海南熱帶蘭花抗氧化活性的研究

1、海南師范大學(xué)本科生畢業(yè)論文題目：海南熱帶蘭花的抗氧化活性研究系別：化學(xué)系學(xué) 院：化學(xué)與化工學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究 工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外， 本論文 （設(shè)計(jì)）中沒(méi)有抄襲他人研究成果和偽造數(shù)據(jù)等行為。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文 （設(shè)計(jì)）中作了明確的說(shuō)明并表 示謝意。論文（設(shè)計(jì)）作者簽名： 日期： 本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）使用授權(quán)聲明海南師范大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交畢業(yè)論文（設(shè) 計(jì)）的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）被查閱和借閱。本人授權(quán)海 南師范大學(xué)可以

2、將本畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù) 進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存、匯編畢業(yè)論文。論文（設(shè)計(jì)）作者簽名： 日期： 指導(dǎo)教師簽名： 日期：目錄1 引言 12 實(shí)驗(yàn)部分 22.1 主要儀器、試劑和材料 22.2 實(shí)驗(yàn)方法 32.2.1 實(shí)驗(yàn)原理 32.2.2 羥自由基檢測(cè) 32.2.3 羥自由基清除率的測(cè)定 33 結(jié)果與分析 43.1熒光光譜 43.2實(shí)驗(yàn)原理驗(yàn)證 43.3實(shí)驗(yàn)條件的研究 63.3.1 反應(yīng)時(shí)間的影響 6332 fQ溶液用量的影響7333 FeS04溶液用量的影響 83.4 正交實(shí)驗(yàn)確定最佳實(shí)驗(yàn)條件 93.5 方法精密度測(cè)定 103.6 方法準(zhǔn)確度測(cè)

3、定 103.7 熱帶蘭花水提物對(duì)羥基自由基的清除作用 113.8 石斛蘭玉玲瓏水提物的抗氧化活性及最佳的提取工藝研究 123.8.1 浸泡時(shí)間的影響 123.8.2花瓣質(zhì)量的影響 133.8.3超聲時(shí)間的影響 143.8.4 浸泡溫度的影響 153.8.5 正交試驗(yàn)確定最佳提取條件 163.8.6 熱帶蘭花各個(gè)部位的抗氧化性 174 結(jié)論 18致謝 18參考文獻(xiàn) 18海南熱帶蘭花的抗氧化活性研究摘要：目的：考察幾種海南熱帶蘭花的抗氧化活性。方法：采用羅丹明-6G為熒光探針，分別測(cè)定幾種海南熱帶蘭花的的水提物對(duì)Fen to n反應(yīng)生成的羥基自由基的清除率，優(yōu)化了體系的測(cè)量條件，篩選出了對(duì)羥基自由

4、基具有較好清除率的蘭花的最好提取工藝條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，體系的 最佳測(cè)量條件：羅丹明-6G與H2O2用量的摩爾比為1: 60，與FeSO4用量的摩爾比為1 : 20，反 應(yīng)時(shí)間40min。最佳的提取條件為：m(石斛蘭玉玲瓏)：v(水)=2.5 : 50 (g/mL),提取溫度50 C, 浸泡3 h，超聲提取60 min，對(duì)羥自由基率的清除率可達(dá)88.35%，海南熱帶蘭花對(duì)羥自由基有清除作用，其中石斛蘭玉玲瓏的清除效果最好。關(guān)鍵詞：羅丹明-6G; Fenton反應(yīng)；羥自由基；熱帶蘭花Tropical orchids of antioxidant activityAbstract : To inv

5、estigate antioxidant activity of several Hainan tropical orchids. Methods: Rhodam in e-6G as the fluoresce nt probe, to measure hydroxyl radical scave nging rate in Fenton react ion of water extract of several Tropical orchids, optimize the system of measurement conditions, and selected the best orc

6、hid extract ion process on hydroxyl radical good cleara nee. The results showed that the best measuringcondition : the amount of rhodamine-6G and H2O2 molar ratio of 1:60, and the amount of the molar ratio of FeSO 1:20, reaction time:40min. The best extraction conditions: m (De ndrobium exquisite ja

7、de): v (water) = 2.5:50 (g / mL), extract ion temperature 50 C , soaked 3 h, ultras onic extract ion of 60 min, the cleara nee rate of hydroxyl radical rate was 88.35%, Tropical Orchid has Scavenging Action of hydroxyl radicals, Den drobium jade exquisite have best removal effectio n.Key words:Rhoda

8、mine-6G; Fenton reaction; hydroxyl radical ; tropical orchid1引言熱帶蘭花為蘭科草本植物，熱帶蘭花品種繁多，可分為石斛蘭、文心蘭、莫氏蘭 等。石斛蘭有很好的藥用價(jià)值，據(jù)神農(nóng)本草經(jīng)中記載石斛蘭有滋養(yǎng)胃陰，生津止渴, 兼能清胃熱。主治熱病傷津，煩渴、舌干苔黑?，F(xiàn)代研究表明，石斛蘭中含石斛堿等 生物堿，粘液質(zhì)、淀粉等。有一定解熱鎮(zhèn)痛作用；能促進(jìn)胃液分泌，助消化；有增強(qiáng) 新陳代謝、抗衰老等作用。科學(xué)表明，人類(lèi)的許多疾病是由于體內(nèi)存在過(guò)剩的羥基自由基0H而引起的。常見(jiàn)的有心腦血管疾病，腫瘤、老年性癡呆、白內(nèi)障、糖尿病、肝病以及過(guò)早衰老等。 傳統(tǒng)

9、的一些人工合成抗氧化劑如丁基羥基茴香醚 （BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）、沒(méi)食 子酸甲酯（PG）等，由于有較大的毒副作用，許多國(guó)家已經(jīng)停止或嚴(yán)格限制它們的使用， 從植物原料中提取天然抗氧化劑是生物醫(yī)藥和食品的發(fā)展方向之一。蘭花中含有大量 的黃酮和多糖，這些天然的有機(jī)分子均有可能被羥基自由基氧化，從而具有清除羥基 自由基的作用。目前，常用的抗自由基活性檢測(cè)方法主要有： 化學(xué)發(fā)光法 2、比色法3、電子自 旋共振法4、熒光光譜法5,6等。本實(shí)驗(yàn)采用Fenton反應(yīng)生成0H，在稀硫酸介質(zhì)中 Fe2+-H2O2體系產(chǎn)生的羥自由基可以氧化羅丹明-6G使其熒光猝滅，體系的熒光強(qiáng)度降 低?？寡趸瘎釒m

10、花水提物）與體系中的羅丹明 -6G爭(zhēng)奪羥自由基從而使體系熒 光強(qiáng)度減弱程度減小， 據(jù)此原理建立了一種測(cè)定抗氧化劑對(duì)羥自由基清除作用的新方 法。本方法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便迅速，適用范圍廣泛，是測(cè)定羥基自由基和篩選天然 抗氧化食品的有效方法之一。海南擁有得天獨(dú)厚的自然環(huán)境優(yōu)勢(shì)，是我國(guó)熱帶蘭花生產(chǎn)最佳區(qū)域。目前海南熱 帶蘭花產(chǎn)業(yè)化發(fā)展程度較低， 主要集中為種植及鮮花銷(xiāo)售上 7-10，如文心蘭、 莫氏蘭、 石斛蘭等熱帶蘭花的種植栽培 11-13。而一些高附加值的蘭花深加工產(chǎn)品，如蘭花茶、 蘭花保健品、蘭花化妝品等市場(chǎng)目前尚未開(kāi)發(fā)。本文將對(duì)海南熱帶蘭花的抗氧化活性 進(jìn)行研究，為綜合開(kāi)發(fā)利用海南熱帶蘭花提供

11、理論依據(jù)和新的發(fā)展方向。2 實(shí)驗(yàn)部分2.1 材料、試劑和儀器材料：石斛蘭：彩虹、迷人蕉、約定、玉玲瓏、花蝴蝶、綠意、艾瑪、暢想、玉觀音；莫氏蘭：小淘氣、小斑吉、金色陽(yáng)光、午后陽(yáng)光、丹頂鶴、黛安娜 ； 蜻蜓蘭：紅寶石、夢(mèng)妮、貝莎、美洲豹、紫氣東來(lái) ;文心蘭：黃金 3 號(hào)試劑：羅丹明-6G （ New Jersey USA分析純）；FeSC4 （天津市化學(xué)試劑一廠(chǎng)，分 析純）； H2O2（ 30%，廣州市番禺力強(qiáng)化工廠(chǎng)，分析純） ；抗壞血酸（廣東光華化學(xué)廠(chǎng) 有限公司，分析純）;H2SO4溶液（98%,廣州市東紅化工廠(chǎng)，分析純）;儀器：RF-5301PC熒光分光光度計(jì)（日本島津）;BS124S電子天

12、平（德國(guó)賽多利 斯股份有限公司） ； SK2200H 超聲波發(fā)生器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司） ； DF-101S 集熱式磁力攪拌器（金壇市金南儀器制造有限公司）2.2 實(shí)驗(yàn)方法2.2.1 實(shí)驗(yàn)原理依據(jù)文獻(xiàn)14-15，在稀硫酸介質(zhì)中，F(xiàn)enton反應(yīng)是以H2Q為氧化劑，以Fe2+為催化 體系的氧化法。其反應(yīng)機(jī)理如下：Fe2+ + HLQ Fe3+ + OH- + OH3+2+-+Fe + H 2Q2 Fe + O- + 2H OH + Fe2+ Fe3+ + OH- O2- + Fe 3+ Fe2+ + O22凈反應(yīng)：2HO2 Fe 2H2O + O2所產(chǎn)生的OH與羅丹明-6G作用后使體系的熒

13、光強(qiáng)度下降，熒光強(qiáng)度的變化值 與OH的量有關(guān)，由此可以測(cè)定OH的產(chǎn)生量。海南熱帶蘭花水提物的加入會(huì)與體 系中的羅丹明-6G爭(zhēng)奪 OH從而使體系熒光強(qiáng)度減弱程度受到抑制。 根據(jù)抑制程度來(lái) 計(jì)算幾種熱帶蘭花的抗氧化性的強(qiáng)弱。2.2.2 羥自由基檢測(cè)在室溫（T=252C）下，在兩支10mL比色管中分別加入I.OmL 0.01mmol/L羅 丹明-6G溶液，0.18mL 0.1mol/L H2SO4溶液，向其中一支再依 次加入0.6mL 1mmol/LH 2O2溶液，2.0mL 0.1mmol/L FeSO4溶液，分別加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻， 反應(yīng)40min,于入ex/入em=346/545n入射和

14、出射光譜狹縫分別為 5nm和3nm處測(cè)定 參比溶液熒光強(qiáng)度（Fo）與反應(yīng)溶液的熒光強(qiáng)度（F）,計(jì)算試液的熒光猝滅值厶F （ F =Fo卡）并以此間接測(cè)定OH的產(chǎn)生量。2.2.3 羥自由基清除率的測(cè)定在2.2.2所述體系中加入一定量的羥自由基清除劑（抗壞血酸 V。，按2.2.2的 操作測(cè)定加入羥自由基清除劑后溶液的熒光強(qiáng)度 F ，羥自由基清除率的計(jì)算方法如 下：錯(cuò)誤！未找到引用源。X 100%（2-1 ）2.2.4 熱帶蘭花（玉玲瓏）的水提物的提取及抗氧化活性研究運(yùn)用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)考察花瓣的質(zhì)量 , 超聲時(shí)間，浸泡超聲溫度三個(gè)影響 因素對(duì)熱帶蘭花（玉玲瓏）的水提物的抗氧化活性影響，并篩選了

15、最佳的提取工藝條 件。3結(jié)果與分析3.1熒光光譜原理分析在346nm激發(fā)光的照射下，羅丹明-6G溶液的最大發(fā)射峰位在545nm, Fenton反 應(yīng)產(chǎn)生的0H可以將其氧化并使熒光強(qiáng)度顯著降低，加入羥自由基清除劑 （抗壞血酸 VC）后，與體系中的羅丹明-6G爭(zhēng)奪羥自由基從而使體系熒光強(qiáng)度減弱程度減小， 但熒 光發(fā)射峰位保持不變。熒光光譜如圖1所示。1. 羅丹明-6G（ aq） + H2SQ（aq）2.羅丹明-6G（ aq）+ H2SQ （aq）+ H2O2 （ aq） + FeS04（ aq）3.羅丹明-6G（ aq）+ H 2SQ （ aq）+ H2O2 （ aq） + FeS04（ aq）

16、+VC （aq）圖1熒光光譜3.2實(shí)驗(yàn)原理驗(yàn)證取四支10mL比色管，按表1分別加入相應(yīng)試劑，定容至10mL，搖勻，反應(yīng)40min， 分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 1和圖2所示。由表1、圖2可得結(jié)論，號(hào)樣的熒光強(qiáng)度很大，證明羅丹明 -6G本身產(chǎn)生了特征熒光；號(hào)樣的的熒光強(qiáng)度介于、號(hào)樣之間，說(shuō)明抗壞血酸（V?？梢?0H反應(yīng)；號(hào)樣的熒光強(qiáng)度最低，說(shuō)明 0H可以使羅丹明-6G熒光猝滅；號(hào)樣與號(hào) 樣的熒光強(qiáng)度大致相等，證明抗壞血酸（V。不能和羅丹明-6G反應(yīng)。據(jù)此可知，F(xiàn)en to n反應(yīng)生成的 OH可以將羅丹明-6G氧化并使其熒光猝滅，抗 氧化劑（VC與羅丹明-6G爭(zhēng)奪 0H使熒光強(qiáng)度減弱程度降低

17、，而不是對(duì)羅丹明-6G的熒光猝滅才導(dǎo)致溶液熒光強(qiáng)度的改變表1實(shí)驗(yàn)原理的驗(yàn)證樣品R6G/mLHSQ/mLHO/mLFeSQ/mLVC/mL熒光強(qiáng)度F11.00.18000494.821.00.180.62.02.0376.531.00.180.62.0038.2741.00.18002.0496.31. 羅丹明-6G溶液+ H2SQ溶液2. 羅丹明-6G溶液+ H2SQ溶液+ H2O2溶液+ FeS04溶液+VC溶液3. 羅丹明-6G溶液+ H2SQ溶液+ H2Q溶液+ FeSQ4溶液4. 羅丹明-6G溶液+ H2SQ溶液+VC溶液圖2實(shí)驗(yàn)原理的驗(yàn)證3.3實(shí)驗(yàn)條件的研究3.3.1反應(yīng)時(shí)間的影響按

18、表2加入各種反應(yīng)試劑，從反應(yīng)10min起，每隔5min測(cè)定一次熒光強(qiáng)度，結(jié) 果表明，反應(yīng)30min以?xún)?nèi)，體系熒光強(qiáng)度隨反應(yīng)時(shí)間的增長(zhǎng)而下降，反應(yīng)30min以后, 熒光強(qiáng)度下降的趨勢(shì)變緩。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表 2和圖3。表2反應(yīng)時(shí)間對(duì)熒光變化的影響樣品R6G/mlH2SO4/mlH2O2/mlFeSO/ml時(shí)間F11.000.180.402.001048.3721.000.180.402.001540.5431.000.180.402.002032.9341.000.180.402.002527.8351.000.180.402.003025.3461.000.180.402.003525.3471.0

19、00.180.402.004025.7681.000.180.402.005025.67圖3反應(yīng)時(shí)間對(duì)熒光變化的影響3.3.2 H2O2溶液用量的影響測(cè)量 1mmol/L H2O2溶液的加入量分別為為 O.IOmL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL、0.60mL、0.70mL時(shí)的各樣品的熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明，當(dāng)羅丹明6G與H2O2的摩爾比在1:10-1:40范圍時(shí)熒光強(qiáng)度隨著H2O2的加入量的增加而降低，在摩爾比為1： 50之后，熒光強(qiáng)度幾乎不變。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3和圖4示。表3 H2O2溶液用量的影響樣品R6G/mlH2O2/mlFeSO/mlH2SO4/ml時(shí)間摩爾比F11

20、.000.102.000.18351:10117.921.000.202.000.18351:2057.4531.000.302.000.18351:3039.5041.000.402.000.18351:4025.8551.000.502.000.18351:5020.9961.000.602.000.18351:6020.3871.000.702.000.18351:7022.2981.000.802.000.18351:8020.48圖4 H2O2溶液用量的影響3.3.3 FeSQ溶液用量的影響測(cè)量 O.1mmol/L FeSO4溶液的加入量分別為 0.40 mL、0.80 mL、1.2

21、0 mL、1.60 mL2.00mL、2.40 mL、2.80 mL時(shí)的各樣品的熒光強(qiáng)度，結(jié)果表明，當(dāng)羅丹明-6G與FeSC4 溶液的摩爾比為1:4-1:16范圍時(shí)，隨著FeSC4溶液加入量熒光強(qiáng)度下降較明顯，在此 之后熒光強(qiáng)度下降較緩。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表 4和圖5。表4 FeS04溶液用量的影響樣品R6G/mlH2O2/mlFeSO/mlH2SO4/ml時(shí)間摩爾比F11.000.400.400.18351:4225.021.000.400.800.18351:8107.731.000.401.200.18351:1262.1341.000.401.600.18351:1645.5951.000.4

22、02.000.18351:2033.3161.000.402.400.18351:2420.7071.000.402.800.18351:2816.33圖5 FeS04溶液用量的影響3.4正交實(shí)驗(yàn)確定最佳實(shí)驗(yàn)條件綜合考慮，選擇羅丹明-6G與FeSQ溶液的摩爾比(A),羅丹明-6G與H2O2溶液 的摩爾比(B)，反應(yīng)時(shí)間C(min)三個(gè)影響因素，設(shè)計(jì)三因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)來(lái)確定 最佳實(shí)驗(yàn)條件，因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表 5。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6所示。表5 因素水平表因素ABC11： 161： 503021: 181: 603531: 201: 7040表6正交實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與分析樣品ABC熒光強(qiáng)度F F11161:

23、503042.31383.121161:603528.95396.431161:704030.45394.941181:503537.66387.751181:604028.19397.261181:703026.78398.671201:504025.19400.281201:603020.85404.591201:703525.95399.5K1117411711186K2118411981184K3120411931192k1391.5390.3395.4k2394.5399.4394.5k3401.4397.7397.5極差R9.99.12.9主次順序A B C優(yōu)水平A3B2C3優(yōu)組合

24、A3B2C3由表6正交實(shí)驗(yàn)分析可知，測(cè)定體系熒光強(qiáng)度的實(shí)驗(yàn)條件最優(yōu)組合為： A3 B2 C3, 即羅丹明-6G與H2O2溶液的摩爾比為1: 60;羅丹明-6G與FeSC4溶液的摩爾比為1： 20反應(yīng)時(shí)間為40min；也即：0.01mmol/L羅丹明-6G溶液用量為1mL，0.1mol/L H2SO4-溶液用量為0.18mL, 1mmol/L的H2O2溶液用量為0.6mL, 0.1mmol/L的FeSC4溶液 用量為2mL，反應(yīng)時(shí)間為40min。由表6極差分析結(jié)果顯示,因素影響主次順序?yàn)锳 BC, 即:羅丹明-6G與FeSC4 溶液的摩爾比為主要因素，羅丹明-6G與H2O2溶液的摩爾比為次要因素

25、，反應(yīng)時(shí)間 為不重要因素。3.5方法精密度測(cè)定在3.4所得最佳的實(shí)驗(yàn)條件下，按照2.2.3所述方法進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)。即:在10mL 比色管中依次加入1.0mL 0.01mmol/L羅丹明-6G溶液，0.18mL 0.1mol/L H2SO4溶液， 0.6mL 1mmol/L的H2O2溶液，同時(shí)加入 1.0mL 1mmol/L Vc溶液，然后加入 2.0mL 0.1mmol/L的FeSC4溶液，反應(yīng)時(shí)間是40min，平行測(cè)定熒光強(qiáng)度6次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的計(jì)算公式如下，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 7所示。； 2(3-1)(3-2)標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算公式： 標(biāo)準(zhǔn)差S = （X X） n 1相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算公式：rsd =m

26、表7方法的精密度實(shí)驗(yàn)樣品F樣F樣-FOH清除率/ %1205.9193.346.822208.8196.247.533211.6199.048.204211.6199.148.215216. 4203.849.366206.4193.846.94平均值210.1197.547.84RSD (%)1.98其中 Fo =425.4F=12.59 F=Fo-F=412.8本實(shí)驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.98%，這表明本方法具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。3.6方法準(zhǔn)確度測(cè)定在選定的最佳實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行工作曲線(xiàn)的繪制，分別加入1mmol/L抗壞血酸（VC）溶液0.20mL、0.60mL、1.00mL，按方法2.2.

27、3測(cè)定體系的熒光強(qiáng)度。得到線(xiàn) 性回歸方程為 丫= 70.90375 X+58.05008,相關(guān)系數(shù)R=0.9993。另取2支比色管，在實(shí) 驗(yàn)最佳條件下，分別加入1mmol/L抗壞血酸（VC）溶液0.30mL、0.90mL，采用同樣 的方法測(cè)定體系的熒光強(qiáng)度。結(jié)果如表 8和圖6所示。表8方法準(zhǔn)確度的測(cè)定樣品R6G/mlH2SO4/mlH2O2/mlFeSCh/mlVCF11.000.180.602.000.2072.8421.000.180.602.000.6099.3731.000.180.602.001.00129.641.000.180.602.000.3079.9251.000.180.

28、602.000.90121.2圖6方法準(zhǔn)確度的測(cè)定由公式3-3計(jì)算得到，當(dāng)體系加入 VC體積為0.3mL和0.9mL時(shí)，相對(duì)誤差分別 為0.76%和-0.51%，說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)所采用的方法系統(tǒng)誤差較小，準(zhǔn)確度較高。3.7海南熱帶蘭花水提物對(duì)羥自由基的清除作用將蘭花花瓣稱(chēng)取1g，放在50ml錐形瓶中，加水50.00ml,在室溫下（25 C左右）， 浸泡3h，超聲60min,取水提物1.00ml，在本實(shí)驗(yàn)選定的體系最優(yōu)條件下，即0.01mmol/L 羅丹明-6G溶液用量為1mL 0.1mol/L HSQ溶液用量為0.18mL, 1mmol/L的HO溶液 用量為0.6mL, 0.1mmol/L的FeSO

29、溶液用量為2.0mL，反應(yīng)時(shí)間為40min,測(cè)定幾種 熱帶蘭花水提物對(duì)羥基自由基的清除率。結(jié)果見(jiàn)表9。結(jié)果表明，石斛蘭中玉玲瓏的水提物對(duì)羥基自由基的清除很好。表9熱帶蘭花的花瓣水提物對(duì)羥基自由基的清除作用名稱(chēng)拉丁文名F OH青除率/ %石斛蘭彩虹Den. Chaopraya GemJBura na jabe-compactum314.961.06石斛蘭迷人蕉283.154.20石斛蘭約定Den. Woon Len g Compactum235.543.92石斛蘭玉玲瓏356.269.98石斛蘭綠意Den. Bura na Gree n334.465.27石斛蘭艾瑪Den. Emma White

30、323.963.00石斛蘭暢想Den. Emma White298.457.49石斛蘭玉觀音Den. Burana jabe Compactum293.156.36文心蘭黃金3號(hào)One. Gower Ramsey Gold 3264.450.16莫氏蘭小淘氣Mokara Choapraya Boy236.344.10莫氏蘭小斑吉Mokara Chittl Orange Spot286.554.93莫氏蘭金色陽(yáng)光Mokara Sun shi ne Yellow266. 050.49莫氏蘭午后陽(yáng)光Mokara Kitiya216.039.71莫氏蘭丹頂鶴Mokara Top Red261.449.

31、51莫氏蘭黛安娜Mokara Dianah Shore268.351.01蜻蜓蘭紅寶石Aranda Ruby Make nse236.544.14蜻蜓蘭夢(mèng)妮Arathera Anne Block271.251.63蜻蜓蘭貝莎Arathera Beatrics NG298.757.56蜻蜓蘭美洲豹Aranda Bertha Brega215.339.56蜻蜓蘭紫氣東來(lái)Aranda Chark Kua n Blue271.151.60F0 = 495.300, F = 32.0803.8石斛蘭玉玲瓏水提物的抗氧化活性及最佳的提取工藝研究3.8.1花的浸泡時(shí)間的影響在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，分別稱(chēng)取玉玲瓏花

32、瓣1g,加入50mL蒸餾水，在室溫條件下, 超聲60min，浸泡時(shí)間分別為1h，2h，3h，4h，5h，6h, 7h。測(cè)量其熒光強(qiáng)度，結(jié)果表明，浸泡時(shí)間對(duì)花瓣的水提物的抗氧化活性影響不大。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表10和圖7表10浸泡時(shí)間的影響樣品浸泡時(shí)間/h花的質(zhì)量/gFOH清除率/%111.0016193.840.15221.0021210. 243.86331.0009230.848.59441.0041233.849.26551.0023231.448.73660.9999232.548.96771.0001230.948.61圖7浸泡時(shí)間的影響382花瓣質(zhì)量的影響在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，分別稱(chēng)取玉玲瓏花

33、瓣 0.5g, 1g, 1.5g, 2g, 2.5g, 3g, 4g, 5g,加入50mL蒸餾水，在室溫條件下，浸泡 3h,超聲1h。測(cè)量其熒光強(qiáng)度。結(jié)果 表明，加入1.5g花瓣以后，熒光強(qiáng)度增長(zhǎng)趨勢(shì)變緩。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表 11和圖8。表11花瓣質(zhì)量的影響樣品浸泡時(shí)間/h超聲時(shí)間/min花的質(zhì)量/gF13600.5018292.223601.0094337.433601.4987380.343601.9959392.553602.5156394.763603.0117397.973603.9955398.883604.9950400.1380360320300 -280質(zhì)量/g圖8花瓣重量的影響3

34、.8.3超聲時(shí)間的影響在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，分別稱(chēng)取玉玲瓏花瓣1g,加入50mL蒸餾水，在室溫條件下， 浸泡 3h，超聲時(shí)間分別為 15min， 30min，45min，60min， 75min，90min， 105min， 120min。測(cè)量其熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明，超聲 60min以后，熒光強(qiáng)度增長(zhǎng)的趨勢(shì)變緩。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表12和圖9。表12超聲時(shí)間的影響樣品浸泡時(shí)間/h超聲時(shí)間/min花的質(zhì)量/gF13151.0049261.823300.9911292. 233451.0018315. 343601.0028336.2753751.0077343.863901.0096348.7731050.

35、9935351.7831201.0049352.4320 -300 -280 -260 -20406080100120時(shí)間/min圖9超聲時(shí)間的影響3.8.4浸泡溫度的影響在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，分別稱(chēng)取玉玲瓏花瓣 1g,加入50ml蒸餾水，浸泡3h,超聲1h,分別在 25 C, 30 C, 35 C, 40 C, 45 C, 50 C, 60 C, 70 C 的條件下浸泡超 聲。結(jié)果表明，浸泡超聲溫度為 50C時(shí)，熒光強(qiáng)度增長(zhǎng)的趨勢(shì)變緩。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表13和圖10。表13浸泡溫度的影響樣品浸泡時(shí)間/h溫度/c超聲時(shí)間/min花的質(zhì)量/gF1325601.0046291.52330601.005929

36、3.53335601.0096298.24340601.0019304.45345601.0069316.56350601.0083328.97360601.0044332.58370601.0044333.4330320310300290203040506070溫度/ c圖10浸泡溫度的影響3.8.5正交試驗(yàn)確定最佳的提取工藝條件綜合考慮，選擇花瓣的質(zhì)量（A）,超聲時(shí)間（B）,浸泡超聲溫度（C）三個(gè)影響因素， 設(shè)計(jì)三因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)來(lái)確定最佳實(shí)驗(yàn)條件，因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表14實(shí)驗(yàn)結(jié)果 如表15所示。表14 因素水平表因素ABC11.5454522.0605032.57555表15正交實(shí)驗(yàn)的結(jié)

37、果與分析樣品ABC熒光強(qiáng)度F11.50374545309.621.49816050339.131.50027555346.142.00134550353.452.00086055349.962.00667545367.372.50684555348.582.50916045374.292.50697550375.1K1994.710121051K2107110631068K3109810881045k1331.6337.2350.3k2357.0364.4355. 9k3366.0362.8348.2極差R34.427.27.7主次順序A B C優(yōu)水平A3B2C2優(yōu)組合A3B2C2由表15正交

38、實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分析可知，測(cè)定體系熒光強(qiáng)度的提取工藝最優(yōu)組合為:A3 B2C2,即：花瓣質(zhì)量2.5 g；超聲時(shí)間60min;超聲浸泡溫度50 C；由表15極差分析結(jié)果顯示，因素影響主次順序?yàn)?ABC,即：花瓣質(zhì)量為主要 因素，超聲時(shí)間為次要因素，超聲浸泡溫度為不重要因素。3.8.6熱帶蘭花（玉玲瓏）各個(gè)部分的抗氧化性在最佳條件下，即：0.01mmol/L 羅丹明-6G 1ml，0.1mol/LH 2SO4 0.18ml，1mmol/LH2O2 0.6ml，花瓣2.5g中加入50ml水，在50 C下浸泡3h，超聲60min，取 1ml水提物后，加入 0.1mmol/LFeSO4 2ml，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表16.表16玉玲瓏各個(gè)部位的抗氧化性編號(hào)部位FOH清除率/ %1花瓣382.588.352花心380.587.873花托381.388.064花莖382.488.324 結(jié)論用熒光法間接測(cè)定 Fenton 反應(yīng)生成的羥基自由基，測(cè)定多種熱帶蘭花的抗氧化 能力，結(jié)果表明，石斛蘭中的玉玲瓏對(duì)羥基自由基的清除效果比較好。進(jìn)一步優(yōu)化了 系的測(cè)量條件和篩選出了玉玲瓏水提物最佳的提取工藝