毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)六

1、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)六 傳統(tǒng)致畸實(shí)驗(yàn) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1、具有致畸作用的外來(lái)化學(xué)物質(zhì)，接觸妊娠母體后，可使處于細(xì)胞分化和器官 形成早期的胚胎發(fā)育受到影響，導(dǎo)致形態(tài)、結(jié)構(gòu)和機(jī)能的缺陷，引起胎兒出現(xiàn)畸 形。 2、通過(guò)致畸試驗(yàn)可檢測(cè)受試物是否具有致畸作用，造成何種畸形以及致畸出現(xiàn) 的主要臟器。 3、通過(guò)本實(shí)驗(yàn)了解致畸試驗(yàn)中妊娠大鼠的處死方法和胎仔畸形的檢查方法。 二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1. 2. 3. 4. 5. 妊娠大鼠的處死 活胎仔外形檢查 胎仔內(nèi)臟的檢查 胎仔骨骼的檢查 胎仔骨骼標(biāo)本制作 三、試劑和材料 1、試劑：固定液（Bouins液）：2,4,6-三硝基酚（苦味酸飽和液）75份、甲醛 20份、冰醋酸5份。

2、2、器材：玻璃標(biāo)本瓶、解剖器械（手術(shù)剪刀、鑷子）、手持放大鏡、天平（感 量0.1g ）、濾紙、透明尺、平皿 3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：妊娠1920天的大鼠 四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 1、動(dòng)物選擇原則 代謝過(guò)程：與人接近 胎盤(pán)結(jié)構(gòu)：與人相似 妊娠期：短，一致 窩產(chǎn)仔數(shù)：多 動(dòng)物：大鼠、小鼠、兔 2、劑量分組 一般設(shè)三個(gè)劑量： 高劑量 （不超過(guò)1/5-1/3 LD50） 低劑量 （1/100-1/30 LD50） 中劑量 陰性對(duì)照組 陽(yáng)性對(duì)照組 五、實(shí)驗(yàn)步驟 1、動(dòng)物受孕及其檢查方法 動(dòng)物交配：雌：雄=1:1同籠 確定受孕：查陰栓，白色蠟狀物 查精子，雌鼠陰道分泌物涂片 分組：確定為孕鼠后按照隨機(jī)區(qū)組的方法。將其分配到各

3、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。 2、染毒 給藥時(shí)間：器官形成期給藥，大、小鼠：在受孕第6-15天給藥 常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物器官形成期 動(dòng)物種類 小鼠 大鼠 家兔 器官形成期 615 615 818 妊娠期（天） 19 21 3035 處死時(shí)間 第18天 第20天 第29天 3、母鼠解剖和胎鼠檢查 于大鼠妊娠第20天或小鼠妊娠第18天用乙醚麻醉后頸椎脫臼處死孕鼠，稱 體重后，立即剖腹暴露子宮檢查。 （1）一般檢查：連同胎仔取出子宮。稱胎窩總重。取出胎鼠，檢查活胎、早死 胎、晚死胎、吸收胎。 顏色 器官外形 自然運(yùn)動(dòng) 對(duì)機(jī)械刺激的反應(yīng) 胎盤(pán) 活胎 肉紅色 完整成形 有 有運(yùn)動(dòng)反應(yīng) 紅色、較大 晚期死胎 灰紅色 完整成形

4、 無(wú) 無(wú)運(yùn)動(dòng)反應(yīng) 灰紅、較小 早期死胎 烏紫色 未完整成形 無(wú) 暗紫 吸收胎 暗紫或淺色點(diǎn)塊 不能辨認(rèn) （2）外觀檢查：對(duì)活胎仔逐一觀察外觀有無(wú)畸形。 記錄胎鼠體重、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)。 （3）骨骼標(biāo)本制作：將每窩1/2活胎鼠剝皮后，去除內(nèi)臟、頸后及肩胛處脂肪， 放入茜素紅溶液軟化染色。 （4）骨骼檢查：檢查已制備好的胎鼠骨骼標(biāo)本 形狀、大小、數(shù)量、骨化程度 骨、 枕骨、脊椎骨、肋骨、胸骨、四肢骨 常見(jiàn)胎鼠骨骼畸形 項(xiàng)目 畸形表現(xiàn) 枕骨 枕骨骨化遲緩 胸骨 缺失、骨節(jié)融合 肋骨 多肋、少肋、肋骨融合、分叉肋、波狀肋 脊柱 脊柱融合、脊柱裂、脊柱缺失 四肢骨 短小、畸形、多趾、少趾 (5) 胎鼠內(nèi)臟檢查

5、： 內(nèi)臟標(biāo)本制作：將每窩1/2活胎鼠浸入Bouins液中固定，1-2周后可進(jìn)行 內(nèi)臟檢查。 沿胸、腹中線和肋下緣水平線作“十”字切口，暴露胸、腹腔內(nèi)臟，檢查 主要臟器的位置、數(shù)目、大小、形狀。(肝、腎、胃、腸、子宮、睪丸) (6)頭部檢查頭部： 將頭部做四個(gè)切面進(jìn)行檢查腭裂、鼻道、眼球、腦室。 六、實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄及處理 1、 2、 3、 4、 5、 6、 試驗(yàn)動(dòng)物: 受孕日期: 處死日期: 孕鼠體重: 胎窩總重: 胎鼠檢查 妊娠1920天的大鼠 2015年11月12日 2015年12月1日 332.5g (1) (2) (3) (4) 活胎數(shù) 吸收胎 死胎數(shù) 總計(jì)： 17 0 0 17 (早

6、死0 晚死 0) 56.75 活胎編號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 身長(zhǎng)(cm) 26 25 28 28 22 29 30 28 27 尾長(zhǎng)(cm) 9 9 8 9 11 10 9 10 10 體重(g) 1.51 1.28 1.48 1.62 1.55 1.60 1.70 1.63 1.55 胎盤(pán)總重 6.65g 外觀 均成肉紅色，器官外形完整成形，有自然運(yùn)動(dòng)，對(duì)機(jī)械刺激有反應(yīng) 活胎編號(hào) 10 11 12 13 14 15 16 17 平均 身長(zhǎng)(cm) 27 27 27 26 25 26 27 29 26.9 尾長(zhǎng)(cm) 9 9 10 9 10 10 9 10 9.5 體重(g) 1.58 1.50 1.57 1.58 1.67 1.53 1.51 1.68 1.56 胎盤(pán)總重 6.65g 外觀 均成肉紅色，器官外形完整成形，有自然運(yùn)動(dòng)，對(duì)機(jī)械刺激有反應(yīng) 七、實(shí)驗(yàn)總結(jié)及注意事項(xiàng) 1、實(shí)驗(yàn)總結(jié)： 本次課程學(xué)習(xí)了致畸實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法以及母鼠解剖、活胎仔的外形檢查 及骨骼標(biāo)本觀察、內(nèi)臟標(biāo)本觀察。由于實(shí)驗(yàn)條件限制，選用了健康的孕大鼠進(jìn)行 實(shí)驗(yàn)?？?/p>