微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用課件

1、 微生物的類群微生物的類群 原生生物：原生生物： 原核生物原核生物: : 真菌真菌: : 病毒病毒: : 如酵母菌、霉菌如酵母菌、霉菌 單細(xì)胞的動(dòng)植物單細(xì)胞的動(dòng)植物 如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類等如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類等 無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu) 真核細(xì)胞真核細(xì)胞 細(xì)菌、藍(lán)藻等細(xì)菌、藍(lán)藻等原核細(xì)胞原核細(xì)胞 一、微生物的培養(yǎng)基一、微生物的培養(yǎng)基 1 1、培養(yǎng)基定義：、培養(yǎng)基定義： 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是為培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是為人工培養(yǎng)微生物而制人工培養(yǎng)微生物而制 備備的，提供適合微生物生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)的，提供適合微生物生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn) 物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 思考：微生物細(xì)胞的元素組成是什么？ 思

2、考：微生物細(xì)胞的元素組成是什么？ 2 2、培養(yǎng)基的類型、培養(yǎng)基的類型 （1 1）按物理狀態(tài)分：）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基。 區(qū)別區(qū)別：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。 瓊脂的性質(zhì)瓊脂的性質(zhì)： 熔點(diǎn)：熔點(diǎn)：9696度度 凝固點(diǎn)：凝固點(diǎn)：4040度度 注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂。注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂。 單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)繁單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)繁 殖殖, ,可以形成肉眼可見(jiàn)子細(xì)胞的群體可以形成肉眼可見(jiàn)子細(xì)胞的群體菌落菌落 固體培養(yǎng)基用途固體培養(yǎng)基用途：用于微

3、生物：用于微生物純化、計(jì)數(shù)、鑒定純化、計(jì)數(shù)、鑒定 菌落菌落 細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征 因種而異。因種而異。 菌落特征菌落特征是微生是微生 物鑒定的重要依物鑒定的重要依 據(jù)據(jù) 菌苔：菌落連成菌苔：菌落連成 片片 液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn) 表面生長(zhǎng)表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng) 半固體培養(yǎng)基：觀察運(yùn)動(dòng)半固體培養(yǎng)基：觀察運(yùn)動(dòng) 無(wú)動(dòng)力無(wú)動(dòng)力 有動(dòng)力有動(dòng)力( (彌散彌散) ) （2 2）按成分分：）按成分分：天然培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基、 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 半半合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基。 （3 3）按功能分：）按功能分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 鑒別

4、培養(yǎng)基。鑒別培養(yǎng)基。 基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有微生物生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)。：含有微生物生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)。 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：培養(yǎng)基加入加入某種物質(zhì)或某種物質(zhì)或缺少缺少某種營(yíng)養(yǎng)某種營(yíng)養(yǎng) 物質(zhì)而物質(zhì)而抑制不需要的微生物生長(zhǎng)抑制不需要的微生物生長(zhǎng)促進(jìn)需要的微生物促進(jìn)需要的微生物 生長(zhǎng)。生長(zhǎng)。 舉例說(shuō)明：加鏈霉素培養(yǎng)基或者加青霉素培養(yǎng)基抑舉例說(shuō)明：加鏈霉素培養(yǎng)基或者加青霉素培養(yǎng)基抑 制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)，篩選真菌。制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)，篩選真菌。 無(wú)氮培養(yǎng)基抑制非固氮菌生長(zhǎng)，篩選固氮菌無(wú)氮培養(yǎng)基抑制非固氮菌生長(zhǎng)，篩選固氮菌 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：區(qū)別微生物：區(qū)別微生物 伊紅伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基

5、美藍(lán)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣桿菌菌落大、灰棕色產(chǎn)氣桿菌菌落大、灰棕色 大腸桿菌菌落小、綠色金屬光澤大腸桿菌菌落小、綠色金屬光澤 選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較 選擇培選擇培 養(yǎng)基養(yǎng)基 鑒別培鑒別培 養(yǎng)基養(yǎng)基 幾種選擇培養(yǎng)基： 加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 二、微生物生長(zhǎng)需

6、要條件二、微生物生長(zhǎng)需要條件 1 1、夏天為什么食物容易腐敗？、夏天為什么食物容易腐??？ 如何處理可以防止腐敗？如何處理可以防止腐敗？ 2 2、為什么真空包裝的食品不容易腐?。?、為什么真空包裝的食品不容易腐??？ 3 3、醋酸是否具有殺菌作用？、醋酸是否具有殺菌作用？ 以上反應(yīng)了微生物生長(zhǎng)受到哪些條件影響？以上反應(yīng)了微生物生長(zhǎng)受到哪些條件影響？ 細(xì)菌細(xì)菌303037 37 霉菌霉菌252528 28 放線菌放線菌25252828 1 12d 34d 57d2d 34d 57d 大腸桿菌大腸桿菌 乳酸菌乳酸菌 破傷風(fēng)桿菌破傷風(fēng)桿菌 大多數(shù)細(xì)菌為好氧型大多數(shù)細(xì)菌為好氧型 霉菌霉菌 5.05.06.0

7、 6.0 細(xì)菌細(xì)菌6.56.57.5 7.5 放線菌放線菌 7.57.58.58.5 三、三、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 1 1、水水 2 2、碳源碳源（提供碳元素的物質(zhì)）（提供碳元素的物質(zhì)） 3 3、氮源氮源（提供氮元素的物質(zhì)）（提供氮元素的物質(zhì)） 4 4、無(wú)機(jī)物無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)鹽）（無(wú)機(jī)鹽） 5 5、生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子（微生物生長(zhǎng)不可缺少的微（微生物生長(zhǎng)不可缺少的微 量有機(jī)物。如維生素、含氮堿基）量有機(jī)物。如維生素、含氮堿基） 碳源碳源 可作為碳源的物質(zhì)有可作為碳源的物質(zhì)有: : a.a. 含碳無(wú)機(jī)物含碳無(wú)機(jī)物: : b.b. 含碳有機(jī)物：含碳有機(jī)物： 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 脂肪酸脂肪酸 不同微生

8、物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同 a.異養(yǎng)型微生物異養(yǎng)型微生物的碳源為的碳源為 b.自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物的碳源為的碳源為 碳酸鹽碳酸鹽 碳酸氫鹽碳酸氫鹽二氧化碳二氧化碳 糖類（主要）糖類（主要） 含碳有機(jī)物（有機(jī)碳）含碳有機(jī)物（有機(jī)碳） 含碳無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)碳）含碳無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)碳） 氮源氮源 可作為氮源的物質(zhì)有可作為氮源的物質(zhì)有: : a.a. 含氮無(wú)機(jī)物：含氮無(wú)機(jī)物： b.b. 含氮有機(jī)物：含氮有機(jī)物： 蛋白胨蛋白胨 牛肉膏牛肉膏 尿素尿素 氮?dú)獾獨(dú)?氨氣氨氣 硝酸鹽硝酸鹽銨鹽銨鹽 注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麥芽汁 等天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)中既含有碳源又同時(shí)含有 氮源、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)要

9、素 1 1、下列細(xì)菌中，能利用含碳無(wú)機(jī)物作碳源的是、下列細(xì)菌中，能利用含碳無(wú)機(jī)物作碳源的是 A A 光合細(xì)菌光合細(xì)菌 B B 根瘤菌根瘤菌 C C 硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌 D D 乳酸菌乳酸菌 2 2、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮源是、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮源是 A A 糖、有機(jī)酸等糖、有機(jī)酸等 B B 二氧化碳、碳酸鹽二氧化碳、碳酸鹽 C C 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) D D 無(wú)機(jī)氮化物無(wú)機(jī)氮化物 A.C A.C 下表關(guān)于四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝的類 型，描述正確的是 硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌乳酸細(xì)菌乳酸細(xì)菌根瘤菌根瘤菌衣藻衣藻 能源NH3乳糖固定N2光能 碳源CO2糖類

10、糖類CO2 氮源NH3N2N2NO2- 新陳代謝類 型 自養(yǎng)需氧型 異養(yǎng)厭氧性 異養(yǎng)厭氧性 自養(yǎng)需氧型 碳源、氮源、磷酸鹽和維生碳源、氮源、磷酸鹽和維生 素素 氮源和維生素氮源和維生素 無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽 氫元素、氧元素氫元素、氧元素 （2 2）特殊營(yíng)養(yǎng)：）特殊營(yíng)養(yǎng)：生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子 （3 3）pHpH、氧氣等要求、氧氣等要求 四：營(yíng)養(yǎng)基配制的原則 1：目的要明確目的要明確 配制培養(yǎng)基要根據(jù)配制培養(yǎng)基要根據(jù) 培養(yǎng)的微生物、培養(yǎng)培養(yǎng)的微生物、培養(yǎng) 的目的、培養(yǎng)基的用途來(lái)確定培養(yǎng)基的化的目的、培養(yǎng)基的用途來(lái)確定培養(yǎng)基的化 學(xué)成分、物理狀態(tài)。學(xué)成分、物理狀態(tài)。 2：營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào) 3：PH要適宜要適

11、宜 五、五、培養(yǎng)基的配制過(guò)程培養(yǎng)基的配制過(guò)程 （一）、細(xì)菌培養(yǎng)基的配制（一）、細(xì)菌培養(yǎng)基的配制 1.1.計(jì)算計(jì)算: 100ml: 100ml蒸餾水中各物質(zhì)的量。蒸餾水中各物質(zhì)的量。 2.2.稱量稱量：注意牛肉膏的粘稠度大。：注意牛肉膏的粘稠度大。 3.3.溶化溶化： 牛肉膏連同稱量紙一同放入牛肉膏連同稱量紙一同放入 不斷攪拌不斷攪拌 4.4.調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)PH:PH:7.07.27.07.2 思考：判斷該培養(yǎng)基的作用是什么？思考：判斷該培養(yǎng)基的作用是什么？ 加熱、溶化 5.5.分裝：分裝： 培養(yǎng)基高培養(yǎng)基高 度度1/51/5 不要污染不要污染 試管口試管口 棉塞塞緊棉塞塞緊 6 6、包扎包扎 3-5

12、 3-5支支 試管扎成試管扎成 一捆，外一捆，外 包一層牛包一層牛 皮紙，用皮紙，用 線扎好。線扎好。 思考：滅菌的溫度、壓力、時(shí)間分別是多少？思考：滅菌的溫度、壓力、時(shí)間分別是多少？ 8 . 8 .擱置斜面擱置斜面/ /倒平板倒平板（斜面的長(zhǎng)度不超過(guò)試管的（斜面的長(zhǎng)度不超過(guò)試管的1/2)1/2) 圖中哪些措施是防止雜菌污染的？圖中哪些措施是防止雜菌污染的？ 培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到5050度左右時(shí)，才能用來(lái)度左右時(shí)，才能用來(lái) 倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 剛剛不燙手。剛剛不燙手。 為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？為

13、什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 防止瓶口附近的微生物污染培養(yǎng)基防止瓶口附近的微生物污染培養(yǎng)基 平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 使培養(yǎng)基表面的水更好的揮發(fā)，防止皿蓋上水使培養(yǎng)基表面的水更好的揮發(fā)，防止皿蓋上水 珠落入培養(yǎng)基珠落入培養(yǎng)基 在倒平板的過(guò)程中，不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與在倒平板的過(guò)程中，不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與 皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？ 為什么？為什么？ 空氣中的微生物會(huì)在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基空氣中的微生物會(huì)在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基 上滋生，最好不要用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物。上滋生，最好

14、不要用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物。 六、無(wú)菌操作六、無(wú)菌操作 1 1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵： 2 2、無(wú)菌操作、無(wú)菌操作 避免雜菌感染操作對(duì)象的操作過(guò)程避免雜菌感染操作對(duì)象的操作過(guò)程 3 3、哪些地方有菌可能導(dǎo)致菌體感染？、哪些地方有菌可能導(dǎo)致菌體感染？ 操作者操作者 培養(yǎng)基、接種工具、器皿培養(yǎng)基、接種工具、器皿 空間空間 防止外來(lái)雜菌的入侵防止外來(lái)雜菌的入侵 4 4、滅菌和消毒、滅菌和消毒 消毒：消毒：溫和的因素殺死一部分對(duì)人體有害的溫和的因素殺死一部分對(duì)人體有害的 微生物。微生物。 舉例：煮沸，舉例：煮沸，70%70%酒精溶液酒精溶液 問(wèn)題：一段時(shí)間后為什么會(huì)腐??？問(wèn)題：一

15、段時(shí)間后為什么會(huì)腐?。?不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子 滅菌滅菌：強(qiáng)烈的因素殺死所有微生物，強(qiáng)烈的因素殺死所有微生物，包括芽包括芽 孢和孢子。孢和孢子。 思考：哪些因素可以滅菌、消毒？思考：哪些因素可以滅菌、消毒？ 物理物理高溫、紫外線高溫、紫外線 化學(xué)化學(xué)酒精、氯氣、石碳酸酒精、氯氣、石碳酸 常用的滅菌方法 種類種類 主要方法主要方法 應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍 灼燒滅菌 酒精燈火焰灼燒 接種針、接種環(huán)或其 他金屬用具，接種過(guò) 程中的試管口、三角 瓶口 干熱滅菌法 電熱鼓風(fēng)干燥箱 160170加熱1 2h 培養(yǎng)皿、試管、移液 管等玻璃制品和金屬 制品不適宜用其他方 法滅菌而又耐高溫的 物品 高壓蒸汽

16、滅菌 壓力100Kp、121維 持15 30分鐘 培養(yǎng)基及多種器材、 物品 常用的消毒方法 種類種類主要方法主要方法應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍 巴氏消毒法 6085下處理30 35分鐘、 牛奶、啤酒、果汁等 不宜高溫滅菌的液體 煮沸消毒法100沸水浴日常食品、灌裝食品 紫外線消毒法 30W紫外線燈照射30 分鐘 接種室空氣 化學(xué)藥物消毒法 體積分?jǐn)?shù)70%75% 的酒精、碘酒、來(lái)蘇 水等 皮膚、傷口、動(dòng)植物 組織表面的消毒 思考：以下應(yīng)當(dāng)用何種方法滅菌、消毒？思考：以下應(yīng)當(dāng)用何種方法滅菌、消毒？ 操作者操作者 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 接種工具接種工具 器皿器皿 空間空間 牛奶牛奶 手用酒精消毒手用酒精消毒 高壓蒸汽

17、滅菌高壓蒸汽滅菌 灼燒灼燒 干熱滅菌干熱滅菌 紫外線紫外線 巴氏消毒巴氏消毒 70707575度度30min 8030min 80度度15min15min a.a.灼燒滅菌灼燒滅菌 微生物的接種工具微生物的接種工具 ( (接種接種 環(huán)、接種針、試管口環(huán)、接種針、試管口) )或或 其他金屬用具直接在火焰其他金屬用具直接在火焰 的充分燃燒層灼燒的充分燃燒層灼燒 b.b.干熱滅菌干熱滅菌 160160170 170 ；1 12h2h 能耐高溫的需要保持干能耐高溫的需要保持干 燥的物品燥的物品( ( 玻璃器皿玻璃器皿) ) c.c.高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 100kPa 121

18、15-30min15-30min 通常用于培養(yǎng)基的滅菌通常用于培養(yǎng)基的滅菌 總結(jié)：無(wú)菌技術(shù)總結(jié)：無(wú)菌技術(shù) 1 1、實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者、衣著和手要、實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者、衣著和手要 和和 。 2 2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基 等進(jìn)行等進(jìn)行 。 3 3、為了避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)、為了避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng) 在在 附近進(jìn)行。附近進(jìn)行。 4 4、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與 周圍物品相接觸。周圍物品相接觸。 清潔清潔 滅菌滅菌 酒精燈酒精燈 消毒消毒 七、七、

19、接種技術(shù)接種技術(shù) 無(wú)菌無(wú)菌條件下將微生物條件下將微生物接入培養(yǎng)基接入培養(yǎng)基的操作過(guò)程稱的操作過(guò)程稱 為接種。為接種。 1 1、接種工具、接種工具 2 、常用的接種方法、常用的接種方法 斜面劃線法斜面劃線法 做什么準(zhǔn)備？做什么準(zhǔn)備？ 點(diǎn)燃酒精燈點(diǎn)燃酒精燈 斜面向上斜面向上 斜面劃線接種的操作過(guò)程 斜面用什么接種？斜面用什么接種？ 接種環(huán)如何滅菌？接種環(huán)如何滅菌？ 取棉塞（不放到桌面？）取棉塞（不放到桌面？） 試管口滅菌試管口滅菌 挑取少量菌體挑取少量菌體 從里到外輕輕劃從里到外輕輕劃“S S”型曲線型曲線，不要，不要 劃破培養(yǎng)基劃破培養(yǎng)基 試管口通過(guò)火焰，塞緊試管口試管口通過(guò)火焰，塞緊試管口 放

20、在放在3737度恒溫箱中培養(yǎng)度恒溫箱中培養(yǎng)24h24h 稀釋稀釋涂布涂布平板法平板法包括涂抹平板法和混合平板法包括涂抹平板法和混合平板法 涂抹平板法涂抹平板法 混合平板法混合平板法 從哪里可以獲得微生物呢？從哪里可以獲得微生物呢？ 微生物的大本營(yíng)：土壤微生物的大本營(yíng)：土壤 從眾多微生物中分離某種微生物有什么方法？從眾多微生物中分離某種微生物有什么方法？ 原理：原理： 根據(jù)微生物所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、氧氣、根據(jù)微生物所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、氧氣、pHpH 不同利用選擇性培養(yǎng)基選擇。不同利用選擇性培養(yǎng)基選擇。 對(duì)微生物進(jìn)行分離的培養(yǎng)基是？（對(duì)微生物進(jìn)行分離的培養(yǎng)基是？（固體培養(yǎng)基）固體培養(yǎng)基） 固體培養(yǎng)基上不同菌的

21、區(qū)別是什么？（菌落）固體培養(yǎng)基上不同菌的區(qū)別是什么？（菌落） 菌落作用：菌落作用：微生物分類、鑒定的依據(jù)微生物分類、鑒定的依據(jù) 分離微生物的方法分離微生物的方法：平板劃線法平板劃線法和和稀釋涂抹平稀釋涂抹平 板法板法 八、微生物的分離、數(shù)量測(cè)定八、微生物的分離、數(shù)量測(cè)定 平板劃線分離微生物的原理平板劃線分離微生物的原理：連續(xù)劃線。由于劃：連續(xù)劃線。由于劃 線后，線條末端的細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，線后，線條末端的細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少， 每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目 隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能 得到由得到由 單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：第一步以及每一次劃線之前和劃線結(jié)第一步以及每一次劃線之前和劃線結(jié) 束后都要灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)要冷卻后再劃束后都要灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)要冷卻后再劃 線。每次劃線之間灼燒接種環(huán)的目的是殺死上一線。每次劃線之間灼燒接種環(huán)的目的是殺死上一 次劃線殘留的菌種，使下一次劃線的菌種直接來(lái)次劃線殘留的菌種，使下一次劃線的菌種直接來(lái) 至于上一次劃線的末端，使每一次劃線的