實驗——DNA的粗提取與鑒定

1、精品文檔實驗DNA 的粗提取與鑒定目的要求1.了解實驗原理。2.學會 DNA 的粗提取和鑒定的方法，觀察提取出來的DNA 物質(zhì)。3通過本實驗培養(yǎng)實驗操作能力和觀察能力。實驗原理1. DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度，是隨著NaCl 的濃度的變化而改變的。當NaCl 的物質(zhì)的量濃度為0.14mOl L 時 ,DNA 的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl 溶液中的DNA 析出。2.DNA 不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA 。3.DNA 遇二苯胺（沸水?。境伤{色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA 的試劑。注意事

2、項1.步驟 3 析出含 DNA 的黏稠物中，蒸餾水要沿燒杯內(nèi)壁緩緩加入，不能一次快速倒入。2.實驗中有多個步驟都要用玻璃棒進行攪拌，但是在不同的步驟中玻璃棒的用法不同。實驗用具雞血細胞液（ 5 10mL ）；體積分數(shù)為95的冷酒精，蒸餾水，質(zhì)量濃度為01gmL 的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2mol L 和 0015mol L 的 NaCl 溶液，二苯胺試劑； 燒杯（100mL ，1 個， 50mL ，500mL，各 2 個），漏斗，試管（20mL ，2 個），玻璃棒，滴管，量筒（100mL ，1 個），紗布，鑷子，濾紙，鐵架臺，鐵環(huán)，三角架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，試管夾。課時安排一課時

3、課前準備制備雞血細胞液，方法是：將質(zhì)量濃度為0.1gmL 的檸檬酸鈉溶液100mL ，置于 500mL 燒懷中，注入新鮮的雞血（約180mL ），用玻璃棒攪拌，使其充分混合，以免凝血。靜置于冰箱內(nèi)一天，使血細胞自行沉淀。（也可以用離心機離心2 min （轉(zhuǎn)速 1000 轉(zhuǎn)/分）。用吸管吸去上清液。板書（提前寫好）DNA 的粗提取與鑒定.精品文檔實驗原理：1.析出溶解在NaC1 溶液中的 DNA 。2.用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA 。3.DNA 在沸水浴時被二苯胺染成藍色。方法步驟 ：1提取細胞核物質(zhì)：順時針方向攪拌，稍快，稍重。5 min2溶解 DNA ：3析出含DNA 的黏稠物：蒸餾水3

4、00mL ，逆時針方向攪拌，緩慢4過濾：取黏稠物5再溶解：順時針方向攪拌，較慢。3 min6過濾：取濾液。7提取出含雜質(zhì)較少的DNA ，逆時針方向攪拌，稍慢。5 min8 DNA 的鑒定：沸水浴5min教學過程引言：上節(jié)課我們通過幾個驗證性實驗，證明了DNA 是主要的遺傳物質(zhì)。那么DNA 是什么樣的物質(zhì)呢？今天我們就通過實驗將它提取出來，進行觀察和鑒定。首先請一位同學說一說實驗原理。（答：略）問：通過預(yù)習，你知道選用什么實驗材料？課前準備是怎樣做的？（答：雞血細胞液。制備方法：略。）問：在制備雞血細胞液時，所用的檸檬酸鈉有什么作用？（答：防止血液凝固。）制備過程中，一定要用剛宰殺的雞的新鮮血，

5、并且要與抗凝劑充分混合，防止凝血。我們采用靜置一天的方法，獲得雞血細胞液。下面大家在動手做實驗之前先要明確幾個需要注意的問題：1要嚴格按照實驗指導(dǎo)的方法步驟去操作。2實驗中有多個步驟都要用玻璃棒進行攪拌，使用時玻璃棒不要碰到燒杯底，在不同的步驟中玻璃棒的用法不同，每一步的用法參照黑板上的指導(dǎo)去操作。3在 DNA 的鑒定中，所用的二苯胺是一種有毒性的試劑，大家在使用時注意不要讓藥液接觸到皮膚.精品文檔或身體的其他部位，也不要近距離觀察。下面在實驗進行過程中，要思考每一操作步驟要達到什么目的。（教師巡視，指導(dǎo)）在進行步驟1 時，利用攪拌的5 分鐘做如下提問：問：為什么要加蒸餾水？加入蒸餾水后細胞將

6、會怎樣？（答：讓細胞內(nèi)溶液的濃度大于周圍溶液的濃度，細胞會吸水以至脹破。）問：為什么要用力攪拌？（答：可以加速血細胞和細胞核的破裂。）所以下一步驟過濾將濾去的是細胞膜和核膜等物質(zhì)。（在進行步驟3 時，要向全班明確。）這一步驟是這個實驗成敗的關(guān)鍵，注意加蒸餾水的方法和使用玻璃棒的方法，千萬不能太快太猛，防止打碎 DNA 。（教師巡視，指導(dǎo)）觀察濾取出來的黏稠物的顏色。有的同學提取的黏稠物較少，原因可能是在溶解DNA 時不充分，也可能是析出黏稠物時攪拌的快了。（教師巡視，指導(dǎo)）將黏稠物再溶解時一定要充分，多攪拌。以免有DNA 損失。（教師巡視，指導(dǎo)。）加入冷酒精時動作要慢。當玻璃棒上出現(xiàn)絲狀物纏繞

7、時，繼續(xù)慢慢攪拌。至不再增加時，取出吸干上面的水分。仔細觀察絲狀物呈什么顏色？（答：黃色。）這些絲狀物要用二苯胺鑒定。使用二苯胺時要注意不要接觸到藥液。進行沸水浴時，在實驗室較為通風的地方集體進行。（利用沸水浴的5 min ）問：步驟 3 中加入蒸餾水的目的？與步驟1 有什么區(qū)別？（答：步驟3 中加蒸餾水是使NaCl 溶液的濃度逐漸降至014mol L，使 DNA 的黏稠物析出。而步驟 1 加蒸餾水是為了讓細胞吸水脹破。）很好。問：步驟7 為什么要加50mL 的冷酒精？（答：因為DNA 不溶于冷酒精，而其他物質(zhì)可以溶解在酒精中，使含雜質(zhì)較少的DNA 絲狀物可以析.精品文檔出。懸浮于溶液中。）現(xiàn)在大家從水浴鍋中拿出試管，比較兩個試管中溶液的顏色有什么不同？（答：有絲狀物的試管變成藍色，另一試管還是原來顏色。）問：這一鑒定結(jié)果說明什么問題？（答：提取出的絲狀物是DNA 。）那么你看到的絲狀物的粗細是不是DNA 分子的直徑呢？（答：不是。 DNA 分子直徑只有2nm。絲狀物是多