食品添加劑的檢測.doc

1、第 5 章食品添加劑的檢測食品添加劑是指為改善食品品質(zhì)和色、香、味以及為防腐和加工工藝的需要而加入食品中的化學(xué)物質(zhì)或天然物質(zhì)。目前，全世界發(fā)現(xiàn)的各類食品添加劑有14000 多種，截止1999 年我國允許使用的食品添加劑有1587 種，其中包括食用香料和其他(不包括復(fù)合食品添加劑)。食品添加劑按其來源不同，國際上通常將其分為三大類：一是天然提取物，如甜菜紅、姜黃素、辣椒紅素等；二是用發(fā)酵等方法制取的物質(zhì)，如檸檬酸、紅曲米和紅曲色素等；三是純化學(xué)合成物，如苯甲酸鈉、山梨酸鉀、莧菜紅和胭脂紅等。如按食品添加劑的功能、用途劃分則可分為 22 大類：酸度調(diào)節(jié)劑、抗結(jié)劑、消泡劑、抗氧化劑、漂白劑、膨脹劑、

2、膠姆糖基礎(chǔ)劑、著色劑、護色劑、乳化劑、酶制劑、增味劑、面粉處理劑、被膜劑、水分保持劑、營養(yǎng)強化劑、防腐劑、穩(wěn)定劑和凝固劑、甜味劑、增稠劑、食品香料和其他類添加劑。食品添加劑是食品工業(yè)重要的基礎(chǔ)原料，對食品的生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量、 安全衛(wèi)生都起到至關(guān)重要的作用。但是違禁、 濫用食品添加劑以及超范圍、超標(biāo)準(zhǔn)使用添加劑，都會給食品質(zhì)量、安全衛(wèi)生以及消費者的健康帶來巨大的損害。隨著食品工業(yè)與添加劑工業(yè)的發(fā)展，食品添加劑的種類和數(shù)量也就越來越多，它們對人們健康的影響也就越來越大。加之隨著毒理學(xué)研究方法的不斷改進和發(fā)展，原來認(rèn)為無害的食品添加劑，近年來又發(fā)現(xiàn)還可能存在慢性毒性、致癌作用、致畸作用及致突變作用

3、等各種潛在的危害，因而更加不能忽視。所以，食品加工企業(yè)必須嚴(yán)格遵照執(zhí)行食品添加劑的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，加強食品添加劑的衛(wèi)生管理，規(guī)范、合理、安全地使用添加劑， 保證食品質(zhì)量， 保證人民身體健康。 而食品添加劑的分析與檢測，則對食品的安全起到了很好的監(jiān)督、保證和促進作用。5 .1防腐劑的測定防腐劑是指能防止食品腐敗、變質(zhì)，抑制食品中微生物繁殖，延長食品保存期的物質(zhì)，它是人類使用最悠久、最廣泛的食品添加劑；目前，我國允許使用的品種主要有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對羥基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸鈉、丙酸鈣、脫氫乙酸等。5 1 1苯甲酸及苯甲酸鈉的測定苯甲酸及苯甲酸鈉是目前我國使用的主要防腐劑之一。它屬于酸型

4、防腐劑，在酸性條件下防腐效果較好，特別適用于偏酸性食品(pH4.55) 。我國食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB2760 一 1996) 規(guī)定：苯甲酸及苯甲酸鈉在碳酸飲料中的最大使用量為0.2g/kg ，低鹽醬菜、醬菜、蜜餞、食醋、果醬(不包括罐頭 )、果汁飲料、塑料裝濃縮果蔬汁中最大使用量為2g/kg( 以苯甲酸計 )。1酸堿滴定法1)原理于試樣中加入飽和氯化鈉溶液，酸化， 用乙醚提取試樣中的苯甲酸，在堿性條件下進行萃取， 分離出蛋白質(zhì)、脂肪等，再將乙醚蒸去，溶于中性醚醇混合液中，最后以標(biāo)準(zhǔn)堿然后液滴定。2)儀器和試劑(1) 儀器堿式滴定管、 300mL 燒杯、 250mL 容量瓶、 500mL

5、分液漏斗、水浴箱、吹風(fēng)機、分析天平、錐形瓶。(2) 試劑純乙醚：將乙醚置于蒸餾瓶中，在水浴上蒸餾，收取鹽酸 (6mol/L) 。35 C 部分的餾液。氫氧化鈉溶液 (100g/L) ：準(zhǔn)確稱取氫氧化鈉 100g 于小燒杯中，先用少量蒸餾水溶解，再轉(zhuǎn)移至 1000mL 容量瓶中，定容至刻度。氯化鈉飽和溶液。純氯化鈉。 95%中性乙醇：于 95%乙醇中加入數(shù)滴酚酞指示劑，用氫氧化鈉溶液中和至微紅色。中性醇醚混合液：將乙醚與乙醇按1 1 體積等量混合，以酚酞為指示劑，用氫氧化鈉中和至微紅色。酚酞指示劑(1%乙醇溶液 )：溶解 1g 酚酞于 100mL 中性乙醇中。氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.05mol/L

6、) ：稱取純氫氧化鈉約3g，加入少量蒸餾水溶去表面部分，棄去這部分溶液，隨即將剩余的氫氧化鈉(約 2g)用經(jīng)過煮沸后冷卻的蒸餾水溶解并稀釋至 1000mL ，按下法標(biāo)定其濃度。氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：將分析純鄰苯二甲酸氫鉀于 120 C 烘箱中烘約 lh 至恒重。冷卻 25min ，稱取 0.4g( 精確至 0.0001g)于錐形瓶中，加入 50mL 蒸餾水溶解后，加 2 滴酚酞指示劑，用上述氫氧化鈉標(biāo)溶液滴定至微紅色 lmin 不褪色為止。按下式計算氫氧化鈉溶液的濃度。m1000c204.2V式中： c 氫氧化鈉溶液的濃度，mol/L ；m 鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，g；V 滴定時使用的氫氧化鈉

7、溶液的體積，mL ；204.2 鄰苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量， g/mol 。3)操作步驟(1)樣品的處理。固體或半固體樣品：稱取經(jīng)粉碎的樣品100g 置于 500mL 容量瓶中，加入 300mL 蒸餾水，加入分析純氯化鈉至不溶解為止( 使其飽和 )，然后用 100g/L 氫氧化鈉溶液使其成堿性(石蕊試紙試驗 )，搖勻，再加飽和氯化鈉溶液至刻度，放置2h(要不斷振搖 )，過濾，棄去最初 l0mL 濾液，收集濾液供測定用。含酒精的樣品：吸取250mL 樣品，加入 100g/L 氫氧化鈉溶液使其成堿性，置水浴上蒸發(fā)至約 100mL 時，移入250mL 容量瓶中，加入氯化鈉30g，振搖使其溶解，再加氯化

8、鈉飽和溶液至刻度，搖勻，放置2h(要不斷振搖 )，過濾，取濾液供測定用。含脂肪較多的樣品：經(jīng)上述方法制備后，于濾液中加入氫氧化鈉溶液使其成堿性，加入 2050mL 乙醚提取，振搖3min ，靜置分層，溶液供測定用。(2)提取。吸取以上制備的樣品濾液l00mL ，移入 250mL 分液漏斗中，加6mol/L 鹽酸至酸性 (石蕊試紙試驗 )。再加 3mL 鹽酸 (6mol/L) ，然后依次用40、30、3OmL純乙醚，用旋轉(zhuǎn)方法小心提取。每次搖動不少于5min 。待靜置分層后，將提取液移至另一個250mL 分液漏斗中 (3次提取的乙醚層均放大這一分液漏斗中)。用蒸餾水洗滌乙醚提取液，每次l0mL

9、，直至最后的洗液不呈酸性(石蕊試紙試驗 )為止。將此乙醚提取液置于錐形瓶中，于4045C 水浴上回收乙醚。待乙醚只剩下少量時，停止回收，以風(fēng)扇吹干剩余的乙醚。(3)滴定。于提取液中加入 30mL 中性醇醚混合液， l0mL 蒸餾水，酚酞指示劑3 滴，以 0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴至微紅色為止。4)結(jié)果計算Vc144.12.5X1m1000Vc122.12.5X 2m1000式中： X1 樣品中苯甲酸鈉的含量，mg/kg ；X 2 樣品中苯甲酸的含量， mg/kg ；V 滴定時所耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL ；C 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L ；m 樣品的質(zhì)量， g；144.1

10、 苯甲酸鈉的摩爾質(zhì)量，g/mol ；122.1 苯甲酸的摩爾質(zhì)量，g/mo1 。2高效液相色譜法本法可同時用于苯甲酸及山梨酸的測定。1)原理樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào) pH 至近中性，過濾后進高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時間和峰面積進行定性和定量。2)儀器和試劑(1)儀器高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。(2)試劑方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純試劑，水為蒸餾水或同等純度水，溶液為水溶液。甲醇：優(yōu)級純，經(jīng)濾膜(0.5 m)過濾。稀氨水溶液(1+1) ：氨水加水等體積混合。乙酸銨溶液(0.02mol/L) ：稱取 1.54g 乙酸銨，加水至1000mL ，溶解，經(jīng)濾膜(0

11、.45m) 過濾。碳酸氫鈉溶液(20g/L) ：稱取 2g 碳酸氫鈉( 優(yōu)級純 )，加水至100mL ，振搖溶解。苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確稱取 0.1000g 苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液 (20g/L)5mL ，加熱溶解，移入 l00mL 容量瓶中，加水定容至 100mL ，搖勻。此溶液每毫升含苯甲酸 lmg 。山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確稱取 0.1000g 山梨酸，加碳酸氫鈉溶液 (20g/L)5mL ，加熱溶解，移入 100mL 容量瓶中，加水定容至 100mL ，搖勻。此溶液每毫升含山梨酸為 lmg 。苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)混合使用溶液：吸取苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液各10.0mL ，放入 100

12、mL 容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL 。經(jīng)濾膜 (0.45m) 過濾。3)操作步驟(1)樣品處理汽水：稱取5.0010.0g 樣品，放入小燒杯中，微溫攪拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)調(diào) pH 約 7。加水定容至 1020mL ，經(jīng)濾膜 (0.45 m)過濾。果汁類：稱取5.0010.0g 樣品，用氨水(1+1) 調(diào) pH 約 7，加水定容至適當(dāng)體積，離心沉淀，上清液經(jīng)濾膜(0.45 m)過濾。配制酒類：稱取10.0g 樣品，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1+1) 調(diào) pH約 7，加水定容至適當(dāng)體積，經(jīng)濾膜(0.45 m) 過濾。(2)高效液相色譜分析

13、參考條件色譜柱： YWG-C 184.6mm l5Omm5 m，或其他型號C18 柱。流動相：甲醇 +乙酸銨溶液(0.02mol/L)(5+95) 。流速： 1.0mL/min 。進樣量： l0 L 。檢測器：紫外檢測器，波長23nm，靈敏度 0.2AUFS 。根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。4)結(jié)果計算m11000XV2m1000V1式中： X 一一樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg ；m1 一一進樣體積中苯甲酸或山梨酸的質(zhì)量，mg；V 2 一一進樣體積， mL ；V 1 一一樣品稀釋液總體積，mL；m 一一樣品質(zhì)量， g。5 1 2山梨酸及山梨酸鉀的測定山梨酸是一種直鏈不飽和脂肪酸，

14、可參與人體內(nèi)的正常代謝，并被同化而產(chǎn)生CO2，和水，所以幾乎對人體沒有毒性。 山梨酸與山梨酸鉀是目前國際上公認(rèn)的安全防腐劑；已被很多國家和地區(qū)廣泛使用。我國食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB2760一 1996) 規(guī)定：山梨酸及山梨酸鉀用于肉、魚、禽類制品時的最大使用限量為0.075g/kg；水果、蔬菜及碳酸飲料為0.2 g/kg ；膠原蛋白腸衣、低鹽醬菜類、蜜餞、果汁飲料、果凍等為0.5 g/kg ；果酒為0.6g/kg ；塑料桶裝濃縮果蔬汁、軟糖、魚干制品、即食豆制品、糕點、面包、乳酸菌飲料等為1.0g/kg 。當(dāng)山梨酸及山梨酸鉀同時使用時，以山梨酸計，不得超過最大使用量。1硫代巴比妥酸比色法1

15、)原理利用自樣品中提取出來的山梨酸及其鹽類，在硫酸及重鉻酸鉀的氧化作用下產(chǎn)生丙二醛，丙二醛與硫代巴比妥酸作用產(chǎn)生紅色化合物， 其紅色深淺與丙二醛濃度成正比， 并于波長 530nm 處有最大吸收，符合比爾定律，故可用比色法測定，反應(yīng)為2）儀器和試劑（ 1）儀器721 型分光光度計、組織搗碎機、l0mL 比色管。（ 2）試劑硫代巴比妥酸溶液：準(zhǔn)確稱取0.5g 硫代巴比妥酸于100mL 容量瓶中，加20mL 蒸餾水，然后再加入l0mL 氫氧化鈉溶液(lmol/L) ，充分搖勻。使之完全溶解后再加入l1mL 鹽酸 (lmol/L) ，用水稀釋至刻度。此溶液要在使用時新配制，最好在配制后不超過6h 內(nèi)使

16、用。重鉻酸鉀 -硫酸混合液： 以 0.1mol/L 重鉻酸鉀和0.15mol/L 硫酸以 11 的比例混合均勻配制備用。山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取250mg 山梨酸鉀于250mL 容量瓶中，用蒸餾水溶解并稀釋至刻度，使之成為lmg/mL 的山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：準(zhǔn)確移取山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液25mL 于 250mL 容量瓶中，稀釋至刻度，充分搖勻，使之成為0.lmg/mL 的山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。3)操作步驟(1)樣品的處理：稱取 100g 樣品，加蒸餾水 200mL ，于組織搗碎機中搗成勻漿。稱取此勻漿 100g，加蒸餾水 200mL 繼續(xù)搗碎 lmin ，稱取 l0g 于 25

17、0mL 容量瓶中定容搖勻，過濾備用。(2)山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別吸取準(zhǔn)使用溶液于200mL 容量瓶中，以蒸餾水定容0.0、2.0、 4.0、 6.0、 8.0、 10.0mL 山梨酸鉀標(biāo)(分別相當(dāng)于0.0、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0g/mL 的山梨酸鉀 )。再分別吸取2.0mL 于相應(yīng)的l0mL 比色管中， 加 2.0mL 重鉻酸鉀 -硫酸溶液，于 l00 C 水浴中加熱 7min，立即加入立即取出迅速用冷水冷卻，在分光光度計上以2.0mL 硫代巴比妥酸溶液，繼續(xù)加熱l0min ，530nm 測定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(3)樣品的測定： 吸取樣品處理液 2mL 于

18、 l0mL 比色管中， 按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的操作程序，自 加 2.0mL 重鉻酸鉀 -硫酸溶液 開始依次操作，在分光光計 530nm 處測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)濃度。4)結(jié)果計算c250X 12mX1X 21.34式中：X 1 X 2樣品中山梨酸鉀的含量，樣品中山梨酸的含量，g/kg ；g/kg ；c 試樣液中含山梨酸鉀的濃度，mg/mL ；m 稱取勻漿相當(dāng)于試樣的質(zhì)量，g；2 用于比色時試樣溶液的體積，mL ；250樣品處理液總體積，mL ；134山梨酸鉀換算為山梨酸的系數(shù)。2紫外分光光度法1）原理樣品經(jīng)氯仿(三氯甲烷 )提取后，再加入碳酸氫鈉，使山梨酸形成山梨酸鈉而溶于水溶液中。純凈的

19、山梨酸鈉水溶液在 254nm 處有最大吸收，經(jīng)紫外分光光度計測定其吸光度后即可測得其含量。2)儀器和試劑(1)儀器紫外分光光度計、組織搗碎機。(2)試劑三氯甲烷： 以三氯甲烷體積 50%的碳酸氫鈉 (0.5mol/L) 提取 2 次，而后以無水硫酸鈉干燥，過濾備用。 0.5mol/L 碳酸氫鈉： 稱取 21g 碳酸氫鈉于小燒杯中， 加少量蒸餾水溶解， 移至 500mL 容量瓶中加水定容至刻度。 0.3m0l/L 碳酸氫鈉。山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取250mg 山梨酸，用0.3mol/L 的碳酸氫鈉定容至250mL 。容至山梨酸標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確吸取山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 250mL ，即為 100 g/m

20、L 的標(biāo)準(zhǔn)使用液。25.00mL ，用 0.3mol/L的碳酸氫鈉定3)操作步驟(1)樣品的處理：稱取50.0g 樣品，加450mL 蒸餾水于組織搗碎機中，粉碎5min，使成勻漿。稱取10.0g 此勻漿于50mL 容量瓶中，并以水定容。移取l0mL 此溶液于250mL 分液漏斗中，用100mL 氯仿提取lmin 。靜置分層。將氯仿層分至125mL 錐形瓶中，加入5g 無水硫酸鈉，振蕩后靜置。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 分別吸取山梨酸標(biāo)準(zhǔn)使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL 于 100mL容量瓶中，用0.3mol/L 碳酸氫鈉定容(分別相當(dāng)于0.0、 1.0、 2.0、 3.0、

21、 4.0、 5.0g/mL 的山梨酸 )。于紫外分光光度計中254nm 處測定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(3)樣品的測定：移取樣品氯仿提取液50mL 于 125mL 分液漏斗中，用25mL 碳酸氫鈉(0.3mol/L) 提取 1min。靜置分層后，小心棄去氯仿層。將碳酸氫鈉提取液于紫外分光光度計中 254nm 處測定吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的山梨酸含量。4)結(jié)果計算V1m1V3XmV2式中： X 一一山梨酸的含量，g/kg ；m1 一一試液中山梨酸的含量，mg/mL ；V 1 一一試樣碳酸氫鈉提取液總量，mL ；V 2吸取試樣氯仿提取液體積，mL ；V 3 一一

22、試樣氯仿提取液總體積，mL ；m 一一用于測定的試樣水提取液相當(dāng)于樣品的質(zhì)量，g。3氣相色譜法本法可同時用于山梨酸和苯甲酸的測定。1)原理樣品經(jīng)酸化后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用帶氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，然后與標(biāo)準(zhǔn)系列進行比較定量。2)儀器和試劑(1)儀器氣相色譜儀(具有氫火焰離子化檢測器)。(2)試劑乙醚：不含過量氧化物。石油醚：沸程3060 C。鹽酸。無水硫酸鈉。鹽酸(1:1) ：取 100mL 鹽酸，加入稀釋至200mL 。氯化鈉的酸性溶液(40g/L)：于氯化鈉溶液(40g/L) 中加少量鹽酸(1:1)，使之酸化。山梨酸和苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取山梨酸和苯甲酸

23、各0.2000g，置于 100mL 容量瓶中， 用石油醚 -乙醚 (3:1) 混合溶劑溶解后，稀釋至刻度， lmL 此溶液相當(dāng)于200mg 山梨酸或苯甲酸。山梨酸和苯甲酸的標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取適量的山梨酸和苯甲酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以石油醚-乙醚 (3:1) 混合溶劑稀釋至每毫升相當(dāng)于50、 100、 150、 200、 250mg 山梨酸或苯甲酸。3)操作步驟(1)樣品的處理：稱取2.50g 事先混合均勻的樣品，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL鹽酸 (l:1) 酸化，依次用 l5mL和 l0mL乙醚提取， 每次振搖 lmin 后，將上層乙醚提取液吸入另一個 25mL 帶塞量筒中，合并乙醚提取液。用3

24、mL 氯化鈉的酸性溶液(40g/L) 洗滌 2 次，靜置 l5min ，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾入25mL 容量瓶中，加乙醚至刻度，混勻。準(zhǔn)確吸取 5mL 乙醚提取液于5mL 帶塞刻度試管中，置于40C 水浴上揮干，加入2mL 石油醚 -乙醚 (3:1) 混合溶劑溶解殘渣，備用。(2)色譜參考條件色譜柱：玻璃柱，內(nèi)徑為3mm，長為 2m，內(nèi)裝涂以5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù) ) DEGS+l%( 質(zhì)量分?jǐn)?shù) )H 3PO4 固體液的 6080 目 ChromosoybWAW 。載氣：載氣為氮氣，氣流速度為50mL/min( 氮氣、空氣及氫氣按各儀器型號不同，選擇各自的最佳比例條件 )。溫度：進樣品溫度

25、為230 C，檢測器溫度為 230 C，柱溫為 170 C。(3)測定進樣 2 L 標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液于氣相色譜儀中，測得不同濃度的山梨酸和苯甲酸的峰高。以濃度為橫坐標(biāo)， 以峰高值為縱坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。山梨酸和苯甲酸的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖如圖 5-1 所示，山梨酸的保留時間為 173s，苯甲酸的保留時間為 368s。進樣 2pL 樣品溶液，測得峰高，然后與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。4)結(jié)果計算m11000XV251000m2V125圖 5-1 山梨酸和苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)色譜圖式中： X 一一樣品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg ；m1 一一測定用樣品溶液中山梨酸或苯甲酸的質(zhì)量， g；V 1 一一加入石油醚

26、 -乙醚 (3 1)混合溶劑的體積， mL ； V 2 一一測定時進樣的體積， L ； m2 一一樣品的質(zhì)量， g；5 一一測定時吸取乙醚提取液的體積，mL ；25 一一樣品乙醚提取液的總體體積，mL 。由測得苯甲酸的量乘以1.18，即為樣品中苯甲酸鈉的含量。5 1 3 過氧乙酸的測定過氧乙酸又叫過醋酸，是過氧化氫、醋酸與微量硫酸的混合水溶液。過氧乙酸對細(xì)菌繁殖體、芽抱、真菌、病毒都具有高度殺滅效果，是一種廣譜、高效、速效的殺菌劑。1)原理在酸性條件下，過氧乙酸中含有的過氧化氫(H 2O2)用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，然后用間接碘量法測定過氧乙酸的含量。反應(yīng)方程式為2KMnO 4 十 3H 2

27、SO4 十 5H2O2= 2MnSO 4 十 K2SO4 十 5O2 十 8H2O2KI 十 2H 2SO4 十 CH 3COOH = 2KHSO4十 CH3COOH 十 H2O 十 I2I2 十 2Na2S2O3 = 2NaI 十 Na2S4O62)儀器和試劑(1)儀器250mL 碘量瓶、 50mL 棕色滴定管、分析天平。(2)試劑硫酸溶液(1十 9)：量取 lmL 硫酸與 9mL 水混合。碘化鉀溶液(100g/L) 。硫酸錳溶液(100g/L) 。鉑酸銨溶液(30g/L) 。高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液c ( l/5 KMnO 4 )=0.lmol/L。硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c (Na 2S2O3)=

28、0.lmol/L 。淀粉指示液(10g/L) 。3)操作步驟稱取約 0.5g 試樣 (或稱取相當(dāng)于含過氧乙酸約0.07g 的試樣 )，精確至 0.000lg，置于預(yù)先盛有 50mL 水， 5mL 硫酸溶液和3 滴硫酸錳溶液并已冷卻至4C 的碘量瓶中，搖勻，用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液呈穩(wěn)定的淺粉色。隨即加入l0mL 碘化鉀溶液和 3 滴鉬酸銨溶液，輕輕搖勻，于暗處放置5l0min ，用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，接近終點時(溶液呈淡黃色 )加入 lmL 淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并保持硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積數(shù)。30s 不變?yōu)榻K點。記錄消耗4)結(jié)果計算XVcM100m式中：X 過氧乙

29、酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；V 消耗的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL ；c 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度，mol/L ；m試樣的質(zhì)量，g；M 與l.00mL 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(c=1.000mol/L)相當(dāng)?shù)倪^氧乙酸的摩爾質(zhì)量(M=0.03803g/m01)；取 2 次平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為測定結(jié)果，兩次平行測定結(jié)果之差不得大于0.3%。5 1 4 對羥基苯甲酸酯類的測定對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯和對羥基苯甲丁酯，又名尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯。 三者均為苯甲酸的衍生物， 分別是由對羥基苯甲酸與乙醇、 丙醇和丁醇，以硫酸為觸媒酯化而成的結(jié)晶性粉末。易溶于丙酮和乙醇，難溶于水，

30、不易受 pH 影響，在pH4 一 8 范圍內(nèi)防腐效果很好。我國食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB2760 一 1996) 規(guī)定：對羥基苯甲酸乙酯、丙酯和丁酯用于果蔬保鮮時的最大使用量 (以對羥基苯甲酸計 )為 0.012g/kg; ，食醋 0.l0g/kg ；碳酸飲料、蛋糕、蛋黃餡 0.20g/kg ；果汁飲料、果醬 (不包括罐頭 )、醬油等為 0.25g/kg；糕點餡為 0 .5g/kg 。1高效液相色譜法1)原理樣品中對羥基苯甲酸酯類，用乙腈提取，經(jīng)過濾后進高效液相色譜儀進行測定，與標(biāo)準(zhǔn)比較，以保留時間定性，以峰高定量。2)儀器和試劑(1)儀器組織搗碎機、離心機、高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。

31、(2)試劑乙腈。全玻蒸餾。對羥基苯甲酸酯類的標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，混勻。分別吸取50mg 相應(yīng)的對羥基苯甲酸酯，溶于100mL 容1.0、2.0、 3.0、4.0、 5.0mL 上述溶液，置于l00mL 容量瓶中， 用乙腈稀釋至刻度。 該系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中每毫升分別含 25.0 g 的對羥基苯甲酸酯。5.0、10.0、15.0、20.0、3)操作步驟(1)樣品提取離心管中， 加入將上清液轉(zhuǎn)移至稱取約 20g 樣品，粉碎。準(zhǔn)確稱取2g 樣品于 10mL 具塞5.0nL 乙腈，塞上塞子。 振搖 30s 后，于 500r/min 離心 5min，25.0mL 容量瓶中，重復(fù)操作3 次，

32、用乙腈稀釋至刻度。用0.45 m 濾膜過濾，供色譜測定用。(2)高效液相色譜分析參考條件色譜柱： BondapakC1830cmX4.6mm 。流速： 1.4mL/min 。檢測波長：254nm。(3)測定方法分別進樣 10 L 對羥基苯甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以濃度為橫坐標(biāo)，峰高為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時進樣 10 L 樣品溶液，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定性、定量。對羥基苯甲酸酯、丙酯的保留時間分別約為 4.2min 和7.6min ，其標(biāo)準(zhǔn)色譜圖如圖5-2所示。4)結(jié)果計算m125圖 5-2 對羥基苯甲X1000m酸酯類標(biāo)準(zhǔn)色譜圖式中： X 樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，mg/g；ml 一

33、一被測樣品液中對羥基苯甲酸酯類的含量， g/mL ；m 一一樣品的質(zhì)量，g；25 一一樣品溶液的體積， mL 。2氣相色譜法1)原理樣品經(jīng)酸化后，對羥基苯甲酸酯類用乙醚提取濃縮后，用具氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。2)儀器和試劑(1)儀器K-D 濃縮器、氣相色譜儀：具氫火焰離子化檢測器。(2)試劑除特別注明外，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均勻分析純試劑，水為蒸餾水。乙醚，重蒸。無水乙醇。無水硫酸鈉。飽和氯化鈉溶液。碳酸氫鈉溶液(1g/100mL) 。鹽酸(1+1) ：量取 50mL 鹽酸，用水稀釋至100mL 。對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取對羥基苯甲酸乙酯、丙

34、酯各0.050g，溶于 50mL 容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，該溶液每毫升相當(dāng)于lmg 對羥基苯甲酸乙酯、丙酯。對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的使用溶液：吸取適量的對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，用無水乙醇分別稀釋至每毫升相當(dāng)于 50、 100、 200、 400、600、 800 g 的對羥基苯甲酸乙酯、丙酯。3)操作步驟(1)樣品的提取與凈化。酸醬油、醋、果汁等：吸取 5g 預(yù)先均勻化的樣品于 (1+1) 酸化， 10mL 飽和氯化鈉溶液，搖勻，分別以125mL 分液漏斗中，加入lmL75、50、 50mL 乙醚提取三次，每次鹽2min ，放置片刻，棄去水層，合并乙醚層于250mL 分液漏斗中

35、，加洗滌一次，再分別以碳酸氫鈉溶液(lg/100mL)30 ， 30、 30mL 洗滌10mL 飽和氯化鈉溶液3 次，棄去水層。用濾紙吸去漏斗頸部水分，塞上脫脂棉，加l0g 無水硫酸鈉于室溫放置30min ，在 K-D 濃縮器上濃縮近干，用吹氮除去殘留溶劑。用無水乙醇定容至每毫升含lmg 對羥基苯甲酸乙酯、丙酯供氣相色譜用。果醬：稱取5g 預(yù)先均勻化的樣品于100mL 具塞試管中，加入ImL 鹽酸 (1+1) ，10mL飽和氯化鈉溶液，搖勻，用50、30、 30mL 乙醚提取3 次，每次2min，用吸管轉(zhuǎn)移乙醚至250mL 分液漏斗中，以下按上法操作。(2)氣相色譜分析參考條件。色譜柱：內(nèi)徑3

36、mm，長 2.6m，內(nèi)涂以 3%SE-30/ChromoserbWAWD-MCS ，6080 目。檢測溫度：柱溫170 C，進樣口和檢測器溫度220 C。氣體流速：氮氣，40mL/min ；氫氣， 50mL/min ；空氣， 500mL/min 。(3)測定 進樣 l L對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度標(biāo)準(zhǔn)使用液于氣相色譜儀中， 測定不同濃度對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的峰高。以濃度為橫坐標(biāo)，峰高為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時進樣 l L 樣品溶液，測定峰高并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。4)結(jié)果計算XA1000V21000mV1式中： X 樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，g/kg ；A 一一測定樣品中對羥基

37、苯甲酸酯類的含量，g；V 1樣品制備液體積， mL ；V 2樣品進樣體積， L ；m樣品質(zhì)量， g。52甜味劑的測定甜味劑是指能夠賦予食品甜味的食品添加劑，按其來源可分為天然甜味劑和人工合成甜味劑， 按其營養(yǎng)價值可分為營養(yǎng)型與非營養(yǎng)型甜味劑，通常所講的甜味劑系指人工合成的非營養(yǎng)型甜味劑，如糖精鈉、環(huán)己氨基磺酸鈉(甜蜜素 )、乙?；前匪徕?安塞蜜 )、天冬酰苯丙氨甲酯(甜味素、阿斯巴甜)等。我國食品添加使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB2760 一 1996)規(guī)定，糖精鈉用于飲料、醬菜類、復(fù)合調(diào)味料、蜜餞、雪糕，配制酒、冰棒、糕點、餅干、面包等食品，最大使用量(以糖精計 )為 0.15g/kg；高糖果汁(果味

38、)飲料按稀釋倍數(shù)的80%加入，瓜子的最大使用量為1.2g/kg ；話梅、陳皮等的最大使用量為5.0g/kg 。環(huán)己氨基磺酸鈉在食品中最大使用量為0.65g/kg；話梅、陳皮等的最大使用量為8.0g/kg。5 2 1糖精鈉的測定1高效液相色譜法利用高效液相色譜法在測定糖精鈉時，也可同時測定山梨酸和苯甲酸。1)原理樣品經(jīng)加溫除去二氧化碳和乙醇后，調(diào)節(jié)pH 至近中性，過濾后進高效液相色譜儀。經(jīng)反相色譜分離后， 根據(jù)保留時間和峰面積進行定性和定量。取樣量為 2.5g，進樣量為10L ，最低檢出量為1.5ng。應(yīng)用高效液相分離條件可以同時測定苯甲酸、山梨酸和糖精鈉，見圖5-5。2)儀器和試劑(1)儀器高

39、效液相色譜儀、紫外檢測器。(2)試劑甲醇：經(jīng)濾膜(0.5 m) 過濾，超聲脫氣。氨水(1+1) 氨水加等體積水混合。乙酸銨溶液(0.02mol/L) ：稱取 1.54g 乙酸銨，加水至1000mL 溶解，經(jīng)濾膜(0.45 m) 過濾。 糖 精 鈉 標(biāo) 準(zhǔn) 儲 備 溶 液 ： 準(zhǔn) 確 稱 取 0.0851g 經(jīng) 120 C 烘 干 4h 后 的 糖 精 鈉(C7 H4O3NSNa 2H 2O)，加水溶解定容至100.0mL 。糖精鈉含量1.0mg/mL ，作為儲備溶液。糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：吸取糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液10.0mL 放入 100mL容量瓶中，加水至刻度。經(jīng)濾膜 (0.45m) 過濾。該溶液

40、每毫升相當(dāng)于0.10mg 的糖精鈉。3)操作步驟(1)樣品處理汽水、飲料、果汁類：汽水需微溫攪拌除去CO2。然后吸取 2.0mL 樣品加入已裝有中性氧化鋁 (3cm l.5cm) 的小柱中，過濾，棄去初濾液，然后用流動相洗脫糖精鈉，接收于 25mL 帶塞量筒中，洗脫至刻度，搖勻。此液通過微孔濾膜(0.45 m)后進樣。配制酒類：稱取 10.0g 樣品放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1+1) 調(diào) pH 至7，加水定容至適當(dāng)體積，經(jīng)濾膜(0.45 m)過濾后進行 HPLC 分析。(2)高效液相色譜分析參考條件色譜柱： YWG 一 C184.6mm l50 mm ， 5 m 不銹鋼柱，或其他

41、型號C18 柱。流動相：甲醇 +乙酸銨溶液(0.02mol/L)(5+95)。流速： 1.0mL/min 。進樣量： 10 L。檢測器：紫外檢測器，波長230nm，靈敏度 0.2AUFS 。(3)測定 取樣品處理液和標(biāo)準(zhǔn)使用液各10 L注入高效液相色譜儀進行分離，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。如圖8-5 所示。4)結(jié)果計算m11000XV21000m2V1式中： X 一一樣品中糖精鈉含量，g/kg( 或 g/L) ；m1 一一進樣體積中糖精鈉的質(zhì)量，mg；V 2 一一進樣體積， mL ；V 1 一一樣品稀釋液總體積，mL；m2 一一樣品質(zhì)量， g。結(jié)果的表述：保留算術(shù)平均值的三位小數(shù)。允

42、許相對誤差10%。2薄層色譜法1）原理樣品經(jīng)處理除去蛋白質(zhì)、果膠、CO2、酒精等雜質(zhì)后，在酸性條件下，用乙醚提取食品樣品中的糖精鈉，經(jīng)薄層層析分離后用溴甲酚綠 -溴甲酚藍混合指示劑顯色后，與標(biāo)準(zhǔn)樣品的斑點進行比較定性。在經(jīng)薄層色譜分離、顯色后與標(biāo)準(zhǔn)比較，進行半定量測定。2)儀器和試劑(1)儀器玻璃紙：生物制品透析袋紙或不含增白劑的市售玻璃紙。玻璃噴霧器。微量注射器。紫外光燈：波長253.7nm 。薄層板： l0cm 20cm 或 20cm 20cm。展開槽。(2)試劑乙醚：不含過氧化物。無水硫酸鈉、無水乙醇及乙醇(95%) 、氫氧化鈉溶液 (40g/L)聚酚胺粉： 200 目。鹽酸 (1+1)

43、 ：取 100mL 鹽酸，加水稀釋至 200mL 。展開劑。a正丁醇 +氨水 +無水乙醇 (7+1+2) 。b異丙醇 +氨水 +無水乙醇(7+1+2) 。顯色劑 ( 溴甲酚紫溶液(0.4g/L) ：稱取 0.04g 溴甲酚紫，用乙醇(50%) 溶解，加氫氧化鈉溶液 (4g/L)l.lmL，調(diào)節(jié) pH 為 8，定容至 100mL 。硫酸銅溶液(100g/L) ：稱取 10g 硫酸銅 (CuSO45H 2O)，用水溶解并稀釋至100mL 。糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液： 準(zhǔn)確稱取0.0851g 經(jīng) 120 C 干燥 4h 后的糖精鈉， 加乙醇溶解， 移入 100mL 容量瓶中，加乙醇(95%) 稀釋至刻度。此溶

44、液每毫升相當(dāng)于lmg 糖精鈉(C6 H4CONNaSO 2 2H2 O)。3)操作步驟(1)樣品的提取飲料、汽水：取10.0mL 均勻試樣 (如樣品中含 CO2，則應(yīng)先于 6070 C 水浴上加熱除去 CO2，如樣品中含有酒精，則加4%氫氧化鈉溶液使其呈堿性，在沸水浴中加熱除去)置于 100mL 分液漏斗中，加2mL 鹽酸(1+1) ，用 30、 20、20mL 乙醚提取三次，合并乙醚提取液，用 5mL 經(jīng)鹽酸酸化的水洗滌一次，棄去水層。乙醚層通過無水硫酸鈉脫水后，揮發(fā)乙醚，加 2.0mL 乙醇溶解殘留物，密封保存，備用。醬油、果汁、果醬等：稱取20.0g 或吸取 20.0mL 均勻試樣，置于

45、l00mL 容量瓶中，加水至約 60mL ，加 20mL 硫酸銅溶液100g/L) ，混勻，再加 4.4mL 氫氧化鈉溶液(40g/L) ，加水至刻度，混勻，靜置30min 后過濾。取 50mL 濾液置于 150mL 分液漏斗中，以下按飲料。汽水樣品提取自“加2mL 鹽酸 (1+1) ”起依法操作。固體果汁粉等：稱取20.0g 磨碎的均勻試樣，置于200mL 容量瓶中，加l00mL 水，加溫使其溶解后放冷。 以下按醬油、 果汁、果醬等樣品提取自 “加 20mL 硫酸銅溶液(100g/L) ”起依法操作。糕點、餅干等蛋白、脂肪、淀粉多的食品：稱取25.0g 均勻試樣，置于透析用玻璃紙中，放入大小適當(dāng)?shù)臒瓋?nèi)，加 50mL 氫氧化鈉溶液(0.8g/L) ，調(diào)成糊狀， 將玻璃紙口扎緊，放入盛有 200mL 氫氧化鈉溶液(0.8g/L) 的燒杯中，蓋上表面皿，透析過夜。量取125m