梅毒血清學(xué)檢測(cè)策略及影響因素

1、梅毒血清學(xué)檢測(cè)策略梅毒血清學(xué)檢測(cè)策略 及影響因素及影響因素 梅毒概述梅毒概述 u梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性 性傳播疾病。人體受感染后，幾乎可侵犯全身 各組織與器官，臨床表現(xiàn)多種多樣，且時(shí)顯時(shí) 隱，病程較長(zhǎng)。 u中華人民共和國(guó)傳染病防治法規(guī)定要管理 的主要性病之一。 u早期主要侵犯皮膚及粘膜，晚期除侵犯皮膚、 粘膜外，還可侵犯心臟血管系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系 統(tǒng)；另一方面，梅毒又可多年無(wú)癥狀呈潛伏狀 態(tài)。 u梅毒主要通過(guò)性接觸傳染，亦可通過(guò)血液和母 嬰垂直傳播。 梅毒螺旋體梅毒螺旋體 梅毒是一種性傳播疾病，病原體為梅毒 螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼 白亞種(Treponema p

2、allidum subspecies pallidum) 極細(xì)亞種 雅司病 地方亞種 地方性梅毒 蒼白亞種 梅毒 蒼白螺旋體 品他螺旋體品他病 密螺旋體屬 我國(guó)基本消滅基本消滅（1950-1964年） 現(xiàn)在呈逐年增加逐年增加的趨勢(shì) 我國(guó)政府針對(duì)梅毒控制的相關(guān)政策相關(guān)政策 中國(guó)預(yù)防與梅毒規(guī)劃（2010-2020年） 性病管理辦法（2013年） 預(yù)防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作實(shí)施方案 梅毒分期梅毒分期 時(shí)間 一期梅毒 二期梅毒 三期梅毒 隱形梅毒 胎傳梅毒 梅毒是一個(gè)可以臨床治愈的傳染病 病例診斷依據(jù)（病例診斷依據(jù)（ws273-2007ws273-2007） u病史 u癥狀 u實(shí)驗(yàn)室檢查 實(shí)驗(yàn)

3、室檢查結(jié)果對(duì)梅毒診斷及判愈有決定性意義 梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法 p病原學(xué)檢測(cè) p梅毒血清學(xué)檢測(cè)梅毒血清學(xué)檢測(cè) p組織病理學(xué)檢測(cè) p白細(xì)胞檢測(cè) p蛋白檢測(cè) 病原學(xué)檢測(cè)病原學(xué)檢測(cè) 暗視野顯微鏡檢查 鍍銀染色法 核酸檢測(cè) （血液標(biāo)本？） 梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法 （1）梅毒非特異性抗體檢測(cè) （非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)） （2）梅毒特異性抗體檢測(cè) （梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)） 梅毒非特異性抗體檢測(cè)原理梅毒非特異性抗體檢測(cè)原理 梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對(duì)螺旋 體表面的脂質(zhì)做出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂 抗原的抗體（即非特異性抗體）。 未經(jīng)治療的患者，其血清內(nèi)的非特異性抗 體可

4、長(zhǎng)期存在。經(jīng)過(guò)正規(guī)治療后，非特異 性抗體可以逐漸減少滴度或直至轉(zhuǎn)為陰性。 反應(yīng)原理反應(yīng)原理 抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼 所見(jiàn) 抗原基本成分抗原基本成分 心磷脂、卵磷脂和膽固醇 方法包括：方法包括： 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR) 不加熱血清反應(yīng)素(USR) 甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST） 性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)等。 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 491-2016WS/T 491-2016 梅毒非特異性抗體檢測(cè)操作指南梅毒非特異性抗體檢測(cè)操作指南 常見(jiàn)的測(cè)定影響因素常見(jiàn)的測(cè)定影響因素 水平旋轉(zhuǎn)儀（100+2r/min） 反應(yīng)時(shí)間 專用抗原滴針的加樣

5、量要求，抗原量每滴為17ul 左右 反應(yīng)板的要求：無(wú)污染、試劑打開(kāi)后不可冷藏保 存 局限性 假陰性反應(yīng)假陰性反應(yīng) 感染梅毒螺旋體后，機(jī)體免疫應(yīng)答需要一 定過(guò)程，抗類脂質(zhì)的抗體濃度尚處于實(shí)驗(yàn) 方法的檢測(cè)限之下，稱為窗口期，可發(fā)生 假陰性反應(yīng)。 少數(shù)早期梅毒和神經(jīng)梅毒以及部分晚期梅 毒，可發(fā)生定性試驗(yàn)假陰性反應(yīng)。 前帶現(xiàn)象前帶現(xiàn)象 部分早期梅毒（1%-2%的二期梅毒，0.5%- 1%的一期梅毒）的樣品可出現(xiàn)前帶現(xiàn)象 樣品類型 血漿中抗體濃度顯著高于血清，同一患者 的血清和血漿檢測(cè)結(jié)果不可直接比較。 雖然VDRL、RPR、TRUST的檢測(cè)原理基本相 同，但因采用的抗原原料和生產(chǎn)工藝的不 同，各種方法

6、和試劑之間可能存在一定范 圍的敏感性和特異性的系統(tǒng)性差異。任何任何2 2 中方法的定性和半定量結(jié)果，相互之間不中方法的定性和半定量結(jié)果，相互之間不 可直接比較?？芍苯颖容^。當(dāng)采用梅毒非特異性抗體作 梅毒篩查用途時(shí)，應(yīng)選擇敏感性高的方法 或試劑。 假陽(yáng)性問(wèn)題假陽(yáng)性問(wèn)題 假陽(yáng)性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽(yáng)性 技術(shù)性假陽(yáng)性技術(shù)性假陽(yáng)性 由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、 試劑質(zhì)量差或過(guò)期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯(cuò)誤所造成。 生物學(xué)假陽(yáng)性生物學(xué)假陽(yáng)性 是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化， 使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽(yáng)性。 急性生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)的急性生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)的 疾病疾病 風(fēng)疹 水痘 傳染性單核細(xì)胞增多癥

7、傳染性肝炎 上呼吸道感染 肺炎球菌性肺炎 病毒性肺炎 牛痘疹 慢性生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)的疾病慢性生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)的疾病 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 自身免疫性溶血性貧血 盤(pán)狀紅斑狼瘡 結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 橋本氏甲狀腺炎 風(fēng)濕性心臟病 干燥綜合征 毒品癮者 慢性腎炎 肝硬化 老年 麻風(fēng) (是唯一產(chǎn)生慢性 生物學(xué)假陽(yáng)性的感染性疾病) 梅毒特異性抗體檢測(cè)梅毒特異性抗體檢測(cè) 抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體 重組特異性抗原），檢測(cè)梅毒患者血中特 異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。 感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體 試驗(yàn)呈陽(yáng)性，則該患者基本終生陽(yáng)性終生陽(yáng)性。 梅毒螺旋體的抗原結(jié)果梅毒螺旋體的抗原結(jié)果 l外

8、膜脂蛋白抗原外膜脂蛋白抗原 47、44.5、43、36、34、17、15KDa成分， 其中47含量高，免疫原性強(qiáng)，為主要抗原， 但與其他兩種致病性螺旋體有交叉反應(yīng)） l軸絲抗原軸絲抗原 軸絲為運(yùn)動(dòng)器官，37、35.5、33KDa l4D4D抗原抗原 為梅毒螺旋體特異性表面抗原，均勻分布 在梅毒螺旋體表面。 梅毒特異性抗體檢測(cè)技術(shù)梅毒特異性抗體檢測(cè)技術(shù) 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA） 梅毒螺旋體血球顆粒凝集試驗(yàn)（TPHA） 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA） 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA） 免疫層析法梅毒快速檢測(cè)（RT） 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS） 蛋白印跡試驗(yàn)（WB） TPPA/

9、TPHATPPA/TPHA原理原理 TPPA試驗(yàn)原理與TPHA試驗(yàn)基本相同 TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒 TPHA試驗(yàn)中梅毒螺旋體致敏羊紅細(xì)胞 特點(diǎn) 梅毒螺旋體(Nichols株)全抗原 Serodia TPPA的操作步驟的操作步驟 6、結(jié)果判讀 1、加入樣品稀釋液 100l25l25l 25l 孔號(hào)14321 2、加入測(cè)試樣品 25l 孔號(hào) 143 2 1 致敏顆粒 4、加入明膠顆粒 最終稀釋倍數(shù) 孔號(hào)14321 1:401:80 25l25l 未致敏顆粒 5、混勻，加蓋，孵育2個(gè)小時(shí) 3、樣品的倍比稀釋 孔號(hào)14321 最終稀釋倍數(shù) 1:201:40 25l25l25l25l 棄去

10、 判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn) 粒子光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊 粒子光滑覆蓋大部分孔底 粒子光滑覆蓋孔底，周?chē)幸患?xì)胞環(huán) 粒子光滑覆蓋孔底，周?chē)幸幻黠@細(xì)胞環(huán) 粒子沉積孔底，中央形成一小點(diǎn) 粒子緊密沉積孔底中央 ELISA/CLIAELISA/CLIA 原理原理 用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒 血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合 物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶標(biāo)儀判定試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)。 特點(diǎn)特點(diǎn) 本法可用于大規(guī)模血清檢測(cè)。 化學(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA。 化學(xué)發(fā)光的敏感性？ 免疫層析免疫層析 梅毒梅毒IgMIgM抗體抗體 uIgM抗體的產(chǎn)生是感染后的早期體液免疫應(yīng) 答反應(yīng)。IgM

11、抗體不能通過(guò)胎盤(pán)屏障和血腦 屏障，而母體的IgG抗體可以通過(guò)胎盤(pán)屏障 傳給胎兒，血液中的IgG抗體也可以通過(guò)血 腦屏障進(jìn)入腦脊液中，因此若在新生兒血 中檢測(cè)到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷 依據(jù)，而IgM抗體可作為先天梅毒的診斷依 據(jù)。 u同時(shí)，梅毒IgM抗體檢測(cè)還可以用于神經(jīng)梅 毒、早期梅毒的診斷依據(jù)。 梅毒各類抗體出現(xiàn)時(shí)間梅毒各類抗體出現(xiàn)時(shí)間 先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷 先天梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn) 必須具備以下條件之一必須具備以下條件之一： 1.暗視野顯微鏡鏡檢梅毒螺旋體陽(yáng)性； 2.梅毒螺旋體IgM抗體陽(yáng)性； 3.RPR/TRUST檢測(cè)陽(yáng)性，滴度比母親分娩前最近 一次滴度高4倍以及上； 4.R

12、PR/TRUST檢測(cè)隨訪中，任何一次滴度不下降 或反而上升； 5.滿18月齡后，TPPA檢測(cè)仍為陽(yáng)性。 梅毒的血清固定梅毒的血清固定 梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略 梅毒血清學(xué)檢測(cè)目的與策略的關(guān) 系 傳統(tǒng)策略傳統(tǒng)策略 逆向策略逆向策略 雙檢策略雙檢策略 試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果 參考結(jié)果解釋參考結(jié)果解釋梅毒特異性抗體梅毒特異性抗體 檢測(cè)檢測(cè) 梅毒非特異性抗梅毒非特異性抗 體檢測(cè)體檢測(cè) 陽(yáng)性陽(yáng)性可能為現(xiàn)癥梅毒 陰性陽(yáng)性非梅毒螺旋體血清學(xué) 試驗(yàn)假陽(yáng)性 陽(yáng)性陰性臨床治愈的早期梅毒 （既往感染者） 或極早期梅毒 陰性陰性排除梅毒感染 或極早期梅毒 總結(jié)總結(jié) 非特異性和特異性兩類抗體檢測(cè)均可作為 梅毒初