布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)

1、布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)WS268-2007范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了人群布魯氏菌病的診斷依據(jù)、診斷原則、診斷和鑒別診斷。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各級(jí)各類醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)及其工作人員對(duì)布魯氏菌病診斷與報(bào)告。診斷依據(jù)2.1流行病學(xué)史發(fā)病前病人與家畜或畜產(chǎn)品、布魯氏菌培養(yǎng)物有密切接觸史，或生活在疫區(qū)，或與疫苗生產(chǎn)、使用 和研究有密切關(guān)系。其他流行病學(xué)參見(jiàn)附錄2.2 臨床表現(xiàn)A。2.2.1 出現(xiàn)持續(xù)數(shù)日乃至數(shù)周發(fā)熱 （包括低熱 ） ，多汗，乏力，肌肉和關(guān)節(jié)疼痛等。2.2.2 多數(shù)患者淋巴結(jié)、肝、脾和睪丸腫大，少數(shù)患者可出現(xiàn)各種各樣的充血性皮疹和黃疸；慢性期患者 多表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)損害。具體臨床表現(xiàn)參見(jiàn)附錄B。2.3 實(shí)驗(yàn)室檢查（操

2、作方法見(jiàn)附錄 C）2.3.1 實(shí)驗(yàn)室初篩231.1平板凝集試驗(yàn)（PAT）（見(jiàn)C.1.1）或虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）（見(jiàn)C.1.2）結(jié)果為陽(yáng)性或可疑。（見(jiàn)C.2）后24h、48h分別觀察1次，皮膚紅腫浸潤(rùn)范圍有一次在2.0cmX2.0cm及2.3.1.2 皮膚過(guò)敏試驗(yàn)以上（或4.0cmn以上）。血清學(xué)檢查 試管凝集試驗(yàn)2.3.22.3.2.1（SAT）（ 見(jiàn) C.1.3） 滴度為 1：l00 +及以上，過(guò) 2 周-4 周后應(yīng)再檢查，滴度升高 4倍及以上）2.3.2.22.3.2.32.3.3補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)抗人免疫球蛋白試驗(yàn) （Coombs）（ 見(jiàn) C. 1.5） 滴度 l ：400+及以上。

3、分離細(xì)菌（CFT）（見(jiàn) C.1.4）滴度 1: lO+及以上。從病人血液、骨髓、其他體液及排泄物等任一種培養(yǎng)物中分離到布魯氏菌。3 診斷原則布魯氏菌病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸比較復(fù)雜，其臨床表現(xiàn)多種多樣，很難以一種癥狀來(lái)確定診斷。對(duì)人布魯氏菌病的診斷，應(yīng)是綜合性的。即結(jié)合病人流行病學(xué)接觸史，臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查。4 診斷4.1疑似病例4.24.3應(yīng)同時(shí)符合確診病例疑似病例和隱性感染2.1.2.2 和 2.3.l 中任一項(xiàng)者。2.3.2 或 2.3.3 中任何一項(xiàng)者。符合 2.1 和2.3.2 或 2.3.3 中任何一項(xiàng)者，但不具備 2.2 者。5 鑒別診斷D）。主要應(yīng)與風(fēng)濕熱、傷寒、副傷寒、肺結(jié)核、

4、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等做出鑒別診斷（參見(jiàn)附錄附錄 A（資料性附錄） 布魯氏菌病流行病學(xué)A 1 貯存宿主及傳染源布魯氏菌（以下簡(jiǎn)稱布氏菌）的貯存宿主很多，已知有六十多種動(dòng)物（家畜、家禽、野生動(dòng)物、馴 化動(dòng)物）可以作為布氏菌貯存宿主。布魯氏菌病（以下簡(jiǎn)稱布?。┩仍诩倚蠡蛞吧鷦?dòng)物中傳播，隨后 波及人類，是人畜共患的傳染病。疫畜是布病的主要傳染源， 我國(guó)大部分地區(qū)羊是主要傳染源； 有些地方牛是主要傳染源； 南方有的 省份，豬是主要傳染源；鹿和犬是次要傳染源。A2 傳播途徑及傳播因子布氏菌可以通過(guò)體表皮膚粘膜、消化道和呼吸道等侵入機(jī)體。人的感染途徑與職業(yè)、飲食、生產(chǎn)生活習(xí)慣有關(guān)。含有布氏菌的各種污染物及食品

5、均可成為傳播媒介，主要有病畜流產(chǎn)物，病畜的乳、肉、內(nèi)臟，被 布氏菌污染的皮毛、水、土壤、塵埃等。A3 易感人群程度有關(guān)。 布病患者可人群對(duì)布氏菌普遍易感。 人群感染率與傳染源和傳播媒介密切接觸的機(jī)會(huì)、 重復(fù)感染布氏菌。A4 分布A 4.1 職業(yè)獸醫(yī)、皮毛和乳肉加工人員感接觸病畜頻繁， 因而感染率比其有明顯的職業(yè)性，凡與病畜、染菌畜產(chǎn)品接觸多者發(fā)病率高。牧民、 染率比一般人高。A 4.2 性別人對(duì)布氏菌易感，無(wú)性別差異，主要取決于接觸機(jī)會(huì)。A 4.3 年齡一歲以上各年齡組均有惑染發(fā)病報(bào)道。由于青壯年是主要?jiǎng)趧?dòng)力， 他年齡組高。A 4.4 季節(jié)一年四季各月均可發(fā)病。 羊種布氏菌流行區(qū)有明顯的季節(jié)性

6、高峰。我國(guó)北方牧區(qū)人群發(fā)病高峰在 45 月。夏季剪羊毛和乳制品增多，也可出現(xiàn)一個(gè)小的發(fā)病高峰。豬種菌和牛種菌流行區(qū)，發(fā)病季節(jié)性不明 顯。A 4.5 地區(qū)一般情況下，牧區(qū)感染率高于農(nóng)區(qū)，農(nóng)區(qū)高于城鎮(zhèn)。牧區(qū)牲畜多，人與之接觸頻繁，感染機(jī)會(huì)多。 牧區(qū)草原遼闊，居住分散，因此病人分布廣，很少集中暴發(fā)和流行。在農(nóng)區(qū)或半農(nóng)半牧區(qū)，以農(nóng)業(yè)生產(chǎn)為 主，兼有少量牲畜，感染機(jī)會(huì)相對(duì)減少，但由于居住較密集，發(fā)病易呈點(diǎn)狀暴發(fā)。城市病人多集中在一些 皮毛乳肉加工企業(yè)或城郊養(yǎng)畜戶。A 5 不同疫區(qū)流行特點(diǎn) 由于傳染源的種類、病原菌的種型、毒力和人群免疫水平不同，表現(xiàn)不同的流行病學(xué)特點(diǎn)。A5.1 羊種布氏菌疫區(qū)羊種布氏菌疫

7、區(qū)的主要傳染源是病羊。 羊種菌各生物型對(duì)人、 畜均有較強(qiáng)的侵襲力和致病力，易引起人、畜間布病暴發(fā)和流行，疫情重。大多出現(xiàn)典型的臨床癥狀和體征。A5.2 牛種布氏菌疫區(qū)牛種布氏菌疫區(qū)的主要傳染源是病牛。牛種菌生物型較多，毒力不一，有的菌株毒力接近羊種菌強(qiáng)毒株。就總體而言，牛種菌毒力較弱，但有較強(qiáng)的侵襲力，即使是弱毒株，也可使牛發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)或不孕，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)發(fā)展。但對(duì)人致病較輕，感染率高而發(fā)病率低，呈散發(fā)性，臨床癥狀和體征多 不典型；病程短，后遺癥少。A. 5.3 豬種布氏菌疫區(qū) 豬種布氏菌疫區(qū)主要傳染源是病豬。通常由豬 1 型和豬 3 型菌致病，毒力介于羊種菌和牛種 菌之間。同一生物型菌株

8、，既有強(qiáng)毒株，也有弱毒株。豬種菌對(duì)豬致病力強(qiáng)。對(duì)羊、牛致病力較低。對(duì)人 致病力比牛種菌強(qiáng)，但也是感染率高，發(fā)病率低，除少數(shù)病例病情較重外，大多數(shù)無(wú)急性期臨床表現(xiàn)。A. 5.4 犬種布氏菌疫區(qū) 犬種布氏菌疫區(qū)主要傳染源是病犬。犬種菌除了侵犯犬，引起犬流產(chǎn)外，也可使貓、牛、豬、 兔、梅花鹿、鼠等動(dòng)物感染，產(chǎn)生抗犬種布氏菌抗體。人也可被感染，但癥狀較輕。A. 5.5 混合型布氏菌疫醫(yī) 兩種或兩種以上布氏菌同時(shí)在一個(gè)疫區(qū)存在，這與羊、牛在一個(gè)牧場(chǎng)放牧或圈舍鄰近有關(guān)。 由于彼此接觸密切，菌種可以發(fā)生轉(zhuǎn)移，羊種菌轉(zhuǎn)移到牛多見(jiàn)，也有羊種菌轉(zhuǎn)移到豬；豬種菌、牛種菌也 可以轉(zhuǎn)移到羊?；旌闲鸵邊^(qū)流行特點(diǎn)取決于當(dāng)?shù)?/p>

9、存在的主要菌種。附錄 B （資料性附錄）l周 3周，平均2周，最短布魯氏菌病臨床表現(xiàn) 布病的臨床癥狀多種多樣，病情的差別也很大。潛伏期一般為僅3天，BB1.1最長(zhǎng)可達(dá) 1 年。 主要癥狀 發(fā)熱 是布病最常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)之一，發(fā)熱多在午后或晚上開(kāi)始，可見(jiàn)于各期病人，熱型不一、變 化多樣，也有典型的波狀熱熱型，多數(shù)為低熱和不規(guī)則熱型。發(fā)熱常伴有寒戰(zhàn)等癥狀。布病患者在高熱時(shí)神志清醒，痛苦也較少，但體溫下降時(shí)自覺(jué)癥狀惡化，這種高熱與病況相矛盾的 現(xiàn)象為布病所特有。B. 1。2多汗也是布病患者的主要癥狀之一，尤其急性期患者，出汗非常嚴(yán)重，體溫下降時(shí)更為明顯，常 可濕透衣褲，使患者感到緊張、煩躁，甚至影響睡

10、眠。B. 1.3 骨關(guān)節(jié)和肌肉疼痛骨關(guān)節(jié)和肌肉疼痛也是布病最常見(jiàn)的癥狀，大關(guān)節(jié)多見(jiàn)，常呈游走性疼痛。有的慢性期病人，關(guān)節(jié)強(qiáng)直，活動(dòng)受限。B1.4 乏力這一癥狀幾乎為全部病人所具有，尤以慢性期患者為甚。B. 1.5 頭痛 為急性期的常見(jiàn)癥狀之一。慢陛期患者在疲乏無(wú)力的同時(shí)，也經(jīng)常伴有頭痛。個(gè)別頭痛劇烈 者常伴有腦膜刺激癥狀。當(dāng)大腦皮層功能降低時(shí)，往住反應(yīng)遲鈍，記憶力減退。部分病人可有眼眶內(nèi)疼痛 和眼球脹痛等。B. 1.6 其他癥妝 心悸、神經(jīng)痛、食欲不振、腹瀉、便秘等。B. 2 主要體征急性期患者可出現(xiàn)各種各樣的充血性皮疹，多數(shù)患者淋巴結(jié)、肝、脾和睪丸腫大，少數(shù)患者 可出現(xiàn)黃疸；慢性期患者多表現(xiàn)

11、為骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)損害。B. 3 臨床分期B3.1 急性期發(fā)病 3 個(gè)月以內(nèi)，凡有高熱和有明顯其他癥狀、體征（包括慢性期患者急性發(fā)作），并出現(xiàn)較高滴度的血清學(xué)反應(yīng)者。B3.2 亞急性期發(fā)病在36個(gè)月，凡有低熱和有其他癥狀、體征（即有慢性炎癥），并出現(xiàn)血清學(xué)陽(yáng)性反應(yīng)或皮膚變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性者。B3.3 慢性期發(fā)病 6 個(gè)月以上，體溫正常，有布病癥狀、體征，并出現(xiàn)血清學(xué)陽(yáng)性反應(yīng)或皮膚變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性者。B3.4 殘余期體溫正常，癥狀、體征較固定或功能障礙往往因氣候變化，勞累過(guò)度而加重者。 附錄 C規(guī)范性附錄）布魯氏菌病診斷的特異性實(shí)驗(yàn)室檢查技術(shù)CCC1 特異性血清學(xué)檢查1.1 平板凝集試驗(yàn) （PAT）1.1.1

12、器材及試劑赫德遜凹玻板或一塊清潔無(wú)油脂玻璃板，平板凝集抗原，被檢血清，已知陰性和陽(yáng)性血清，0. 2mL 吸管或微量加樣器，牙簽或細(xì)鐵絲。C1.1.2.1C. 1.1 ， 2 操作方法 備方形潔凈的玻璃板，劃成 25個(gè)方格，橫數(shù) 5格，縱數(shù) 5格，第一列各格寫下血清號(hào)碼。C1.1.2.2用0. 2mL吸管按下列劑量加受檢血清于任何一行的各格中：第一格0.08mL,第二格0. 04mL第三格 0.02mL，第四格 0.OlmL 。加平板凝集抗原 0. 03mL 于各血清格中，用牙簽或細(xì)鐵絲混合，由血清量最小的格混起， 每份血清用一根牙簽 昆合即可，用后燒毀；若用細(xì)鐵絲混合時(shí)，每份血清混合后用酒精棉

13、球擦凈，然后再 用作另一份血清。C1.1.2.3C. 1.1.2.4 混勻后將玻璃板置于酒精燈火焰或凝集反應(yīng)箱上，均勻加溫，使其達(dá)到 內(nèi)30C 左右，5min記錄反應(yīng)結(jié)果。C1.1.2.5 每次試驗(yàn)用陰、陽(yáng)性血清各 1 份作對(duì)照。C1.1.2.6 按下列標(biāo)準(zhǔn)用加號(hào)記錄反應(yīng)強(qiáng)度：+：出現(xiàn)大的凝榘片或小的粒狀物，液體完全透明100%凝集。+ :有明顯的凝集片，液體幾乎完全透明.7J%凝集。+：有可見(jiàn)的凝集片，液體不甚透明，50%凝集。+ :液體混濁，只有少量粒狀物，25%凝集。一:液體均勻混濁。C1.1.2.7 平板凝集反應(yīng)與試管凝集反應(yīng)的關(guān)系0. 08mL 血清量出現(xiàn)凝集相當(dāng)于試管法1：25 的

14、血清稀釋度， 0.04mL 相當(dāng)于 1：50， 0.02mL相當(dāng)于 1: 100， 0.OlmL 相當(dāng)于 1: 200。1.1.3 判定CCC人血清 0. 02mL 出現(xiàn)+及以上凝集程度判為陽(yáng)性，0. 04mL 出現(xiàn)+及以上凝集程度判為可疑。1.2 虎紅平板凝集試驗(yàn) （RBPT）1.2.1 器材及試劑清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片，0. ImL吸管或微量加樣器，牙簽或細(xì)鐵絲，虎紅平板凝集抗原，被檢血清。C. 1.2.2操作方法在玻片上加0. 03mL被檢血清，然后加入虎紅平板抗原0.03mL，搖勻或用牙簽混勻，在 5minc.內(nèi)判定結(jié)果。1.2.3判定c.c.判定凝集程度（一至+）同平板凝集反應(yīng)

15、；亦可只分為 什）陽(yáng)性，（一）陰性兩類。1.3試管凝集試驗(yàn)（SAT）1.3.1器材及試劑試管凝集抗原，被檢血清，0. 5%勺石碳酸生理鹽水，吸管，凝集試管，溫箱和試管架等。c. 1.3.2操作方法C. 1.3.2.1被檢血清的稀釋：在一般情況下，每份血清用5支小試管（口徑8mm- lOmm）,第一管加入2. 3mL石碳酸生理鹽水，第二管不加，第三、四、五管各加0.5mL。用ImL吸管吸取被檢血清 0.2mL，加入第一管中，混勻?；靹蚝螅栽撐芪〉谝还苤醒寮尤氲诙芎偷谌芨?. 5mL，以該吸管將第三管混勻，并吸取0. 5mL加入第四管，混勻。從第四管吸取0.5mL加入第五管，混勻。再?gòu)?/p>

16、第五管吸取0. 5ml。 棄去。如此稀釋后，從第二管到第五管血清稀釋度分別為1： 12.5，1: 25，1： 50和1: 100。C. 1.3.2.2加入抗原：先以0. 5%石碳酸生理鹽水將抗原原液作適當(dāng)稀釋（一般是作1 : 10稀釋）。稀釋后的抗原加入各稀釋的血清管（第一管不加，作為血清對(duì)照），每管加0. 5mL，混勻。加入抗原后第二管至第五管，每管總量ImL，血清稀釋度從第二管至第五管分別為1: 25，1: 50，1 : 100和1: 200，從第一管再吸出0. 5mL，剩ImL。C. 1.3.2.3對(duì)照：陰牲血清對(duì)照，血清稀釋后加抗原（與被檢血清對(duì)照相似）。陽(yáng)性血清對(duì)照，其 血清稀釋到原

17、有滴度，再加抗原，抗原對(duì)照，適當(dāng)稀釋的抗原加石碳酸鹽水。C. 1.3.3 判定C. 1.3.3.3記錄結(jié)果：根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄結(jié)果。特別是so%青亮度什+）對(duì)判定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對(duì)比判定。+ :完全凝集，上層液100%青亮。+：幾乎完全凝集，上層液75%青亮。+：顯著凝集，液體50%青亮。+:有微量凝集，液體 25%青亮。一：無(wú)凝集，液體不清亮。 確定每份血清滴度是以出現(xiàn)“十+”及以上的凝集現(xiàn)象的最高血清稀釋度。C.c.c.c.c.OOOrlmin1.4抗人免疫球蛋白試驗(yàn)（coombs）1.4.1器材及試劑除試管凝集試驗(yàn)所需的一般器材及試劑外，還需抗人免疫球蛋白血清及普

18、通離心機(jī)。1.4.2揉作方法1.421試管凝集試驗(yàn)階段：按 C. 1.3進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)。1.4.2.2抗球蛋白反應(yīng)階段：選取試管凝集試驗(yàn)的可疑反應(yīng)管及全部陰性反應(yīng)管，記錄管號(hào)，經(jīng)離心15min，用生理鹽水反復(fù)洗滌 3次，然后向各管中加人生理鹽水0.5mL、一定稀釋度（一般C. 1.3.3.1判定比濁管制備：每次試驗(yàn)須配制比濁管作為判定的依據(jù)。配制方法是：取本次試驗(yàn)用 的抗原稀釋液5mL-lOmlJ，加入等量的0.5%石碳酸鹽水作倍比稀釋，按表C. 1配制比濁管。管號(hào)抗原稀釋液mL石碳酸鹽水mL清亮度標(biāo)記10.001.00100%+20.250.7575%+30.500.5050%+40.75

19、0.2525%+51.000.000%C. 1.3.3.2全部試驗(yàn)管，對(duì)照管及比濁管充分振蕩后置37C溫箱中20h22h，取出后放室溫2h ,然后以比濁管為標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。是1: 20倍稀釋）的抗人免疫球蛋白血清0.5mL,混勻，將反應(yīng)管置 37C溫箱中20h22h，取出放室溫2h后判定結(jié)果。C. 1.4.2.3判定：判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)，程度均同試管凝集試驗(yàn)。C. 1.5補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)【CFI）C. 1.5.1器材及試劑補(bǔ)體（新鮮豚鼠血清或凍干補(bǔ)體）， 血清，被檢血清。C. 1.5.2操作方法C. 1.5.2.1補(bǔ)體滴定：在進(jìn)行 十支凝集管中分別依次加入不同量的 液0. 2mL再用生理鹽水把各管補(bǔ)至

20、和2%綿羊紅細(xì)胞0.2mL，混勻，置表C. 2補(bǔ)體滴定程序和結(jié)果37C水浴箱，普通離心機(jī)，普通冰箱，各種容量的吸管，燒瓶，凝集管和試管架，生理鹽水，2%勺綿羊紅細(xì)胞懸液（2%SRBC）溶血素，補(bǔ)體結(jié)合抗原，陰性和陽(yáng)性CFT時(shí)，必須當(dāng)天滴定補(bǔ)體，將補(bǔ)體用生理鹽水稀釋為 1： 20補(bǔ)體稀釋液0.6mL,混勻后放37C水浴中30min,1: 20,通常在0.02mLO. 2mL,然后各管中加入 2個(gè)單位的抗原37C水浴中30min,再加0.2mL的溶血素（2個(gè)單位） 判定結(jié)果（見(jiàn)表C. 2）。管號(hào)12345678910對(duì)昭八、抗原對(duì)昭八、補(bǔ)體對(duì) 昭 八、 溶 血 素1:20 補(bǔ)0.20.180.16

21、0.140.120.100.080.060.040.02-0.2-體量2單位抗0.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.2-原量生理鹽水0.20.220.240.260.280.30.320.340.360.380.40.40.6量37C水浴30分鐘2單位溶0.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.2血素量2%SRBC0.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.2量37C水浴30分鐘結(jié)果舉例+-ml)上例中產(chǎn)生完全溶血且含補(bǔ)體量最少管為第八管，定為一個(gè)恰定單位，前一管（即第七管） 為一個(gè)完全單位。在正式試驗(yàn)時(shí)采用兩個(gè)完

22、全單位的補(bǔ)體量，按式（C . 1）計(jì)算出補(bǔ)體稀釋倍數(shù)X320:2Y X:0.2 一（C.1）式中：Y 1個(gè)完全單位補(bǔ)體量。X一墊薈孚一號(hào)，Y=O 08x 番磊一 25即補(bǔ)體作1: 25稀釋。C. 1.5.2.2溶血素及抗原滴定：在進(jìn)行 CFT時(shí)溶血素和抗原亦需滴定，但不必在試驗(yàn)當(dāng)天進(jìn)行；而 且，在購(gòu)到此二試劑時(shí)出售單位（或提供單位）都已滴定了，需用單位按說(shuō)明稀釋即可。C. 1.5.2.3 被檢血清滅活人血清滅活補(bǔ)體的溫度是56C，時(shí)間為30min。C. 1.5.2.4 本試驗(yàn)滅活后的被檢血清從1:5稀釋開(kāi)始，然后做倍比稀釋，每管中稀釋血清量為0.2mL,再向各管中加2個(gè)單位抗原0. 2mL 2

23、個(gè)單位補(bǔ)體0.2mL.混勻，置37C水浴中30min，取出后，向各管加 0.4mL 的溶血系，再放37C水浴中作用30min，判定結(jié)果（見(jiàn)表 C. 3）。表C3本試驗(yàn)程序C.C.C02環(huán)境中培養(yǎng)），二天后觀察結(jié)果。如 繼續(xù)培養(yǎng)，每隔一天觀察一次，如有可 進(jìn)一步作布氏菌鑒定，血培養(yǎng)30天仍不成分血清稀釋度血清對(duì)昭八、補(bǔ)體及抗原對(duì)照1:51:101:201:401:801:1601:50.5單位1.0單位2.0單位被檢血0.20.20.20.20.20.20.2清2單位0.20.20.20.20.20.20.20.20.2抗原2單位0.20.20.20.20.20.20.20.050.10.2補(bǔ)體

24、生理鹽0.20.350.30.2水37C水浴30分鐘溶血系0.40.40.40.40.40.40.40.40.40.437C水浴30分鐘結(jié)果+-+-ml ,C. 1.5.3 判定+ :無(wú)溶血，SRBC沉于管底或懸浮。+: 25%溶血。+: 50%溶血。+: 75%溶血。-:100%C. 4 ）。溶血。以50%（+）及以上不溶血確定 CFT的滴度。為防止判定的錯(cuò)誤，可配制標(biāo)準(zhǔn)溶血管（見(jiàn)表C.2皮膚過(guò)敏試驗(yàn) 2.1 器材及試劑布氏菌素，75%酉精棉球，1毫升注射器，皮內(nèi)注射針頭，測(cè)量尺。2.2操作方法于被檢者前臂內(nèi)側(cè)前1/3處，用酒精棉球消毒后，晾干，皮內(nèi)注射0. ImL布氏菌 素，在注射后24h

25、和48h作兩次觀察。C. 2.3判定2. 0cmX2.0cn及以上（或以兩次觀察，以反應(yīng)最強(qiáng)的結(jié)果為準(zhǔn)，注射局部出現(xiàn)充血，浸潤(rùn)為 反應(yīng)面積4. Ocn12 ）判為陽(yáng)性。C. 3分離布氏茵C. 3.1血培養(yǎng)C. 3.1.1 雙相培養(yǎng)基培養(yǎng)從可疑病人靜脈無(wú)菌取血渡 4m 5mL在酒精燈火焰附近將血液注入 56支含雙相培養(yǎng)基 的中試管內(nèi)，或24只含雙相培養(yǎng)基燒瓶中， 輕輕混合傾斜，使被檢血液均勻分布在瓊脂斜面上，置37C溫箱培養(yǎng)（如果懷疑病人是牛種布氏菌感染時(shí)，應(yīng)有一半標(biāo)本置 未見(jiàn)布氏菌生長(zhǎng)，可按上法再傾斜，使血液均勻涂在瓊脂斜面上， 疑布氏菌落，可用鉑金耳勾出接種到瓊脂試管培基，獲得純培養(yǎng)， 出菌

26、，可定為陰性。C. 3.1.2接種未受精雞卵法取新鮮雞蛋兩個(gè)，把雞蛋放在固定架上，鈍端向上，以碘酒和酒精依次消毒蛋殼，用眼科手術(shù)刀在頂部穿一小孔，用三厘米長(zhǎng)注射針頭將被檢血液徐徐注入卵黃中，每個(gè)雞蛋接種血液0. 2mL，立即用滅菌石蠟將孔密封，置 37C溫箱中培養(yǎng)，五天后把接種血液的雞蛋無(wú)菌打開(kāi)，用滅菌的毛細(xì)管把接種血液部分的卵黃及蛋清吸出 0. 5mLO. 6mL，接種23支斜面培養(yǎng)基上，置 37C培養(yǎng)，23天觀察1次,15天仍不見(jiàn)可疑菌落生長(zhǎng)，定為陰性。C3.2 尿液培養(yǎng)用滅菌的導(dǎo)尿管將尿液導(dǎo)出放入滅菌容器中，為濃縮細(xì)菌，提高檢出率，可在尿液中加入1%-3%勺高價(jià)布氏菌免疫血清，混合后，置37C溫箱2h，高速離心沉淀，取沉淀物 0.5mL接種在選擇性培基上培養(yǎng)，或注射豚鼠，用生物學(xué)方法分離布氏菌。C3.3 其他病原材料培養(yǎng) 由乳、腦脊液、關(guān)節(jié)液和滑囊液分離布氏菌，將液體標(biāo)本無(wú)菌接種到瓊脂斜面上，或培養(yǎng)平 板上，參照血培養(yǎng)法觀察結(jié)果， 15天仍無(wú)可疑菌生長(zhǎng)，定為陰性。C3.4 生物學(xué)分離布氏茵法 為