生化檢驗實驗室基本知識.

1、第一節(jié) 第三節(jié) 第二節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié)實驗用純水 I 實驗方法的選捧: 實驗用玻璃儀冨; 實驗方法的評給 實驗的診斷;( 性能評價 1雜經實精 多須學和 許必化度 有，物確 軸質生準 肝物于的 刈解用果 給溶能結 學和才驗亍質，實 心物水響 前體純影 瞞勢重 啲、成嚴掰物質將 水如去否。，理。度 質處譬、純水的制備方法(-)蒸憎法將自來水在蒸憎器中加熱氣化，然后冷凝（二）離子交換法將自來水通過離子交換柱去除水中雜質的方法。離子交換樹脂是一種人工合成的帶 有交換活性基團的多孔網狀結構的高分子化 合物，在網狀結構的骨架中，含有許多能溶 液中的離子起交換作用的“活性基團”。當 水通過陽離子交換樹脂時

2、，水中帶正電荷的 陽離子與樹脂中的H+交換，而水中帶負電荷 的陰離子則與樹脂中的OH-交換。離子交換 水在25 C時的電阻率為5 X13Q/C m左右。水的純度檢查包括用電導儀測定其電導率或電阻率，用特定試劑檢測水中殘留的62+、Mg2+、Cl-v SOJ一等成分，細菌培養(yǎng) 計數(shù)菌落。1電阻率 用電導儀或兆歐表測定，用電導儀測得的電導率，可與電阻率進行換算。 電導單位為西門子（s）,電導是電阻的倒數(shù),EPls=l2-1；每cm長的電導為電導率（s-cm1）。2可溶性硅檢驗定性方法：純水10ml加 1%的鉗酸溶液15滴，草酸與硫酸的混合液 (4%草酸1份，加4mol/L硫酸3份)8滴，混勻, 置

3、室溫10分鐘，滴加1 %硫酸亞鐵溶液5滴，搖 勻，以不顯藍色為合格(S05mg/L)3. 細菌菌落計數(shù)按常規(guī)菌落計數(shù)法進行。4. 實驗用純水標準及用途 1976年，CAP 提出了實驗用水的三級標準，1985年，NCCLS 又提出了新標準。生化試劑及生化檢驗用水標準（CAP）特性指標I級II級m級pH6.07.06.07.06.07.0電導率(ps/cm, 25C)0.1 2.0100.50.2硅酸鹽（mg/L）0.010.010.01重金屬（mg/L）0.010.0152 0如果F值F臨界值，則統(tǒng)計學上認 為兩種方法的精密度有差別；F值VF臨界 值，則表示兩種方法的精密度無明顯差別。(3)直線

4、回歸：根據(jù)兩法所測數(shù)據(jù) 得回歸方程Y = abXo。為回歸線截距,a = ybx僅對恒定誤差敏感；4 = 0時,定誤差。為回歸線斜率,表示無恒僅對比例誤差敏感；方=1時，表示無比 初誤差。7 nl.XY-YXXYb =nLX2 _(X)2（-）性能標準1 允許分析誤（血）被規(guī)定為95%樣品 的允許誤差限度2醫(yī)學決定性水平（Xc）是指對疾病診 治具有參考價值的臨床分析物濃度o對于某一分析物，每一醫(yī)學決定性水平規(guī)定相應的性能標準，即在一定疋值下的值。（二）性能判斷指標單值判斷指標誤差類型判斷標準評價實驗隨機誤差（RE）1.96SEa重復試驗比例誤差（PE）| (R100) XXc/1QQEa回收試

5、驗恒定誤差（CE）1偏差1 Ea干擾試驗系統(tǒng)誤差（SE）| Ca+bXc) - Xc | Ea對比試驗1.96S+1 (a+bXc ) -Xc EA總誤差（TE二RE+SE重復和對比試驗)評價某項試驗方法的好壞，除了分析 測測定方法的隨機誤差和系統(tǒng)誤差外，還 必須與臨床診斷結合，建立參考值，采用臨床評價指標一診斷靈敏度、特異度、預測值、似然比等作進一步評價。、泰靑Ct% 診決M /rA（-）參考值與參考范圍i概念是指從若干標準規(guī)定的參考 人群中選取一定數(shù)量的參考個體檢測的結 果。經統(tǒng)計學處理求得均值（力和標準 差（S）,均值即為參考值，結果的95% 的分布區(qū)間即為參考范圍。（正態(tài)分布一 般些f

6、2S表示，偏態(tài)分布可用百分位數(shù) 表 ） O2 參考值的制訂(1) 參考個體的選擇 選擇的參考個體應 具有典型性、代表性，能反映出目標總體的 特征。如人群的來源，健康的標準、年齡、 性別、民族、職業(yè)等。(2) 測定方法的選擇與標準化 一般應選 擇國內或國際上推薦方法，并參加標準化工 作，達到標準化后再對參考樣本中每一參考 個體測定。標準化工作除方法本身外，還包 括被檢對象的準備、標本采集、處理和保存、記錄格式和填寫方法。(3) 應有一定數(shù)量的受檢人數(shù) 一般應 有100例以上。IIIIII025單位，大于25為異常。(4)根據(jù)專業(yè)知識確定單、雙側位界如 雙側均有意義的應采用雙側位界(參考值上 限、

7、下限),如血糖396lmmol/L于、 小于這上限、下限均為異常。如單側有意義 的采用單側位界，單值上限，如血清ALT1概念：是指對疾病診療具有參考價值的臨床分析物濃度。2 醫(yī)學決定水平與參考值的關系 現(xiàn)有 兩組人群，組A是參考人群，所得出的參考值 在箭頭之間，組B是某種疾病患者，DL1為第 一決定性水平，此值左側可排除B疾病，DL2 為第二決定性水平，該值右側可確定患者有B 疾病，由此可見醫(yī)學決定水平與參考值不同。IllIII如血清白蛋白正常值3550g/L可分為 三個決定性水平。第一決定性水平20g/L,預 后嚴重，第二決定性水平35g/L,低白蛋白血 癥界線值，第三決定性水平52g/L,

8、排除FP。二、診斷靈敏度、特異度、預測值和似然日(-)診斷試驗和金標準診斷試驗是指對疾病作出判斷的一般臨床實驗檢查方法。金標準則是對疾病作出的決定性診斷的方法。診斷試驗的評價是先用金標準診斷結果為患者和非患者,然后用診斷試驗測得其陽性和陰性結果，再進行各種分析。診 斷試驗結杲與息病的 關系疾?。ń饦藴试\斷）診斷試驗結果有無總計陽性TPFPTP+FP陰性FNTNFN+TN總計TP+FNFP+TNTP+FP+FN+TNTP真陽性，F(xiàn)P假陽性，TN真陰性，F(xiàn)N假陰性。（二）診斷靈敏度：是指在金標準診斷為有病”的患者中用診斷試驗檢出的陽性 百分率。表示診斷試驗查出患病者的能力,這稱為真陽性率。診斷靈敏

9、度=真陽性數(shù)患者的總數(shù)X100 % = TP+FN X100 %靈敏度高的診斷試驗常用于普查或定期rm健康體檢，能篩選某一疾病。防止漏診。1一診斷靈敏度稱為假陰性率。（三）診斷特異度：是指在金標準診斷 為“無病”的非患病者中，用診斷試驗檢出 的陰性結果的百分率。表示診斷試驗正確確 定非患病者的能力，這稱為真陰性率。診斷特異度=真陰性數(shù)無病者的總數(shù)X100% =TNFP+TNX100%特異度高的診斷試驗在臨床上常用于某 些疾病的確診，以防誤診。1一診斷特異度稱為假陽性率。理想的試驗應是每一個病人均為陽性結 果，而任何一個健康者均為陰性結果，但這 種理想試驗是不存在的，受試者有病，試驗 結果正常，

10、為假陰性，受試者無病試驗結果 異常，為假陽性。（四）診斷準確度:是指真陽性和真陰性人數(shù)之和占受試人數(shù)的百分率。診斷準確度=TP+TNTP+FP+TN+FNX100%（五）預測值：一項診斷試驗能夠確定或 排除某疾病的診斷概率稱為預測值（PV）, 預測值分為陽性預測值（+PV）和陰性預測 值（-PV）OI陽性預測值（+PV）指診斷試驗為 陽性時，被檢者患病的概率。+PV =診斷試驗陽性數(shù)X100% =TPTP+FPX100%真陽性數(shù)2陰性預測值（一PV）指診斷試驗結果為陰性的人當中，非患病者的百分率。-PV =真陰性數(shù)診斷試驗陰性數(shù)X100% =TNTN+FNX100%(六)似然比敏感度_TP率a

11、 / b1 陽性似然比 在診斷性試驗中奠陽性 率(TPR)與假陽性率(FPR)的比值稱為 陽性似然比M ( + )。陽性似然比=特異度Fp率卄b+d 用于描述診斷性試驗陽性時，患病與不 患病的機會比。若比值大于1,則隨比值的增 大，患病的概率也增大。(六)似然比2陰性似然比 在診斷性試驗中假陰性 率(FNR)與真陰性率(TNR)的比值稱為 陰性似然比M (-)。陰性似然比=尺“率特卄度= bT啤 a+c/方十用于描述診斷性試驗陰性時，患病與不患病的機會比。其比值愈大，則患病的概率通過診斷試驗的似然比，只要已知試 驗前病人患病可能性(P),就可求出試 驗后病人患病可能性。PTL ( + ) P

12、LR(PTL 葉)a-P) +P LR ( + )PTL(_) 卩皿)a-p)+p lr(+)PTL ( + )陽性結果的試驗后患病可能性PTL (-)陰性結果的試驗后患病可能性rrprrrrrrrrrrrc(七)診斷試驗評價指標的應用1.根據(jù)診斷試驗檢測結果計算其評價指標 例根據(jù)下表所給血清鐵蛋白對診斷貧血 的有關數(shù)據(jù)，計算血清鐵蛋白的診斷敏感 度、診斷特異度、診斷準確度、陽性預測 值、陰性預測值及流行率。血淸鐵蛋 白測定結果IIIIIIIII血清鐵蛋白測定結果(ng/ml)缺鐵性貧血(50)非缺鐵性貧血(79)3047 U)3 (c)475 (J)頁* 頁診斷敏感度=a +c診斷特異度x

13、100%= - x 100%= 94%47+375x 100%=二 x 100%= 949%75 + 4診斷準確性=a + 方 + c + dxl00%=47+7547 + 4 + 3 + 75x 100%= 946%+ PV= x 100%=的 x 100%= 922% a+b47 + 4JUM-PV=X100%=X100%= 962%c + d3 + 75流行率=a + ca+b + c +dx!00%=47+347+4 + 3 + 75x 100%= 41%2 根據(jù)診斷敏感度和特異度，臨床醫(yī) 生可根據(jù)病人試驗前患病可能性，估計病 人試驗后患病的可能性(+PV),確定是 否需要做該項檢查。

14、例已知前列腺特異抗原(PSA)的診 斷敏感度為70%,診斷特異度為90%,醫(yī) 生根據(jù)病史、體檢等估計該病人試驗前診 斷為前列腺癌的可能性為5%,試計算應用 PSA檢查，該病人試驗后診斷為前列腺癌 的可能性是多少？(1) 以病人數(shù)1000開始填寫。(2) 已知試驗前診斷患病可能性為5%,則1000X5% =50 填入a + c處。(3)按診斷敏感度和診斷特異度計算a、bv cv do(4)計算試驗后診斷患病的可能性，即陽性預測值(+FV診斷敏感度=X100%a +c70x50100=35c = 5035=15診斷特異度二點xlO咳叱50卡5100b = 950-855=95PS A檢查預測結果P

15、SA結果前列腺癌有無陽性3595陰性15855a + c = 50b + d = 950a u+ PV= x 100%=x 100%= 26.9%a +b35+95該病人如做PSA檢查，患病可能性由試驗前的 5%變?yōu)樵囼灪蟮?6.9%,診斷患病可能性僅提高 21.9%,故病人無需做該項檢查。3閾值 也稱臨界值，指劃分診斷試驗 結果正常與異常的界值。閾值的確定直接影 響診斷試驗的臨床評價指標。頁當正常人的分布與病人的分布沒有重疊,可取A值為閾值。若兩者有重疊時，閾值向右移，則假陰性增加, 左移，則假陰性減少,假陽性減少; 假陽性增加。閾值向頻數(shù)rrrrrrrprrrrrrrrrrrc由此可見，閾

16、值不同，診斷敏感度、 診斷特異度、+PV. 一PV等參數(shù)隨之改 變。此時應先確定幾個閾值，分別計算 TP. FP. TN、FN,進一步計算診斷指 標，最后根據(jù)早期診斷、療效觀察、流 行病調查等不同目的，確定閾值。例560名收入冠心病監(jiān)護室的病人， 在入院當天抽血作CK檢查，CK結果見下 表。醫(yī)生在不知道CK結果的情況下，根據(jù) 心電圖結果和臨床報告，診斷340名病人患 有心肌梗死，其他220名無心肌梗死。根據(jù) 資料確定若干閾值，并計算診斷敏感度、 特異度及試驗后診斷的可能性。CK結果分布CK活性(U/L) 900 有心梗(340)419951156740無心梗(220)1643415頁* 頁(1

17、) 選定 10、180、360、720U/L四個閾值。(2) 計算每個CK閾值上的病人數(shù)。見下表不同閾值時病人數(shù)統(tǒng)計血清CK水平(U/L)心肌梗死有無720107236071921020180359193410 1794164（3）對每個閾值列表并計算診斷敏感度、特異度及試驗后診斷的可能性。見下表各個闔值下診斷敏感度、特異度及預測值閾值CK水平（U/L）10723172233656340220233 21823198416400敏感度（）31.593.29&8100特異度（%）99.19074.50+PV9&293.585.7-PV51.710.42.4720360180 10（4）選定合適的

18、閾值 從上得知，選定360U/L 水平為閾值時，所產生的假陽性和假陰性最少。診斷敏感度即陽性率（TP率，TPR）、 診斷特異度即陰性率（TN率）、閾值對診斷 指標影響很大。 3率=xlOO% 貯率=- xlOO% b +db -dFF 率+7W 率= 100%.TP率=100% 7W率以試驗的敏感度（7T率）為縱坐標，1 一特異度（假陽性率FP率，F(xiàn)PR）為橫坐標 作圖，依連續(xù)分組測定的數(shù)據(jù)，分別計算TPR及FPR,并將相對的點連接就得到受試者工作曲線（ROC曲線）不同闔值時的陽性卒.陰性率和假陽性率百分率7203603L59X2TP閾值血清CK7R平（U/L）180 10 _10098.TN FP99.190.00.91074.5 025.5 100(1)選擇合適的閾值。左上角代表一 個