植物組織中可溶性糖與淀粉的測定

1、植物組織中可溶性糖與淀粉的測定一、蒽酮法測定可溶性糖【儀器與用具】分光光度計；電爐；鋁鍋；20ml刻度試管；刻度吸管 5ml 1支，1ml 2支；記號筆；吸水紙適量?！驹噭?.蒽酮乙酸乙酯試劑：取分析純蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中，貯于棕色瓶中，在黑暗中可保存數(shù)星期，如有結(jié)晶析出，可微熱溶解。2濃硫酸（比重）?！痉椒ā?.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取20ml刻度試管11支，從010分別編號，按表24-1加入溶液和水。表1各試管加溶液和水的量管號012345678910100卩g/ml蔗糖液(ml)0水(ml)蔗糖量（卩g）020406080100然后按順序向試管內(nèi)加入 1ml 9%苯酚溶液，搖勻，再

2、從管液正面快速加入 5ml濃硫酸， 搖勻。比色液總體積為 8ml，在恒溫下放置30min，顯色。然后以空白為參比，在 485nm波 長下比色測定，以糖含量為橫坐標(biāo)，光密為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出標(biāo)準(zhǔn)直線方程。按表1力口入標(biāo)準(zhǔn)的蔗糖溶液，然后按順序向試管中加入蒽酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管均準(zhǔn)確保溫1min，取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在 630nm波長下測其光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，以糖含量為橫坐標(biāo)，繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程。2可溶性糖的提取取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取 0.30g，共3份，或干材料。分別 放入3支刻度

3、試管中，加入 510ml蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取 30min （提取2 次）,提取液過濾入25ml容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘渣，定容至刻度。2次），加蒸餾水，以下步驟3顯色測定 吸取樣品提取液于 20ml刻度試管中（重復(fù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線測定相同，測定樣品的光密度。4.計算可溶性糖的含量a可溶性糖含量（mg/g）= W 103式中 C 一標(biāo)準(zhǔn)方程求得糖量（卩g）；a吸取樣品液體積（ml）；V 提取液量（ml）；n 稀釋倍數(shù)；W 組織重量（g ）。四、淀粉含量的測定【儀器與用具】 電子天平；容量瓶：100mlX4, 50mlX2;漏斗；小試管若干支；電爐；刻度吸管X1, X3,5ml用；分光光

4、度計；記號筆。【試劑】（1）濃硫酸（比重）；（2）L HCIO4;（3） 2%蒽酮試劑：同蒽酮法（或 9%苯酚，同方法一）;（4） 淀粉標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取100mg純淀粉，放入100ml容量瓶中，加6070ml熱蒸餾水，放入沸水浴中煮沸，冷卻后加蒸餾水稀釋至刻度，則每ml含淀粉1mg ,吸取此液，加蒸餾水稀釋至50ml，即為每ml含淀粉100卩g的標(biāo)準(zhǔn)液?！痉椒ā? .標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取小試管11支從010編號，按表2加入溶液和蒸餾水。 以下步驟按苯酚法或蒽酮法均可，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表2各試管加入標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水量管號012345678910淀粉標(biāo)準(zhǔn)液（ml）0蒸餾水（ml）0淀粉含量（mg）04

5、0801201602002樣品提取將提取可溶性糖以后的殘渣，移入50ml容量瓶中，加20ml熱蒸餾水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入L高氯酸2ml提取15min，冷卻后，混勻，用濾紙過濾，并用蒸餾水定 容（或以 2500r/min 離心 10min ）。3.測定可采用苯酚法或蒽酮顯色法測定。1分子水，因而計算時所得的按下式計算淀粉的含量。淀粉水解時，在單糖殘基上加了 糖量乘以才為扣除加入水量后的實際淀粉含量。C淀粉含量（%） = WVa106100式中 C 標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的淀粉含量（卩 g）;V 提取液總量（ml）; a顯色時取液量（ml）;W樣品重（g）。注：淀粉水解完全度試驗樣品測定中可同時作 1份用于淀粉水解完全度檢驗的樣品，在酸解過濾后，將其殘渣加上