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文檔簡介

1、原 理 IgG是血清中主要的免疫球蛋白，占全部抗體含 量的7075，在臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)中常 用到的第二抗體就是通過用純化人IgG作抗原免 疫動物而來 分離純化IgG的技術(shù)有多種，通常采用綜合技術(shù)， 其中鹽析沉淀法常用于IgG的粗制品的提取 原理 蛋白質(zhì)顆粒在水溶液中 親水膠體 蛋白質(zhì)顆粒在鹽溶液中 既不含水膜又不帶電荷的 不穩(wěn)定顆粒 蛋白質(zhì)在不同濃度的鹽溶液中相對溶解度不同， 血清免疫球蛋白主要為球蛋白，它在一定濃 度中性鹽溶液中易于沉淀，而其他蛋白質(zhì)組分在 此時(shí)不易沉淀，通過離心可將兩者分離。 原理 材料 樣本 正常人血清 試劑 生理鹽水、飽和硫酸銨溶液、 透析緩沖液 主要器材 離心機(jī) 冰

2、箱 透析袋 紫外分 光光度計(jì)等 操作步驟 1.25ML血清1.25ML生理鹽水 滴加飽和硫酸銨溶液2.5ML 棄去上清液（含清蛋白） 沉淀溶于生理鹽水,使體積達(dá)1.25ML 滴加飽和硫酸銨溶液0.625ML 棄去上清液（、球蛋白） 沉淀（球蛋白及少量球蛋白） 上清液（球蛋白） 沉淀為球蛋白 室溫靜置30min, 離心4000rpm,10min 重復(fù)一遍 紫外分光光的計(jì)測定蛋白含量 沉淀放入透析袋， 充分透析，去除NH4+ 室溫靜置30min, 離心4000rpm,10min 注意事項(xiàng) 蛋白質(zhì)的濃度、鹽的濃度、PH值、溫度對鹽析的效果 有影響 飽和硫酸銨溶液的滴加方式 鹽析后放置時(shí)間、離心操作的速度、時(shí)間 透析袋的使用 方法評價(jià) 硫酸銨水中溶解度高，受溫度影響小，不易使蛋白質(zhì) 變性，操作簡單，為鹽析中常用的中性鹽 硫酸銨中含有氮，會干擾蛋白質(zhì)的測定，且溶液的緩 沖能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要獲得純化 的免疫球蛋白，必須經(jīng)過凝膠過濾、離子交換層析和 親和層析進(jìn)一步提純 結(jié)果判斷 1.效價(jià)可用免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn)判斷 2.特異性則可通過雙擴(kuò)、免疫電泳或交叉 凝集試驗(yàn)進(jìn)行考察 思考題 鹽析法提取免疫球蛋白的實(shí)驗(yàn)原理？ 鹽析法提取免疫球蛋白時(shí)，主要的影響因 素有哪些？ 結(jié)果判斷 1

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