大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目申請書-羊肚菌菌種制備與栽培技術(shù)的研究

1、 項目編號xx 學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃創(chuàng)新訓(xùn)練項目申請書項目名稱項目主持人所在學(xué)院學(xué) 號申請日期起止年月羊肚菌菌種制備與栽培技術(shù)的研究聯(lián)系電話生物與制藥工程學(xué)院專業(yè)班級教務(wù)處制2013 年 5 月填 寫 說 明 1、本申請書所列各項內(nèi)容均須實(shí)事求是，認(rèn)真填寫，表達(dá)嚴(yán)謹(jǐn)，簡明扼要。2、申請人可以是個人，也可也是創(chuàng)新團(tuán)隊，“項目編號”不填。3、本申請書為a4 紙雙面打印，左側(cè)裝訂成冊?？删W(wǎng)上下載、自行復(fù)印或加頁，但格式、內(nèi)容、大小均須與原件一致?？杖表椧睢盁o”4、主持人所在學(xué)院認(rèn)真審核 , 經(jīng)初評和答辯，簽署意見后，由學(xué)院統(tǒng)一將申請書（一式 3 份）報送教務(wù)處。 申請者承諾我保證填報內(nèi)容的真

2、實(shí)性，不存在知識產(chǎn)權(quán)爭議。如果獲得資助，我與本項目組成員將嚴(yán)格遵守學(xué)校的有關(guān)規(guī)定，并按計劃認(rèn)真開展研究工作，在項目研究過程中或結(jié)束時，接受學(xué)校對本項目的中期檢查和結(jié)題驗(yàn)收，并按時提交工作總結(jié)和結(jié)題報告。申請者（簽名）：成員（簽名）：年 月 日 一、基本情況漢xxxx主持人曾經(jīng)參與科研的情況指導(dǎo)教師承擔(dān)科研課題情況指導(dǎo)教師對本項目的支持情況專業(yè)班級xxx郵箱xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 二、項目研究的目的和主要研究內(nèi)容1、研究目的由于羊肚菌營養(yǎng)價值高，在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域具有廣闊的市場需求，其主要來源于野生資源，遠(yuǎn)不能滿足市場需求，而目前羊肚菌人工栽培技術(shù)沒有一個有效的突破，成為羊肚菌

3、人工種植的一個技術(shù)瓶頸。本研究將以野生羊肚菌為原料，對其進(jìn)行菌種的制備，篩選出優(yōu)良的菌種，并進(jìn)一步進(jìn)行栽培技術(shù)的研究，以期在溫室中完成從菌種制備到栽培技術(shù)的這個難題。2、研究內(nèi)容本課題的研究內(nèi)容主要包括羊肚菌菌種的分離、羊肚菌人工栽培技術(shù)的研究以及如何提高栽培的成功率。菌種的分離方法主要是通過對子實(shí)體的組織分離，可以對菌柄或者菌蓋進(jìn)行分離；然后在進(jìn)行一系列的消毒措施，可以用 0.2%的升汞溶液或者 75%的乙醇溶液進(jìn)行浸泡消毒，之后再用無菌水漂洗數(shù)次，其中在升汞或乙醇溶液中的浸泡時間要控制，不能對子實(shí)體的活性造成影響；最后接種于 pda 培養(yǎng)基中，在 25下恒溫培養(yǎng)，并定期觀察菌絲生長情況。為

4、了探索上述科學(xué)問題，申請者將對野生的羊肚菌進(jìn)行不同部位的分離，經(jīng)消毒、漂洗等一系列的措施后，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，并定期觀察，對出現(xiàn)的問題進(jìn)行分析，進(jìn)一步研究菌種分離的新技術(shù)。羊肚菌是一種低溫型菌類 ，適宜溫度較低的地區(qū)栽培 ，氣溫 在 22以下 15以上即可栽培 ，多數(shù)在 10 月份是栽培的好時間 ，適宜菌絲生長發(fā)育 ，遇低溫季節(jié)有利羊肚菌的生理變化。翌年 3 份氣溫逐漸回升 ，子實(shí)體開始大量形成。為了探索上述科學(xué)問題，申請者將選取合適的母種，采用袋裝栽培技術(shù)，將母種進(jìn)行培養(yǎng)至原種，然后在適宜的環(huán)境條件下培養(yǎng)至栽培種，進(jìn)行袋裝栽培，并定期的觀察研究生長過程中的出現(xiàn)的一些現(xiàn)象及問題，并對這些問題進(jìn)行分

5、析，研究出更加合理的栽培方案。 二、國、內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展動態(tài)e mi k jacoue tant 教授在 les mo rill es( 1984)一書中記載 ，羊肚菌屬共有 28個種。，分布于亞州、歐州、北美州及大洋州等國家。 中國真菌總匯記入 8 種羊肚菌。 但根據(jù)目前報道資料統(tǒng)計 ，我國現(xiàn)有羊肚菌 12 個種: 小頂羊肚菌 (黑脈羊肚菌、黑羊肚菌 ) morchella angusticeps peck、尖頂羊肚菌 (圓錐羊肚菌、羊肚子、陽雀菌、蘑菇菌、雞足磨菇 ) m. conica pers.、粗柄 羊肚菌 (粗腿羊肚菌、皺柄羊肚菌 ) m. crassipes (v ent) p

6、ers. ex fr.、小羊肚菌 (美味羊肚菌、鮮羊肚菌、陽雀菌、狼肚菌 )m. deliciosa fr.、羊肚菌 (圓頂羊肚菌、羊肚子、編笠菌、可食羊肚菌 ) m.esculenta ( l. ) pers.、普通羊肚菌 m. vulgaris( pers. ) boud、高羊肚菌 m. elata fr.、硬羊肚菌 m.rigida krombh.、開裂羊肚菌 m. distans fr.、褐赫羊肚菌 m. umbrina、白羊肚菌 m. morchellasp、紫變羊肚菌 m. purpurascens。 分布于我國的西北、西南、華中、華北、華東、華南等地。 其中 m. esculen

7、ta、 m. deliciosa、 m. conica、 m.angusticeps、 m.crassipes 是比較常見的食用菌 。11.2、羊肚菌的生態(tài)環(huán)境1.2.1、 土壤及植被羊肚菌多生長在闊葉林或針闊混交林的腐殖質(zhì)層上 。發(fā)生的土壤類型有黑壤土、1.2.2、 氣候羊肚菌子實(shí)體的生長季節(jié)在每年的 3 5 月和 8 9 月 ， 當(dāng)時氣溫達(dá)10 20 ， 地表溫度達(dá) 12 24 ，月降水量一般 35 60 mm 3，4。所以 ，羊肚菌是在低溫 、高濕條件下萌發(fā)子實(shí)體的 。有研究表明 ，羊肚菌的野外發(fā)生條件主要取決于上年度 11 月的降雨量 ， 而當(dāng)年羊肚菌發(fā)生的遲早取決于當(dāng)年春季 5cm

8、表層土壤溫度是否穩(wěn)定通過 11.5 。21.2.3、形態(tài)特征羊肚菌的菌絲體呈白色 ， 有分隔 ， 分隔處有縊縮 ， 隔膜上有孔洞 ， 多核 ，無鎖狀聯(lián)合 ，異宗接合 ，常產(chǎn)生菌核( 一種堅硬的 、無性細(xì)胞團(tuán) ，是羊肚菌的營養(yǎng)貯藏器官 ，在休眠階段可使其渡過不良的氣候條件) ， 尚未發(fā)現(xiàn)有分生孢子或其 他無性孢子出現(xiàn) 。菌絲有短茸毛和顆粒狀 2 種類型 。顆粒狀菌絲可能是營養(yǎng)衰竭或不良外界條件的應(yīng)變形態(tài) 。羊肚菌子實(shí)體的菌蓋近球形或圓錐形 ，邊緣全部與柄相連 ， 表面起伏成蜂窩狀網(wǎng)棱紋 ，因其形狀像羊肚而被稱為羊肚菌 。菌柄內(nèi)部空心 ， 外面平整或有凹槽 ， 顏色從灰白到深褐色 ，子實(shí)體沿菌蓋下

9、陷部分生長 。子囊呈圓柱形 ， 每個子囊含 8 個子囊孢子 ， 單行排列 ，子囊之間有長的側(cè)絲 ，子囊孢子呈卵圓形 。菌種分離是在無菌條件下將所需要的食用菌與其他微生物分開 ， 在適宜的條件下培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)的過程 。分離純化得到的純培養(yǎng)即是母種 ， 母種的培育制種的關(guān)鍵 ，也是食用菌生產(chǎn)的關(guān)鍵 。母種可由孢子萌發(fā)而成 ， 也可從子實(shí)體組織分離或用斜面菌的菌絲體一節(jié)擴(kuò)增而得 。2.1、孢子分離法孢子分離法是用食用菌成熟的有性孢子(擔(dān)孢子或子囊孢子)在適宜的培養(yǎng)基上萌發(fā)成菌絲體而獲得的純培養(yǎng)的方法，孢子分離法的程序:選擇種菇 種菇消毒 采收孢子接種 培養(yǎng)挑菌落鈍化菌種母種 。2.2、組織分離法切

10、去子實(shí)體、菌核、菌索內(nèi)部組織獲得純培養(yǎng)的方法都屬于組織分離法。2.3、菇木分離法食用菌繁殖盛期已經(jīng)長過子實(shí)體的菇木上 ，選擇出菇良好， 無病蟲害的菇木晾干 ，截取 2 c m 長的小段 ，放在 0. 1%氯化汞中浸 1 mi n ，再用無菌水沖洗 2 3 次 ，吸干水分， 或通過酒精燈火焰重復(fù)鐐銬幾次 ，用 75%酒精表面消毒。然后用解剖刀把木段四周切去， 再把木段切成火柴枝大小的木枝 ，每木枝去兩頭， 接入 p d a 培養(yǎng)基上在適當(dāng)條件下 3 5 d 長出菌絲體 ，即得母種， 以上必須無菌操作 。2.4、培養(yǎng)料分離法選擇子實(shí)體發(fā)生早、產(chǎn)量高、無病蟲害的移栽袋，待子實(shí)體長到成熟度 80%時去

11、掉子實(shí)體，然后用 75%酒精消毒整個栽培袋，同時將接種工具和接種培養(yǎng)料一起放入接種袋 ，用甲醛熏蒸消毒。分離時去掉袋料表面老菌絲 ，用接種針挑取小塊長有菌絲的培養(yǎng)料，接入試管內(nèi)，適宜溫度下培養(yǎng)。選取菌絲良好的試管轉(zhuǎn)管純化。5 羊肚菌為野生真菌 ，其產(chǎn)量受季節(jié)、氣侯等因素的制約。 所以 ，一百多年來 ，羊肚菌的人工栽培研究 ，一直是真菌學(xué)家和業(yè)余愛好者最感興趣的課題之一。 雖有人工栽培成功的報道 ，但試驗(yàn)的重復(fù)性仍較差 ，大面積栽培還有待進(jìn)一步研究之 。1baron dyvoire( 1898)在 5、 6 月把羊肚菌子實(shí)體 (組織塊 )接種到菊芋畦中 ，秋天在菊芋莖基四周施放蘋果渣 ， 1 2

12、 周后 ，再蓋上枯枝落葉。翌年春天 ，除去枯枝落葉 ，在比較潮濕的條件下 ，羊肚菌菌絲體在這種基質(zhì)中蔓延生長。 其后年年產(chǎn)生子實(shí)體。劉波 ( 1953 1954) 4 月中旬在山西羊肚菌產(chǎn)區(qū)的自然條件下 ，進(jìn)行了新鮮菌絲體人工栽培實(shí)驗(yàn) ，并獲得完全正常的第二代子實(shí)體。他的實(shí)驗(yàn)結(jié)論之一是子實(shí)體組織塊分離到的菌絲體移到自然條件下可以產(chǎn)生子實(shí)體。陳惠群 ( 1995)采用層播、從 1991 年冬季開始播種、野外栽培尖頂羊肚菌 ，連續(xù)三年均獲成功。 試驗(yàn)面積由 10m 大到 40m ，單位產(chǎn)量最高達(dá) 212 朵 /m 。22羅凡 ( 1995)報道 ，四川省青川縣菇農(nóng)從 1990 年起開始探索羊肚菌的

13、人工栽培技術(shù) ，通過摸擬野生羊肚菌的生境 ，已成功地培養(yǎng)出了子實(shí)體 ，有的單產(chǎn)達(dá) 40朵/m 。在清溪菌種場曾發(fā)現(xiàn)一特大型叢生羊肚菌 ，其由 64 朵組成 ，鮮重達(dá) 1.2825kg，是采用山上熬過香樟油后的經(jīng)自然堆制的樟木渣作栽培原料人工栽培而成的董淑鳳 ( 1995)野外栽培美味羊肚菌僅獲 8 株碩大的子實(shí)體。她認(rèn)為菌核是轉(zhuǎn)化為子實(shí)體的重要時期 ，也是營養(yǎng)階段處于惡劣條件的標(biāo)志。 菌核在外界適宜的條件下就轉(zhuǎn)變?yōu)樽訉?shí)體。當(dāng)外界條件不適宜時 ，菌核就會老化 ，致使羊肚菌的人工栽培不易成功。早在 1889 年，baron 即在用蘋果渣和菊芋堆制而成的菌床上，用羊肚菌子實(shí)體的碎塊作菌種栽培過羊肚菌

14、。其后，molliard( 1904，1905)用蘋果渣，matruchat( 1909，1910)用廢紙漿和腐木混合物以類似方法栽培羊肚菌，都獲得了羊肚菌的子實(shí)體。 ron o we r( 1982)首次報道栽培 m. esculenta 獲得成功。并與 g. mills 及 j. m ala8朱斗錫( 1993)人工栽培羊肚菌成功，并獲國家專利 。綜上所述 ，羊肚菌已可9以進(jìn)行人工栽培 ，只是栽培的要點(diǎn)、關(guān)鍵技術(shù)尚未完全掌握 ，導(dǎo)致人工栽培的時成時敗。4、發(fā)展動態(tài)我國羊肚菌資源豐富，目前在 20 多個省、市、自治區(qū)都發(fā)現(xiàn)了羊肚菌的蹤跡。由于羊肚菌具有較高的食用藥用價值，其子實(shí)體栽培技術(shù)尚不

15、成熟，而天然資源有限，導(dǎo)致供需不平衡，市場價格居高不下 。所以人工栽培是解決羊肚菌緊俏的出路 ，10實(shí)現(xiàn)羊肚菌商業(yè)化、工廠化生產(chǎn)無疑是真菌學(xué)家急需攻克的難題。為解決這一問題 ，除了要合理保護(hù)、利用、開發(fā)天然資源，如調(diào)查新的羊肚菌資源，對國內(nèi)羊肚菌進(jìn)行資源調(diào)查、分類方面的研究，開展羊肚菌的分子分類學(xué)研究和分子地理學(xué)的研究等 ，還需要深入研究羊肚菌的人工栽培技術(shù) ，實(shí)現(xiàn)其工業(yè)化和商業(yè)化的生產(chǎn)。羊肚菌菌絲是一種易獲得的可利用資源，因此，應(yīng)加強(qiáng)菌絲的應(yīng)用開發(fā)。改進(jìn)發(fā)酵條件，促使發(fā)酵過程朝提高目的產(chǎn)物的方向進(jìn)行，提高產(chǎn)物品質(zhì)，降低發(fā)酵成本，是液體發(fā)酵研究的方向。目前，對羊肚菌多糖的純化研究尚不夠深入。提

16、取、開發(fā)和1任桂梅,張少剛.羊肚菌的研究進(jìn)展n.延安大學(xué)學(xué)報 :自然科學(xué)版 ,1999-3(18).2談峰,胡加如,汪凱華.羊肚菌野生生態(tài)條件調(diào)查研究j.食用菌,1999(6):2.3任桂梅,張少剛.羊肚菌的研究進(jìn)展n.延安大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,1999,18(1): 57-64. 4謝占玲,謝占青.羊肚菌研究綜述n.青海大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版,2007, 25(2): 36-40.5江 微 ,楊江華 ,李 川.食用菌菌種分離研究進(jìn)展j.農(nóng)技服務(wù),2009,26(7):161 -162.6陳惠群等 ,羊肚菌子實(shí)體生理特性研究 ,(二),食用菌 ,1997, (2) 6- 7.7羅凡 ,青川羊肚

17、菌資源及其生態(tài)環(huán)境 ,食用菌 , 1995, (增): 7- 8.8o we r.r.(1982) notes on the development of the m o red ascocar p. m o rchella esculenta ,1974( 1):142-143.10朱 林,程顯好 ,田吉騰.羊肚菌的研究進(jìn)展j.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) .2008 ,36(10) : 4054-4057.11陳向東, 朱 戎 ,蘭 進(jìn).羊肚菌研究進(jìn)展j.食用菌學(xué)報 .2002 .9(2): 56 61. 1.2 羊肚菌的消毒：將準(zhǔn)備好的羊肚菌在清水中微微的清洗一下，去除表面的臟東西和泥土，然后進(jìn)行消毒：

18、將羊肚菌用消過毒的剪刀從中間豎直剪開，取其中一半浸泡在0.1%的升汞溶液中 20 秒（事先配制好），溶液浸沒過羊肚菌即可，然后立即用消過毒的鑷子夾取放入無菌水中，漂洗兩次；在用鑷子夾取放入75%的乙醇溶液中，浸泡 30秒，然后在用無菌水漂洗三次，即可成功消毒。1.3 羊肚菌不同部位的組織培養(yǎng)：在超凈工作臺上用消毒后的剪刀將消毒后的羊肚菌剪取菌柄、菌傘、菌根三個部位，在分別對三個部分剪成四份，在酒精燈火焰上方用滅菌后的鑷子分別夾取放入編號為 1、2、3 的培養(yǎng)基上（分成四個區(qū)域），1、2、3 分別代表菌柄、菌傘、菌根。然后放入28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 34 天，并每天觀察培養(yǎng)的情況。羊肚菌的袋裝栽培工藝流程為：栽培場地的準(zhǔn)備培養(yǎng)料的調(diào)配裝袋滅菌接種菌絲培養(yǎng)脫袋轉(zhuǎn)色出菇管理采收。由于羊肚菌的生長對周圍的環(huán)境要求非常苛刻，土壤的濕度、溫度、ph、光照等都是栽培中所需要解決的問題。 2016 年 5 月2017 年 4 月：本課題組所有成員在高中的學(xué)習(xí)時就已經(jīng)對生物學(xué)科有很強(qiáng)的興趣，現(xiàn)在就讀于大學(xué)