原發(fā)性肺癌中DMBT1基因的表達(dá)(一)

1、原發(fā)性肺癌中 DMBT1基因的表達(dá) （一 ）作者：文海云，羅松古，李君，何建猷 【摘要】目的探討原發(fā)性肺癌組織中 DMBT1基因表達(dá)水平與肺癌臨床 和病理特征的關(guān)系。方法以逆轉(zhuǎn)錄 聚合酶鏈反應(yīng)（ ）檢測(cè)原 發(fā)性肺癌中 DMBT1基因的表達(dá)水平。結(jié)果 37 例原發(fā)性肺癌中 10 例 DMBT1表達(dá)正常 （27.03%,10/37），有 27例 DMBT1表達(dá)低下或完全無(wú)表 達(dá)（72.97%,27/37）;DMBT1的表達(dá)與原發(fā)性肺癌的病理類(lèi)型、 TNM 分 期、吸煙史等均無(wú)明顯相關(guān) （P 0.05），但與肺癌組織分化程度及有無(wú) 淋巴結(jié)和 （或 ）遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（ P80.05(t=0.385)

2、 性別 1.000 女性 1293 男性 25187 腫瘤大小 (cm)5.0 1.45.1 1.8 0.05(t=0.269)腫瘤分類(lèi) 0.460中心型 20164 周?chē)?17116 病理類(lèi)型 1.000 非小細(xì)胞肺癌1.1.2 主要試劑異丙醇、氯仿和乙醇等均為國(guó)產(chǎn)分析純， Trizolreagent 購(gòu)自 GIBICO公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自廣州基因工程公司，實(shí)驗(yàn)試劑均用無(wú)菌去離子三蒸水配制1.1.3 引物引物設(shè)計(jì)參照文獻(xiàn)，均由上海生物工程公司合成，包括5末端、 3末端和引物，見(jiàn)表 2。表 2 引物序列引物引物序列 5末端片段引物（ A/2AS ）末 端 片 段 引 物（ 4A/4AS ）

3、 引物3 （antisense）1.2 方法1.2.1RNA的抽提用 Trizol 抽提法提取肺組織 RNA，分光光度計(jì)測(cè)定其OD值，純凈 RNA的 OD260/OD280比值要 2.。0選擇 cDNA上的兩個(gè)位點(diǎn)（ 5末端、 3末端）進(jìn)行 PCR擴(kuò) 增，擴(kuò)增片斷分別為 233bp、746bp，內(nèi)參（擴(kuò)增片斷為 415bp）被用來(lái)鑒定 cDNA的質(zhì)量。未加模板的反應(yīng)管被用來(lái)作為陰性對(duì)照， 以 排除污染。反應(yīng)體系組成：Totalvolume25 ，lTemplateRNA3l， ，dNTPMix（10mMofeachdNTP）1 l，5.9 l ， RNaseInhibitor（optional）0.1 ，Primers（eachPrimer）1 。熱循l環(huán)參數(shù)： 50逆轉(zhuǎn)錄 30min，95始變性15min，30 個(gè)主循環(huán)（94變性 1min，60退火 1min，72延伸 1min ），72終延伸 10min。1.2.3 電泳 產(chǎn)物在 1.5% 2.0%瓊脂糖凝膠上電泳， EB 染色20