實驗4放線菌、酵母菌、霉菌形態(tài)觀察.

1、實驗四 放線菌、酵母菌、霉菌形態(tài)觀察（一）放線菌的形態(tài)觀察1 目的觀察放線菌的基本形態(tài)特征 掌握培養(yǎng)放線菌的幾種方法2 原理 放線菌一般由分枝狀菌絲組成，它的菌絲可分為基內(nèi)菌絲（營養(yǎng)菌絲 ）、氣生菌絲或有孢子絲三種。 放線菌生長到一定階段， 大部分氣生菌絲分化成孢子絲， 通過橫割分列的方式產(chǎn)生成 串的分生孢子。孢子絲形態(tài)多樣，有直、波曲、鉤狀、螺旋狀、輪生等多種形態(tài)。孢子也有 球形、橢圓形、桿狀和瓜子狀等等。它們的形態(tài)構(gòu)造都是放線菌分類鑒定的重要依據(jù)。 放線菌的菌落早期絨狀同細(xì)菌菌落月牙狀相似， 后期形成孢子菌落呈粉狀、 干燥， 有各種顏 色呈同心圓放射狀。3 材料3.1 菌種灰色鏈霉菌 （S

2、tr. griseus）, 天藍(lán)色鏈霉菌 （Str. coelicolor）, 細(xì)黃鏈霉菌（ Str.microflavus ）。Q O Z推甘3.2 培養(yǎng)基 高氏 1 號培養(yǎng)基。3.3 器皿培養(yǎng)皿，載玻片、蓋玻片、無菌滴管、鑷子、接種環(huán)、小刀（或刀片 ）、水浴鍋，顯微鏡，超凈工作臺，恒溫培養(yǎng)箱。4 流程4.1插片法：倒平板t插片t接種t培養(yǎng)t鏡檢t記錄繪圖4.2壓印法：倒平板T劃線接種T挑取菌落T加蓋玻片T鏡檢T記錄繪圖4.3埋片法：倒瓊脂T切槽T接種T培養(yǎng)T鏡檢T記錄繪圖5 步驟5.1 插片法5.1.1 倒平板將高氏 1 號培養(yǎng)基熔化后，倒 1012 毫升左右于滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，凝固后使用 .

3、5.1.2 插片將滅菌的蓋玻片以 45 度角插入培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)基中，插入深約為 1/2 或 1/3（圖 5-1）。5.1.3 接種與培養(yǎng)用接種環(huán)將菌種接種在蓋玻片與瓊脂相接的沿線，放置28 C培養(yǎng)37天。5.1.4 觀察培養(yǎng)后菌絲體生長在培養(yǎng)基及蓋玻片上， 小心用鑷子將蓋玻片抽出， 輕輕擦去生長較差的一 面的菌絲體，將生長良好的菌絲體面向的載玻片，壓放于載玻片上。直接在顯微鏡下觀察。5.2 壓印法5.2.1 制備放線菌平板同 5.1.1 。在凝固的高氏 1 號培養(yǎng)基平板上用劃線分離法得到單一的放線菌菌落。5.2.2 挑取菌落用滅菌的小刀 （或刀片 ）挑取有單一菌落的培養(yǎng)基一小塊，放在潔凈的載玻

4、片上。5.2.3 加蓋玻片用鑷子取一潔凈蓋玻片，在火餡上稍微加熱（注意：別將蓋玻片烤碎），然后把玻片蓋放在帶菌落的培養(yǎng)基小塊上，再用小鑷子輕輕壓幾下，使菌落的部分菌絲體印壓在蓋玻片上。5.2.4 觀察將印壓好的蓋玻片放在潔凈的載玻片上(菌體朝向載玻片 )，然后放置在顯微鏡下觀察。5.3 埋片法5.3.1 倒瓊脂平板將已配制、滅菌的高氏 l 號瓊脂培養(yǎng)基熔化，通過無菌操作倒入滅菌的培養(yǎng)皿底，倒均，將整個培養(yǎng)皿蓋住使凝固。一般 f=9cm 的培養(yǎng)皿約倒入 15mL 培養(yǎng)基。5.3.2 接種與培養(yǎng)在已凝固的瓊脂平板上用滅菌小刀切開兩條小槽， 寬度小于 1.5cm 。把放線菌接種在小槽 邊上，蓋上已滅

5、菌的蓋玻片，蓋好培養(yǎng)蓋。將制作好的平板放在28 C恒溫箱培養(yǎng)3-4天。5.3.3 觀察取出培養(yǎng)皿， 可以打開皿蓋， 將培養(yǎng)皿直接置于顯微鏡下觀察； 也可以取下蓋玻片， 將其 放在潔凈載波片上，？放在顯微鏡下觀察。6 結(jié)果6.1 觀察并繪制放線菌的孢子絲形態(tài)，并指明其著生方式。6.2 繪圖和描述自然生長狀態(tài)下觀察到的放線菌形態(tài)6.3 比較不同放線菌形態(tài)特征的異同7 思考1 在高倍鏡或油鏡下如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？2 比較實驗中采用的幾種觀察方法的優(yōu)缺點。(二) 酵母菌的形態(tài)觀察1 目的1.1 觀察啤酒酵母的個體形態(tài)及其無性繁殖。1.2 觀察假絲酵母的菌體結(jié)構(gòu)、假菌絲以及繁殖特點。2

6、原理真菌是具有真正細(xì)胞核的真核生物， 包括酵母菌、 霉菌和大型？真菌三大類型。本部分主要介紹如何觀察酵母菌的顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)。酵母菌是單細(xì)胞的真核微生物， 細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)有明且分化， 個體比細(xì)菌大得多。酵母菌的形態(tài)通常有球狀、卵園狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。酵母菌的無性繁殖有芽殖、裂殖 和產(chǎn)生擲孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母細(xì)胞在一系列的芽殖后， 如果長大的子細(xì)胞與母細(xì)胞并不分離，就會形成藕節(jié)狀的假菌絲。3 材料3.1 器械 接種針、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、吸管、顯微鏡、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱。3.2 培養(yǎng)基與染液配制麥芽汁培養(yǎng)基、肉湯蛋白胨培養(yǎng)基、孔雀綠染液、 0.1

7、？美藍(lán)液、3.3 菌種啤酒酵母( Saccharomyces cerevisiae )，假絲酵母( Candida.spp. )的試管斜面菌種。4 流程啤酒酵母鏡檢t假絲酵母鏡檢t酵母菌死活細(xì)胞鏡檢t子囊孢子鏡檢5 步驟5.1 啤酒酵母形態(tài)觀察取一潔凈載玻片， 在載玻片上滴一滴無菌水， 用接種環(huán)挑取少許啤酒酵母菌苔置于無菌水 中，用接種環(huán)輕輕劃動，使其分散成云霧狀薄層；另取一蓋玻片，小心覆蓋菌液。在顯微鏡 下觀察酵母細(xì)胞的形狀、大小及出芽方式。5.2 假絲酵母觀察用劃線法將假絲酵母接種在麥芽汁平板上，在劃線部分加無菌蓋玻片，于28 30 C培養(yǎng)3 天，取下蓋玻片， 放到潔凈載波片上， 在顯微鏡

8、下觀察呈樹枝狀分枝的假菌絲細(xì)胞的形狀， 或打開皿蓋，在顯微鏡下直接觀察。5.3 酵母菌死活細(xì)胞的檢查載片上加一滴 0.1 的美藍(lán)， 用接種環(huán)挑取少許酵母菌苔置于美蘭液滴中， 用接種環(huán)劃動， 使其分散均勻，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察，死細(xì)胞為蘭色，活細(xì)胞無色。5.4 子囊孢子的觀察將啤酒酵母接種于麥芽汁液體培養(yǎng)基中，于2830 C恒溫箱中培養(yǎng) 24小時，連續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)34次；再轉(zhuǎn)接到肉汁蛋白胨培養(yǎng)基中，在 2528 C的恒溫箱中培養(yǎng) 3天左右，最 后經(jīng)過涂片染色后 (按芽孢染色法 )，觀察子囊孢子形狀和特點， 以及每個子囊內(nèi)的孢子數(shù)等。 6 結(jié)果把觀察到的各種酵母繪圖，并注明各部分名稱。7 思考7.

9、1 在酵母菌死活細(xì)胞的觀察中，使用美蘭液有何作用？7.2 比較假絲酵母與啤酒酵母形態(tài)的異同。(三) 霉菌的形態(tài)觀察1 目的1.1 觀察霉菌的菌絲以及菌絲體。1.2 觀察霉菌營養(yǎng)和氣生菌絲體的特化形態(tài)1.3 學(xué)會用水浸法觀察霉菌的技術(shù)。2 原理霉菌形態(tài)比細(xì)菌、 酵母菌復(fù)雜，個體比較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。 霉菌 營養(yǎng)體的基本形態(tài)單位是菌絲， 包括有隔菌絲和無隔菌絲。 營養(yǎng)菌絲分布在營養(yǎng)基質(zhì)的內(nèi)部， 氣生菌絲伸展到空氣中。 營養(yǎng)菌絲體除基本結(jié)構(gòu)以外， 有的霉菌還有一些特化形態(tài)，例如假根、匍匐菌絲、吸器等。霉菌的繁殖體不僅包括無性繁殖體，例如分生孢子，孢子囊等，包 裹其內(nèi)或附著其上的有

10、各類無性孢子； 還包括有性繁殖結(jié)構(gòu)， 例如子囊果， 其內(nèi)形成有性孢 子。在觀察時要注意細(xì)胞的大小，菌絲構(gòu)造和繁殖方式。3 材料3.1 器械接種針、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、吸管3.2 藥品乳酸一石炭酸液、 PDA 培 養(yǎng)基 (配方見附錄 )3.3 菌種黑 根 霉 ( Rhizopus nigricans )、 總 狀 毛 霉 ( Mucor racemosus )、 產(chǎn) 黃 青 霉 ( Penicillum chrysogenum )、木霉( Trichoderma spp. )、黑曲霉( Aspergillus nigricans )、 犁頭霉( Absidia spp. )等斜面菌種

11、。4 流程倒平板t接種t制片t鏡檢t描述繪圖5 步驟5.1 倒平板將 PDA 培養(yǎng)基熔化后，倒 1012 毫升左右于滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，凝固后使用。5.2 接種與培養(yǎng)將青霉、木霉、毛霉、曲霉、根霉等接種在不同的平皿中。置于28 30 C的恒溫箱中培養(yǎng) 3-7 天。5.3 制水浸片分別置于不同的觀察菌絲體。取潔凈的載玻片， 滴加一滴乳酸一石炭酸液， 挑取不同菌株的一團(tuán)菌絲， 載玻片上（用記號筆標(biāo)記菌株名稱） ，加蓋玻片。5.4 觀察5.4.1 觀察青霉、木霉、毛霉、曲霉形態(tài)選取標(biāo)記青霉、 木霉、毛霉、 曲霉的載玻片， 觀察霉菌的菌絲及其分隔情況。 觀察分生孢子著生情況 （要求辨認(rèn)分生孢子梗、頂囊、小梗及分生孢子）。5.4.2 觀察根霉形態(tài)選取標(biāo)記