急性、慢性和亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)

1、WORD格式急性毒性試驗(yàn)(-)經(jīng)典的急性致死性毒性試驗(yàn)通過試驗(yàn)得到化合物引起動物死亡的劑量一反應(yīng)關(guān)系并求得LD50 ( LC50)1、實(shí)驗(yàn)動物常用的實(shí)驗(yàn)動物是小鼠或大鼠。一般受試動物應(yīng)是雌、雄各半；若雌、雄動物對待測化學(xué)物 毒性的敏感程度有明差異，則應(yīng)分別求出各自的LD50；如果試驗(yàn)是為畸形試驗(yàn)做劑量準(zhǔn)備， 也可僅做雌性動物的LD50試驗(yàn)。小動物每組10只，狗等大動物可每組6只。2、染毒劑量設(shè)計(jì)首先要了解化學(xué)毒物的結(jié)構(gòu)式、分子量、常溫常壓下的狀態(tài)、純度、雜質(zhì)成分與含量、溶解 度、揮發(fā)度、PH等理化性質(zhì)。對于新的受試化學(xué)物，找出與受試化學(xué)毒物結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì) 近似的化學(xué)物的毒性資料，并以文獻(xiàn)資料中

2、相同的動物種系和相同接觸途徑所測得的 LD50(LC50)值作為受試化學(xué)物的預(yù)期毒性中值，先用少量動物，以較大的劑量間隔(一般按 幾何級數(shù))染毒，找出找出10%、90% (或0%100%)的致死劑量范圍，然后在這個劑量范 圍內(nèi)設(shè)幾個劑量組。改良寇氏法最好設(shè)5個劑量組，每組10只動物，雌雄各半，劑量組要 求以等比級數(shù)設(shè)置。根據(jù)以下公式計(jì)算出劑量分組：i=(lgLD90-lgLD10) / (n-1)或：i=(lgLD100-lgLD0)/ (n-1) 式中i為組距(相鄰的兩個劑量組對數(shù)劑量之差)；n為設(shè)計(jì)的劑量組數(shù)。有的毒性較小，此時(shí)可不再求其LD50,而應(yīng)進(jìn)行限量試驗(yàn)。在用大鼠或小鼠進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)

3、， 一般用20只動物，雌雄各半。單次染毒劑量一般限定為5g/kg (體重)，對于食品毒理學(xué)試 驗(yàn)，限量要求為15g/kg (體重)。如果實(shí)驗(yàn)動物無死亡或僅有個別動物死亡(死亡率低于50%), 則可得出LD50大于限量的結(jié)論。3、觀察染毒后一般要求觀察14天，依據(jù)14天內(nèi)動物的總死亡情況計(jì)算LD50o在實(shí)際工作中，依 據(jù)受試物有關(guān)測試規(guī)程要求確定觀察期的長短。觀察內(nèi)容包括：(1) 動物死亡情況：包括動物死亡數(shù)及各自的死亡時(shí)間。(2) 動物體重：于染毒前、染毒后每周和死亡時(shí)測定體重。(3) 中毒反應(yīng)癥狀：臨床觀察每天至少一次，觀察皮膚、被毛、眼睛和粘膜改變，呼吸、循環(huán)、自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及四肢活

4、動和行為方式的變化等，特別要注意有無震 顫、驚厥、腹瀉、嗜睡等現(xiàn)象。神經(jīng)毒性：驚厥、共濟(jì)失調(diào)和死亡。植物神經(jīng)興奮： 腹瀉或豎毛。(4) 病理學(xué)檢查：解剖進(jìn)行尸檢，觀察各器官有無改變，對肉眼觀察有變化的臟器需進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。4、LD50計(jì)算(1) 霍恩氏法(2) 簡化寇氏法M=X - i (S p - 0. 5)式中:mlogLD50,X最高劑量組劑量對數(shù)值，p死亡率(用小數(shù)表示)，工p死亡率總和，i相鄰兩組劑量對數(shù)之差。(3) 直接回歸法：死亡頻率呈正態(tài)分布，則變化曲線為典型的“鐘罩”型；死亡頻率化為累積死亡頻率，反應(yīng) 曲線呈s形；累積死亡頻率化為概率單位時(shí)，反應(yīng)曲線呈直線。（二）急性毒性

5、試驗(yàn)的其他方法1. 固定計(jì)量法2. 急性毒性分級法3上、下移動法亞慢性毒性和慢性毒性的評價(jià)方法1、實(shí)驗(yàn)動物要求選拔兩種實(shí)驗(yàn)動物，一種為嚙齒類，首選是大鼠，另一種為非嚙齒類，首選是狗。亞慢 性毒性試驗(yàn)一般每個劑量組20只大鼠，或每組46只狗。慢性毒性試驗(yàn)每組40只大鼠，狗 每組8只或以上。2、染毒途徑常用的染毒途徑是經(jīng)胃腸道、經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮膚染毒。3、染毒期限工業(yè)毒理學(xué)36個月食品毒理學(xué)一一6個月一1年環(huán)境毒理學(xué)一一6個月一1年致癌試驗(yàn)一一接近或等于動物的預(yù)期壽命4、劑量分組（1）亞慢性毒性的劑量選擇：陰性對照組，低劑量組，中劑量組，高劑量組急性毒性的閾劑量:l/20l/5LD50組距：3、10倍，最低不小于2倍（2）慢性毒性的劑量選擇陰性對照組，低劑量組，中劑量組，高劑量組亞慢性閾劑量：l/50l/5LD50組距：25倍,最低不小于2倍5、觀察指標(biāo)（1）中毒癥狀（行為和外觀）（2）體重：每周稱量一次（3）食物利用率（試驗(yàn)動物每食入100g飼料所增長的體重克數(shù)）（4）實(shí)驗(yàn)室檢查1）血液學(xué)檢查2）尿液檢查3）血液生化學(xué)檢查（5）病理及病理組織學(xué)檢查對瀕死動物進(jìn)行解剖。試驗(yàn)結(jié)束及恢復(fù)期結(jié)束時(shí)，活殺實(shí)驗(yàn)動物。1）系統(tǒng)解剖：消化道、肺、肝、腎、淋巴腺、眼、皮膚等，記錄有無肉眼可見的異常 變化。2）臟器系數(shù)：是指某個臟器質(zhì)量與體重