野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀及SSR遺傳多樣性分析

1、園 藝 學(xué) 報(bào) 2014，41（6）：11981206 http: / www. ahs. ac. cn acta horticulturae sinica e-mail: yuanyixuebao 收稿日期：20131211；修回日期：20140226 基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31360472）；江西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（20132bab204025） * 通信作者 author for correspondence（e-mail：xiaobiaoxu） 野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀及ssr遺傳多樣性分析 湯佳樂，黃春輝，吳 寒，郎彬彬，曲雪艷，徐小彪* （江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，南昌 33

2、0045） 摘 要：以江西省武功山境內(nèi)的70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源為試材，對(duì)其果實(shí)表型性狀、ssr遺傳多樣性及其親緣關(guān)系進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)。根據(jù)upov（國(guó)際植物新品種保護(hù)聯(lián)盟）公布的獼猴桃屬品種測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)供試材料的果實(shí)表型性狀進(jìn)行觀測(cè)。參照獼猴桃遺傳連鎖圖譜，選用分布于中華獼猴桃基因組中的70對(duì)ssr引物對(duì)供試材料進(jìn)行多態(tài)性分析。結(jié)果表明，在70對(duì)引物中，21對(duì)引物成功擴(kuò)增出多態(tài)性片段。隨機(jī)采集的70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源中，其果實(shí)表型性狀和dna分子水平均存在豐富的遺傳多樣性?；趗pgma聚類分析將供試的野生毛花獼猴桃資源分為果實(shí)圓形和橢圓形混合組、果實(shí)橢圓形組以及果實(shí)圓柱形組。21對(duì)多

3、態(tài)性高的ssr引物共檢測(cè)出127個(gè)等位變異位點(diǎn)，變異范圍在2 12之間，平均每對(duì)ssr引物可檢測(cè)到6.04個(gè)等位位點(diǎn)。遺傳相似系數(shù)（gs）變異范圍為0.5306 0.9252。gs值在0.65水平上upgma聚類分析可將供試的野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源劃分成、和 共3個(gè)組，這與果實(shí)表型性狀分析的結(jié)果基本一致。這些遺傳變異豐富的種質(zhì)資源可為獼猴桃育種提供有價(jià)值的材料。 關(guān)鍵詞：毛花獼猴桃；野生；ssr標(biāo)記；果實(shí)表型性狀；遺傳多樣性 中圖分類號(hào)：s 663.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：a 文章編號(hào)：0513-353x（2014）06-1198-09 genetic diversity of wild actini

4、dia eriantha germplasm based on fruit traits and ssr markers tang jia-le，huang chun-hui，wu han，lang bin-bin，qu xue-yan，and xu xiao-biao* （college of agronomy，jiangxi agricultural university，nanchang 330045，china） abstract：genetic diversity and genetic relationship of 70 actinidia eriantha benth. ger

5、mplasms sampled from wugong mountain in jiangxi province were estimated based on the fruit morphological traits and ssr markers. the fruit phenotypic traits were collected based on the upov（international union for the protection of new varieties of plants）for kiwifruit. seventy srr primer pairs even

6、 distributed on genetic linkage map of actinidia chinensis were used to initially assess the polymorphism. of the 70 primer pairs tested，21 pairs successfully amplified polymorphic fragments. the collected 70 accessions have expressed rich genetic diversity in both fruit traits and ssr markers. seve

7、nty accessions were clustered into three groups including the circular and elliptic group，elliptic group and the oblong group 6期 湯佳樂等：野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀及ssr遺傳多樣性分析 1199 based on upgma analysis. one hundred and twenty-seven bands were amplified using 21 primer pairs，and the number of allele per locus rang

8、ed from 2 to 12，with an average of 6.04. the genetic similarity ranged from 0.5306 to 0.9252. upon on the upgma cluster analysis，70 accessions were separated into three major groups when gs values were set at the level of 0.65，which was basically consistent with the results of the fruit traits. the

9、high level of genetic variation of a. eriantha suggested that these accessions may be useful to provide breeding materials for kiwifruit. key words：actinidia eriantha；wild；ssr marker；fruit morphological traits；genetic diversity 獼猴桃（actinidia spp.）原產(chǎn)于中國(guó)。相對(duì)于龐大的野生種質(zhì)資源，獼猴桃的栽培品種只占了很小的一部分。目前獼猴桃品種選育主要還是通過從

10、野生資源中選擇或雜交育種（黃宏文 等，2000）。豐富的野生獼猴桃種質(zhì)資源是獼猴桃品種選育和產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)（huang et al.，2004；ferguson & huang，2006）。 目前商業(yè)化栽培利用的獼猴桃主要是美味獼猴桃和中華獼猴桃（劉磊 等，2013），而毛花獼猴桃（actinidia eriantha benth.）多處于野生狀態(tài)，生產(chǎn)實(shí)踐中推廣應(yīng)用的毛花獼猴桃品種極少（張佳佳 等，2011）。毛花獼猴桃果實(shí)asa含量較高（5.00 13.79 mg g-1 fw），是中華獼猴桃的3 4倍（鐘彩虹 等，2011）。毛花獼猴桃作為中國(guó)特有的野生種質(zhì)，廣泛分布于云南、廣西、

11、貴州、湖南、江西、福建和浙江。通過對(duì)野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源進(jìn)行果實(shí)表型性狀及ssr遺傳多樣性分析的研究，可了解其種內(nèi)的遺傳背景，選擇優(yōu)良的育種親本材料，提高育種效益。 weising等（1996）研究發(fā)現(xiàn)二倍體中華獼猴桃的大多數(shù)ssr位點(diǎn)擁有較高的雜合度。huang等（1998）用20個(gè)ssr位點(diǎn)研究發(fā)現(xiàn)二倍體和四倍體中華獼猴桃表現(xiàn)出很高的雜合度，在dna水平上的多倍體獼猴桃具有更豐富的多樣性。cipriani等（2002）用ssr標(biāo)記在對(duì)獼猴桃進(jìn)行遺傳圖譜構(gòu)建時(shí)尋找到了控制果實(shí)質(zhì)量的數(shù)量性狀位點(diǎn)連鎖的標(biāo)記。tsetolin等（1997）采用“假測(cè)交”的作圖技術(shù)，挑選中華獼猴桃和硬齒獼猴桃雜交

12、后代對(duì)251個(gè)標(biāo)記進(jìn)行篩選，獲得了105個(gè)ssr位點(diǎn)，應(yīng)用ssr和rflp標(biāo)記構(gòu)建了獼猴桃遺傳連鎖圖譜。 本研究中通過對(duì)江西武功山境內(nèi)的野生毛花獼猴桃進(jìn)行實(shí)地調(diào)查和資源收集，在對(duì)果實(shí)表型性狀分析的基礎(chǔ)上，采用ssr標(biāo)記技術(shù)對(duì)野生毛花獼猴桃進(jìn)行遺傳多樣性分析，旨為其優(yōu)異基因發(fā)掘利用和野生株選優(yōu)及其遺傳育種工作提供理論依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 試驗(yàn)材料及其果實(shí)表型性狀的觀測(cè) 2012年78月對(duì)江西省武功山境內(nèi)的野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源進(jìn)行了普查，供試材料為隨機(jī)采集的70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)的幼葉和果實(shí)，用冰盒保存并運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，置于20 超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?每份毛花獼猴桃種質(zhì)隨機(jī)選取10個(gè)果

13、實(shí)，根據(jù)upov（國(guó)際植物新品種保護(hù)聯(lián)盟）公布的獼猴桃屬品種測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)（upov，2012）對(duì)果實(shí)的8個(gè)表型性狀（表1）進(jìn)行測(cè)定和評(píng)價(jià)。所有的表型性狀的測(cè)定結(jié)果按照upov標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類和采用ntsys-pc2.1進(jìn)行賦值轉(zhuǎn)換成表型數(shù)據(jù)矩陣。 1.2 基因組dna的提取與ssr分析 采用ctab法提取樣品幼葉基因組dna，用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)dna質(zhì)量和濃度，20 保1200 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷 存?zhèn)溆谩?參照testolin等（2001）構(gòu)建的獼猴桃ssr遺傳連鎖圖譜，選用廣泛分布于中華獼猴桃基因組中的70對(duì)srr引物（palombi & damiano，2002；zheng et al.，

14、2004；korkovelos et al.，2008），首先隨機(jī)選擇8份野生毛花獼猴桃種質(zhì)材料進(jìn)行擴(kuò)增，篩選出多態(tài)性較好的21對(duì)ssr引物，再對(duì)70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源進(jìn)行擴(kuò)增。pcr擴(kuò)增程序?yàn)?4 預(yù)變性5 min；94 變性45 s，50 60 退火45 s，72 延伸45 s，30個(gè)循環(huán)；72 延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物10%聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，快速銀染法染色。 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 對(duì)果實(shí)表型性狀賦值后，采用excel 2007進(jìn)行頻率分析。根據(jù)ssr分析的結(jié)果，將每條ssr引物擴(kuò)增出的每一條帶視為1個(gè)位點(diǎn)，相同遷移率的記為1，無(wú)條帶的記為0，統(tǒng)計(jì)等位位點(diǎn)數(shù)、多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)和多

15、態(tài)性信息含量（pic）參數(shù)值，不具多態(tài)性的條帶不予統(tǒng)計(jì)。采用ntsys-pc2.1軟件計(jì)算野生毛花獼猴桃的遺傳距離并按照非加權(quán)配對(duì)平均法（upgma）和shan程序進(jìn)行聚類分析，并對(duì)聚類分析得到的果實(shí)表型性狀歐式距離矩陣和ssr標(biāo)記遺傳距離矩陣進(jìn)行mantel相關(guān)性檢測(cè)（lapointe & legendre，1992）。 2 結(jié)果與分析 2.1 野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀分析 調(diào)查結(jié)果（表1）表明，70份野生毛花獼猴桃的果實(shí)形狀變化豐富，果實(shí)形狀以圓柱形居多（49%），其次為橢圓形（37%）和圓形（14%）；果心橫截面有圓形、扁圓形和橫向橢圓形，所占比例分別為27%、32%和41%；果實(shí)橫截

16、面以圓形居多（61%），扁圓形和橫向橢圓形所占比例分別為23%和16%；果基形狀以微傾斜（74%）為主，果實(shí)傾斜則占26%；果頂形狀除了圓形所占比例為41%外，其它微凸和深凸所占比例分別為37%和22%；毛被顏色為白色和棕色，各占50%。 表1 野生毛花獼猴桃資源果實(shí)性狀描述及頻率統(tǒng)計(jì) table 1 the description and frequency of fruit traits for wild actinidia eriantha benth. 果實(shí)性狀 fruit trait 性狀描述 description 頻率/% frequency 果實(shí)性狀 fruit trait 性

17、狀描述 description 頻率/% frequency 果實(shí)形狀 圓柱形 oblong 49 果實(shí)橫截面 圓形 circular 61 fruit shape 橢圓形 elliptic 37 shape in cross 扁圓形 oblate 23 圓形 circular 14 section（at median） 橢圓形 elliptic 16 果實(shí)橫徑 寬 broad 24 果基形狀 微傾斜 weakly sloping 74 fruit width 中等 medium 50 shape of shoulder 傾斜 strongly sloping 26 窄 narrow 26 a

18、t stalk end 果實(shí)縱徑 長(zhǎng) long 36 果頂形狀 圓形 circular 41 fruit length 中等 medium 38 stylar end 微凸 weakly blunt protruding 37 短 short 26 深凸 strongly blunt protruding 22 果心橫截面 圓形 circular 27 毛被顏色 白色 white 50 shape in core in 扁圓形 oblate 32 color of hairs 棕色 brown 50 cross section 橢圓形 elliptic 41 根據(jù)果實(shí)的表型性狀對(duì)野生毛花獼猴桃

19、進(jìn)行upgma聚類分析，70份野生毛花獼猴桃資源分為3個(gè)組（圖1）。a組屬于果實(shí)圓形和橢圓形混合組，果基形狀微傾斜，毛被白色和棕色混合分布。a組又可以分為兩個(gè)亞組：a-1亞組果實(shí)橫徑寬，縱徑短，果心橫截面橢圓形，果實(shí)橫截面扁圓或 6期 湯佳樂等：野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀及ssr遺傳多樣性分析 1201 圖1 野生毛花獼猴桃70份資源果實(shí)性狀upgma聚類圖 a-1：果實(shí)橫徑寬、縱徑短，果心橫截面橢圓形，果實(shí)橫截面扁圓或橢圓形，果頂圓形；a-2：果實(shí)橫徑中等或窄、縱徑中等， 果心橫截面圓形或扁圓形，果實(shí)橫截面圓形，果頂微凸；b：果實(shí)橢圓形，縱徑短，果頂微凸，毛被白色； c-1：果實(shí)橫徑中等，果

20、實(shí)橫截面圓形；c-2：果實(shí)橫徑窄，果實(shí)橫截面扁圓。 fig. 1 upgma dendrogram of 70 wild actinidia eriantha benth. accessions based on fruit traits a-1：fruit width broad，fruit length short，shape in core in cross section elliptic，shape in cross section（at median）oblate or elliptic， stylar end rounded；a-2：fruit width medium or n

21、arrow，fruit length medium，shape in core in cross section circular or oblate， shape in cross section（at median）circular，stylar end weakly blunt protruding；b：fruit shape elliptic， fruit length short，stylar end weakly blunt protruding，color of hairs white； c-1：fruit width medium，shape in cross section（

22、at median）circular； c-2：fruit width narrow，shape in cross section（at median）oblate. 1202 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷 橢圓形，果頂圓形；a-2亞組果實(shí)的橫徑中等或窄，縱徑中等，果心橫截面圓形或扁圓形，果實(shí)橫截面圓形，果頂微凸。b組果實(shí)橢圓形，縱徑短，果頂微凸，毛被為白色。c組果實(shí)圓柱形，果實(shí)的縱徑長(zhǎng)，果心橫截面橢圓形，果基性狀傾斜，果頂深凸，毛被白色和棕色混合分布。c組又分為兩個(gè)亞組：c-1亞組果實(shí)的橫徑中等，果實(shí)橫截面圓形；c-2亞組果實(shí)橫徑窄，果實(shí)橫截面扁圓。 2.2 野生毛花獼猴桃ssr標(biāo)記分析 利用所選

23、擇的70對(duì)ssr引物對(duì)野生毛花獼猴桃種質(zhì)進(jìn)行分析，共篩選出21對(duì)多態(tài)性高的ssr引物，通過對(duì)70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)群體的擴(kuò)增，并對(duì)等位位點(diǎn)數(shù)、多態(tài)位點(diǎn)數(shù)以及多態(tài)性信息含量（pic）等進(jìn)行多樣性統(tǒng)計(jì)（表2）。兩對(duì)ssr引物擴(kuò)增得到的基因片度長(zhǎng)度在75 400 bp，pcr總擴(kuò)增總計(jì)得到127個(gè)等位位點(diǎn)，等位位點(diǎn)數(shù)在2 12之間，平均每對(duì)ssr引物可以檢測(cè)到6.04個(gè)等位位點(diǎn)數(shù)。其中多態(tài)性位點(diǎn)最豐富的是引物udk96-040，有12個(gè)等位位點(diǎn)變異，而引物udk97-401只檢測(cè)到了兩個(gè)等位位點(diǎn)變異。多態(tài)信息含量（pic值）變化范圍為0.358 0.837，平均為0.691。 表2 ssr 多態(tài)性

24、引物的特征 table 2 the characteristics for ssr polymorphism primer 引物編號(hào) primer code 片段大小/ bp size range 等位位點(diǎn)數(shù) number of alleles 多態(tài)位點(diǎn)數(shù) number of polymorphic alleles 多態(tài)信息含量 pic udk96-001 200 300 3 3 0.520 udk96-026 150 200 4 4 0.640 udk96-030 100 200 6 6 0.704 udk96-039 150 200 4 4 0.480 udk96-040 50 150 1

25、2 12 0.773 udk96-053 100 200 5 5 0.747 udk97-401 75 150 2 2 0.358 udk97-408 100 200 8 8 0.774 udk97-411 75 150 4 4 0.652 udk97-414 100 150 5 5 0.562 uth03-04 100 300 8 8 0.832 udk99-143 100 200 8 8 0.837 ke221 75 200 7 7 0.725 ke227 100 250 7 5 0.652 97-421 200 400 7 7 0.756 714 100 150 11 9 0.786 7

26、19 250 350 3 3 0.685 722 100 150 5 5 0.812 751 150 350 7 7 0.748 761 100 350 10 9 0.695 764 150 250 6 6 0.775 2.3 遺傳相似系數(shù)及聚類分析 通過21對(duì)多態(tài)性ssr引物分析，70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)材料的遺傳相似系數(shù)（gs）變異范圍為0.5306 0.9252，平均值為0.7805。其中種質(zhì)66和68、種質(zhì)45和53的gs值最大（0.9252），表明兩者的親緣關(guān)系很近，而種質(zhì)25和47的gs值最小，說明兩者的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，兩者的相似性只有為0.5306。 根據(jù)材料間的遺傳相似系數(shù)，采用

27、upgma法對(duì)野生毛花獼猴桃種質(zhì)進(jìn)行聚類分析（圖2），利用21對(duì)ssr標(biāo)記能將70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)相互區(qū)分，在gs值在0.65水平上將所有的材料6期 湯佳樂等：野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀及ssr遺傳多樣性分析 1203 劃分成、和 共3個(gè)組。組包括了27份種質(zhì)材料，包含了全部10份果實(shí)圓形的種質(zhì)和17份的果實(shí)橢圓形的種質(zhì)。組包括19份種質(zhì)材料，果實(shí)形狀主要為橢圓形，但也包括了5份的圓柱形的種質(zhì)材料。組則包括了24份種質(zhì)材料，種質(zhì)的果實(shí)形狀主要為圓柱形，同時(shí)也聚集了3份橢圓形的種質(zhì)材料。圓形、橢圓形和圓柱形果實(shí)的種質(zhì)都有各自聚類的趨勢(shì)，但三者之間并沒有完全分開。 圖2 野生毛花獼猴桃材料ss

28、r標(biāo)記遺傳相似（gs）聚類圖 ：果實(shí)圓形或橢圓形；：果實(shí)橢圓形或圓柱形；：果實(shí)圓柱形或橢圓形。 fig. 2 cluster result of wild actinidia eriantha benth. materials based on ssr markers ：fruit shape circular or elliptic；：fruit shape elliptic or oblong；：fruit shape oblong or elliptic. 1204 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷 2.4 野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀與ssr標(biāo)記相關(guān)性分析 為了解野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀的遺傳多

29、樣性和ssr分子標(biāo)記之間可能存在的內(nèi)在聯(lián)系，將野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀歐式距離矩陣和ssr標(biāo)記遺傳距離矩陣進(jìn)行mantel相關(guān)性分析，結(jié)果表明二者相關(guān)性達(dá)到極顯著水平（r = 0.814，p 0.01），兩種分析方法得出的結(jié)果具有很大程度的吻合性。野生毛花獼猴桃不同單株之間在ssr標(biāo)記遺傳距離矩陣中親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近與果實(shí)表型性狀變異的程度大致吻合，果實(shí)表型性狀歐式距離矩陣中相距較近的單株之間其遺傳距離也相對(duì)較小。 3 討論 3.1 野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀分析 近年來，對(duì)野生植物的遺傳多樣性和核心種質(zhì)的研究是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)問題（馬玉敏 等，2008）。通過對(duì)野生居群的表型性狀的調(diào)查和研究，

30、不僅可以對(duì)野生資源進(jìn)行科學(xué)有效地保護(hù)和合理地開發(fā)利用提供指導(dǎo)意義，而且還可以為推動(dòng)保護(hù)生物學(xué)和遺傳育種提供重要的理論基礎(chǔ)。雖然野生毛花獼猴桃在中國(guó)多個(gè)省份有分布，但大多數(shù)是出于零星分布的狀態(tài)，再加上人為的因素，毛花獼猴桃資源破壞很嚴(yán)重。本研究中對(duì)江西省武功山境內(nèi)的野生毛花獼猴桃居群進(jìn)行實(shí)地調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源集中分布在（n273214，e1140722）至（n273252，e1140747）之間，分布較集中，超出這一范圍則所發(fā)現(xiàn)的野生毛花獼猴桃極少，基本處于零星分布狀態(tài)。在獼猴桃種質(zhì)資源進(jìn)行評(píng)價(jià)和遺傳育種工作中，果實(shí)的表型性狀是一類十分重要的評(píng)價(jià)指標(biāo)（黃宏文 等，2000）

31、。通過對(duì)收集的70份野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀的研究，發(fā)現(xiàn)毛花獼猴桃在野生狀態(tài)下存在豐富的表型性狀遺傳多樣性，如在果實(shí)形狀、果實(shí)橫徑、果實(shí)縱徑、果心及果實(shí)橫截面形狀、果基及果頂形狀以及毛被的顏色等性狀上都表現(xiàn)出了很高的多樣性和差異性。同時(shí)，豐富的表型性狀遺傳多樣性也為野生毛花獼猴桃的品種選育和遺傳育種的親本選擇提供豐富的種質(zhì)資源。因此，在對(duì)野生毛花獼猴桃資源進(jìn)行野生選優(yōu)工作中，發(fā)現(xiàn)具有優(yōu)良的果實(shí)表型性狀的單株，從中培育出適應(yīng)性和抗性強(qiáng)、果實(shí)表型性狀優(yōu)良的毛花獼猴桃品種是今后研究工作的重點(diǎn)方向。 3.2 野生毛花獼猴桃ssr遺傳多樣性分析 選擇優(yōu)良性狀的親本材料是進(jìn)行獼猴桃育種工作的前提和基礎(chǔ)，

32、親本材料遺傳背景狹窄則會(huì)導(dǎo)致難以培育出優(yōu)良性狀的品種。因此，通過選擇優(yōu)良性狀的親本材料，比較材料間親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，對(duì)于獼猴桃新品種的選育和品種改良工作具有重要的生產(chǎn)指導(dǎo)意義。利用ssr分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行獼猴桃遺傳多樣性的研究，國(guó)內(nèi)外已有相關(guān)報(bào)道。鄭軼琦等（2003）利用9對(duì)ssr引物，對(duì)中國(guó)栽培的48個(gè)獼猴桃品種（品系）進(jìn)行了遺傳多樣性研究，結(jié)果表明中國(guó)獼猴桃栽培品種具有較高的遺傳多樣性，ssr標(biāo)記在獼猴桃品種中有較高鑒定效率；栗琪等（2004）對(duì)中華獼猴桃（a. chinensis）和美味獼猴桃（a. deliciosa）的9個(gè)天然居群的遺傳多樣性進(jìn)行了初步分析，通過對(duì)14對(duì)獼猴桃引物的篩選，

33、8對(duì)重現(xiàn)性好的引物擴(kuò)增結(jié)果表現(xiàn)出良好的多態(tài)性。liu等（2010）和劉亞令等（2006）對(duì)毛花獼猴桃自然居群進(jìn)行了ssr分析，結(jié)果表明毛花獼猴桃自然居群的多態(tài)信息含量變化范圍為 0.705 0.827。然而，本研究中在對(duì)武功山境內(nèi)的野生毛花獼猴桃ssr遺傳多樣性分析時(shí)，70份種質(zhì)資源材料的多態(tài)信息含量變化范圍為0.358 0.837。造成武功山境內(nèi)自然居群遺傳多樣性含量變化范圍不同的原因除了本身的群體結(jié)構(gòu)差異之外，可能主要是由于隨機(jī)選擇ssr位點(diǎn)的所帶來的影響（劉亞令 等，2008）。雖然所收集的70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源為一個(gè)野生居群，各個(gè)單株6期 湯佳樂等：野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀及s

34、sr遺傳多樣性分析 1205 都分布在很近的地域范圍，同處在相同或相近的氣候和地域環(huán)境條件下，野生毛花獼猴桃單株之間具有一定的親緣關(guān)系，但各自遺傳背景的卻存在一定的多樣性。因此，通過ssr分子標(biāo)記分析野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源遺傳多樣性，可為野生毛花獼猴桃居群優(yōu)良單株的選擇在分子水平上提供了依據(jù)。野生毛花獼猴桃資源開發(fā)與利用工作重點(diǎn)是應(yīng)該結(jié)合毛花獼猴桃具有高asa含量的特性，發(fā)掘與其相關(guān)的ssr標(biāo)記位點(diǎn)（湯佳樂 等，2014），揭示野生毛花獼猴桃asa富集的分子特征，并有效地促進(jìn)改良獼猴桃果實(shí)品質(zhì)性狀與種質(zhì)創(chuàng)新。 3.3 野生毛花獼猴桃果實(shí)表型性狀與ssr標(biāo)記相關(guān)性分析 歲立云等（2013）在對(duì)中

35、華獼猴桃和美味獼猴桃紅肉類型獼猴桃調(diào)查研究中發(fā)現(xiàn)兩種獼猴桃親緣關(guān)系較近，有按地理來源優(yōu)先聚類的趨勢(shì)，且果實(shí)性狀數(shù)據(jù)和aflp數(shù)據(jù)之間具有極顯著的相關(guān)性。本研究中通過對(duì)70份野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源基于遺傳距離的聚類分析，gs值在0.65水平上將所有的材料劃分成、和 3個(gè)組，說明野生毛花獼猴桃不同單株之間存在較大的遺傳差異。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)野生毛花獼猴桃資源有按照?qǐng)A形、橢圓形和圓柱形果實(shí)形狀聚合在一起的趨勢(shì)，但三者之間并沒有完全的分開，果實(shí)表型性狀分析與ssr標(biāo)記分析聚類的結(jié)果具有極顯著的相關(guān)性（r = 0.814，p 0.01）。這說明同一個(gè)地理地域來源的野生毛花獼猴桃種質(zhì)資源ssr分子標(biāo)記上的遺

36、傳多樣性在一定程度上可以反映表型性狀上的多樣性。因此，今后在對(duì)獼猴桃進(jìn)行品種改良和遺傳育種工作過程中，野生毛花獼猴桃在果實(shí)表型性狀和ssr分子標(biāo)記上表現(xiàn)出的豐富的遺傳變異能夠?yàn)楂J猴桃產(chǎn)業(yè)提供有價(jià)值的育種材料。 references cipriani g，huang q g，testolin r. 2002. towards a linkage map in kiwifruit（actinidia chinensis）based in simple sequence repeat（ssrs）. proceeding of the fifth international symposium kiw

37、ifruit. ferguson a r，huang hong-wen. 2006. genetic resources of kiwifruit：domestication and breeding. horticultural reviews，33：1121. huang hong-wen，gong jun-jie，wang sheng-mei，he zi-can，zhang zhong-hui，li jian-qiang. 2000. genetic diversity in the genus actinidia. biodiversity science，8 (1)：112. (in

38、 chinese) 黃宏文，龔俊杰，王圣梅，何子燦，張忠慧，李建強(qiáng). 2000. 獼猴桃屬（actinidia）植物的遺傳多樣性. 生物多樣性，8 (1)：112. huang hong-wen，wang ying，zhang zhong-hui，jiang zheng-wang，wang sheng-mei. 2004. actinidia germplasm resources and kiwifruit industry in china. hortscience，39 (6)：11651172. huang w g，cipriani g，morgante m，tsetolin r. 1

39、998. microsatellite dna in actinidia chinensis：isolation，characterization and homology in related species. theoretical and applied genetics，97 (8)：12691278. korkovelos a e，mavromatis a g，huang w g，hagidimitriou m，giakoundis a，goulas c k. 2008. effectiveness of ssr molecular markers in evaluating the

40、 phylogenetic relationships among eight actinidia species. scientia horticulturae，116 (3)：305310. lapointe f j，legendre p. 1992. statistical significance of the matrix correlation coefficient for comparison independent for phylogenetic trees. systematic biology，41：378384. li qi，li zuo-zhou，huang hon

41、g-wen. 2004. preliminary study on ssr analysis in natural populations of actinidia. journal of wuhan botanical research，22 (2)：175178. (in chinese) 栗 琪，李作洲，黃宏文. 2004. 獼猴桃野生居群的ssr分析. 武漢植物學(xué)研究，22 (2)：175178 liu lei，yao xiao-hong，huang hong-wen. 2013. development of epic markers in actinidia and their a

42、pplication for phylogenetic analysis of genus actinidia. acta horticulturae sinica，40 (6)：11621168. (in chinese) 劉 磊，姚小洪，黃宏文. 2013. 獼猴桃 epic 標(biāo)記開發(fā)及其在獼猴桃屬植物系統(tǒng)發(fā)育分析中的應(yīng)用. 園藝學(xué)報(bào)，40 (6)：11621168. liu ya-ling，li zuo-zhou，zhang peng-fei，jiang zheng-wang，huang hong-wen. 2006. spatial genetic structure in natur

43、al populations of two closely related actinidia species（actinidiaceae）as revealed by ssr analysis. biodiversity science，14 (5)：421434. (in chinese) 劉亞令，李作洲，張鵬飛，姜正旺，黃宏文. 2006. 獼猴桃自然居群ssr遺傳變異的空間自相關(guān)分析. 生物多樣性，14 (5)：421434. 1206 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷 liu ya-ling，li zuo-zhou，jiang zheng-wang，liu yi-fei，huang hong-

44、wen. 2008. genetic structure and hybridization introgression in natural populations of two closely related actindia species，a. chinensis and a. deliciosa. journal of plant ecology，32 (3)：704718. (in chinese) 劉亞令，李作洲，姜正旺，劉義飛，黃宏文. 2008. 中華獼猴桃和美味獼猴桃自然居群遺傳結(jié)構(gòu)及其種間雜交漸滲. 植物生態(tài)學(xué)報(bào)，32 (3)：704718. liu yi-fei，liu

45、 ya-ling，huang hong-wen. 2010. genetic variation and natural hybridization among sympatric actinidia species and the implications for introgression breeding of kiwifruit. tree genetics and genomes，6 (5)：801813. ma yu-min，chen xue-sen，he tian-ming，wu chuan-jin，wang na. 2008. genetic diversity of morp

46、hological traits in wild populations of castanea mollissima blume. acta horticulturae sinica，35 (12)：17171726. (in chinese) 馬玉敏，陳學(xué)森，何天明，吳傳金，王 娜. 2008. 中國(guó)板栗3個(gè)野生居群部分表型性狀的遺傳多樣性. 園藝學(xué)報(bào)，35 (12)：17171726. palombi m a，damiano c. 2002. comparison between rapd and ssr molecular markers in detecting genetic va

47、riation in kiwifruit（actinidia deliciosa a. chev）. plant cell reports，20：10611066. sui li-yun，liu yi-fei，huang hong-wen. 2013. genetic diversity of red-fleshed kiwifruit germplasm based on fruit traits and aflp markers. acta horticulturae sinica，40 (5)：859868. (in chinese) 歲立云，劉義飛，黃宏文. 2013. 紅肉獼猴桃種質(zhì)

48、資源果實(shí)性狀及aflp遺傳多樣性分析. 園藝學(xué)報(bào)，40 (5)：859868. tang jia-le，wu han，lang bin-bin，qu xue-yan，huang chun-hui，xu xiao-biao. 2014. association analysis on leaf and fruit asa content and ssr markers of wild actinidia eriantha. acta horticulturae sinica，41 (5)：833840. (in chinese) 湯佳樂，吳 寒，郎彬彬，曲雪艷，黃春輝，徐小彪. 2014. 野生毛花獼猴桃葉片和果實(shí)asa含量的ssr標(biāo)記關(guān)聯(lián)分析. 園藝學(xué)報(bào)，41 (5)：833840. testolin r，gaspero g，huang w g，lain o，messina r，cipriani g. 1997. linkage map in kiwifruit：the choic