HSP90β基因突變與糖皮質(zhì)激素治療敏感性的關(guān)系(一).doc

1、HSP90基因突變與糖皮質(zhì)激素治療敏感性的關(guān)系(一)作者：趙艷，王華，陳星云，季業(yè)偉，周元國【關(guān)鍵詞】熱休克蛋白90；糖皮質(zhì)激素類；突變【Abstract】AIM:Toscreenthemutationofheatshockprotein90 (HSP90 )geneinpatientswithprimarynephroticsyndromeandtoinvestigatetheassociationbetweenthemutationandthesensitivitytoglucocorticoidtherapy.METHODS:ExtractthebloodDNAofthe300gluco

2、coiticoidtreatedprimarynephroticsyndromepatients.PCRapproachwasusedtoamplifyintron9,exon10,intron10,exon11and3untranslatedregionofHSP90 ,andautomatedfluorescentsequencingtechnologywasappliedtodetectthemutationoftheregion.RESULTS:TwopointmutationsofHSP90 ,7489CTinintron10and7612CTin3untranslatedregio

3、nwerefoundinprimarynephroticsyndromepatients.Themutationfrequencyofglucocoiticoidsensitiveandglucocoiticoidresistedpatientswere2.44%，3.68%and2.44%，2.94%;therewasnosignificantdifferenceinthe2groups(P0.5).CONCLUSION:Thisstudyhasfound9casesof7489CTand8casesof7612CTinprimarynephroticsyndromepatients,but

4、therewasnosignificantlydifferenceintheoccurrencefrequencybetweenglucocoiticoidsensitiveandglucocoiticoidresistedgroups.TheexpressionquantityofHSP90 hasnorelationtoglucocoiticoidtherapeuticeffect.【Keywords】heatshockproteins90;glucocorticoids;mutation【 摘 要 】 目 的 ： 篩 選 腎 病 綜 合 征 患 者 熱 休 克 蛋 白 90 （heats

5、hockprotein90,HSP90）基因突變 ,并分析該突變與糖皮質(zhì)激素治療敏感性的關(guān)系 .方法：提取 300 例經(jīng)糖皮質(zhì)激素治療的腎病綜合征患者血液 DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng) (polymerasechainreaction)和自動(dòng)熒光測序方法 ,對(duì) HSP90基因 intron9 ，exon10，intron10 ，exon11，3 非編碼區(qū)域 DNA 序列進(jìn)行突變分析，結(jié)合臨床資料探討突變與糖皮質(zhì)激素治療敏感性的關(guān)系 .結(jié)果：在腎病綜合征患者中發(fā)現(xiàn)了 2 個(gè) HSP90基因點(diǎn)突變，分別為 intron10 的 7489CT和 3 非編碼區(qū)的 7612CT,其發(fā)生頻率在糖皮質(zhì)激素敏感和

6、不敏感患者中分別為（ 2.44%，3.68%）和（2.44%，2.94%）,兩組患者的突變頻率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P0.5).結(jié)論：在腎病綜合征患者中發(fā)現(xiàn) 9 例 7489CT和 8 例 7612CT突變，在敏感和不敏感組的發(fā)生頻率無顯著差異，提示 HSP90表達(dá)量與 GC治療敏感性無顯著相關(guān) .【關(guān)鍵詞】熱休克蛋白 90；糖皮質(zhì)激素類；突變0 引言熱休克蛋白90（heatshockprotein90,HSP90）是體內(nèi)普遍存在、高度保守的一類分子伴侶蛋白，是熱休克蛋白家族中的重要成員之一，在正常細(xì)胞內(nèi)有較高的組成性表達(dá)，約占細(xì)胞內(nèi)蛋白含量的1%2%1，它們參與眾多的細(xì)胞生理過程.有人 2在高加索

7、人中檢測到HSP90基因突變，但未作進(jìn)一步的分析.因此， HSP90 在糖皮質(zhì)激素糖皮質(zhì)激素受體（ glucocorticoidglucocorticoidreceptor,GCGR）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用尤其引起我們的關(guān)注 .但目前國內(nèi)尚無人HSP90基因變異以及與GCGR效應(yīng)或激素敏感性的相關(guān)研究，故本研究旨在篩查腎病綜合征患者的HSP90是否存在突變，并分析該突變與糖皮質(zhì)激素治療敏感性的關(guān)系，進(jìn)一步探討 HSP90在糖皮質(zhì)激素治療敏感性差異中的作用，為臨床治療提供理論基礎(chǔ)和實(shí)踐指導(dǎo).1 對(duì)象和方法1.1 對(duì)象所收集病例來自第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院和大坪醫(yī)院，均符合1985 年中華全國第二次腎病學(xué)術(shù)

8、會(huì)議制訂的腎病綜合癥診斷標(biāo)準(zhǔn)，治療方法采用激素治療標(biāo)準(zhǔn)方法. 敏感組：激素治療后 8wk 內(nèi)尿蛋白轉(zhuǎn)陰，水腫消退 .164 例患者，其中男 79 例，女 85 例，年齡 1766 歲. 不敏感組 :治療 8wk 內(nèi)水腫未消退，或尿蛋白仍“+以”上， 136 例患者，其中男 71 例,女 65 例 ,年齡 2263 歲.用 EDTANa2抗凝管抽取清晨空腹靜脈血 2mL,置-20凍存待檢 .DNA 純化試劑盒購自 Promega 公司 ;Taq 多聚酶購自寶生物公司.細(xì)胞裂解液：10mmol/LTris.Cl,10mmol/LKCl,10mmol/LMgCl. 細(xì)胞裂 解液：10mmol/LTris.Cl,10mmol/LKCl,10mmol/LMgCl2，0.5mol/LNaCl,5g/LSDS，2mmol/LEDTANa2.NP40為 Sigma 公司產(chǎn)品，酚、氯仿、異戊醇、乙酸鈉購自重慶醫(yī)藥股份有限公司.全自動(dòng)凝膠成像分析系統(tǒng)（UVP，英國） ,PTC100TMPCR儀 (MJResearch,美國 )，全自動(dòng)基因測序分析儀CEQ8000（BECKMANCOULTER,美國） .1.2 方法1.2.1 基因組 DNA 的提取全血 DNA 的提取采用 NP40 法.取 500L抗凝血于 1.5