化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)

1、人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 免疫學(xué)檢驗(yàn)免疫學(xué)檢驗(yàn) 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 第二十一章第二十一章 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 1.1.化學(xué)發(fā)光劑的概念及常用的化學(xué)發(fā)光劑?；瘜W(xué)發(fā)光劑的概念及常用的化學(xué)發(fā)光劑。 2.2.化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理及其技術(shù)類化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理及其技術(shù)類 型。型。 3.3.化學(xué)發(fā)光酶免疫分析基本原理及其分離技化學(xué)發(fā)光酶免疫分析基本原理及其分離技 術(shù)。術(shù)。 4.4.電化學(xué)發(fā)光免疫分析基本原理。電化學(xué)發(fā)光免疫分析基本原理。

2、 5.5.化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的臨床應(yīng)用?；瘜W(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的臨床應(yīng)用。 本章要點(diǎn)本章要點(diǎn) 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 目錄目錄 發(fā)光基本知識(shí)發(fā)光基本知識(shí) 1 化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析 2 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析 3 電化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析 4 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的臨床應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的臨床應(yīng)用 5 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)技術(shù)是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光 測(cè)定技術(shù)與高特異性的測(cè)定技術(shù)與高特異性的抗原抗體抗原抗體反應(yīng)反應(yīng)技術(shù)技術(shù)相結(jié)合，

3、相結(jié)合， 用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、維生用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、維生 素和藥物等的檢測(cè)分析技術(shù)素和藥物等的檢測(cè)分析技術(shù)。該技術(shù)具有。該技術(shù)具有特異性特異性 高、高、靈敏度靈敏度高、分離簡(jiǎn)便、高、分離簡(jiǎn)便、 快速、試劑無(wú)毒、安快速、試劑無(wú)毒、安 全穩(wěn)定、可自動(dòng)化全穩(wěn)定、可自動(dòng)化分析等特點(diǎn)，在免疫學(xué)檢驗(yàn)中分析等特點(diǎn)，在免疫學(xué)檢驗(yàn)中 應(yīng)用廣泛。應(yīng)用廣泛。 前前 言言 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 放放 射射 免免 疫疫 技技 術(shù)術(shù) 酶酶 免免 疫疫 技技 術(shù)術(shù) 熒熒 光光 免免 疫疫 技技 術(shù)術(shù) 金金 免免 疫疫 技技 術(shù)術(shù) 化化 學(xué)學(xué) 發(fā)

4、發(fā) 光光 免免 疫疫 技技 術(shù)術(shù) 標(biāo)記免疫技術(shù)標(biāo)記免疫技術(shù) 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 第一節(jié)第一節(jié) 基本知識(shí)基本知識(shí) 一、發(fā)光一、發(fā)光 發(fā)光是指分子或原子中的電子吸收能量后，由低能級(jí)發(fā)光是指分子或原子中的電子吸收能量后，由低能級(jí) 的基態(tài)躍遷到高能級(jí)的激發(fā)態(tài)，然后再返回到基態(tài)，的基態(tài)躍遷到高能級(jí)的激發(fā)態(tài)，然后再返回到基態(tài)， 釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射。根據(jù)形成激發(fā)態(tài)的激釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射。根據(jù)形成激發(fā)態(tài)的激 發(fā)能不同可將發(fā)光分為發(fā)能不同可將發(fā)光分為光照發(fā)光光照發(fā)光、生物發(fā)光生物發(fā)光和和化學(xué)發(fā)化學(xué)發(fā) 光光。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技

5、術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 1.1.光照發(fā)光（光照發(fā)光（photoluminescencephotoluminescence） 發(fā)光劑（熒光素）經(jīng)短波長(zhǎng)入射光照射后進(jìn)發(fā)光劑（熒光素）經(jīng)短波長(zhǎng)入射光照射后進(jìn) 入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時(shí)發(fā)出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時(shí)發(fā)出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的 可見(jiàn)光?？梢?jiàn)光。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 2.2.生物發(fā)光（生物發(fā)光（bioluminescencebioluminescence） 發(fā)生在生物體內(nèi)的發(fā)光現(xiàn)象，如螢火蟲的發(fā)光，反發(fā)生在生物體內(nèi)的發(fā)光現(xiàn)象，如螢火蟲的發(fā)光，反 應(yīng)底物為螢火蟲熒光素，在熒光素酶的催化下，利應(yīng)底物為螢火蟲熒

6、光素，在熒光素酶的催化下，利 用用ATPATP產(chǎn)能，生成激發(fā)態(tài)氧化型熒光素，它在回復(fù)產(chǎn)能，生成激發(fā)態(tài)氧化型熒光素，它在回復(fù) 基態(tài)時(shí)多余的能量以光子的形式釋放出來(lái)。基態(tài)時(shí)多余的能量以光子的形式釋放出來(lái)。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 3.3.化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光 某些物質(zhì)某些物質(zhì)( (發(fā)光劑發(fā)光劑) )在化學(xué)反應(yīng)時(shí)，吸收了反應(yīng)過(guò)在化學(xué)反應(yīng)時(shí)，吸收了反應(yīng)過(guò) 程中所產(chǎn)生的化學(xué)能，使反應(yīng)的產(chǎn)物分子或中間程中所產(chǎn)生的化學(xué)能，使反應(yīng)的產(chǎn)物分子或中間 態(tài)分子中的電子躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子從激發(fā)態(tài)態(tài)分子中的電子躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子從激發(fā)態(tài) 回復(fù)到基態(tài)時(shí)，以發(fā)射光子的形式釋放出能量，

7、回復(fù)到基態(tài)時(shí)，以發(fā)射光子的形式釋放出能量， 這一現(xiàn)象稱為化學(xué)發(fā)光。這一現(xiàn)象稱為化學(xué)發(fā)光。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 一個(gè)化學(xué)反應(yīng)要產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，必須滿足以一個(gè)化學(xué)反應(yīng)要產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，必須滿足以 下條件：下條件： 該反應(yīng)必須提供足夠的激發(fā)能該反應(yīng)必須提供足夠的激發(fā)能, , 并由某一步驟單并由某一步驟單 獨(dú)提供獨(dú)提供, , 因?yàn)榍耙徊椒磻?yīng)釋放的能量將因振動(dòng)弛豫因?yàn)榍耙徊椒磻?yīng)釋放的能量將因振動(dòng)弛豫 消失在溶液中而不能發(fā)光消失在溶液中而不能發(fā)光 要有有利的反應(yīng)過(guò)程要有有利的反應(yīng)過(guò)程, , 使化學(xué)反應(yīng)的能量至少能被使化學(xué)反應(yīng)的能量至少能被 一種物質(zhì)所接受并生

8、成激發(fā)態(tài)一種物質(zhì)所接受并生成激發(fā)態(tài) 激發(fā)態(tài)分子必須具有一定的化學(xué)發(fā)光量子效率釋放激發(fā)態(tài)分子必須具有一定的化學(xué)發(fā)光量子效率釋放 出光子出光子, , 或者能夠轉(zhuǎn)移它的能量給另一個(gè)分子使之進(jìn)或者能夠轉(zhuǎn)移它的能量給另一個(gè)分子使之進(jìn) 入激發(fā)態(tài)并釋放出光子入激發(fā)態(tài)并釋放出光子 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光 子的形式釋放能量的化合物稱為子的形式釋放能量的化合物稱為化學(xué)發(fā)光劑化學(xué)發(fā)光劑或或發(fā)發(fā) 光底物光底物。 二二. .化學(xué)發(fā)光劑化學(xué)發(fā)光劑 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)

9、發(fā)光免疫技術(shù) 作為化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下作為化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下 幾個(gè)條件：幾個(gè)條件： 發(fā)光的量子產(chǎn)率高發(fā)光的量子產(chǎn)率高 物理物理- -化學(xué)特性要與被標(biāo)記或測(cè)定的物質(zhì)相匹配化學(xué)特性要與被標(biāo)記或測(cè)定的物質(zhì)相匹配 能與抗原或抗體形成穩(wěn)定的偶聯(lián)結(jié)合物能與抗原或抗體形成穩(wěn)定的偶聯(lián)結(jié)合物 其化學(xué)發(fā)光常是氧化反應(yīng)的結(jié)果其化學(xué)發(fā)光常是氧化反應(yīng)的結(jié)果 在所使用的濃度范圍內(nèi)對(duì)生物體沒(méi)有毒性在所使用的濃度范圍內(nèi)對(duì)生物體沒(méi)有毒性 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 常用的化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物有常用的化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物有 1.1.直接化學(xué)發(fā)光劑直接化學(xué)發(fā)

10、光劑 2.2.酶促反應(yīng)的發(fā)光底物酶促反應(yīng)的發(fā)光底物 3.3.電化學(xué)發(fā)光劑電化學(xué)發(fā)光劑 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 1.1.直接化學(xué)發(fā)光劑直接化學(xué)發(fā)光劑 在發(fā)光免疫分析過(guò)程中不需酶的催化作用，直接在發(fā)光免疫分析過(guò)程中不需酶的催化作用，直接 參與發(fā)光反應(yīng)，它們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的參與發(fā)光反應(yīng)，它們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的 特有基團(tuán)，可直接標(biāo)記抗原或抗體。如常用的吖特有基團(tuán)，可直接標(biāo)記抗原或抗體。如常用的吖 啶酯（啶酯（acridiniumacridinium，AEAE） 。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 吖啶酯吖啶酯在堿性條

11、件下被在堿性條件下被H H2 2O O2 2氧化時(shí)氧化時(shí), ,發(fā)出波長(zhǎng)發(fā)出波長(zhǎng) 為為470nm470nm的光，具有很高的發(fā)光效率，其激發(fā)的光，具有很高的發(fā)光效率，其激發(fā) 態(tài)產(chǎn)物態(tài)產(chǎn)物N-N-甲基吖啶酮是該發(fā)光反應(yīng)體系的發(fā)光體。甲基吖啶酮是該發(fā)光反應(yīng)體系的發(fā)光體。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 2.2.酶促反應(yīng)的發(fā)光底物酶促反應(yīng)的發(fā)光底物 是利用標(biāo)記酶的催化作用，使發(fā)光劑（底物）發(fā)是利用標(biāo)記酶的催化作用，使發(fā)光劑（底物）發(fā) 光。光。 目前化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)中常用的酶有辣根過(guò)氧目前化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)中常用的酶有辣根過(guò)氧 化物酶（化物酶（HRPHRP）和堿性磷酸酶（

12、）和堿性磷酸酶（ALPALP）。）。HRPHRP的常用的常用 的發(fā)光底物為魯米諾或其衍生物，的發(fā)光底物為魯米諾或其衍生物，ALPALP的發(fā)光底物的發(fā)光底物 為金剛烷（為金剛烷（AMPPDAMPPD） 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) （1 1）魯米諾或其衍生物）魯米諾或其衍生物 魯米諾在堿性條件下可被一些氧化劑氧化，發(fā)生化魯米諾在堿性條件下可被一些氧化劑氧化，發(fā)生化 學(xué)發(fā)光反應(yīng)，輻射出最大發(fā)射波長(zhǎng)為學(xué)發(fā)光反應(yīng)，輻射出最大發(fā)射波長(zhǎng)為425nm425nm的光。的光。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 魯米諾增強(qiáng)發(fā)光反應(yīng)原理魯米諾增強(qiáng)發(fā)光反

13、應(yīng)原理 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) （2 2）AMPPDAMPPD 3-(23-(2- -螺旋金剛烷螺旋金剛烷)-4-)-4-甲氧基甲氧基-4-(3-4-(3“- -磷酰氧基磷酰氧基 ) )苯苯-1,2-1,2-二氧雜環(huán)丁烷二氧雜環(huán)丁烷 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 3 3電化學(xué)發(fā)光劑電化學(xué)發(fā)光劑 電化學(xué)發(fā)光劑是指通過(guò)在電極表面進(jìn)行電化學(xué)反電化學(xué)發(fā)光劑是指通過(guò)在電極表面進(jìn)行電化學(xué)反 應(yīng)而發(fā)光的物質(zhì)。如化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕應(yīng)而發(fā)光的物質(zhì)。如化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕 Ru(bpy)32+Ru(bpy)32+和電子供體三丙胺（和電子供

14、體三丙胺（TPATPA）在陽(yáng)性電）在陽(yáng)性電 極表面可同時(shí)失去一個(gè)電子而發(fā)生氧化反應(yīng)。極表面可同時(shí)失去一個(gè)電子而發(fā)生氧化反應(yīng)。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 用化學(xué)發(fā)光劑（如吖啶酯）直接標(biāo)記抗體用化學(xué)發(fā)光劑（如吖啶酯）直接標(biāo)記抗體( (抗原抗原) )， 與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原( (抗體抗體) )和磁顆粒性的抗和磁顆粒性的抗 體（抗原）發(fā)生免疫反應(yīng)后，通過(guò)磁場(chǎng)把結(jié)合狀體（抗原）發(fā)生免疫反應(yīng)后，通過(guò)磁場(chǎng)把結(jié)合狀 態(tài)和游離狀態(tài)的化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物分離開(kāi)來(lái)，這態(tài)和游離狀態(tài)的化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物分離開(kāi)來(lái)，這 時(shí)只需加入氧化劑（時(shí)只需加入氧化劑（H H2 2

15、O O2 2）和）和NaOHNaOH使成堿性環(huán)境，使成堿性環(huán)境， 吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光。由吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光。由 集光器和光電倍增管接收、記錄單位時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)集光器和光電倍增管接收、記錄單位時(shí)間內(nèi)所產(chǎn) 生的光子能，可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測(cè)抗原生的光子能，可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測(cè)抗原 ( (抗體抗體) )的含量的含量 第二節(jié)第二節(jié) 化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析 一、一、 檢測(cè)原理檢測(cè)原理 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 化學(xué)發(fā)光免疫分析雙抗體夾心法原理示意圖化學(xué)發(fā)光免疫分析雙抗體夾心法原理示意圖 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社

16、 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 1.1.分離方法分離方法 常用磁顆粒分離技術(shù)，即用抗原或抗體包被磁顆粒，常用磁顆粒分離技術(shù)，即用抗原或抗體包被磁顆粒， 與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原及吖啶酯標(biāo)記的抗體或與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原及吖啶酯標(biāo)記的抗體或 抗原通過(guò)一定模式的免疫學(xué)反應(yīng)后抗原通過(guò)一定模式的免疫學(xué)反應(yīng)后, ,最終通過(guò)在磁場(chǎng)最終通過(guò)在磁場(chǎng) 中沖洗將結(jié)合到免疫復(fù)合物中的標(biāo)記物和游離標(biāo)記物中沖洗將結(jié)合到免疫復(fù)合物中的標(biāo)記物和游離標(biāo)記物 進(jìn)行分離的技術(shù)。進(jìn)行分離的技術(shù)。 二、方法類型二、方法類型 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 2.2.常用的免疫學(xué)反應(yīng)模式常用的免疫學(xué)反應(yīng)

17、模式 雙抗原夾心法雙抗原夾心法 固相抗原競(jìng)爭(zhēng)法固相抗原競(jìng)爭(zhēng)法 雙抗體夾心法雙抗體夾心法 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 三、技術(shù)要點(diǎn)三、技術(shù)要點(diǎn) 抗原抗體結(jié)合反應(yīng)抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 結(jié)合物與游離物的分離結(jié)合物與游離物的分離 (磁顆粒分離技術(shù)磁顆粒分離技術(shù)) 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng) 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIACLEIA）是用參與催化某一）是用參與催化某一 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶如辣根過(guò)氧化物酶（化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶如辣根過(guò)氧化物酶（HRPHRP）或堿）或堿 性磷酸酶性磷酸酶(ALP)(A

18、LP)來(lái)標(biāo)記抗原或抗體，在與待測(cè)標(biāo)本來(lái)標(biāo)記抗原或抗體，在與待測(cè)標(biāo)本 中相應(yīng)的抗體中相應(yīng)的抗體( (抗原抗原) )發(fā)生免疫反應(yīng)后，經(jīng)洗滌將發(fā)生免疫反應(yīng)后，經(jīng)洗滌將 結(jié)合物與游離的酶標(biāo)物分離后，加入底物結(jié)合物與游離的酶標(biāo)物分離后，加入底物( (發(fā)光劑發(fā)光劑 ) )，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接 收，光電倍增管將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)并加以放收，光電倍增管將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)并加以放 大，再把它們傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算大，再把它們傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算 出測(cè)定物的濃度。出測(cè)定物的濃度。 第三節(jié)第三節(jié) 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分

19、析 一、一、 檢測(cè)原理檢測(cè)原理 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 堿性磷酸酶化學(xué)發(fā)光酶免疫分析雙抗體夾心法原理示意圖堿性磷酸酶化學(xué)發(fā)光酶免疫分析雙抗體夾心法原理示意圖 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 1.1.根據(jù)標(biāo)記酶不同分類根據(jù)標(biāo)記酶不同分類 可分為辣根過(guò)氧化物可分為辣根過(guò)氧化物 酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析和堿性磷酸酶標(biāo)酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析和堿性磷酸酶標(biāo) 記的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析。前者常以魯米諾或記的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析。前者常以魯米諾或 其衍生物作為發(fā)光底物，后者常以其衍生物作為發(fā)光底物，后者常以AMPPDAMPPD作為發(fā)作為

20、發(fā) 光底物。光底物。 2. 2. 根據(jù)免疫學(xué)反應(yīng)模式分類根據(jù)免疫學(xué)反應(yīng)模式分類 同化學(xué)發(fā)光免同化學(xué)發(fā)光免 疫分析，主要有雙抗體夾心法、雙抗原夾心法疫分析，主要有雙抗體夾心法、雙抗原夾心法 和固相抗原競(jìng)爭(zhēng)法等主要模式，所不同只是相和固相抗原競(jìng)爭(zhēng)法等主要模式，所不同只是相 應(yīng)抗原或抗體上標(biāo)記的是酶而不是直接標(biāo)記發(fā)應(yīng)抗原或抗體上標(biāo)記的是酶而不是直接標(biāo)記發(fā) 光劑。光劑。 二、方法類型二、方法類型 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 三、技術(shù)要點(diǎn)三、技術(shù)要點(diǎn) 抗原抗體結(jié)合反應(yīng)抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 結(jié)合物與游離物的分離結(jié)合物與游離物的分離 （磁顆粒分離法磁顆粒分離法 、微粒子捕獲法

21、、微粒子捕獲法 、包被聚苯乙烯反應(yīng)珠或孔分離法、包被聚苯乙烯反應(yīng)珠或孔分離法 ） 酶促發(fā)光反應(yīng)酶促發(fā)光反應(yīng) 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 電化學(xué)發(fā)光免疫分析（電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIAECLIA）是以電化學(xué)發(fā)光劑）是以電化學(xué)發(fā)光劑 三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體( (抗原抗原) )，通過(guò)抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)抗原抗體反應(yīng) 和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出 的光強(qiáng)度對(duì)待測(cè)的抗原或抗體進(jìn)行定量分析，它的光強(qiáng)度對(duì)待測(cè)的抗原或抗體進(jìn)行定量分析，它 包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過(guò)程。包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過(guò)程。 第

22、四節(jié)第四節(jié) 電化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析 一、一、 檢測(cè)原理檢測(cè)原理 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 電化學(xué)發(fā)光免疫分析雙抗體夾心法原理示意圖電化學(xué)發(fā)光免疫分析雙抗體夾心法原理示意圖 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定示意圖電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定示意圖 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 1.1.分離方法分離方法 常用磁顆粒分離技術(shù)常用磁顆粒分離技術(shù) 2.2.免疫學(xué)反應(yīng)模式免疫學(xué)反應(yīng)模式 其反應(yīng)模式同發(fā)光免疫分析，其反應(yīng)模式同發(fā)光免疫分析， 主要有雙抗體夾心法、雙抗原夾心法和固相抗原

23、主要有雙抗體夾心法、雙抗原夾心法和固相抗原 競(jìng)爭(zhēng)法三種主要模式，所不同只是相應(yīng)抗原或抗競(jìng)爭(zhēng)法三種主要模式，所不同只是相應(yīng)抗原或抗 體上標(biāo)記的是三聯(lián)吡啶釕。體上標(biāo)記的是三聯(lián)吡啶釕。 二、方法類型二、方法類型 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 三、技術(shù)要點(diǎn)三、技術(shù)要點(diǎn) 抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng) 結(jié)合物與游離物的分離結(jié)合物與游離物的分離 (磁顆粒分離技術(shù)磁顆粒分離技術(shù)) 電化學(xué)發(fā)光過(guò)程電化學(xué)發(fā)光過(guò)程 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 第五節(jié)第五節(jié) 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的臨床應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的臨床應(yīng)用 一、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的特點(diǎn)一、化學(xué)發(fā)光免

24、疫技術(shù)的特點(diǎn) 1.1.敏感度高，甚至超過(guò)敏感度高，甚至超過(guò)RIARIA； 2.2.精密度和準(zhǔn)確性均可與精密度和準(zhǔn)確性均可與RIARIA相比；相比； 3.3.試劑穩(wěn)定，無(wú)毒害；試劑穩(wěn)定，無(wú)毒害； 4.4.測(cè)定耗時(shí)短；測(cè)定耗時(shí)短； 5.5.測(cè)定項(xiàng)目多；測(cè)定項(xiàng)目多； 6.6.已發(fā)展成自動(dòng)化測(cè)定系統(tǒng)。已發(fā)展成自動(dòng)化測(cè)定系統(tǒng)。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 1.1.甲狀腺激素甲狀腺激素 T3T3、T4T4、hTSHhTSH、FT4FT4、FT3FT3、抗、抗TPOTPO、 甲狀腺球蛋白、抗甲狀腺球蛋白抗體等。甲狀腺球蛋白、抗甲狀腺球蛋白抗體等。 2.2.生殖激素生殖激素

25、 -HCG-HCG、催乳素、促卵泡激素、促黃、催乳素、促卵泡激素、促黃 體激素、孕酮、雌二醇、非結(jié)合雌三醇、甲胎蛋白、體激素、孕酮、雌二醇、非結(jié)合雌三醇、甲胎蛋白、 睪丸酮、硫酸脫氫異雄酮。睪丸酮、硫酸脫氫異雄酮。 3.3.腎上腺腎上腺/ /垂體激素垂體激素 皮質(zhì)醇、尿皮質(zhì)醇、人生長(zhǎng)激皮質(zhì)醇、尿皮質(zhì)醇、人生長(zhǎng)激 素、甲狀旁腺素、促腎上腺皮質(zhì)激素。素、甲狀旁腺素、促腎上腺皮質(zhì)激素。 二、二、 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)常見(jiàn)的檢測(cè)項(xiàng)目化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)常見(jiàn)的檢測(cè)項(xiàng)目 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 4.4.貧血因子貧血因子 維生素維生素B12B12、葉酸、紅細(xì)胞葉酸、鐵、葉酸、

26、紅細(xì)胞葉酸、鐵 蛋蛋 白等。白等。 5.5.腫瘤標(biāo)記物腫瘤標(biāo)記物 AFPAFP、CEACEA、PSAPSA、游離、游離PSAPSA、CAl9-9CAl9-9、 CAl25CAl25、CAl5-3CAl5-3等。等。 6 6感染性疾病感染性疾病 衣原體抗原、尿衣原體抗原、衣原衣原體抗原、尿衣原體抗原、衣原 體抗原確認(rèn)、弓形體體抗原確認(rèn)、弓形體IgGIgG抗體、弓形體抗體、弓形體IgMIgM抗體、風(fēng)抗體、風(fēng) 疹病毒疹病毒IgGIgG抗體、風(fēng)疹病毒抗體、風(fēng)疹病毒IgMIgM抗體、巨細(xì)胞病毒抗體、巨細(xì)胞病毒 IgGIgG 抗體、巨細(xì)胞病毒抗體、巨細(xì)胞病毒IgMIgM抗體等?？贵w等。 二、二、 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)常見(jiàn)的檢測(cè)項(xiàng)目化學(xué)發(fā)光免