘導(dǎo)翻譯抑制的功能，mirna被認(rèn)為在 調(diào)控發(fā)育過程中有重要作用。 rnai具有的特征具有的特征 vrnai是轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默機(jī)制；是轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默機(jī)制； vrnai具有很高的特異性，只降解與之序列相應(yīng)具有很高的特異性，只降解與

13、之序列相應(yīng) 的單個(gè)內(nèi)源基因的的單個(gè)內(nèi)源基因的mrna； vrnai抑制基因表達(dá)具有很高的效率，表型可以抑制基因表達(dá)具有很高的效率，表型可以 達(dá)到缺失突變體表型的程度，而且相對(duì)很少量的達(dá)到缺失突變體表型的程度，而且相對(duì)很少量的 dsrna分子（數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于內(nèi)源分子（數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于內(nèi)源mrna的數(shù)量）的數(shù)量） 就能完全抑制相應(yīng)基因的表達(dá)，是以催化放大的就能完全抑制相應(yīng)基因的表達(dá)，是以催化放大的 方式進(jìn)行的；方式進(jìn)行的； vrnai抑制基因表達(dá)的效應(yīng)可以穿過細(xì)胞界限，抑制基因表達(dá)的效應(yīng)可以穿過細(xì)胞界限， 在不同細(xì)胞間長(zhǎng)距離傳遞和維持信號(hào)甚至傳播至在不同細(xì)胞間長(zhǎng)距離傳遞和維持信號(hào)甚至傳播至 整個(gè)有機(jī)體以

14、及可遺傳等特點(diǎn)；整個(gè)有機(jī)體以及可遺傳等特點(diǎn)； vdsrna不得短于不得短于21個(gè)堿基，并且長(zhǎng)鏈個(gè)堿基，并且長(zhǎng)鏈dsrna也也 在細(xì)胞內(nèi)被在細(xì)胞內(nèi)被dicer酶切割為酶切割為21 bp左右的左右的sirna，并，并 由由sirna來介導(dǎo)來介導(dǎo)mrna切割。而且大于切割。而且大于30 bp的的 dsrna不能在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)特異的不能在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)特異的rna干擾，干擾， 而是細(xì)胞非特異性和全面的基因表達(dá)受抑和凋亡而是細(xì)胞非特異性和全面的基因表達(dá)受抑和凋亡 ； vatp依賴性：在去除依賴性：在去除atp的樣品中的樣品中rna干擾現(xiàn)干擾現(xiàn) 象降低或消失顯示象降低或消失顯示rna干擾是一個(gè)干擾是一個(gè)

15、atp依賴的過依賴的過 程。可能是程。可能是dicer和和risc的酶切反應(yīng)必須由的酶切反應(yīng)必須由atp提提 供能量。供能量。 四、四、rnai的特點(diǎn)的特點(diǎn) 生物體內(nèi)廣泛存在的生物體內(nèi)廣泛存在的rnairnai作用是什么？作用是什么？ 在小分子rna中發(fā)現(xiàn)了一類與調(diào)節(jié)基因表達(dá)密切 相關(guān)的分子micro rna (mirna)。這種內(nèi)源性的 小分子rna針對(duì)3端非編碼區(qū)，有著極高的保守 性，并在組織中廣泛表達(dá)，可在轉(zhuǎn)錄后以及翻譯 水平上調(diào)控基因表達(dá)。 病毒防御 rna沉默被認(rèn)為是低等生物和植物抗病毒防御 系統(tǒng)的一道防線 基因調(diào)控 五、五、rnai技術(shù)應(yīng)用技術(shù)應(yīng)用 基因沉默工具 rnai主要通過轉(zhuǎn)

16、錄后水平阻斷基因的表達(dá)，導(dǎo)主要通過轉(zhuǎn)錄后水平阻斷基因的表達(dá)，導(dǎo) 致蛋白無法合成，出現(xiàn)致蛋白無法合成，出現(xiàn)“基因沉默基因沉默”。比如，當(dāng)。比如，當(dāng) 關(guān)閉關(guān)閉非必須非必須或或致病致病基因的功能。從理論上說，若基因的功能。從理論上說，若 能抑制致病基因的表達(dá)則很多疾病將被治愈能抑制致病基因的表達(dá)則很多疾病將被治愈。動(dòng)動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)證明，可以通過物實(shí)驗(yàn)證明，可以通過rnai的方法是膽固醇升的方法是膽固醇升 高的基因高的基因“沉默沉默”：病毒性疾病、眼疾、心血管：病毒性疾病、眼疾、心血管 代謝性疾病等方面的臨床實(shí)驗(yàn)也正在進(jìn)行；這一代謝性疾病等方面的臨床實(shí)驗(yàn)也正在進(jìn)行；這一 方法為病毒性肝炎，艾滋病，腫瘤等等

17、人類頑疾方法為病毒性肝炎，艾滋病，腫瘤等等人類頑疾 的治療指明道路的治療指明道路。 rnai文庫(kù) 隨著人類基因組計(jì)劃的完成和蛋白質(zhì)組隨著人類基因組計(jì)劃的完成和蛋白質(zhì)組 研究的開展，我們的視野不再局限于單研究的開展，我們的視野不再局限于單 個(gè)的基因，整個(gè)研究領(lǐng)域都在期待呼喚個(gè)的基因，整個(gè)研究領(lǐng)域都在期待呼喚 更為強(qiáng)大的、全基因組高度的基因功能更為強(qiáng)大的、全基因組高度的基因功能 研究工具。研究工具。 rnai文庫(kù)文庫(kù)(rnai library)是人工構(gòu)建的是人工構(gòu)建的 能通過誘導(dǎo)沉能通過誘導(dǎo)沉 默眾多不同基因表達(dá)的默眾多不同基因表達(dá)的 組合文庫(kù)，可以用于建立功能缺陷組合文庫(kù)，可以用于建立功能缺陷(

18、loss of function) 的生物或細(xì)胞庫(kù)，進(jìn)行表的生物或細(xì)胞庫(kù)，進(jìn)行表 型的篩選。型的篩選。 臨床疾病治療 病毒性疾病的治療病毒性疾病的治療 設(shè)計(jì)合成的設(shè)計(jì)合成的lenti病毒載體引入病毒載體引入sirna，激發(fā)，激發(fā) rnai使其抑制了使其抑制了hiv-1的輔助受體的輔助受體ccr5進(jìn)進(jìn) 入人體外周淋巴細(xì)胞，而不影響另一種入人體外周淋巴細(xì)胞，而不影響另一種 hiv-1主要的輔助受體主要的輔助受體ccr4，從而使以，從而使以lenti 病毒載體為媒介引導(dǎo)病毒載體為媒介引導(dǎo)sirna進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生 了免疫應(yīng)答，由此治療了免疫應(yīng)答，由此治療hiv-1和其他病毒感和其他病毒感

19、 染性疾病的可行性大大增加染性疾病的可行性大大增加。 rnairnai還可應(yīng)用于其它病毒感染如脊髓灰質(zhì)炎病還可應(yīng)用于其它病毒感染如脊髓灰質(zhì)炎病 毒等毒等 hiv-1 淋巴球 淋巴球 出芽出芽 遺傳性疾病的治療遺傳性疾病的治療 美國(guó)西北大學(xué)的美國(guó)西北大學(xué)的carthew r w和日本基因研和日本基因研 究所的究所的ishizuka a等人發(fā)現(xiàn)等人發(fā)現(xiàn)rnai與脆性染與脆性染 色體綜合征（與色體綜合征（與fmr-1基因基因異常異常 有關(guān)的導(dǎo)致智力低下的染色體?。┲g的關(guān)有關(guān)的導(dǎo)致智力低下的染色體?。┲g的關(guān) 系密切，揭示了與系密切，揭示了與rnai相關(guān)機(jī)制的缺陷可能相關(guān)機(jī)制的缺陷可能 導(dǎo)致人類疾病

20、的病理機(jī)制。導(dǎo)致人類疾病的病理機(jī)制。 遺傳性疾病的遺傳性疾病的rnai治療成治療成 為當(dāng)今研究為當(dāng)今研究rnai的又一大的又一大 熱點(diǎn)。熱點(diǎn)。 腫瘤病的治療腫瘤病的治療 rnai可以利用同一基因家族的多個(gè)基因具有一可以利用同一基因家族的多個(gè)基因具有一 段同源性很高的保守序列這一特性，設(shè)計(jì)針對(duì)這段同源性很高的保守序列這一特性，設(shè)計(jì)針對(duì)這 一區(qū)段序列的一區(qū)段序列的dsrna分子，只注射一種分子，只注射一種dsrna 即可以產(chǎn)生多個(gè)基因同時(shí)剔除的表現(xiàn)，也可以同即可以產(chǎn)生多個(gè)基因同時(shí)剔除的表現(xiàn)，也可以同 時(shí)注射多種時(shí)注射多種dsrna而將多個(gè)序列不相關(guān)的基因而將多個(gè)序列不相關(guān)的基因 同時(shí)剔除。同時(shí)剔除

21、。 小鼠黑色素瘤細(xì)胞小鼠黑色素瘤細(xì)胞 在整形外科領(lǐng)域的應(yīng)用前景在整形外科領(lǐng)域的應(yīng)用前景 n-ras或或braf的激活型突變是引發(fā)黑素瘤的激活型突變是引發(fā)黑素瘤 的主要病因，其中的主要病因，其中66%的病例為的病例為braf激激 酶作用域突變酶作用域突變，而約而約80%的的braf突變病突變病 例是因胸腺嘧啶突變?yōu)橄汆堰试斐傻诶且蛐叵汆奏ね蛔優(yōu)橄汆堰试斐傻?99 位的纈氨酸突變?yōu)楣劝彼崴?。位的纈氨酸突變?yōu)楣劝彼崴隆?使用使用rnai技術(shù)剔除黑素瘤細(xì)胞技術(shù)剔除黑素瘤細(xì)胞 的的braf表達(dá)，不僅抑制了腫表達(dá)，不僅抑制了腫 瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，而且減弱了其侵瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，而且減弱了其侵 襲能力，為黑素瘤基

22、因治療奠襲能力，為黑素瘤基因治療奠 定了基礎(chǔ)。定了基礎(chǔ)。 最近研究表明趨化因子受體最近研究表明趨化因子受體 cxcr4是乳腺癌轉(zhuǎn)移的重要調(diào)是乳腺癌轉(zhuǎn)移的重要調(diào) 節(jié)因素，其配體節(jié)因素，其配體cxcl12可趨化可趨化 腫瘤細(xì)胞并調(diào)節(jié)其增生和侵襲腫瘤細(xì)胞并調(diào)節(jié)其增生和侵襲 特性。使用特性。使用rnai干擾技術(shù)剔除干擾技術(shù)剔除 cxcr4證實(shí)該分子為原位移植證實(shí)該分子為原位移植 腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移所必需。此外，腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移所必需。此外， 剔除剔除bcrp表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)其介導(dǎo)表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)其介導(dǎo) 的腫瘤耐藥。的腫瘤耐藥。 在植物學(xué)中的應(yīng)用在植物學(xué)中的應(yīng)用 napoli等將等將1個(gè)查爾酮合成酶基因個(gè)查爾酮合成酶

23、基因(chs)置于置于1個(gè)個(gè) 強(qiáng)啟動(dòng)子后導(dǎo)人矮牽牛，試圖加深花朵的紫顏強(qiáng)啟動(dòng)子后導(dǎo)人矮牽牛，試圖加深花朵的紫顏 色。結(jié)果部分花的顏色并非期待中的深紫色，色。結(jié)果部分花的顏色并非期待中的深紫色， 而是形成了花斑狀甚至白色，而且這種性狀可而是形成了花斑狀甚至白色，而且這種性狀可 以遺傳。以遺傳。 由于導(dǎo)入的基因和其同 源的內(nèi)源基因同時(shí)都被 抑制，他們將這種現(xiàn)象 命名為共抑制(co- suppression)。 六、六、rnai發(fā)展展望發(fā)展展望 未發(fā)現(xiàn)未發(fā)現(xiàn)rnai之前之前，曾利用反義曾利用反義rna與靶與靶 mrna 序列互補(bǔ)的特性來抑制其表型的發(fā)序列互補(bǔ)的特性來抑制其表型的發(fā) 生生，但由于反義但

24、由于反義rna對(duì)內(nèi)源性表達(dá)的基因?qū)?nèi)源性表達(dá)的基因 抑制作用較弱抑制作用較弱，往往會(huì)產(chǎn)生一些過渡表型往往會(huì)產(chǎn)生一些過渡表型， 易造成對(duì)基因功能判斷錯(cuò)誤易造成對(duì)基因功能判斷錯(cuò)誤，rnai 技術(shù)技術(shù) 與之相比與之相比，特異性更高特異性更高，作用更迅速作用更迅速，副副 反應(yīng)小反應(yīng)小，在有效地沉默靶基因的同時(shí)在有效地沉默靶基因的同時(shí)，對(duì)對(duì) 細(xì)胞本身的調(diào)控系統(tǒng)也沒有影響。細(xì)胞本身的調(diào)控系統(tǒng)也沒有影響。 所以所以rnai技術(shù)的應(yīng)用技術(shù)的應(yīng)用，不僅能大不僅能大 大推動(dòng)人類后基因組計(jì)劃大推動(dòng)人類后基因組計(jì)劃(蛋白組蛋白組 學(xué)學(xué)) 的發(fā)展的發(fā)展，還有可能設(shè)計(jì)出還有可能設(shè)計(jì)出 rnai芯片芯片，高通量地篩選藥物靶高通量地篩選藥物靶 基基，逐條檢測(cè)人類基因組的表達(dá)逐條檢測(cè)人類基因組的表達(dá) 抑制情況來明確基因的功能抑制情況來明確基因的功能。 由于使用由于使用rnai技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特技術(shù)可以特異性