TNF―α,INF―γ的診斷意義

1、TNF a ,INF Y的診斷意義摘要：目的 為更好地為兒童急性再生障礙性貧血體 內(nèi)細胞因子濃度變化提供證據(jù)。方法 采再障組（ 46 例）和 對照組（ 48 例）靜脈血，用酶聯(lián)免疫吸附法測定所取血樣標 本中腫瘤壞死因子 -a （TNF- a ）和干擾素 -Y （INF-Y ）的 含量。并用獨立樣本 t 檢驗分析兩組外周血中細胞因子是否 存在顯著性差異。結(jié)果 再障組患兒外周血 TNF- a 和 INF- Y的含量均高于對照組兒童。結(jié)論通過對TNF- a和INF-Y 的監(jiān)測，可以有效的了解再障患兒疾病進展，治療效果和 預(yù)后情況。關(guān)鍵詞：再生障礙性貧血；腫瘤壞死因子 -a ；干擾素 -Y再生障礙性貧

2、血可分為急性再障和慢性再障兩型。其中 急性再生障礙性貧血發(fā)病急、進展快，骨髓衰竭是其主要病 理過程， 常伴內(nèi)臟出血、 嚴重感染， 常危及生命， 預(yù)后不良。 但是現(xiàn)在大部分的病例被診斷為特發(fā)性免疫異常導(dǎo)致的再 生障礙性 1 。細胞因子失調(diào)， 包括腫瘤壞死因子 （TNF- a ）， 干擾素（INF- y ）,今年來研究發(fā)現(xiàn)在再生障礙性貧血的發(fā)病 機制中起到了重要的作用 2 。兒童再生障礙性貧血已經(jīng)成為 繼兒童白血病之后，兒童死亡率較高的一種血液系統(tǒng)疾病3 。本研究為了給臨床上提供更好的關(guān)于兒童急性再障體內(nèi) 細胞因子濃度變化的證據(jù)?，F(xiàn)報告如下：1 資料與方法1.1 一般資料 2010年6月2013年

3、6月我院診治的46名急性再生障礙性貧血患兒。符合我國小兒再生障礙性貧血 的診斷及分型標準 4 ?；純壕鶠榧毙栽偕系K性貧血發(fā)作。 其中男 20 例，女 26 例，中位年齡 6.3（ 2 1 4）歲。對照組 選擇同期到我院體檢中心體檢的正常兒童，共 48 例，男 21 例，女 27 例，中位年齡 7（ 2 1 6）歲。兩組兒童的年齡比 較和性別比例上無顯著性差異，P 0.05。1.2 方法1.2.1 標本收集 用肝素鈉抗凝管采集靜脈血 5ml 用于TNF- a測定。取用無肝素采集管采集靜脈血15ml用于INF-Y測定。1.2.2TNF- a含量的測定 以鼠源性的抗 TNF- a單抗以 每孔 40

4、0ng 的量， 在 PH 值為 9 的碳酸 -碳酸鈉緩沖液中包被 96孔板中，置4C環(huán)境過夜。取出后洗滌3次，加入預(yù)先備好的待測樣本及標準的TNF- a （制作標準曲線用）。37C孵育2h。用洗滌液洗滌3次，加入羊抗鼠 TNF- a抗體，37C 孵育 2h 后，再洗滌 3 次，加入辣根過氧化物酶標記的兔抗 羊IgG , 37C孵育2h后加入底物顯色。終止顯色后在自動酶 標儀上測定濃度，并以標準曲線為基準求得TNF- a的含量。 以（ xs） ng/ml 的形式表示結(jié)果。1.2.3INF- 丫含量測定 將上述采得的用于INF- 丫測定的 靜脈血在室溫凝固 30m in , 1000r /m in

5、離心15m in，收集血 清。檢測IFN- a用人IFN- a檢測Elisa試劑盒，操作步驟為 分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步 操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品 準確加樣50卩I，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40卩I，然后 再加待測樣品10卩I （樣品最終稀釋度為 5倍）。將樣品加于 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。用封板膜 封板后置37 C溫育30min。將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加 滿洗滌液，靜置 30s 后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。每孔加 入酶標試劑50卩I，空白孔除外。再

6、用封板膜封板后置37C溫育 30min 。小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿 洗滌液，靜置 30s 后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。每孔先加 入顯色劑A50卩I,再加入顯色劑B50卩I,輕輕震蕩混勻，37 C 避光顯色15min，每孔加終止液50卩I，終止反應(yīng)（此時藍色 立轉(zhuǎn)黃色）。以空白孔調(diào)零， 450nm 波長依序測量各孔的吸 光度（ OD 值）。終止顯色后在自動酶標儀上測定濃度，并以 標準曲線為基準求得 IFN- a 的含量。以（ xs） ng/mI 的形 式表示結(jié)果。1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS1 1 2 . 0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用均 x s 表示，結(jié)

7、果分析采用獨立樣 本的 t 檢驗，以 P 0.05 為差異有顯著性。2 結(jié)果2.1 TNF- a含量的對比結(jié)果 再障組患兒外周血中 TNF- a含量的平均值是：(56.51 土 20.02) ng/ml，而對照組的患 兒的平均值為( 25.88 10.11) ng/m l 。通過獨立樣本 t 檢驗 分析，P=0.0080.05，差異具有顯著性。2.2 INF- 丫含量的對比結(jié)果 再障組患兒外周血中INF-Y含量的平均值是：(21.2 9.22) ng/ml，而對照組的患兒 的平均值為 (8.87 10.11) ng/ml 。通過獨立樣本 t 檢驗分析， P=0.0010.05。3 討論 近年來

8、，越來越多的證據(jù)表明，再生障礙性貧血發(fā)病與 免疫異常有關(guān)。已經(jīng)有不少學(xué)者從細胞因子水平方面研究再 生障礙性貧血 5 。到目前為止雖然再生障礙性貧血精確的發(fā) 病機制還沒有被完全的闡明， 但是大量證據(jù)表明 T 細胞介導(dǎo) 的免疫調(diào)節(jié)異常在再障的發(fā)病機理中發(fā)揮了重要的作用。Th1 功能失調(diào)被認為是再障發(fā)病的一個重要原因， Th1 功能 活躍導(dǎo)致TNF- a和INF- 丫過表達成為了再障炎癥改變的基 礎(chǔ)6。腫瘤壞死因子， 是單核 -巨噬細胞分泌的單核細胞刺激因 種形式TNF- a和TNF- B o由于TNF- 3又稱為淋巴毒素只限 于局限分泌，而 TNF- a則被廣泛分泌到外周血循環(huán)中。所 以在關(guān)于機體

9、免疫功能的研究中，一般都是檢測 TNF- a 的 含量。研究表明，再障患者體內(nèi) TNF 的含量有明顯增加 7 最初的研究認為， TNF 是造血祖細胞的負調(diào)節(jié)因子，能夠抑 制粒紅細胞集落形成單位、粒單細胞集落形成單位、紅系爆 式集落形成單位及紅系集落形成單位的形成 8 。但后期證 實， TNF 對正常造血細胞具有雙向調(diào)節(jié)作用 9 。在正常情況 下，TNF- a濃度較低，適量的 TNF- a對機體有保護作用， 在疾病的病理改變下，TNF- a大量分泌，以致對機體產(chǎn)生損 害作用。最近的研究證實， TNF 升高是由于患兒存在自身免 疫功能缺陷，特別是組織免疫受到抑制，過量的 TNF- a 刺 激單核

10、-巨噬細胞從而分泌更多的結(jié)果。 是否還有其它因素影 響，尚待進一步探討 10 。本研究的結(jié)果為再障兒童體內(nèi)外 周血 TNF- a 含量顯著高于正常兒童含量提供了臨床依據(jù)。子，在炎癥和免疫反應(yīng)中起著重要的作用人的 TNF 具有兩INF- 丫主要由輔助T (Th)細胞產(chǎn)生，INF- 丫是可調(diào)節(jié)Th 細胞極化的細胞因子 。在這種調(diào)節(jié)機制中， 細胞分泌的 INF- 丫發(fā)揮著十分重要的作用，能顯著地促進Th1應(yīng)答，且抑制 Th2 應(yīng)答 11。國外已經(jīng)有學(xué)者研究表明再障患者外 周血中存在高水平的INF- 丫 12升高的機理可能是患兒血清 中血管內(nèi)皮生長因子水平明顯低于正常患兒，也可能是由于 患兒外周血 T

11、、B 淋巴細胞調(diào)節(jié)紊亂，機體的免疫功能發(fā)生障礙的原因。再障患兒 Th1 功能活躍，超過了機體正常的調(diào) 節(jié)功能，產(chǎn)生高水平的INF- 丫，進而對造血又起抑制作用， 進一步惡化再障。所以體內(nèi)的INF -丫含量可以有效的體現(xiàn)再 生障礙性患者疾病的嚴重程度。在我們這次研究中，也可以 看到急性再生障礙性貧血患兒外周血中的INF- 丫的含量與對照組患兒體內(nèi)INF- 丫的含量差異具有顯著性。 這里后期應(yīng) 該追加急性再障和慢性再障患兒體內(nèi)外周血INF- 丫含量比較的研究，以提供更完善的證據(jù)證明INF -丫的含量可以反映 再障疾病的嚴重程度。綜上所述， 在再生障礙貧血的發(fā)展過程中， 通過對 TNF- a和INF

12、- Y三種細胞因子的監(jiān)測， 可以有效地了解疾病的情 況、治療效果和疾病的預(yù)后，具有較重要的意義。本研究為 再障的新治療靶點提供有效的臨床依據(jù)。同時，提示我們較 新的研究思路，有助于進一步研究兒童再生障礙性貧血。參考文獻：1 Jianping Li ， Qinjun Zhao ， Wen Xing ， et al.Terleukin-27 enhances the production of tumour necrosis actor-a and interferon-c by bone marrow T lymphocytes in aplastic anaemiaJ.British Jour

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