中藥材祈州漏蘆幾種有效成分的高效毛細(xì)管電泳法測定

1、中藥材祈州漏蘆幾種有效成分的高效毛細(xì)管電泳法測定(作者：單位：郵編：)作者：崔英杰，李玉琴，于學(xué)美，馮蕾，張穎，趙曉民【摘要】目的建立一種高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳快速分離和測定祈州漏蘆中的有效成分。方法pH 8.0, 30mmol L-1磷酸一硼砂緩沖液； 毛細(xì)管柱75 g (i.d) X50.2 cm,有效長度40 cm,壓力進(jìn)樣(3.45 kPa)3 s, 25 kV恒壓分離；214 nm檢測，柱溫25C。結(jié)果6 min內(nèi)將祈州漏蘆樣 品中的蘆丁、栩皮素、甘草昔完全基線分離，線性范圍10-500.0血ml-1。結(jié)論該法具有良好的精密度、回收率及線性關(guān)系， 可以用來快速定量測定祈州漏蘆中3種有效成

2、分的含量。【關(guān)鍵詞】毛細(xì)管電泳；祈州漏蘆；蘆?。昏蚱に?；甘草昔祁州漏蘆(Raidx Rhapontici)為菊科植物 Rhaponticum uniflorum (L.) DC.的干燥根,始載于神農(nóng)本草經(jīng)，被列為上品，具有清熱解 毒、消癰排膿、通乳的功效。研究表明漏蘆提取物對D-半 乳糖致衰老小鼠具有抗衰老作用1;其肖酮總提取物有改善小鼠學(xué)習(xí) 記憶障礙的作用2 o祈州漏蘆根中主要成分為隸質(zhì)、宙酮類化合物。對其化學(xué)成 分的分離測定報道有高效液相法3, 4和紫外分光光度計法5,而 且測定成分少。本文首次采用高效毛細(xì)管電泳（HPCE ）法同時分離祈 州漏蘆中的蘆丁、栩皮素、甘草昔3種化學(xué)成分?，F(xiàn)報道

3、如下。1儀器與試藥毛細(xì)管電泳儀，美國Beckman P/ACE MDQ型，二極管陣 列檢測器；自動控制軟件 32 Karat Software （Version5.0） ;Orion 868 型pH測試儀，美國Orion公司;Milli-Q SYSTHESIS型超純水系統(tǒng)， 法國Millipore公司;AX-205型0.01 mg/220 g電子分析天平，瑞士梅 特 勒公司；氫氧化鈉（山東單縣有機(jī)化工廠）、磷酸（山東兗州化工 廠）、硼砂（天津市博迪化工有限公司）、乙醇（天津市盛奧化工有限 公司）為分析純；對照品蘆?。ㄅ?0270-080128 ）和甘草昔（批號 10162-080301 ）均

4、購自江西本草天工科技有限公司；榊皮素（批號 100081-200406 ）購于中國藥品生物制品檢定所。祈州漏蘆產(chǎn)地河北， 購于山東郵城志遠(yuǎn)中藥飲片有限公司（批號081108 ）,經(jīng)泰山醫(yī)學(xué)院時元林教授鑒定為祈州漏蘆干燥根。2方法與結(jié)果2.1電泳條件以30 mmol L-1的硼砂緩沖液(pH8.0 )為介質(zhì)，未 涂層石英毛細(xì)管柱(75 gm X50.2 cm,有效長度為40 cm,美國 Beckman Coulter)為分離通道，柱溫25 C;壓力進(jìn)樣(3.45 kPa) 3 s;25kV恒壓分離；214 nm檢測;正極進(jìn)樣，負(fù)極檢測。為了使毛細(xì)管內(nèi)表面保持一致，每次實驗前，分別用蒸f留水(5

5、min ) 、0.1 mol/L NaOH (5 min)、蒸f留水(3 min )、緩沖溶液(10 min)依次沖洗毛細(xì)管。兩次運行之間，依次用蒸f留水(2min )、0.1 mol/L NaOH (3 min)、蒸f留水(2 min )、緩沖溶液(5 min)沖洗毛細(xì)管，以提高遷移時間、峰面積和峰高的重現(xiàn)性。進(jìn)樣前 所有溶液 需經(jīng)0.45 g微孔濾膜過濾，并超聲脫氣。實驗結(jié)束后將毛細(xì)管用 超 純水沖洗10 min儲存，備用。2.2對照品溶液的配制分別精密稱取蘆丁栩皮素、甘草昔對照 品，用50%乙醇溶解分別配制成1 mg/inl對照品儲備液，密閉置于4 C 下避光保存，實驗時用50%乙醇稀釋

6、至所需濃度。2.3祈州漏蘆藥材溶液的制備5精密稱取祈州漏蘆根粗粉約40g,置索氏提取器中，70%乙醇提取3次。第1次，70%乙醇40 ml,提取1.5h ;第2次，70%乙醇30 ml提取1.0h ;第3次， 70%乙醇20 ml提取1.0 ho合并3次提取液濃縮后5 000 r/min離心5 min,最終定容至10 ml。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制由對照品儲備液配制成不同質(zhì)量濃度（10.0, 25.0, 50.0, 100.0, 200.0, 500 血 ）的系列混合液， 進(jìn)行電泳分析。分別重復(fù)3次，以峰面積平均值（Y）對質(zhì)量濃度（X,血 ml-1 ）進(jìn)行回歸分析，得到蘆丁、榊皮素、甘草昔3種成分

7、的線性回歸 方程分別為：Y 二 1 514.57+247.21 X , r =0.998 8 ; Y= 3748.03+731.42X , r =0.998 5 ; 丫二 4 598.26+199.97X , r =0.999 1。結(jié)果表明3種分析物在10-500.0ml-1的濃度范圍內(nèi)呈良 好的線性關(guān)系；檢測限分別為1.86 , 0.64, 1.80ml-1。25精密度實驗精密吸取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰 面 積。當(dāng)對照品濃度分別為5,50,100ml-1時，蘆丁的RSD小于 1.86%；棚皮素的RSD小于2.35%;甘草昔的RSD小于2.87。表明儀 器 精密度良好。26加樣回收率

8、實驗取已知含量的祈州漏蘆藥材樣品溶液，按高 中、低3個量度準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，按樣品測定法測定，計算回 收率。結(jié)果見表1。表1加樣回收率實驗結(jié)果（略）27實際樣品測定結(jié)果在相同測定條件下，測定了祈州漏蘆中蘆 丁、栩皮素、甘草昔3種成分的含量。結(jié)果見表2。標(biāo)準(zhǔn)品電泳圖譜見 圖1 , 3種分析物的質(zhì)量濃度均為200ml-1 ；漏蘆樣品電泳圖譜見圖2。通過峰純度鑒定，3種有效成分的測定均不受其它復(fù)雜成分 的干擾。表2樣品測定結(jié)果（略）3結(jié)論本實驗在6 min內(nèi)蘆丁、桶皮素、甘草昔3種成分就可以完全基線分離；回收率在95%-103%之間，RSD小于3%。說明 采用 毛細(xì)管電泳法分離測定祈州漏蘆中的有效成分，快速準(zhǔn)確有效，可以為 祈州漏蘆的質(zhì)量控制提供理論依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】:1 樸龍，張學(xué)武,金香子漏蘆提取物抗衰老作用的研究:J 時珍國醫(yī)國藥，2006 , 17 (10) : 1918.：2先宇飛，紀(jì)雪飛，劉新霞，等，漏蘆角酮總提取物改善小鼠記憶障礙的實驗研究J 中藥新藥與臨床藥理，2005, 16(6) : 405.：3侯柏玲，孟大利，李寧，等，中藥漏蘆提取工藝的優(yōu)化J