Agilent1290超高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、Agilent 1290 超高效液相色 譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程I目的：制定Agilent 1290 超高效液相色譜儀使用操作規(guī)程，確保 操作人員能正確規(guī)范地操作液相色譜儀。H范圍:適用于Agilent1290超高效液相色譜儀的使用。皿規(guī)程：1開機(jī)1.1打開計(jì)算機(jī)，進(jìn)入 Windows畫 面。 1.2 打開 1290INFINITY HPLC各 模塊電源。1.3待各模塊自檢完成后，雙擊 “ Instrument! Online 圖 標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與 12001290INFINITY HPLC通訊。 1.4從“ View菜單中選擇 方法和運(yùn)行控制畫面，點(diǎn) 擊”視圖”菜單中的“樣品視圖“系統(tǒng)視圖”，使

2、其命令 前有“、標(biāo)志，來(lái)調(diào)用所需的界面。1.5點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo)，選擇瓶填充如下圖所示，輸入溶劑的實(shí) 際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積。點(diǎn)擊“Ok”。1.6 從菜單“視圖”中，選中“在線信號(hào)”，選中“信號(hào)窗 口 1”，然后點(diǎn)擊“改變,”鈕，將所要繪圖的信號(hào)移到 右邊的框中，點(diǎn)擊“確定”。（如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào)， 則重復(fù)選中“信號(hào)窗口 2”） 2排氣 2.1 首先在方法編 輯中，泵的參數(shù)設(shè)置部分，選好需要排空的通道 （保證是開的） 2.2 點(diǎn)擊儀器狀態(tài)視圖中泵的圖標(biāo)， 選擇控制，出現(xiàn)如下圖 2.3 勾上吹掃，并且輸入流速，時(shí)間，比例就可以 purge 泵頭。排空的時(shí)候閥會(huì)自動(dòng) 切換，無(wú)需人為介

3、入。 2.4 當(dāng)我們發(fā)現(xiàn)泵頭里面有 氣泡出不來(lái)的時(shí)候，選擇預(yù)備 -開。然后點(diǎn)擊確定。 此時(shí)泵會(huì)用很強(qiáng)烈的方式朝外泵液體，并持續(xù) 20 次 自動(dòng)停止。 3 編輯數(shù)據(jù)采集方法 3.1 開始編輯完整 方法： 從“方法”菜單中選擇“編輯完整方法 , ”項(xiàng)，如下圖所 示選中除“數(shù)據(jù)分析”外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入 下一畫面。 3.2 方法信息： 在“方法注釋”中加入方 法的信息(如： This is for test!) 。點(diǎn)擊“確定”，進(jìn) 入下一畫面。 3.3 進(jìn)樣方式選擇 根據(jù)自動(dòng)進(jìn)樣器的 類型，選擇合適的進(jìn)樣方式。 3.4 泵參數(shù)設(shè)定： 在 “流速”處輸入流量，如 1.5ml/min ，停止時(shí)間

4、： 10 min。在 溶劑B”處輸入70.0, (A=100-B)，也可 插 入”一行時(shí)間表”，編輯梯度。在壓力限”處輸入柱 子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。 3.5 自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù) 設(shè)定: 選擇合適的進(jìn)樣方式， 如圖所示，進(jìn)樣體積 1.0ul ，標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣”只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無(wú)洗針功能?！跋瘁樳M(jìn)樣”可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會(huì)在針座旁邊中 洗針。 3.6 柱溫箱參數(shù)設(shè)定 : 在“溫度”下面的空白方 框內(nèi)輸入所需溫度，如： 40 度。并選中它，點(diǎn)擊“更多信息” 鍵，如圖所示，選中“與左側(cè)相同”，使柱 溫箱的溫度左右一致。3.7 DAD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定：檢 測(cè)波長(zhǎng)：2

5、54nm，帶寬=4nm, 參比波長(zhǎng)=360nm,帶 寬=100nm;檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇最大吸收處的波長(zhǎng)。 樣品帶寬： 一般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度。 參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸 收區(qū)域。參比帶寬：至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等, 許多情況下用 100nm 作為缺省值。峰寬（響應(yīng)時(shí) 間）：其值盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬。狹縫 -狹縫 窄,光譜分辨率高；寬時(shí),噪音低。同時(shí)可以輸入采 集光譜方式,步長(zhǎng),范圍,閾值。選中所用的燈。 可以開啟光學(xué)單元溫度控制 ;可以設(shè)定 8 通道信號(hào)等。 3.8 FLD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定： 色譜條件：響應(yīng)時(shí)間=4s.停止時(shí)間：4min。激發(fā)波長(zhǎng):200-

6、700nm，步長(zhǎng)為1nm，或零級(jí)。發(fā)射波長(zhǎng):280-900nm,步長(zhǎng)為1nm，或零級(jí)。PMT多數(shù)應(yīng)用適當(dāng)?shù)脑O(shè)定值為 10，若高濃度樣品峰被切平頭，則 減少PMT值。 峰寬”大多數(shù)應(yīng)用設(shè)為4s,只有快 速分析采用小的設(shè)定值。 多波長(zhǎng)及光譜（激發(fā)） 。 多波長(zhǎng)及光譜（發(fā)射） 。同時(shí)可以輸入范圍、步長(zhǎng)、 采集光譜。 點(diǎn)擊“確定”進(jìn)入下一畫面。 3.9 運(yùn)行時(shí) 選項(xiàng)表在“運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表”中，選中“數(shù)據(jù)采集”，點(diǎn) 擊“確定”。 3.10 保存方法 從“方法”菜單，選中“方 法另存為 ,”，輸入一方法名，如“測(cè)試”，點(diǎn)擊“確定 4 單次樣品運(yùn)行 從“運(yùn)行控制”菜單中，選擇“樣品信 息”選項(xiàng)，如下圖所示，輸入

7、操作者名稱，如 “安裝工 程師”；在“數(shù)據(jù)文件”中選擇“手動(dòng)”或“前綴/計(jì)數(shù)器” 點(diǎn)擊“確定”，從“系統(tǒng)視圖菜單啟動(dòng)系統(tǒng)。 等儀器準(zhǔn) 備好，基線平穩(wěn)，從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“運(yùn)行方 法”，進(jìn)樣。 （若無(wú)自動(dòng)樣器，則基線平穩(wěn)后，進(jìn)樣并 搬動(dòng)手動(dòng)進(jìn)樣閥，啟動(dòng)運(yùn)行。 ） 5 面積百分比數(shù)據(jù)處 理 5.1 選擇界面 從“視圖”菜單中，點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)分析” 進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。 5.2 調(diào)用信號(hào) 從“文件”菜單選 擇“調(diào)用信號(hào)”，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。 點(diǎn)擊“確定”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。 5.3 做譜圖優(yōu)化： 從 “圖形”菜單中選擇“信號(hào)選項(xiàng)”，如下圖所示。從“范 圍”中選擇“滿 量程”或“自動(dòng)量程”及

8、合適的時(shí)間范圍或選擇“自定 義量程”調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。 點(diǎn)擊“確定”。 5.4 積分優(yōu)化 : 從“積分”菜單中選擇 “積分事件”選項(xiàng)，如下圖所示。選擇合適的 “斜率靈 敏度”， “峰寬”， “最小峰面積”， “最小峰高”。從 “積分”菜單中選擇“積分”選項(xiàng)，則數(shù)據(jù)被積分。 如 積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。點(diǎn)擊左邊“A圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。5.5 打印報(bào)告 : 從“報(bào)告”菜單中選擇“設(shè)定報(bào)告”選項(xiàng)， 進(jìn)入如下圖所示畫面。 點(diǎn)擊“定量結(jié)果”框中“計(jì)算” 右側(cè)的黑三角，選中“面積百分比”，其它選項(xiàng)不變。 點(diǎn)擊“確定”。從“報(bào)告”菜單中選擇“打印報(bào)告”

9、，則 報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則 點(diǎn)擊“報(bào)告”底部的“打印”鈕。 6 關(guān)機(jī)關(guān)機(jī)前，先關(guān) 燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。 退出化學(xué)工作站， 依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用 shut down 關(guān)）。關(guān)閉 Agilent 1290 各模塊電源開關(guān)。 7 定量數(shù)據(jù)處理 7.1 點(diǎn)擊“方法”菜單，選擇“調(diào)用方法 L. ，”在方法目錄中選擇要進(jìn)行定量設(shè)定的方法，該 方法是經(jīng)過(guò)積分和譜圖優(yōu)化過(guò)的方法。點(diǎn)擊 “確定”， 則選擇的方法被調(diào)出。 7.2 從“文件”菜單中選擇“調(diào) 用信號(hào), ”選項(xiàng)，選中標(biāo)樣的數(shù)據(jù)文件名， 點(diǎn)擊“確 定”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。檢查確認(rèn)積分和譜圖優(yōu)化的參 數(shù)是否

10、合適。 7.3 從“校正”菜單中選擇， “新建校正 表”按鈕，進(jìn)入以下畫面， 確認(rèn)選項(xiàng)在“自動(dòng)設(shè)定”； 級(jí)別為“1，”點(diǎn)擊“確定”。若要信號(hào)單獨(dú)計(jì)算，則選 擇前面的空白框。 7.4 在覆蓋現(xiàn)有校準(zhǔn)表中對(duì)話框中， 選擇“是（ Y） ”。若方法中沒(méi)有舊的校準(zhǔn)表，無(wú)此項(xiàng)。7.5 則所有積過(guò)分的峰，其保留時(shí)間、峰面積按序顯 示在校準(zhǔn)表中。如圖所示，依次輸入化合物的名稱、 含量，校準(zhǔn)曲線顯示在右下方。可以設(shè)定參考峰等。 若用內(nèi)標(biāo)方法定量，還須選擇內(nèi)標(biāo)，點(diǎn)擊 “內(nèi)標(biāo)“下的 區(qū)域，選擇那個(gè)峰作為內(nèi)標(biāo)峰，指定每個(gè)色譜峰以 那個(gè)內(nèi)標(biāo)為參比。點(diǎn)擊“確定”。 7.6 在刪除含量為 零的行對(duì)話框中選擇 是（Y） ”。則校準(zhǔn)表中未輸入 含量的峰從表中刪除。 7.7 點(diǎn)擊“校準(zhǔn)”菜單，選擇“校準(zhǔn)設(shè)置”按鈕，進(jìn)入以下畫面，輸入單位：如 “%”； 其它項(xiàng)不變。點(diǎn)擊“確定”。 7.8 打印報(bào)告 : 從“報(bào)告” 菜單中選擇“指定報(bào)告 , ”選項(xiàng)。點(diǎn)擊“定量結(jié)果”框中 “定量”右側(cè)的黑三角，選中“外標(biāo)法”，其它選項(xiàng)不變。 點(diǎn)擊“確定” 。 若是用內(nèi)標(biāo)法定量，則選“內(nèi)標(biāo)法” 。 從“報(bào)告”菜單中選擇“打印報(bào)告“，則報(bào)告結(jié)果將打印 至y屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，貝y點(diǎn)擊報(bào)告“底部的 打印”鈕。-可以選擇打印到文件中，如 PDF格 式。 7.9 若有多個(gè)濃度標(biāo)樣，則依次調(diào)出校準(zhǔn)數(shù)據(jù)， 調(diào)出每一個(gè)校準(zhǔn)數(shù)據(jù)后，