藥物重復(fù)給藥毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則參考Word

1、藥物重復(fù)給藥毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則一、概述 重復(fù)給藥毒性試驗是描述動物重復(fù)接受受試物后的毒性特征，它是非臨床安全性評價的重要內(nèi)容。重復(fù)給藥毒性試驗可以：預(yù)測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)，包括不良反應(yīng)的性質(zhì)、程度、量效和時效關(guān)系、以及可逆性等；判斷受試物重復(fù)給藥的毒性靶器官或靶組織；如果可能，確定未觀察到臨床不良反應(yīng)的劑量水平（No Observed Adverse Effect Level，NOAEL）；推測第一次臨床試驗（First in Human, FIH)的起始劑量，為后續(xù)臨床試驗提供安全劑量范圍；為臨床不良反應(yīng)監(jiān)測及防治提供參考。本指導(dǎo)原則適用于中藥、天然藥物和化學(xué)藥物。二、基本原則藥

2、物安全性評價試驗必須執(zhí)行藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（GLP），藥物重復(fù)給藥毒性試驗是藥物研發(fā)體系的有機(jī)組成部分，試驗設(shè)計要重視與其他藥理毒理試驗設(shè)計和研究結(jié)果的關(guān)聯(lián)性，要關(guān)注同類藥物臨床使用情況、臨床適應(yīng)癥和用藥人群、臨床用藥方案，還要結(jié)合受試物理化性質(zhì)和作用特點，使得重復(fù)給藥毒性試驗結(jié)果與其他藥理毒理試驗研究互為說明、補(bǔ)充或/和印證。三、基本內(nèi)容 （一）受試物中藥、天然藥物：受試物應(yīng)采用能充分代表臨床試驗擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品。應(yīng)采用工藝路線及關(guān)鍵工藝參數(shù)確定后的工藝制備，一般應(yīng)為中試或中試以上規(guī)模的樣品，否則應(yīng)有充分的理由。應(yīng)注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、

3、保存條件、有效期及配制方法等，并提供質(zhì)量檢驗報告。由于中藥的特殊性，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，否則應(yīng)提供數(shù)據(jù)支持配制后受試物的質(zhì)量穩(wěn)定性及均勻性。當(dāng)給藥時間較長時，應(yīng)考察配制后體積是否存在隨放置時間延長而膨脹造成終濃度不準(zhǔn)的因素。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進(jìn)行試驗。試驗中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明名稱、標(biāo)準(zhǔn)、批號、有效期、規(guī)格及生產(chǎn)單位?；瘜W(xué)藥物：受試物應(yīng)采用工藝相對穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能反映臨床試驗擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品。受試物應(yīng)注明名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件、有效期及配制方法等，并提供質(zhì)量檢驗報告。試驗中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明名稱、標(biāo)準(zhǔn)、批號、有效期

4、、規(guī)格和生產(chǎn)單位等，并符合試驗要求。在藥物研發(fā)的過程中，若受試物的工藝發(fā)生可能影響其安全性的變化，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的安全性試驗?；瘜W(xué)藥物試驗過程中應(yīng)進(jìn)行受試物樣品分析，并提供樣品分析報告。成分基本清楚的中藥、天然藥物也應(yīng)進(jìn)行受試物樣品分析。（二）實驗動物重復(fù)給藥毒性試驗通常采用兩種實驗動物，一種為嚙齒類，另一種為非嚙齒類。理想的動物應(yīng)具有以下特點：對受試物的代謝與人體相近；對受試物敏感；已有大量歷史對照數(shù)據(jù)，來源、品系、遺傳背景清楚。在重復(fù)給藥毒性試驗前應(yīng)采用合適的試驗方法對實驗動物種屬或品系進(jìn)行選擇。通常，嚙齒類動物首選大鼠、非嚙齒類動物首選Beagle犬，特殊情況下可選用其他種屬或品系動物進(jìn)行重

5、復(fù)給藥毒性試驗，必要時選用疾病模型動物進(jìn)行試驗。實驗動物應(yīng)符合國家對相應(yīng)等級動物的質(zhì)量規(guī)定要求，具有實驗動物質(zhì)量合格證明。一般選擇正常、健康、性成熟動物，同性別體重差異應(yīng)在平均體重的20%之內(nèi)。應(yīng)根據(jù)試驗期限和臨床擬用人群確定動物年齡，一般大鼠為69周齡，Beagle犬612月齡，猴35歲，動物年齡應(yīng)盡量接近，應(yīng)注明開始給藥時動物年齡。每個劑量組動物數(shù)，嚙齒類一般不少于15只/性別（主試驗組10只，恢復(fù)組5只），非嚙齒類一般不少于5只/性別（主試驗組3只，恢復(fù)組2只）。（三）給藥方案1. 給藥劑量：重復(fù)給藥毒性試驗原則上至少應(yīng)設(shè)低、中、高 3個劑量組，以及1個溶媒（或輔料）對照組，必要時設(shè)立空

6、白對照組和/或陽性對照組；高劑量原則上使動物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，低劑量原則上相當(dāng)或高于動物藥效劑量或臨床使用劑量的等效劑量，中劑量應(yīng)結(jié)合毒性作用機(jī)制和特點在高劑量和低劑量之間設(shè)立，以考察毒性的劑量-反應(yīng)關(guān)系。2. 給藥途徑：原則上應(yīng)與臨床擬用途徑一致，如不一致則應(yīng)說明理由。3. 給藥頻率：原則上重復(fù)給藥毒性試驗中動物應(yīng)每天給藥，特殊類型的受試物就其毒性特點和臨床給藥方案等原因，可根據(jù)具體藥物的特點設(shè)計給藥頻率。4. 試驗期限：建議分階段進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗以支持不同期限的臨床試驗。試驗期限的選定可以根據(jù)擬定的臨床療程、適應(yīng)癥、用藥人群等進(jìn)行設(shè)計。一般重復(fù)給藥毒性試驗的試驗期限與所支持的臨床試驗

7、及上市申請的關(guān)系詳見附錄（一）。（四）檢測指標(biāo)重復(fù)給藥毒性試驗應(yīng)檢測指標(biāo)詳見附錄（二）。此外，還應(yīng)結(jié)合受試物的特點及其他試驗中已觀察到的改變或背景信息（如關(guān)于處方組成成分毒性的文獻(xiàn)報道等），在不影響正常毒性觀察和檢測的前提下增加合理的指標(biāo)。實驗動物相關(guān)指標(biāo)的歷史背景數(shù)據(jù)在重復(fù)給藥毒性試驗中具有重要的參考意義。在結(jié)束動物安樂死時進(jìn)行一次全面檢測；當(dāng)試驗期限較長時，應(yīng)根據(jù)受試物的特點及相關(guān)信息選擇合適的時間點進(jìn)行階段性檢測；試驗期間對瀕死或死亡動物應(yīng)及時采集標(biāo)本進(jìn)行檢測，分析瀕死或死亡的原因；恢復(fù)期結(jié)束時進(jìn)行一次全面的檢測。給藥前應(yīng)對動物進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)，嚙齒類動物應(yīng)不少于5天，非嚙齒類動物不少于2

8、周。在適應(yīng)性飼養(yǎng)時，對實驗動物進(jìn)行外觀體征、行為活動、攝食情況和體重檢查，非嚙齒類動物至少應(yīng)進(jìn)行2次體溫、血液學(xué)、血液生化學(xué)和至少1次心電圖檢測。 給藥期間，根據(jù)試驗期限的長短和受試物的特點確定檢測時間和檢測次數(shù)。原則上應(yīng)盡早發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)，并反映出觀測指標(biāo)或參數(shù)變化與試驗期限的關(guān)系。給藥結(jié)束，對主試驗組動物進(jìn)行系統(tǒng)的大體解剖，稱重主要臟器并計算臟器系數(shù)；進(jìn)行組織病理學(xué)檢查并出具完整的病理學(xué)檢查報告，如發(fā)現(xiàn)有異常變化，應(yīng)附有相應(yīng)的組織病理學(xué)照片。非嚙齒類動物對照組和各給藥組主要臟器組織均應(yīng)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查；嚙齒類動物對照組、高劑量組、尸檢異常動物應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)檢查，如高劑量組動物某一組織發(fā)生病理改

9、變，需要對其他劑量組動物的相同組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查；通常需要制備骨髓涂片，以便當(dāng)受試物可能對動物造血系統(tǒng)有影響時進(jìn)行骨髓檢查。給藥結(jié)束后，繼續(xù)觀察恢復(fù)期動物，以了解毒性反應(yīng)的可逆性和可能出現(xiàn)的遲發(fā)毒性；應(yīng)根據(jù)受試物代謝動力學(xué)特點、靶器官毒性反應(yīng)和恢復(fù)情況確定恢復(fù)期的長短，一般情況下應(yīng)不少于4周。（五）伴隨毒代動力學(xué)重復(fù)給藥毒性試驗應(yīng)伴隨進(jìn)行藥物毒代動力學(xué)試驗，具體內(nèi)容參照相應(yīng)指導(dǎo)原則。 四、結(jié)果分析與評價重復(fù)給藥毒性試驗的最終目的在于預(yù)測人體可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。只有通過對試驗結(jié)果的科學(xué)分析和全面評價才能夠清楚描述動物的毒性反應(yīng)，并推斷其與人體的相關(guān)性。重復(fù)給藥毒性試驗結(jié)果的分析和評價是重復(fù)給

10、藥毒性試驗的必要組成部分。（一）試驗結(jié)果的分析分析重復(fù)給藥毒性試驗結(jié)果，判斷動物是否發(fā)生毒性反應(yīng)及毒性靶器官，描述毒性反應(yīng)的性質(zhì)和程度（包括毒性反應(yīng)的起始時間、程度、變化規(guī)律和消除時間），如果有動物死亡應(yīng)分析死亡原因，確定安全范圍，并探討可能的毒性作用機(jī)制。1. 正確理解試驗數(shù)據(jù)的意義在對重復(fù)給藥毒性試驗結(jié)果進(jìn)行分析時，應(yīng)正確理解均值數(shù)據(jù)和個體數(shù)據(jù)的意義。嚙齒類動物重復(fù)給藥毒性試驗中組均值的意義通常大于個體動物數(shù)據(jù)的意義，實驗室歷史背景數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)可以為結(jié)果的分析提供參考；非嚙齒類動物單個動物的試驗數(shù)據(jù)往往具有重要的毒理學(xué)意義，是試驗動物數(shù)量較少、個體差異較大的原因。此外，非嚙齒類動物試驗結(jié)

11、果必須與給藥前數(shù)據(jù)、對照組數(shù)據(jù)和實驗室歷史背景數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，要考慮文獻(xiàn)數(shù)據(jù)參考價值有局限性。在分析重復(fù)給藥毒性試驗結(jié)果時應(yīng)綜合考慮數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)意義和生物學(xué)意義，正確利用統(tǒng)計學(xué)假設(shè)檢驗有助于確定試驗結(jié)果的生物學(xué)意義，要考慮具有統(tǒng)計學(xué)意義并不一定代表具有生物學(xué)意義；在判斷生物學(xué)意義時要考慮參數(shù)變化的劑量-反應(yīng)關(guān)系、其他關(guān)聯(lián)參數(shù)的改變、與歷史背景數(shù)據(jù)的比較等因素；分析試驗結(jié)果時，須對出現(xiàn)的異常數(shù)據(jù)應(yīng)判斷是否由受試物毒性引起并給予科學(xué)解釋。2. 正確判斷毒性反應(yīng)給藥組和對照組之間檢測結(jié)果的差異可能來源于受試物有關(guān)的毒性、動物對藥物的適應(yīng)性改變或正常的生理波動，也可能源于試驗操作失誤和動物應(yīng)激。在分

12、析試驗結(jié)果時，應(yīng)關(guān)注參數(shù)變化的劑量反應(yīng)關(guān)系、組內(nèi)動物的參數(shù)變化幅度和性別差異，同時綜合考慮多項毒理學(xué)指標(biāo)的檢測結(jié)果，分析其中的關(guān)聯(lián)和受試物作用機(jī)制，以正確判斷藥物的毒性反應(yīng)。單個參數(shù)的變化往往并不足以判斷化合物是否引起毒性反應(yīng)，可能需要進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)的試驗。此外，毒代動力學(xué)試驗可以為毒性反應(yīng)和毒性靶器官的判斷提供重要的參考依據(jù)。（二）動物毒性反應(yīng)對于臨床試驗的意義 將重復(fù)給藥毒性試驗結(jié)果外推至人體時，不可避免地會涉及到受試物在動物和人體內(nèi)毒性反應(yīng)之間的差異。首先，不同物種、同物種不同種屬或個體之間對于某一受試物的毒性反應(yīng)可能存在差異；其次，由于在重復(fù)給藥毒性試驗中通常采用較高的給藥劑量，受試物

13、可能在動物體內(nèi)呈非線性動力學(xué)代謝過程，從而導(dǎo)致與人體無關(guān)的毒性反應(yīng)；另外，重復(fù)給藥毒性試驗難以預(yù)測一些在人體中發(fā)生率較低的毒性反應(yīng)或僅在小部分人群中出現(xiàn)的特異質(zhì)反應(yīng)；同時有些毒性反應(yīng)目前在動物中難以觀察，如頭痛、頭昏、頭暈、皮膚搔癢、視物模糊等。鑒于以上原因，動物重復(fù)給藥毒性試驗的結(jié)果不一定完全再現(xiàn)于人體臨床試驗。但如果沒有試驗或文獻(xiàn)依據(jù)證明受試物對動物的毒性反應(yīng)與人體無關(guān)，在進(jìn)行藥物評價時必須首先假設(shè)人最為敏感，重復(fù)給藥毒性試驗中動物的毒性反應(yīng)將會在臨床試驗中出現(xiàn)。進(jìn)行深入的作用機(jī)制研究將有助于判斷動物和人體毒性反應(yīng)的相關(guān)性。（三）綜合評價 重復(fù)給藥毒性試驗是藥物非臨床安全性研究的有機(jī)組成部

14、分，是藥物非臨床毒理學(xué)研究中綜合性最強(qiáng)、獲得信息最多和對臨床指導(dǎo)意義最大的一項毒理學(xué)試驗。對其結(jié)果進(jìn)行評價時，應(yīng)結(jié)合受試物的藥學(xué)特點，藥效學(xué)、藥代動力學(xué)和其他毒理學(xué)的試驗結(jié)果，以及已取得的臨床試驗結(jié)果，進(jìn)行綜合評價。對于重復(fù)給藥毒性試驗結(jié)果的評價最終應(yīng)落實到受試物的臨床不良反應(yīng)、臨床毒性靶器官或靶組織、安全范圍、臨床需重點檢測的指標(biāo)，以及必要的臨床監(jiān)護(hù)或解救措施。五、參考文獻(xiàn) 1.化學(xué)藥物長期毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則. 國家藥品監(jiān)督管理局，2005.3.2.中藥、天然藥物長期毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則. 國家藥品監(jiān)督管理局，2005.3.3.周宗燦. 毒理學(xué)基礎(chǔ). 第二版. 北京醫(yī)科大學(xué)出版社，2000

15、. 4.秦伯益. 新藥評價概論. 第二版 人民衛(wèi)生出版社，1998.5.Guidance on nonclinical safety studies for the conduct of human clinical trials and marketing authorization for pharmaceuticals , ICH /M3(R2) 2009.6.6.Guideline on repeated dose toxicity, EMA 2010.3.7.Redbook 2000 IV.C, FDA 2003，2007.8.Note for guidance on toxicok

16、inetics: The assessment of systemic exposure in toxicity studies, ICH /S3A 2007.六、注釋（一）試驗期限的考慮試驗期限應(yīng)與擬開展的臨床試驗期限和上市要求相匹配；通過較短試驗期限的毒性試驗獲得的信息，可以為較長試驗期限的毒性試驗設(shè)計提供給藥劑量、給藥頻率、觀察指標(biāo)等方面的參考；同時，臨床試驗中獲得的信息有助于設(shè)計較長試驗期限的動物毒性試驗方案，降低藥物開發(fā)的風(fēng)險。以不同試驗期限的重復(fù)給藥毒性試驗支持不同用藥期限的臨床試驗及上市評價時，重復(fù)給藥毒性試驗內(nèi)容都應(yīng)完整、規(guī)范，結(jié)果分析評價強(qiáng)調(diào)客觀性、注重科學(xué)性。擬試驗的臨床適

17、應(yīng)癥如有若干項，應(yīng)按最長療程的臨床適應(yīng)癥來確定重復(fù)給藥毒性試驗的試驗期限。（二）劑量設(shè)計的考慮劑量設(shè)計應(yīng)考慮之前進(jìn)行的各項試驗所評價的終點、受試物的理化性質(zhì)和生物利用度等；局部給藥應(yīng)保證充分的接觸時間。高劑量應(yīng)出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，或達(dá)到最大給藥量（Maximum Feasible Dose, MFD），或系統(tǒng)暴露量達(dá)到臨床系統(tǒng)暴露量的50倍（基于AUC）。如需要在試驗中途改變給藥劑量，應(yīng)說明劑量調(diào)整理由，完整記錄劑量調(diào)整過程。（三）不同情況中藥、天然藥物的試驗要求考慮到中藥、天然藥物各類藥物處方來源、立題依據(jù)等差別，在具體進(jìn)行試驗時可參照以下要求進(jìn)行。這些要求僅是一般要求，應(yīng)遵循新藥開發(fā)的客觀規(guī)

18、律，具體試驗結(jié)合受試物特點考慮需開展的試驗，進(jìn)行個性化的設(shè)計。1未在國內(nèi)上市銷售的從中藥、動物、礦物等物質(zhì)中提取的有效成分及其制劑，新發(fā)現(xiàn)的藥材及其制劑，新的中藥材代用品、藥材新的藥用部位及其制劑，未在國內(nèi)上市銷售的從中藥、動物、礦物等物質(zhì)中提取的有效部位制成的制劑，未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物注射劑。以上情況，由于其物質(zhì)基礎(chǔ)較傳統(tǒng)中藥發(fā)生了明顯改變，或應(yīng)用經(jīng)驗較少，為全面考察受試物的重復(fù)給藥毒性反應(yīng)情況，應(yīng)采用嚙齒類和非嚙齒類兩種動物進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗。2未在國內(nèi)上市銷售的由中藥、天然藥物組成的非注射給藥的復(fù)方制劑可先進(jìn)行一種動物（嚙齒類）的重復(fù)給藥毒性試驗，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有明顯毒性時，為進(jìn)一

19、步研究毒性情況，再采用第二種動物（非嚙齒類）進(jìn)行試驗。若該類處方中含有毒性藥材見注釋（四）、無法定標(biāo)準(zhǔn)藥材或有十八反、十九畏等配伍禁忌時，則應(yīng)進(jìn)行兩種動物（嚙齒類和非嚙齒類）的重復(fù)給藥毒性試驗。天然藥物組成的非注射給藥的復(fù)方制劑臨床試驗前采用嚙齒類和非嚙齒類兩種動物進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗。 3改變國內(nèi)已上市銷售藥品給藥途徑（不包括由非注射劑改為注射劑）的制劑、不改變給藥途徑的非注射給藥改劑型制劑和改工藝制劑，建議增設(shè)一個原給藥途徑、原劑型或原工藝的高劑量對照組，先進(jìn)行一種動物（嚙齒類）的重復(fù)給藥毒性試驗。如發(fā)現(xiàn)與原給藥途徑、原劑型或原工藝制劑不同的明顯毒性反應(yīng)或更嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，應(yīng)進(jìn)行另一種動物

20、（非嚙齒類）的重復(fù)給藥毒性試驗。4增加新的適應(yīng)癥或者功能主治的品種如需延長用藥期限或增加劑量者，應(yīng)結(jié)合原品種的申報資料及處方組成的情況，確定是否需進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗。 （四）中藥毒性藥材品種毒性藥材：系指收入國務(wù)院醫(yī)療用毒性藥品管理辦法的中藥品種。即：砒石、砒霜、水銀、生馬錢子、生川烏、生草烏、生白附子、生附子、生半夏、生南星、生巴豆、斑蝥、青娘蟲、紅娘蟲、生甘遂、生狼毒、生藤黃、生千金子、生天仙子、鬧羊花、雪上一枝蒿、紅升丹、白降丹、蟾酥、洋金花、紅粉、輕粉、雄黃。另外，凡在近年來發(fā)現(xiàn)的有毒性作用的藥材（原材料）或在復(fù)方中含有明顯有毒組分的，均按毒性藥材處理。七、附錄（一）試驗期限支持藥物

21、臨床試驗最長臨床試驗期限重復(fù)給藥毒性試驗的最短期限嚙齒類動物非嚙齒類動物 2周2周2周2周6個月同臨床試驗同臨床試驗 6個月6個月9個月1、2支持藥物上市申請臨床擬用期限嚙齒類動物非嚙齒類動物 2周1個月1個月2周1個月3個月3個月1個月 3個月6個月6個月3 個月6個月9個月1、2注：1. 非嚙齒類動物不超過6個月期限的試驗可接受情況： 當(dāng)免疫原性或耐受性問題使更長期限的試驗難以進(jìn)行時；重復(fù)、短期用藥（即便臨床試驗期限6個月以上）的疾病，如偏頭痛、勃起障礙、單純性皰疹等的反復(fù)間歇給藥時；擬用于危及生命的疾?。ㄈ邕M(jìn)展性疾病、輔助使用的腫瘤化療藥）時。2如果兒童為主要擬用藥人群，而已有毒理學(xué)或藥理學(xué)研究結(jié)果提示可能發(fā)生發(fā)育毒性，應(yīng)考慮在幼年動物上進(jìn)行長期毒性試驗。該試驗應(yīng)采用合適年齡和種系的動物，試驗觀察指標(biāo)應(yīng)針對發(fā)育方面的毒性，試驗期限犬12個月、大鼠6個月。12個月的犬試驗期限應(yīng)涵蓋其發(fā)育的全過程。這些幼年動物的長期試驗可用于替代標(biāo)準(zhǔn)的長期毒性試驗和單獨的幼年動物試驗。（二）檢測指標(biāo) 項目類別指標(biāo)1.臨床觀察外觀、體征、行為活動、腺體