動物細胞培養(yǎng)和核移植技術（經(jīng)典實用）

1、動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 植物體細胞雜交植物體細胞雜交 1.1.動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)2.2.動物細胞融合動物細胞融合 3.3.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 4.4.細胞核移植細胞核移植 回顧：回顧： v動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞工程常用的技術手段： v植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物細胞工程常用的技術手段有哪些？ 動物細胞工程動物細胞工程 的基礎的基礎 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 就是從動物機體就是從動物機體 中取出中取出相關組織相關組織， 將它分散成將它分散成單個單個 細胞細胞，然后，然后, ,放

2、在放在 適宜的培養(yǎng)基適宜的培養(yǎng)基中，中， 讓這些細胞讓這些細胞生長生長 和繁殖和繁殖。 1、動物細胞培養(yǎng)概念：、動物細胞培養(yǎng)概念： 2 2、原理：、原理：細胞增殖細胞增殖 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 定義：定義：人們通常將人們通常將 動物組織動物組織消化后消化后的的 初次培養(yǎng)初次培養(yǎng)稱為原代稱為原代 培養(yǎng)。培養(yǎng)。 胰蛋白酶處理胰蛋白酶處理 取出組織取出組織 胚胎或幼齡動物器官組織胚胎或幼齡動物器官組織 剪碎剪碎 單個細胞單個細胞 細胞懸液細胞懸液 轉入培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)轉入培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng) （貼壁生長貼壁生長長成單層細胞。長成單層細胞。 有有接觸抑制接觸抑制現(xiàn)象）現(xiàn)象）。 原代培

3、養(yǎng)原代培養(yǎng) 3 3、過程、過程 原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) 增殖能力強，分裂旺盛，分化增殖能力強，分裂旺盛，分化 程度低，容易培養(yǎng)程度低，容易培養(yǎng) 去掉組織間去掉組織間 蛋白蛋白 加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 強調一：細胞貼壁過程強調一：細胞貼壁過程 細胞貼壁：細胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細胞很快就在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細胞很快就 貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。 培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑、無毒、易表面光滑、無毒、易 于帖附。于帖附。 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 當貼壁細胞分裂生當貼壁細胞

4、分裂生 長到表面相互接觸時長到表面相互接觸時, , 細胞就會停止分裂增細胞就會停止分裂增 殖，這種現(xiàn)象稱為細殖，這種現(xiàn)象稱為細 胞的胞的接觸抑制。接觸抑制。 強調二：接觸抑制強調二：接觸抑制 細胞的接觸抑制細胞的接觸抑制 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 定義：定義： 當原代培養(yǎng)的細胞處于當原代培養(yǎng)的細胞處于接觸抑制后接觸抑制后, , 用用胰蛋白酶胰蛋白酶處理處理, ,使細胞從瓶壁上使細胞從瓶壁上脫離脫離下下 來來, ,然后加入新的培養(yǎng)液然后加入新的培養(yǎng)液, ,將將細胞分離稀釋細胞分離稀釋, , 并并從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi), ,這這 個過

5、程稱個過程稱傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng). .（分瓶培養(yǎng)的過程分瓶培養(yǎng)的過程） 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 遺傳物質未遺傳物質未 改變改變 原代細胞原代細胞 4050代細胞代細胞(細胞株細胞株) 遺傳物質己遺傳物質己 改變改變 無限傳代（無限傳代（細胞系細胞系） 分瓶分瓶傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)胰蛋白酶胰蛋白酶 原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) 接觸抑制接觸抑制 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 強調：細胞株、細胞強調：細胞株、細胞系系（了解即可，老課本體系了解即可，老課本體系） 又出現(xiàn)細胞生長停又出現(xiàn)細胞生長停 滯狀態(tài)，滯狀態(tài)， 細胞株和細胞系的區(qū)別

6、細胞株和細胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳物細胞系的遺傳物 質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑 制，容易傳代培養(yǎng)。制，容易傳代培養(yǎng)。 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 l接觸抑制接觸抑制 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 總結：動物細胞培總結：動物細胞培 養(yǎng)過程養(yǎng)過程 動物胚胎或幼齡動物動物胚胎或幼齡動物 的組織、器官的組織、器官 配置細胞懸液配置細胞懸液 剪碎用胰蛋白酶處理剪碎用胰蛋白酶處理 1010代細胞代細胞 轉入培養(yǎng)瓶轉入培養(yǎng)瓶 40-5040-50代細胞代細胞 傳傳 代代 培培 養(yǎng)養(yǎng) 無限傳代無限傳代 單個細胞單個細

7、胞 加培養(yǎng)液稀釋加培養(yǎng)液稀釋 傳代傳代1010代以內(nèi)，代以內(nèi)，遺傳物質不改變，遺傳物質不改變， 保持保持正常正常二倍體核型二倍體核型。 傳代傳代10-5010-50代左右，增長緩慢以代左右，增長緩慢以 至于完全停止，至于完全停止，部分細胞核型可部分細胞核型可 能發(fā)生變化能發(fā)生變化（遺傳物質可能改變（遺傳物質可能改變） 為什么用胰蛋白酶處理？為什么用胰蛋白酶處理？ 分瓶分瓶傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) 原代培養(yǎng)特點：原代培養(yǎng)特點：細胞貼壁、細胞貼壁、 接觸抑制接觸抑制 繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細胞獲得不獲得不 死性死性，細胞突變細胞突變，遺傳物質已經(jīng)遺傳物質已經(jīng) 改變改變，等同于癌細胞等同于

8、癌細胞。 細胞株：細胞株：一般說一般說 遺傳物質未改變遺傳物質未改變 細胞系：細胞系： 遺傳物遺傳物 質已改質已改 變變 原原 代代 培培 養(yǎng)養(yǎng) 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中 據(jù)此思考：據(jù)此思考： 1 .內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)包括哪些方面？內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)包括哪些方面？ 適宜的溫度、適宜的溫度、pH值、滲透壓、營養(yǎng)、氧氣。值、滲透壓、營養(yǎng)、氧氣。 2.體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？ 無菌、無毒的環(huán)境。無菌、無毒的環(huán)境。 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術

9、3.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質？如體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質？如 何才能保證類似于內(nèi)環(huán)境的營養(yǎng)環(huán)境？培何才能保證類似于內(nèi)環(huán)境的營養(yǎng)環(huán)境？培 養(yǎng)基應是液態(tài)還是固態(tài)？養(yǎng)基應是液態(tài)還是固態(tài)？ 充足的營養(yǎng)、適宜的溫度、充足的營養(yǎng)、適宜的溫度、pH和氣體和氣體 環(huán)境。加入動物血清。培養(yǎng)基應是液態(tài)。環(huán)境。加入動物血清。培養(yǎng)基應是液態(tài)。 思考：動物血清的作用？思考：動物血清的作用？ 主要是：提供有利于細胞生長增殖所需的主要是：提供有利于細胞生長增殖所需的 激素、生長因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏激素、生長因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏 的營養(yǎng)物質等。的營養(yǎng)物質等。 保證細胞順利的保證細胞順利的 生長增殖生長

10、增殖 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 4 4、動物細胞培養(yǎng)條件、動物細胞培養(yǎng)條件 能否用胃蛋白酶代能否用胃蛋白酶代 替胰蛋白酶？替胰蛋白酶？ l無菌、無毒的環(huán)境無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液） l營養(yǎng)營養(yǎng) （葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清、微量元素等（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清、微量元素等） l溫度和溫度和PHPH 溫度溫度36.5+0.5度，pH7.27.4 l氣體環(huán)境氣體環(huán)境 O O2 2和和COCO2 2（95%95%空氣和空氣和5%CO5%CO2 2） 離體培養(yǎng)的細胞對微生物和離體

11、培養(yǎng)的細胞對微生物和 有毒物質沒有防御能力。有毒物質沒有防御能力。 保證細胞順利的保證細胞順利的 生長增殖生長增殖 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：動物細胞培養(yǎng)液的主要成分： 葡萄糖葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和、氨基酸、無機鹽、維生素和動物動物血清血清等。等。 動物培養(yǎng)基特有的特點是：動物培養(yǎng)基特有的特點是： （1 1）液體培養(yǎng)基）液體培養(yǎng)基 （2 2）含有動物血清）含有動物血清 動物體細胞大都生活動物體細胞大都生活 在在液體液體的環(huán)境的環(huán)境 植物組織培養(yǎng)呢？植物組織培養(yǎng)呢？ 無機鹽、蔗糖無機鹽、蔗糖 、維生素、生、維生素、生 長調節(jié)物質、植物

12、激素長調節(jié)物質、植物激素 成分比較：成分比較： 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 5.5.動物細胞培養(yǎng)技術的應用動物細胞培養(yǎng)技術的應用: : 1.1.蛋白質生物制品的生產(chǎn)蛋白質生物制品的生產(chǎn) 如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體 2.2.應用于基因工程應用于基因工程 主要用于作為受體細胞主要用于作為受體細胞 3.3.檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性 4.4.細胞的生理、藥理、病理研究細胞的生理、藥理、病理研究 如用于篩選抗癌藥物如用于篩選抗癌藥物 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 細胞的全能性細胞的全能

13、性 細胞株、細胞系細胞株、細胞系 植物體或組織植物體或組織培養(yǎng)結果培養(yǎng)結果 獲得細胞獲得細胞 或細胞分泌蛋白或細胞分泌蛋白 快速繁殖、培育快速繁殖、培育 無病毒植株等無病毒植株等 培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的 葡萄糖、動物血清葡萄糖、動物血清 蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素 培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質培養(yǎng)基性質 細胞增殖細胞增殖 原理原理 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 比較項目比較項目 植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 細胞分化程度細胞分化程度 ，

14、恢復全能性恢復全能性 。 核移植核移植 （難度高）（難度高） 三、動物體細胞核移植技術三、動物體細胞核移植技術 胚胎細胞核移植胚胎細胞核移植 體細胞核移植體細胞核移植 細胞分化程度細胞分化程度 ， 恢復全能性恢復全能性 。 用核移植的方法得到的動物稱為用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物克隆動物 1.1.概念：概念： 將動物的一個細胞的細胞核，移入一個將動物的一個細胞的細胞核，移入一個 已經(jīng)去掉細胞核的已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞卵母細胞中，使其重組并中，使其重組并 發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā) 育成動物個體。育成動物個體。 低低 容易容易 高高 困

15、難困難 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 卵母細胞卵母細胞 黑面母綿羊黑面母綿羊白面母綿羊白面母綿羊 乳腺細胞乳腺細胞 細胞核移植細胞核移植 早期胚胎早期胚胎 C C母綿羊子宮母綿羊子宮 胚胎移植胚胎移植 多莉羊多莉羊 分娩分娩妊娠妊娠 融合后的融合后的 卵母細胞卵母細胞 2.2.體細胞核移植過程體細胞核移植過程 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 取供體細胞取供體細胞 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)1010代代 以內(nèi)的細胞以內(nèi)的細胞. . 為什么？為什么？ 用的是去用的是去 核的減數(shù)核的減數(shù) 第二次分第二次分 裂中期細裂中期細 胞（胞（M中中 期期）為什）為什 么？么？激

16、活方法：激活方法： 激活目的：激活目的： 促融方法：促融方法： 電刺激電刺激 胚胎移植至胚胎移植至 代孕受體內(nèi)代孕受體內(nèi) 妊娠、分娩妊娠、分娩 體細胞核移植流程體細胞核移植流程 供體：優(yōu)質高產(chǎn)奶牛供體：優(yōu)質高產(chǎn)奶牛 受體：普通奶牛（卵受體：普通奶牛（卵 母細胞的采集與培養(yǎng)）母細胞的采集與培養(yǎng)） 1.體積大，易體積大，易 操作。操作。2.含有含有 促使細胞核表促使細胞核表 達全能性的物達全能性的物 質和營養(yǎng)條件。質和營養(yǎng)條件。 有人說它三個母有人說它三個母 親，對嗎？親，對嗎？ 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 細胞核核移植細胞核核移植 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和

17、核移植技術 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 、核移植之前，為何要去掉受體卵母細胞的核？、核移植之前，為何要去掉受體卵母細胞的核？ 為使核移植動物的核遺傳物質全部來自有利用為使核移植動物的核遺傳物質全部來自有利用 價值的動物提供的細胞。價值的動物提供的細胞。 、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代1010代以代以 內(nèi)的細胞，為什么？內(nèi)的細胞，為什么？ 1010代以內(nèi)的細胞保持一般保持正常二倍體的核型代以內(nèi)的細胞保持一般保持正常二倍體的核型 3 3、細胞核移植生產(chǎn)的克隆動物是對體細胞供體動、細胞核移植生產(chǎn)的克隆動物是對體細胞供體動 物進行了物進

18、行了100%100%的復制嗎？為什么？的復制嗎？為什么？ 不是，克隆動物絕大部分不是，克隆動物絕大部分DNADNA來自供體細胞核，來自供體細胞核， 但核外還有少部分但核外還有少部分DNADNA（如線粒體（如線粒體DNADNA）來自受體）來自受體 卵母細胞。卵母細胞。 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 在體細胞克隆羊在體細胞克隆羊“多莉多莉”培育成功之前，培育成功之前，胚胚 胎細胞核移植胎細胞核移植技術已經(jīng)有了很大的發(fā)展。實際上，技術已經(jīng)有了很大的發(fā)展。實際上， “多莉多莉”的克隆在核移植技術上沿襲了胚胎細胞的克隆在核移植技術上沿襲了胚胎細胞 核移植的全部過程，但這并不能減低核

19、移植的全部過程，但這并不能減低“多莉多莉”的的 重大意義，因為它是世界上重大意義，因為它是世界上第一例經(jīng)體細胞核移第一例經(jīng)體細胞核移 植植出生的動物，是克隆技術領域研究的巨大突破。出生的動物，是克隆技術領域研究的巨大突破。 這一巨大進展意味著：這一巨大進展意味著：在理論上證明了，同植物在理論上證明了，同植物 細胞一樣，細胞一樣，分化了的分化了的動物細胞核也具有全能性動物細胞核也具有全能性 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 2.2.體細胞核移植技術的應用前景體細胞核移植技術的應用前景 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 你還在為身體有殘疾而苦惱嗎？你還在為器你還

20、在為身體有殘疾而苦惱嗎？你還在為器 官移植找不到合適的供體而焦慮嗎？不能在這樣官移植找不到合適的供體而焦慮嗎？不能在這樣 下去了，看看我們的下去了，看看我們的體細胞核移植技術吧體細胞核移植技術吧，只需，只需 要從你身上取一個小小的要從你身上取一個小小的體細胞體細胞，通過核移植培，通過核移植培 養(yǎng)出養(yǎng)出胚胎干細胞胚胎干細胞，再用胚胎干細胞，再用胚胎干細胞誘導分化出各誘導分化出各 種組織器官種組織器官，這樣的器官的，這樣的器官的組織相容性抗原組織相容性抗原跟你跟你 的一摸一樣，用這樣的器官進行器官移植，根本的一摸一樣，用這樣的器官進行器官移植，根本 就就不會發(fā)生免疫排斥不會發(fā)生免疫排斥。不夸張的說

21、，如果這項技。不夸張的說，如果這項技 術研究成熟了，以后大家換條胳膊換條腿就跟給術研究成熟了，以后大家換條胳膊換條腿就跟給 汽車換個輪胎一樣。你聽明白了嗎？這不是天方汽車換個輪胎一樣。你聽明白了嗎？這不是天方 夜譚，巨大的前景就在眼前，你還在等什么？現(xiàn)夜譚，巨大的前景就在眼前，你還在等什么？現(xiàn) 在，對，就是現(xiàn)在，趕緊加入到生命科學的研究在，對，就是現(xiàn)在，趕緊加入到生命科學的研究 中來吧！中來吧！ 廣而告之：廣而告之： 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 四、體細胞核移植技術的應用前景四、體細胞核移植技術的應用前景 1、加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育、加速家畜遺傳改良進程

22、，促進優(yōu)良畜群繁育 2、保護瀕危物種，增加存活數(shù)量、保護瀕危物種，增加存活數(shù)量 3、克隆動物作為生物反應器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白、克隆動物作為生物反應器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織、可以作為異種移植的供體，可以用于組織 器官的移植器官的移植 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 五、體細胞核移植技術存在的問五、體細胞核移植技術存在的問 題題 胚胎移植動物幼體產(chǎn)出胚胎移植動物幼體產(chǎn)出 概率概率10 克隆動物存在著健康問題克隆動物存在著健康問題 克隆動物的食品安全性問題存在爭議克隆動物的食品安全性問題存在爭議 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 1

23、 1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是 -（ ） A A細胞系細胞系 B B細胞株細胞株 C C原代細胞原代細胞 D D傳代細胞傳代細胞 2 2、動物細胞工程技術的基礎是、動物細胞工程技術的基礎是 -（ ） A.A.動物細胞融合動物細胞融合 B.B.單克隆抗體單克隆抗體 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) A D 課堂反饋練習課堂反饋練習 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 3 3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或 出生不久的幼齡動物的器官或組

24、織，其主要原因是出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是 這樣的組織細胞這樣的組織細胞 （ ） A.A.容易產(chǎn)生各種變異容易產(chǎn)生各種變異 B B具有更強的全能性具有更強的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力強分裂增殖的能力強 D 4、下列屬于動物細胞工程中的工具是（、下列屬于動物細胞工程中的工具是（ ） A限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶 BDNA連接酶連接酶 C胰蛋白酶胰蛋白酶 D果膠酶果膠酶 C 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 5 5、下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答、下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答 (1)(1)容

25、器容器A A中放置的是動物器官或組織。它一般取中放置的是動物器官或組織。它一般取 自自_。 (2)(2)容器容器A A中的動物器官或組織首先要進行的處理中的動物器官或組織首先要進行的處理 是是_，然后用，然后用 酶處理，這是為了酶處理，這是為了 使細胞分散開來。這樣做的目的是使細胞分散開來。這樣做的目的是 _._. (3) (3)培養(yǎng)首先在培養(yǎng)首先在B B瓶中進行。瓶中的培養(yǎng)基成分有瓶中進行。瓶中的培養(yǎng)基成分有 _ _等。在此瓶中培等。在此瓶中培 養(yǎng)一段時間后，有許多細胞衰老死亡，到這時的養(yǎng)一段時間后，有許多細胞衰老死亡，到這時的 培養(yǎng)稱為培養(yǎng)稱為_._. (4)(4)為了把為了把B B瓶中的

26、細胞分裝到瓶中的細胞分裝到C C瓶中，用瓶中，用_ 處理，然后配置成處理，然后配置成_，再分裝。，再分裝。 (5)(5)在在C C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細胞全瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細胞全 部死亡。原因是部死亡。原因是_。 幼齡動物的器官或組織、動物胚胎幼齡動物的器官或組織、動物胚胎 用剪刀剪碎用剪刀剪碎 胰蛋白胰蛋白 使每個細胞能與培養(yǎng)液接觸使每個細胞能與培養(yǎng)液接觸 ，便于獲取營養(yǎng)和排出代謝廢物，便于獲取營養(yǎng)和排出代謝廢物 葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清 原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) 胰蛋白酶胰蛋白酶 細胞懸浮液細胞懸浮液 細胞沒有發(fā)生癌變

27、細胞沒有發(fā)生癌變 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 6 6(2009(2009年浙江理綜年浙江理綜) )用動、植物成體的體細胞進行用動、植物成體的體細胞進行 離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是( () ) A A都需用都需用COCO2 2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱 B B都需用液體培養(yǎng)基都需用液體培養(yǎng)基 C C都要在無菌條件下進行都要在無菌條件下進行 D D都可體現(xiàn)細胞的全能性都可體現(xiàn)細胞的全能性 解析解析：用動、植物成體的體細胞進行離體培養(yǎng)都必：用動、植物成體的體細胞進行離體培養(yǎng)都必 須在無菌條件下進行。用植物成體的體細胞進行離須在無菌條件下進行。用植物成體的體細胞進行

28、離 體培養(yǎng)獲得新個體體現(xiàn)的是細胞的全能性，而動物體培養(yǎng)獲得新個體體現(xiàn)的是細胞的全能性，而動物 體細胞離體培養(yǎng)主要是獲得細胞的代謝產(chǎn)物。體細胞離體培養(yǎng)主要是獲得細胞的代謝產(chǎn)物。 答案答案：C C 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 7 7、(2008(2008年寧夏高考年寧夏高考) )回答下列有關動物細胞培養(yǎng)的問題：回答下列有關動物細胞培養(yǎng)的問題： (1)(1)在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表 面面_時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為 細胞的細胞的_。此時，瓶壁上形成的細胞層數(shù)是

29、。此時，瓶壁上形成的細胞層數(shù)是 _。要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶。要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶 處理，可用的酶是處理，可用的酶是_。 (2)(2)隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進 而出現(xiàn)而出現(xiàn)_的現(xiàn)象；但極少數(shù)細胞可以連續(xù)的現(xiàn)象；但極少數(shù)細胞可以連續(xù) 增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發(fā)生改變而變成增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發(fā)生改變而變成 _細胞，該種細胞的黏著性細胞，該種細胞的黏著性_，細胞膜表面，細胞膜表面 蛋白質蛋白質( (糖蛋白糖蛋白) )的量的量_。 相互接觸相互接觸 接觸抑制接觸抑制 胰島蛋白酶

30、胰島蛋白酶 單層單層 減少減少 不死性不死性降低降低 衰老甚至死亡衰老甚至死亡 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 (3)(3)現(xiàn)用某種大分子染料，對細胞進行染色時，觀察到死細現(xiàn)用某種大分子染料，對細胞進行染色時，觀察到死細 胞被染色，而活細胞不染色，原因是胞被染色，而活細胞不染色，原因是 _ (4)(4)檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數(shù)目，最好選用檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數(shù)目，最好選用 細胞分裂到細胞分裂到_期的細胞用顯微鏡進行觀察。期的細胞用顯微鏡進行觀察。 (5)(5)在細胞培養(yǎng)過程中，通常在在細胞培養(yǎng)過程中，通常在_條件下保存細胞。條件下保存細胞。 因為在

31、這種條件下，細胞中因為在這種條件下，細胞中_的活性降低，細胞的活性降低，細胞 _ _ 的速率降低。的速率降低。 (6)(6)給患者移植經(jīng)細胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥給患者移植經(jīng)細胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥 現(xiàn)象，這是因為機體把移植的皮膚組織當作現(xiàn)象，這是因為機體把移植的皮膚組織當作_進行進行 攻擊。攻擊。 酶酶 由于死細胞的膜喪由于死細胞的膜喪 失了選擇透過性，大分子染料能夠進入死細胞內(nèi)而著色失了選擇透過性，大分子染料能夠進入死細胞內(nèi)而著色 中中 超低溫超低溫 新陳代謝新陳代謝 抗原抗原 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 和核移植技術和核移植技術 8 8( (海南高考海南高考) )某研究小組進行藥物試驗時，以動物肝細胞某研究小組進行藥物試驗時，以動物肝細胞 為材料，測定藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性。供培養(yǎng)的細胞為材料，測定藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性。供培養(yǎng)的細胞 有甲、乙兩種，甲細胞為肝腫瘤細胞，乙細胞為正常肝細有甲、乙兩種，甲細胞為肝腫瘤細胞，乙細胞為正常肝細 胞。胞。 請回答下列有關