血小板抗原抗體檢測及其在血液病科臨床應(yīng)用課件

1、血小板抗原抗體檢測及臨床應(yīng)用血小板抗原抗體檢測及臨床應(yīng)用 ( (血液病科篇血液病科篇) ) 01 02 03 目 錄 / contents 血小板抗血小板抗原原 血小板抗體與疾血小板抗體與疾病病 血小板抗體檢測的臨床意義和臨床應(yīng)血小板抗體檢測的臨床意義和臨床應(yīng)用用 04 臨床治療方案參臨床治療方案參考考 血小板簡介血小板簡介 血小板：血小板：D:2-5umD:2-5um V: V:紅細胞紅細胞* *1/51/5 功能：促進止血和加速凝血功能：促進止血和加速凝血 正常范圍：正常范圍：100-300100-30010109 9/L/L 骨髓干細胞骨髓干細胞 胞質(zhì)塊脫落胞質(zhì)塊脫落 來源來源： 多功能

2、祖細胞多功能祖細胞 巨核祖細胞巨核祖細胞 幼巨核細胞幼巨核細胞 巨核細胞巨核細胞 血小板血小板 血小板形態(tài)血小板形態(tài) 靜息狀態(tài)靜息狀態(tài) 活化狀態(tài)活化狀態(tài) 血小板抗原血小板抗原 血小板血小板“非特異性非特異性”抗原抗原 血小板血小板“特異性特異性”抗原抗原 HPAHPA抗原抗原 HLA-HLA-類抗原類抗原 ABHABH抗原抗原 u血小板具有血小板具有HLA-HLA-類抗原（類抗原（HLA-AHLA-A、HLA-BHLA-B抗原和少抗原和少 量量HLA-CHLA-C抗原），無抗原），無HLA-HLA-類抗原。故輸注血小板要比類抗原。故輸注血小板要比 器官移植所需配型簡單。器官移植所需配型簡單。

3、u血小板個體間血小板個體間HLA-HLA-類抗原位點數(shù)差別不大。類抗原位點數(shù)差別不大。 u每個血小板上至少有每個血小板上至少有2000020000個個HLAHLA抗原位點?？乖稽c。 HLAHLA抗原抗原 u部分為血小板的固有蛋白，另一部分從血漿中吸附。部分為血小板的固有蛋白，另一部分從血漿中吸附。 u血小板上的血小板上的ABHABH抗原個體之間表達不同，約抗原個體之間表達不同，約5%5%的非的非O O 型個體為型個體為A A抗原或抗原或B B抗原的高表達者。抗原的高表達者。 u故血小板輸血應(yīng)同型輸注；抗體檢測應(yīng)采用故血小板輸血應(yīng)同型輸注；抗體檢測應(yīng)采用O O型血小型血小 板，以排除板，以排除

4、ABOABO系統(tǒng)抗體的干擾。系統(tǒng)抗體的干擾。 GPIbGPIb、GPIIb/IIIaGPIIb/IIIa、 GPIa/Iia GPIa/Iia、CD109CD109等也攜帶少等也攜帶少 量量ABHABH抗原抗原 ABHABH抗原抗原 u主要存在于血小板膜的主要存在于血小板膜的GPGP分子上，也少量存在于血分子上，也少量存在于血 管內(nèi)皮細胞、結(jié)締組織細胞和平滑肌細胞。管內(nèi)皮細胞、結(jié)締組織細胞和平滑肌細胞。 u19901990年國際輸血協(xié)會血小板免疫學(xué)工作組提出了年國際輸血協(xié)會血小板免疫學(xué)工作組提出了 HPAHPA命名，以發(fā)現(xiàn)的時間順序排列：命名，以發(fā)現(xiàn)的時間順序排列：HPA-1HPA-1、HPA

5、-2HPA-2、 HPA-3HPA-3等系統(tǒng)。等系統(tǒng)。 HPAHPA抗原抗原 u已確定了已確定了3333個個HPAHPA，其中，其中12 12 個抗原為雙等位基因表達（個抗原為雙等位基因表達（HPA-HPA- 1,-2,-3,-41,-2,-3,-4，-5-5和和-15-15）。其中高頻率抗原命名）。其中高頻率抗原命名a a，低頻率抗原，低頻率抗原 命名命名b b。其余。其余2121個抗原為低頻率抗原，尚未發(fā)現(xiàn)對偶抗原，命名個抗原為低頻率抗原，尚未發(fā)現(xiàn)對偶抗原，命名 為為bwbw。 u單核苷酸多態(tài)性（單核苷酸多態(tài)性（SNPSNP）:33:33個個HPAHPA中均已搞清楚基因背景，其中均已搞清楚

6、基因背景，其 中中3232個個HPAHPA的多態(tài)性型是由一個氨基酸置換所致，而這又是由編的多態(tài)性型是由一個氨基酸置換所致，而這又是由編 碼血小板膜糖蛋白（碼血小板膜糖蛋白（GPGP）基因的一個核苷酸的不同所致。）基因的一個核苷酸的不同所致。 uHPA-14bwHPA-14bw不具有單核苷酸多態(tài)性。其核苷酸置換發(fā)生在不具有單核苷酸多態(tài)性。其核苷酸置換發(fā)生在 AAG1929-31AAG1929-31。 HPAHPA抗原抗原 HPAHPA抗原抗原 HPAHPA抗原抗原 血小板抗原定型血小板抗原定型 u血清學(xué)定型血清學(xué)定型 即用已知特異性抗體檢測血小板血型抗原即用已知特異性抗體檢測血小板血型抗原 缺點

7、：特異性抗體來源困難缺點：特異性抗體來源困難 -人血清中血小板抗體通常為多特異性人血清中血小板抗體通常為多特異性 -單克隆抗體匱乏，目前國際上僅有單克隆抗體匱乏，目前國際上僅有HPA-1aHPA-1a單抗，單抗， 無其它無其它HPAHPA單抗。單抗。 u基因定型基因定型 限制性片段長度多態(tài)性分析（限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLPRFLP） 序列特異性寡核苷酸聚合酶鏈反應(yīng)序列特異性寡核苷酸聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSO)(PCR-SSO) 序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)( (PCR-SSPPCR-SSP) ) 用途： （1 1）健康人群）健康人群HPAHPA基因分型，建立已

8、知基因分型，建立已知HPAHPA基因型的血小板獻血員庫?；蛐偷难“瀚I血員庫。 （2 2）檢測受者）檢測受者HPAHPA基因型，以便從血小板獻血員庫中尋找與其基因型，以便從血小板獻血員庫中尋找與其HPAHPA基因型相基因型相 匹配的血小板供者。匹配的血小板供者。 （3 3）檢測患者）檢測患者HPAHPA基因型，輔助臨床胎兒基因型，輔助臨床胎兒/ /新生兒免疫性血小板減少癥、輸新生兒免疫性血小板減少癥、輸 血后紫癜及血小板輸注無效癥等疾病的病因診斷。血后紫癜及血小板輸注無效癥等疾病的病因診斷。 （4 4）對特定區(qū)域或種族人群）對特定區(qū)域或種族人群HPAHPA基因分型，可為人類遺傳學(xué)研究提供相關(guān)

9、基因分型，可為人類遺傳學(xué)研究提供相關(guān) 資料和證資料和證據(jù)據(jù)。 1aa2aa3ab4aa5aa6aa7aa8aa9aa10aa11aa12aa13aa14aa15ab16aa17aa 血小板抗原定型血小板抗原定型 血小板抗體的產(chǎn)生方式血小板抗體的產(chǎn)生方式 以上途徑產(chǎn)生的血小板同種抗體與血小板上以上途徑產(chǎn)生的血小板同種抗體與血小板上 的相應(yīng)抗原結(jié)合，導(dǎo)致血小板被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)清除。的相應(yīng)抗原結(jié)合，導(dǎo)致血小板被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)清除。 懷孕懷孕 移植（骨髓、器官）移植（骨髓、器官） 藥物、自身免疫藥物、自身免疫 輸血小板、紅細胞（尤其是沒輸血小板、紅細胞（尤其是沒 有濾白的紅細胞）有濾白的紅細胞） 血小板抗

10、體與部分相關(guān)疾病血小板抗體與部分相關(guān)疾病 抗抗 體體 分分 類類 疾疾 病病HLA / HPA HLA / HPA 抗抗 體體其其 它它 抗抗 體體 同同 種種 抗抗 體體 格蘭茨曼血小板功能格蘭茨曼血小板功能 不全病不全病 抗抗GPb/aPb/a抗體抗體 同同 種種 異異 體體 抗抗 體體 新生兒同種異體免疫新生兒同種異體免疫 性血小板減少癥性血小板減少癥 HPA1a(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, Anti-CD36 血小板輸注無效癥血小板輸注無效癥HLA-I抗體抗體5080% ,HPA1725%(日本人為日本人為HPA-2b)

11、, HPA-15, anti-CD36 極少數(shù)為極少數(shù)為ABO抗體抗體 血小板輸血后紫癜血小板輸血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15, anti-CD36 少數(shù)為抗少數(shù)為抗GPIa/IIa抗體抗體 被動同種異體免疫被動同種異體免疫 性血小板減少癥性血小板減少癥 HPA-1a,HPA-5b 移植相關(guān)同種異體移植相關(guān)同種異體 免疫性血小板減少癥免疫性血小板減少癥 HPA-1a,HPA-3,HPA-5b 自自 身身 抗抗 體體 自發(fā)性血小板減少癥自發(fā)性血小板減少癥多數(shù)位于多數(shù)位于GPb/ab/a GPIb/IX/VIb/IX/V，少數(shù)位于，少數(shù)位

12、于 GPIV/V IV/V 和和 GPIa/IIaGPIa/IIa 繼發(fā)于母體自發(fā)性繼發(fā)于母體自發(fā)性 血小板減少癥血小板減少癥 同上同上 藥物依藥物依 賴性抗賴性抗 體體 奎寧奎寧/奎尼丁抗體奎尼丁抗體 所致疾病所致疾病 抗原位于抗原位于GPb/ab/a和和 GPIb/IXIb/IX 肝素抗體所致疾病肝素抗體所致疾病抗原表位是抗原表位是PF4 血小板抗體檢測常用方法血小板抗體檢測常用方法 功能性功能性 試驗試驗 酶標法酶標法熒光法熒光法固相凝集法固相凝集法 應(yīng)用應(yīng)用 范圍范圍 抗體檢測抗體檢測 交叉配型交叉配型 性能性能靈敏度靈敏度低低高高極高極高高高 特異性特異性不好不好好好一般一般較好較好

13、 反應(yīng)時間反應(yīng)時間長長2h2h2h2h1h1h 所用儀器所用儀器不定不定酶標儀酶標儀熒光顯微鏡熒光顯微鏡 或流式細胞儀或流式細胞儀 平板離心機平板離心機 16th16th版版AABBAABB評價評價未提及未提及特異性鑒定特異性鑒定 的可靠方法的可靠方法 敏感性高敏感性高 特異性不足特異性不足 血小板交叉配型應(yīng)血小板交叉配型應(yīng) 用最為廣泛的方法用最為廣泛的方法 方法方法 指標指標 血小板抗體檢測方法血小板抗體檢測方法- -固相凝集法固相凝集法 血小板抗體篩檢，血小板抗體篩檢，包括包括HLAHLA抗體、抗體、HPAHPA抗體及其它血小板反應(yīng)抗體及其它血小板反應(yīng) 性抗體。輔助血小板相關(guān)免疫性疾病的診

14、斷。性抗體。輔助血小板相關(guān)免疫性疾病的診斷。 血小板交叉配型血小板交叉配型，為患者篩選相容性的血小板或血小板供者，為患者篩選相容性的血小板或血小板供者， 避免血小板輸注無效癥的發(fā)生。避免血小板輸注無效癥的發(fā)生。 患者自身抗體檢測患者自身抗體檢測，包括血小板結(jié)合抗體和血清中游離抗體。，包括血小板結(jié)合抗體和血清中游離抗體。 檢測血小板結(jié)合抗體可將患者血小板平鋪在反應(yīng)孔后，直檢測血小板結(jié)合抗體可將患者血小板平鋪在反應(yīng)孔后，直 接加入抗人接加入抗人IgGIgG和指示紅細胞進行檢測。血清中的游離抗和指示紅細胞進行檢測。血清中的游離抗 體可通過患者自身血小板和血清反應(yīng)來檢體可通過患者自身血小板和血清反應(yīng)來

15、檢測測。 用途：用途： 血小板抗體檢測方法血小板抗體檢測方法- -固相凝集法固相凝集法 l1.1.預(yù)防血小板輸注無效癥的發(fā)生：通過對患者進行血小板抗體篩查和與預(yù)防血小板輸注無效癥的發(fā)生：通過對患者進行血小板抗體篩查和與 血小板供者的交叉配型試驗，篩選和患者血小板抗原配合性高的血小板供血小板供者的交叉配型試驗，篩選和患者血小板抗原配合性高的血小板供 者，以提高血小板輸注有效率，防止血小板輸注無效癥的發(fā)生。者，以提高血小板輸注有效率，防止血小板輸注無效癥的發(fā)生。 l2.2.自身免疫性疾病的輔助診斷：檢測患者血清和血漿中自身血小板抗體自身免疫性疾病的輔助診斷：檢測患者血清和血漿中自身血小板抗體 的水

16、平和特異性，可輔助診斷自身免疫性疾病如白血病、再生障礙性貧血的水平和特異性，可輔助診斷自身免疫性疾病如白血病、再生障礙性貧血 、骨髓增生異常綜合癥、血小板減少癥、多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤、特發(fā)性、骨髓增生異常綜合癥、血小板減少癥、多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤、特發(fā)性 血小板減少性紫癜等。血小板減少性紫癜等。 血小板抗體檢測的臨床意義血小板抗體檢測的臨床意義 l3.3.藥物性抗體的檢測：某些藥物的存在如肝素、奎寧、奎尼丁、藥物性抗體的檢測：某些藥物的存在如肝素、奎寧、奎尼丁、 環(huán)磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水楊酸鈉等，選擇性的抑制了環(huán)磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水楊酸鈉等，選擇性的抑制了 骨髓巨核細胞造血功

17、能，使血小板的生成減少，同時應(yīng)用某種藥骨髓巨核細胞造血功能，使血小板的生成減少，同時應(yīng)用某種藥 物后，產(chǎn)生藥物相關(guān)抗體，藥物抗體復(fù)合物附著血小板膜上與補物后，產(chǎn)生藥物相關(guān)抗體，藥物抗體復(fù)合物附著血小板膜上與補 體結(jié)合，使血小板聚集破壞，一些藥物進入人體后也可直接破壞體結(jié)合，使血小板聚集破壞，一些藥物進入人體后也可直接破壞 血小板，造成血小板破壞增多，從而引發(fā)血小板減少。血小板，造成血小板破壞增多，從而引發(fā)血小板減少。 血小板抗體檢測臨床意義血小板抗體檢測臨床意義 l預(yù)防血小板輸注無預(yù)防血小板輸注無效效 l自身免疫性疾病的輔助診自身免疫性疾病的輔助診斷斷 l藥物性抗體檢藥物性抗體檢測測 血小板抗

18、體檢測臨床應(yīng)用血小板抗體檢測臨床應(yīng)用 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 現(xiàn)狀現(xiàn)狀 1.1.很多地區(qū)成分血不濾白；很多地區(qū)成分血不濾白； 2.2.血小板盲輸現(xiàn)象非常普遍；血小板盲輸現(xiàn)象非常普遍； 血液病患者輸血小板時進行配型的重要性！血液病患者輸血小板時進行配型的重要性！ 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 困惑困惑 患者抗體陽性，沒有配合的血小板怎么辦！患者抗體陽性，沒有配合的血小板怎么辦！ 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 反向推動血站配合臨床供應(yīng)配反向推動血站配合臨床供應(yīng)配 型相合的血小板型相合的血小板 提前告知患者輸注風險提前告知患者輸注風險 針對患者個體狀況采取針對性臨床干預(yù)

19、針對患者個體狀況采取針對性臨床干預(yù) 血小板輸注無效的危害血小板輸注無效的危害 1 1）患者發(fā)生免疫反應(yīng)，加重病情。）患者發(fā)生免疫反應(yīng)，加重病情。 2 2）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。 3 3）浪費財力、物力、寶貴的血小板資源。）浪費財力、物力、寶貴的血小板資源。 4 4）存在醫(yī)療糾紛隱患。）存在醫(yī)療糾紛隱患。 5 5）不利于采供血機構(gòu)和醫(yī)療機構(gòu)業(yè)務(wù)水平的提高。）不利于采供血機構(gòu)和醫(yī)療機構(gòu)業(yè)務(wù)水平的提高。 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防 血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小

20、板輸注無效的預(yù)防血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防 n血小板輸血采用隨機供者血小板有效率不超過血小板輸血采用隨機供者血小板有效率不超過30%30%； n采用交叉配型相容性血小板有效率為采用交叉配型相容性血小板有效率為92%92%，而對于重度血，而對于重度血 小板免疫患者，輸注相容性血小板有效率為小板免疫患者，輸注相容性血小板有效率為70%70%。 血小板交叉配型意義血小板交叉配型意義 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 p 對對844844例貧血、白血病、血小板減少及腫瘤等疾病患者進行血小板抗體例貧血、白血病、血小板減少及腫瘤等疾病患者進行血小板抗體 檢測。其中有效病例檢測。其中有效

21、病例766766例，其余例，其余7878例患者病例不祥。檢測結(jié)果統(tǒng)計如下：例患者病例不祥。檢測結(jié)果統(tǒng)計如下： 病例數(shù)病例數(shù)男性男性女性女性平均年齡平均年齡血小板抗體陽血小板抗體陽 性數(shù)性數(shù) 抗體陽性抗體陽性 率率 貧血貧血 （包括再障和溶血性貧血）（包括再障和溶血性貧血） 30314016345.955116.8% 白血病白血病99524741.602525.25% 血小板減少血小板減少27111642.30933.33% 腫瘤腫瘤60213956.3311.67% 出血出血90424852.3466.67% 骨髓纖維化及骨髓纖維化及 骨髓異常綜合癥骨髓異常綜合癥 1912755.74736.

22、84% 其它病癥其它病癥168798948.12137.74% 總計總計76635740947.5411214.62% 臨床數(shù)據(jù)：臨床數(shù)據(jù)： 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 海南省人民醫(yī)院海南省人民醫(yī)院 共檢測共檢測102102例患者，陽性例患者，陽性1818例，平均陽性率例，平均陽性率17.6%17.6% 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 9 9例抗篩陽性患者，例抗篩陽性患者，8 8例尋找到了相合的血小板，輸注效果良例尋找到了相合的血小板，輸注效果良 好。好。 中華臨床醫(yī)師雜志中華臨床醫(yī)師雜志 2012/012012/01 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 5757例血小板輸注

23、無效患者中，血小板抗體陽性患者為例血小板輸注無效患者中，血小板抗體陽性患者為2121例（例（3737） 采用固相凝集法對有血小板抗體的采用固相凝集法對有血小板抗體的2121例患者進行輸注前交叉例患者進行輸注前交叉 配型來篩選血小板供者。選擇交叉配型陰性或反應(yīng)最弱的的供者配型來篩選血小板供者。選擇交叉配型陰性或反應(yīng)最弱的的供者 血小板給患者輸注。血小板給患者輸注。2121例患者輸注相容性血小板后，所有患者例患者輸注相容性血小板后，所有患者1h CCI7.5109，24h CCI4.5109，有效率為，有效率為100。 吉林大學(xué)第三醫(yī)院吉林大學(xué)第三醫(yī)院 中國實驗診斷學(xué)中國實驗診斷學(xué) 2013201

24、3年第年第1 1期期 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 廣州血液中心廣州血液中心 9595例血小板輸注患者經(jīng)固相凝集法檢測，血小板抗體例血小板輸注患者經(jīng)固相凝集法檢測，血小板抗體 陽性陽性3232例，抗體陽性率為例，抗體陽性率為33.7%33.7%。 將血小板抗體陽性患者隨機分成未配型組和配型組，各將血小板抗體陽性患者隨機分成未配型組和配型組，各 1616例。例。 廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2012/2012/1 1 預(yù)防血小板輸注無效預(yù)防血小板輸注無效 進行血小板抗體檢測，可以輔助診斷血小板免疫性疾病，如進行血小板抗體檢測，可以輔助診斷血小板免疫性疾病，如ITPITP。 自身免疫性疾

25、病的輔助診斷自身免疫性疾病的輔助診斷 一般認為，一般認為，ITPITP的發(fā)病機制包括血小板自身抗體導(dǎo)致的血的發(fā)病機制包括血小板自身抗體導(dǎo)致的血 小板破壞和清除。小板破壞和清除。 檢測患者血小板自身結(jié)合抗體，了解血小板是否在體內(nèi)致檢測患者血小板自身結(jié)合抗體，了解血小板是否在體內(nèi)致 敏，是血小板自身抗體導(dǎo)致敏，是血小板自身抗體導(dǎo)致ITPITP發(fā)生的發(fā)生的直接證據(jù)直接證據(jù) 檢測患者血小板自身游離抗體，了解血漿中的自身抗體是檢測患者血小板自身游離抗體，了解血漿中的自身抗體是 否能在體外與患者自身血小板結(jié)合，是血小板自身抗體導(dǎo)否能在體外與患者自身血小板結(jié)合，是血小板自身抗體導(dǎo) 致致ITPITP發(fā)生的發(fā)生

26、的間接證據(jù)間接證據(jù) 自身免疫性疾病的輔助診斷自身免疫性疾病的輔助診斷 l血液病患者血小板抗體檢測及其與血小板輸注療效的相關(guān)血液病患者血小板抗體檢測及其與血小板輸注療效的相關(guān) 性研究性研究 l夏世勤夏世勤 蘇莉蘇莉 劉秋洪劉秋洪 楊眉楊眉 安邦權(quán)安邦權(quán) 王茂玲王茂玲 于慧芳于慧芳 l1 1貴州省人民醫(yī)院輸血科貴州省人民醫(yī)院輸血科 ，2 2遵義醫(yī)學(xué)院檢驗系，遵義醫(yī)學(xué)院檢驗系， l結(jié)論結(jié)論 血小板抗體的產(chǎn)生與血小板輸注療效密切相關(guān)，血小板抗體血小板抗體的產(chǎn)生與血小板輸注療效密切相關(guān)，血小板抗體 是直接影響血小板輸注效果是直接影響血小板輸注效果 的重要免疫因素之一的重要免疫因素之一 ；血液病患者的血液

27、病患者的 病因與血小板抗體的產(chǎn)生有一定相關(guān)性病因與血小板抗體的產(chǎn)生有一定相關(guān)性 ； 血小板抗體的產(chǎn)生與患血小板抗體的產(chǎn)生與患 者性別無關(guān)者性別無關(guān) ； 血小板輸注次數(shù)與血小板抗體產(chǎn)生密切相關(guān)：血小板輸注次數(shù)與血小板抗體產(chǎn)生密切相關(guān)： 血血 小板抗體的產(chǎn)生與輸注的血小板種類有關(guān)，單采組明顯低于濃縮組。小板抗體的產(chǎn)生與輸注的血小板種類有關(guān)，單采組明顯低于濃縮組。 醫(yī)學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)檢驗 2013 2013年年8 8月第月第2O2O卷第卷第 2222期期 l流式細胞技術(shù)檢測血小板相關(guān)抗體在流式細胞技術(shù)檢測血小板相關(guān)抗體在ITPITP診斷中的應(yīng)用研究診斷中的應(yīng)用研究 l吳國才，王珍吳國才，王珍( (廣東醫(yī)學(xué)

28、院附屬醫(yī)院廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 血液內(nèi)科血液內(nèi)科 ，廣東，廣東 湛江湛江 524001)524001) l摘要摘要 ：目的：目的 探討流式細胞技術(shù)檢測血小板相關(guān)抗體在探討流式細胞技術(shù)檢測血小板相關(guān)抗體在ITPITP診斷中的意義診斷中的意義 。方法。方法 選選 擇擇20122012年年5 5月至月至20132013年年6 6月在我院血液科住院的月在我院血液科住院的3O3O例例ITPITP患者為觀察組患者為觀察組, ,同期本院健康同期本院健康 體檢正常者體檢正常者3O3O例為對照組，采用流式細胞技術(shù)檢測兩組對象的外周血血小板相關(guān)抗例為對照組，采用流式細胞技術(shù)檢測兩組對象的外周血血小板相關(guān)抗 體體PA

29、Ig(PAIgG PAIg(PAIgG 、PAIgM PAIgM 、PAIgA )PAIgA )水平水平 。結(jié)果。結(jié)果FCMFCM檢測觀察組患者血小板抗體檢測觀察組患者血小板抗體 ， PAIgGPAIgG陽性率為陽性率為7O,7O,平均熒光強度為平均熒光強度為(25.154-2.61)(25.154-2.61)，對照組平均熒光強度為，對照組平均熒光強度為 (5.09(5.09士士 0.54),0.54),兩組比較有顯著性差異兩組比較有顯著性差異(P O.05);(P O.05);觀察組觀察組 PAIgM PAIgM 陽性率為陽性率為8O 8O ，平均熒光，平均熒光 強度強度(27.28(27.

30、28士士2.25)2.25)，對照組平均熒光強度為，對照組平均熒光強度為 (5.184-0.58)(5.184-0.58)，兩組，兩組 比較有顯著性差比較有顯著性差 異異(P O.05)(P 0.05)(PT 0.05)。結(jié)論。結(jié)論 流式細胞儀檢測血小板相關(guān)抗體流式細胞儀檢測血小板相關(guān)抗體 在在ITPITP診斷中具有重要的臨床意義診斷中具有重要的臨床意義 中國實驗診斷學(xué)中國實驗診斷學(xué) 2O142O14年年6 6月第月第1818卷第卷第 6 6 期期 自身免疫性疾病的輔助診斷自身免疫性疾病的輔助診斷 l 許多藥物會導(dǎo)致血小板減少，常見的有肝素、奎寧、奎尼許多藥物會導(dǎo)致血小板減少，常見的有肝素、奎

31、寧、奎尼 丁等，均會誘導(dǎo)產(chǎn)生藥物依賴性血小板抗體，從而產(chǎn)生血小丁等，均會誘導(dǎo)產(chǎn)生藥物依賴性血小板抗體，從而產(chǎn)生血小 板減少癥板減少癥。 l 藥物性抗體產(chǎn)生的機制尚不完全明了。目前認識藥物性抗體產(chǎn)生的機制尚不完全明了。目前認識的產(chǎn)生機的產(chǎn)生機 制主要有：制主要有： l 免疫復(fù)合物機制免疫復(fù)合物機制：藥物與抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物：藥物與抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，與血與血 l 小板上的小板上的FcFc受體結(jié)合，介導(dǎo)血小板的破壞。受體結(jié)合，介導(dǎo)血小板的破壞。 l 半抗原機制半抗原機制：藥物小分子與血小板膜蛋白結(jié)合，形成新的：藥物小分子與血小板膜蛋白結(jié)合，形成新的 l 抗原，刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體，從而破壞

32、血小板?？乖?，刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體，從而破壞血小板。 藥物性抗體檢測藥物性抗體檢測 l血液科患者可能產(chǎn)生藥物性抗體的用藥：血液科患者可能產(chǎn)生藥物性抗體的用藥： l抗生素類：抗生素類：頭孢他啶、頭孢曲松、磺胺類、萬古霉素頭孢他啶、頭孢曲松、磺胺類、萬古霉素 l鎮(zhèn)痛劑鎮(zhèn)痛劑：芬太尼、布洛芬、對乙酰氨基酚：芬太尼、布洛芬、對乙酰氨基酚 l消化系統(tǒng)用藥消化系統(tǒng)用藥：雷尼替丁、：雷尼替丁、 l心血管系統(tǒng)用藥心血管系統(tǒng)用藥：ACEIACEI、阻滯劑阻滯劑 l抗腫瘤藥抗腫瘤藥：奧沙利鉑：奧沙利鉑 2. MF Leach. Detection of drug-dependent platelet antibo

33、dies by use of solid-phase red cell adherence assay. British Journal of haematology,1997,97, 755-761. 1. Alan D. Michelson Platelets, Third Edition，Chapter 42 藥物性抗體檢測藥物性抗體檢測 懷疑患者因應(yīng)用藥物而導(dǎo)致血小板減少癥時，應(yīng)準備相懷疑患者因應(yīng)用藥物而導(dǎo)致血小板減少癥時，應(yīng)準備相 應(yīng)的藥物。如果為液體劑型，可以直接使用。如果為固體劑應(yīng)的藥物。如果為液體劑型，可以直接使用。如果為固體劑 型，需要將其破碎、溶解于蒸餾水中。型，需要將其破

34、碎、溶解于蒸餾水中。 對于免疫復(fù)合物機制，可以將藥物直接加入待檢標本中；對于免疫復(fù)合物機制，可以將藥物直接加入待檢標本中； 對于半抗原機制，可將其加入對于半抗原機制，可將其加入0.5%0.5%緩沖液中。緩沖液中。 檢測時加入藥物的濃度，應(yīng)參照相應(yīng)藥物的藥代動力學(xué)檢測時加入藥物的濃度，應(yīng)參照相應(yīng)藥物的藥代動力學(xué) 數(shù)據(jù)，選用下列三個濃度：數(shù)據(jù)，選用下列三個濃度： 1. 1.略低于谷濃度略低于谷濃度 2. 2.峰濃度峰濃度 3. 3.峰濃度的峰濃度的5-105-10倍。倍。 藥物性抗體檢測藥物性抗體檢測 對照標本與血小板對照標本與血小板 無藥物性血小板減少癥的健康人標本，作為本無藥物性血小板減少癥的

35、健康人標本，作為本 實驗的對照標本。實驗的對照標本。 4-64-6人份混合，人份混合，O O型血小板。該血小板與待檢型血小板。該血小板與待檢 血小板做配型實驗，結(jié)果應(yīng)為陰性。血小板做配型實驗，結(jié)果應(yīng)為陰性。 藥物性抗體檢測藥物性抗體檢測 每一個標本使用三條試劑，一條用于免疫復(fù)合每一個標本使用三條試劑，一條用于免疫復(fù)合 物機制，兩條用于半抗原機制。物機制，兩條用于半抗原機制。 濃度1濃度2濃度3濃度1濃度2濃度3 PCNC 免疫復(fù)合 物機制 半抗原 機制 對對 照照 標標 本本 陽陽 性性 對對 照照 陰陰 性性 對對 照照 檢檢 測測 標標 本本 藥物性抗體檢測藥物性抗體檢測 操作步驟：操作步驟：免疫復(fù)合物機制免疫復(fù)合物機制 1. 1. 將血小板包被在微孔板上，洗板將血小板包被在微孔板上，洗板3 3次次 2. 2. 加入兩滴低離子強度溶液加入兩滴低離子強度溶液 3. 3. 加入兩滴已加入不同濃度藥物的待檢標本（同時加入不添加入兩滴已加入不同濃度藥物的待檢標本（同時加入不添 加藥物的待檢標本作為對照）加藥物的待檢標本作為對照） 4. 4. 向陽性對照、陰性對照對照孔中分別加入試劑盒中的陽性向陽性對照、陰性對照對照孔中分別加入試劑盒中的陽性 對照、陰性對照對照、陰性對照 5. 375. 37氣育氣育4545分鐘分鐘 6. 6. 洗板洗板5 5