器官培養(yǎng)課件

1、器官培養(yǎng)課件 器官培養(yǎng)主要指植物根、莖、葉、花及小果器官培養(yǎng)主要指植物根、莖、葉、花及小果 實(shí)的無(wú)菌培養(yǎng)。實(shí)的無(wú)菌培養(yǎng)。 器官培養(yǎng)的特點(diǎn)在于能保持它們所具有的特器官培養(yǎng)的特點(diǎn)在于能保持它們所具有的特 征性結(jié)構(gòu)，通過(guò)器官培養(yǎng)可快速大量地繁殖。目征性結(jié)構(gòu)，通過(guò)器官培養(yǎng)可快速大量地繁殖。目 前這一技術(shù)已在生產(chǎn)上得到廣泛應(yīng)用。本章將介前這一技術(shù)已在生產(chǎn)上得到廣泛應(yīng)用。本章將介 紹離體根的培養(yǎng)、莖的培養(yǎng)和葉的培養(yǎng)。紹離體根的培養(yǎng)、莖的培養(yǎng)和葉的培養(yǎng)。 第七章第七章 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng) 器官培養(yǎng)課件 第一節(jié) 根的培養(yǎng) 離體根的培養(yǎng)，由于具有生長(zhǎng)迅速、代謝離體根的培養(yǎng)，由于具有生長(zhǎng)迅速、代謝 活躍及在已知條件

2、下可根據(jù)需要增減培養(yǎng)基中活躍及在已知條件下可根據(jù)需要增減培養(yǎng)基中 的成分等優(yōu)點(diǎn)，多用于探索植物根系的生理及的成分等優(yōu)點(diǎn)，多用于探索植物根系的生理及 其代謝活動(dòng)。其代謝活動(dòng)。 器官培養(yǎng)課件 一、培養(yǎng)過(guò)程 現(xiàn)以番茄根為例，介紹其培養(yǎng)過(guò)程 （圖6-1）。番茄種子經(jīng)表面消毒，在無(wú) 菌條件下萌發(fā)，待根伸長(zhǎng)后，從根尖一 端切取10mm長(zhǎng)的根尖接種于培養(yǎng)基中 。 器官培養(yǎng)課件 圖圖7-1 7-1 番茄離體根培養(yǎng)的過(guò)程番茄離體根培養(yǎng)的過(guò)程 1 1、種子用、種子用70%70%酒精消毒酒精消毒1 1分鐘；分鐘； 2 2、用飽和漂白粉液消毒、用飽和漂白粉液消毒1010 分鐘；分鐘；3 3、用無(wú)菌水洗三次；、用無(wú)菌水

3、洗三次；4 4、將、將6 61010粒種子放入培養(yǎng)皿中粒種子放入培養(yǎng)皿中 的濕濾紙上；的濕濾紙上；5. 5.培養(yǎng)皿放入暗中培養(yǎng)直至胚根長(zhǎng)至培養(yǎng)皿放入暗中培養(yǎng)直至胚根長(zhǎng)至303040mm40mm ；6. 6.切取切取10mm10mm長(zhǎng)的根尖用無(wú)菌的接種環(huán)接種于培養(yǎng)液中；長(zhǎng)的根尖用無(wú)菌的接種環(huán)接種于培養(yǎng)液中；7. 7. 在在2525下培養(yǎng)直到長(zhǎng)出側(cè)根下培養(yǎng)直到長(zhǎng)出側(cè)根 器官培養(yǎng)課件 暗培養(yǎng)暗培養(yǎng)4 4天后長(zhǎng)出側(cè)根，天后長(zhǎng)出側(cè)根，7 7天后又可切天后又可切 離側(cè)根的根尖作為新的培養(yǎng)材料再進(jìn)行擴(kuò)離側(cè)根的根尖作為新的培養(yǎng)材料再進(jìn)行擴(kuò) 大培養(yǎng)。通過(guò)這種由單個(gè)直根衍生而來(lái)，大培養(yǎng)。通過(guò)這種由單個(gè)直根衍生而來(lái)

4、， 并經(jīng)繼代培養(yǎng)而保持遺傳性一致的根的培并經(jīng)繼代培養(yǎng)而保持遺傳性一致的根的培 養(yǎng)物，可稱為離體根的無(wú)性系。養(yǎng)物，可稱為離體根的無(wú)性系。 器官培養(yǎng)課件 二、培養(yǎng)基 目前培養(yǎng)番茄離體根時(shí)，使用改良的懷特目前培養(yǎng)番茄離體根時(shí)，使用改良的懷特 培養(yǎng)基（表培養(yǎng)基（表6-16-1）。培養(yǎng)基中氮源以硝酸鹽的效）。培養(yǎng)基中氮源以硝酸鹽的效 果好，蔗糖是雙子葉植物離體根培養(yǎng)最好的碳果好，蔗糖是雙子葉植物離體根培養(yǎng)最好的碳 源。與懷特培養(yǎng)基相比，降低了大量元素的濃源。與懷特培養(yǎng)基相比，降低了大量元素的濃 度，但甘氨酸和煙酸的用量增加，硫胺素（維度，但甘氨酸和煙酸的用量增加，硫胺素（維 生素生素B6B6）對(duì)離體根培

5、養(yǎng)的作用明顯，所用濃度）對(duì)離體根培養(yǎng)的作用明顯，所用濃度 仍為仍為0.1mg/L0.1mg/L。在這個(gè)培養(yǎng)基中增加了碘的成分，。在這個(gè)培養(yǎng)基中增加了碘的成分， 因?yàn)榈庥欣诜迅纳L(zhǎng)，濃度為因?yàn)榈庥欣诜迅纳L(zhǎng)，濃度為0.38mg/L0.38mg/L。 硼對(duì)離體根的生長(zhǎng)也具有重要的影響，缺硼會(huì)硼對(duì)離體根的生長(zhǎng)也具有重要的影響，缺硼會(huì) 降低根尖細(xì)胞的分裂速度，阻礙細(xì)胞伸長(zhǎng)等。降低根尖細(xì)胞的分裂速度，阻礙細(xì)胞伸長(zhǎng)等。 器官培養(yǎng)課件 對(duì)離體根培養(yǎng)研究得最多的是胡蘿卜，對(duì)離體根培養(yǎng)研究得最多的是胡蘿卜， 用用WhiteWhite培養(yǎng)基添加培養(yǎng)基添加0.01mg/L0.01mg/L的的2,42,4

6、D D和和 0.15mg/L0.15mg/L的的KTKT使胡蘿卜肉質(zhì)根形成愈傷組織。使胡蘿卜肉質(zhì)根形成愈傷組織。 將未分化的愈傷組織球形細(xì)胞轉(zhuǎn)入到含低水將未分化的愈傷組織球形細(xì)胞轉(zhuǎn)入到含低水 平生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中，細(xì)胞先形成根，再產(chǎn)平生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中，細(xì)胞先形成根，再產(chǎn) 生不定芽，長(zhǎng)成小植株。用胡楊的根段進(jìn)行生不定芽，長(zhǎng)成小植株。用胡楊的根段進(jìn)行 離體培養(yǎng)，在根段的上面先形成愈傷組織，離體培養(yǎng)，在根段的上面先形成愈傷組織， 后再分化產(chǎn)生出小植株。后再分化產(chǎn)生出小植株。 器官培養(yǎng)課件 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)離體根生長(zhǎng)的影響，因生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)離體根生長(zhǎng)的影響，因 植物種或品種的不同而存在差別。如離體根植物種

7、或品種的不同而存在差別。如離體根 對(duì)生長(zhǎng)素的反應(yīng)有三種情況：對(duì)生長(zhǎng)素的反應(yīng)有三種情況： 1. 1.生長(zhǎng)素促進(jìn)根的生長(zhǎng)（如玉米、小麥等）；生長(zhǎng)素促進(jìn)根的生長(zhǎng)（如玉米、小麥等）； 2. 2.有些植物離體根的生長(zhǎng)要依賴于生長(zhǎng)素的作有些植物離體根的生長(zhǎng)要依賴于生長(zhǎng)素的作 用（如黑麥、小麥的一些變種）；用（如黑麥、小麥的一些變種）； 3. 3.生長(zhǎng)素抑制植物離體根的生長(zhǎng)（如櫻桃、番生長(zhǎng)素抑制植物離體根的生長(zhǎng)（如櫻桃、番 茄等）茄等）。 器官培養(yǎng)課件 第二節(jié)第二節(jié) 莖的培養(yǎng)莖的培養(yǎng) 根據(jù)取材部位莖的培養(yǎng)可分為莖尖培養(yǎng)和莖根據(jù)取材部位莖的培養(yǎng)可分為莖尖培養(yǎng)和莖 段培養(yǎng)。關(guān)于莖尖培養(yǎng)詳見(jiàn)第八章，這里只討論段培

8、養(yǎng)。關(guān)于莖尖培養(yǎng)詳見(jiàn)第八章，這里只討論 莖段的培養(yǎng)。莖段的培養(yǎng)。 一、莖段培養(yǎng)過(guò)程一、莖段培養(yǎng)過(guò)程 莖段培養(yǎng)是指帶有腋（側(cè)）芽或葉柄、長(zhǎng)數(shù)厘莖段培養(yǎng)是指帶有腋（側(cè)）芽或葉柄、長(zhǎng)數(shù)厘 米的莖節(jié)段進(jìn)行離體培養(yǎng)。米的莖節(jié)段進(jìn)行離體培養(yǎng)。 器官培養(yǎng)課件 由于嫩莖段（即當(dāng)年萌發(fā)或新抽出的尚未由于嫩莖段（即當(dāng)年萌發(fā)或新抽出的尚未 完全木質(zhì)化的枝條），其細(xì)胞的可塑性大，容完全木質(zhì)化的枝條），其細(xì)胞的可塑性大，容 易離體培養(yǎng)，常作為外植體。一般在無(wú)菌條件易離體培養(yǎng)，常作為外植體。一般在無(wú)菌條件 下，將經(jīng)過(guò)消毒的莖段切成數(shù)厘米長(zhǎng)帶節(jié)的節(jié)下，將經(jīng)過(guò)消毒的莖段切成數(shù)厘米長(zhǎng)帶節(jié)的節(jié) 段，接種在固體培養(yǎng)基上。莖段可直接

9、形成不段，接種在固體培養(yǎng)基上。莖段可直接形成不 定芽或先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再脫分化形成再定芽或先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再脫分化形成再 生苗。把再生苗進(jìn)行切割，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基生苗。把再生苗進(jìn)行切割，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基 上培養(yǎng)，便可得到完整的小植株。上培養(yǎng)，便可得到完整的小植株。 現(xiàn)以月季為例說(shuō)明?，F(xiàn)以月季為例說(shuō)明。 器官培養(yǎng)課件 （一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基 誘導(dǎo)萌芽培養(yǎng)基誘導(dǎo)萌芽培養(yǎng)基 MS+BA0.5-1.0mg/LMS+BA0.5-1.0mg/L； 增殖培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基 MS+BA1.0-2.0mg/L+NAA0.01-0.1mg/LMS+BA1.0-2.0mg/L+NAA0.01-0.1mg/L

10、或或 MS+BA1.0-2.0mg/L+IAA0.1-0.3mg/LMS+BA1.0-2.0mg/L+IAA0.1-0.3mg/L； 生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基 1/2MS+NAA0.1-0.2mg/L+IAA1.0mg/L1/2MS+NAA0.1-0.2mg/L+IAA1.0mg/L或或 1/2MS+IBA0.75mg/L+NAA0.2mg/L+1/2MS+IBA0.75mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖蔗糖2%2%。 器官培養(yǎng)課件 （二）培養(yǎng)過(guò)程（二）培養(yǎng)過(guò)程 1. 1.取材取材 生長(zhǎng)健壯的當(dāng)年生枝條，取其生長(zhǎng)健壯的當(dāng)年生枝條，取其 飽滿的未萌芽的作為外植體。一般飽滿的未萌芽的作為外植體。一般

11、 取中部的側(cè)芽誘導(dǎo)效果最好。取中部的側(cè)芽誘導(dǎo)效果最好。 器官培養(yǎng)課件 2. 2.滅菌滅菌 切去葉片及葉柄，切成切去葉片及葉柄，切成1 12cm2cm的帶節(jié)莖的帶節(jié)莖 段（如果是嫩梢需切去少許芽的頂部）。將原段（如果是嫩梢需切去少許芽的頂部）。將原 來(lái)向下的莖端切成斜面，向上的莖端切成平面來(lái)向下的莖端切成斜面，向上的莖端切成平面 （這是為了以后接種時(shí)方便，也為了避免接種（這是為了以后接種時(shí)方便，也為了避免接種 時(shí)將上下顛倒）。將清理好的材料在自來(lái)水下時(shí)將上下顛倒）。將清理好的材料在自來(lái)水下 沖洗干凈，然后在無(wú)菌條件下用沖洗干凈，然后在無(wú)菌條件下用70%70%酒精表面酒精表面 消毒消毒30s30s

12、，用無(wú)菌水洗，用無(wú)菌水洗3 34 4次，用次，用0.1%0.1%的升汞溶的升汞溶 液滅菌液滅菌8 812min(12min(或用或用2%2%漂白粉溶液滅菌漂白粉溶液滅菌8 8 12min),12min),取出后在無(wú)菌水中清洗取出后在無(wú)菌水中清洗4 45 5次（用漂白次（用漂白 粉溶液滅菌的清洗粉溶液滅菌的清洗3 34 4次）。次）。 器官培養(yǎng)課件 3. 3.接種、生長(zhǎng)及分化接種、生長(zhǎng)及分化 在無(wú)菌條件下操作，將莖段兩端用在無(wú)菌條件下操作，將莖段兩端用 解剖刀切去少許解剖刀切去少許( (以除去被殺菌劑傷害以除去被殺菌劑傷害 的的 組織組織) )，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，7d7d后

13、芽開(kāi)后芽開(kāi) 始萌發(fā)，莖尖展葉生長(zhǎng)，始萌發(fā)，莖尖展葉生長(zhǎng)，20d20d后長(zhǎng)至后長(zhǎng)至1 1 2cm2cm； 器官培養(yǎng)課件 4. 4.繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng) 萌生芽會(huì)不斷長(zhǎng)大，并可從莖段上分化出若干萌生芽會(huì)不斷長(zhǎng)大，并可從莖段上分化出若干 個(gè)叢生芽，這時(shí)可通過(guò)側(cè)芽增殖和叢生芽再生的方個(gè)叢生芽，這時(shí)可通過(guò)側(cè)芽增殖和叢生芽再生的方 式進(jìn)行繼代增殖，切割出叢生芽或?qū)⒂籽糠智谐擅渴竭M(jìn)行繼代增殖，切割出叢生芽或?qū)⒂籽糠智谐擅?段含段含1 12 2個(gè)節(jié)的莖段，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，每隔個(gè)節(jié)的莖段，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，每隔4 4周周 繼代一次。繼代一次。 對(duì)于增殖率過(guò)高的品種，小苗會(huì)變得非常細(xì)弱，對(duì)于增殖率過(guò)高的品種，小苗會(huì)

14、變得非常細(xì)弱， 一般需要轉(zhuǎn)入一般需要轉(zhuǎn)入MS+BA0.3MG/l+NAA0.1mg/L(MS+BA0.3MG/l+NAA0.1mg/L(或或 IBA0.3mg/L)IBA0.3mg/L)的低分裂素培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，再的低分裂素培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，再 轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中。轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中。 器官培養(yǎng)課件 5. 5.生根培養(yǎng)生根培養(yǎng) 將繼代增殖的叢生苗切成長(zhǎng)度為將繼代增殖的叢生苗切成長(zhǎng)度為2 23cm3cm的的 單株，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，單株，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，12d12d后便可生根。后便可生根。 當(dāng)根長(zhǎng)當(dāng)根長(zhǎng)0.5cm0.5cm，有，有2 24 4條白色的根系時(shí)即可出瓶條白色的根系時(shí)即可出瓶

15、移栽。在生根培養(yǎng)基中加入移栽。在生根培養(yǎng)基中加入0.3g/L0.3g/L活性炭可提活性炭可提 高生根質(zhì)量。高生根質(zhì)量。 器官培養(yǎng)課件 莖段莖段不定芽不定芽再生苗再生苗生根生根盆栽盆栽 愈傷組織愈傷組織 芽分化芽分化 器官培養(yǎng)課件 球莖類花卉是一類變態(tài)莖（球莖、鱗莖）的植物，球莖類花卉是一類變態(tài)莖（球莖、鱗莖）的植物， 其繁殖可用分球或鱗片進(jìn)行離體培養(yǎng)，達(dá)到大量增殖。其繁殖可用分球或鱗片進(jìn)行離體培養(yǎng)，達(dá)到大量增殖。 球莖類通常在地下培育，污染率比較高。對(duì)百合的鱗球莖類通常在地下培育，污染率比較高。對(duì)百合的鱗 莖消毒時(shí)，要把外面幾層的鱗片剝?nèi)ィJ(rèn)真用水清洗莖消毒時(shí)，要把外面幾層的鱗片剝?nèi)?，認(rèn)真用水

16、清洗 后，再將鱗莖底部臟的部分用鋒利小刀剝?nèi)?，在超凈后，再將鱗莖底部臟的部分用鋒利小刀剝?nèi)?，在超?工作臺(tái)上用工作臺(tái)上用70%70%酒精浸半分鐘，然后在酒精浸半分鐘，然后在0.1%0.1%升汞溶液升汞溶液 中浸泡中浸泡10-12min10-12min，用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌水沖洗3 34 4次，用消毒的濾次，用消毒的濾 紙吸干表面水分，切取鱗片接種于培養(yǎng)基上，通過(guò)芽紙吸干表面水分，切取鱗片接種于培養(yǎng)基上，通過(guò)芽 的誘導(dǎo)、增殖、成球與生根，培養(yǎng)成了完整植株。的誘導(dǎo)、增殖、成球與生根，培養(yǎng)成了完整植株。 器官培養(yǎng)課件 二、培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基 誘導(dǎo)、擴(kuò)繁和生根培養(yǎng)基大量的用誘導(dǎo)、擴(kuò)繁和生根培養(yǎng)基大量的用

17、MS培養(yǎng)培養(yǎng) 基，再加入不同濃度的不同種類的生長(zhǎng)素和細(xì)基，再加入不同濃度的不同種類的生長(zhǎng)素和細(xì) 胞分裂素。胞分裂素。 這是百合鱗莖誘導(dǎo)的植株這是百合鱗莖誘導(dǎo)的植株 器官培養(yǎng)課件 第三節(jié)第三節(jié) 葉的培養(yǎng)葉的培養(yǎng) 很多植物如香葉、天竺葵、秋海棠很多植物如香葉、天竺葵、秋海棠 等的葉片具有很強(qiáng)的再生能力，由于取等的葉片具有很強(qiáng)的再生能力，由于取 材方便，數(shù)量多且均一性較強(qiáng)，為適宜材方便，數(shù)量多且均一性較強(qiáng)，為適宜 的外植體。的外植體。 器官培養(yǎng)課件 一、培養(yǎng)過(guò)程一、培養(yǎng)過(guò)程 葉片從枝上摘取后，用水沖洗數(shù)小時(shí)，通葉片從枝上摘取后，用水沖洗數(shù)小時(shí)，通 過(guò)表面消毒后接種于固體培養(yǎng)基上。葉片在培過(guò)表面消毒后

18、接種于固體培養(yǎng)基上。葉片在培 養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況大多依賴于葉子離體時(shí)的成熟養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況大多依賴于葉子離體時(shí)的成熟 程度，一般說(shuō)來(lái)，幼葉比近成熟的葉生長(zhǎng)潛力程度，一般說(shuō)來(lái)，幼葉比近成熟的葉生長(zhǎng)潛力 大。很多植物的葉組織在離體培養(yǎng)條件下先形大。很多植物的葉組織在離體培養(yǎng)條件下先形 成愈傷組織，然后通過(guò)愈傷組織再分化出胚狀成愈傷組織，然后通過(guò)愈傷組織再分化出胚狀 體、莖、葉和根（圖體、莖、葉和根（圖7-27-2）。）。 器官培養(yǎng)課件 圖圖7-2 7-2 由葉組織培養(yǎng)經(jīng)愈傷組織及胚狀體再生植株由葉組織培養(yǎng)經(jīng)愈傷組織及胚狀體再生植株 器官培養(yǎng)課件 如從香石竹頂芽或腋芽下面取葉片，平如從香石竹頂芽或腋芽下面

19、取葉片，平 放在放在MS+1mg/LBAMS+1mg/LBA培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基上，5 5天后外植體開(kāi)天后外植體開(kāi) 始膨大，基部略有綠色愈傷組織形成，始膨大，基部略有綠色愈傷組織形成，1010天天 后開(kāi)始從基部分化出淺綠色小芽點(diǎn)，并逐漸后開(kāi)始從基部分化出淺綠色小芽點(diǎn)，并逐漸 長(zhǎng)成小芽叢，經(jīng)過(guò)生根培養(yǎng)后得到完整小植長(zhǎng)成小芽叢，經(jīng)過(guò)生根培養(yǎng)后得到完整小植 株。離體葉的培養(yǎng)也可以發(fā)生不定芽結(jié)構(gòu)。株。離體葉的培養(yǎng)也可以發(fā)生不定芽結(jié)構(gòu)。 器官培養(yǎng)課件 二、培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基 離體葉經(jīng)誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基（生長(zhǎng)素與細(xì)離體葉經(jīng)誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基（生長(zhǎng)素與細(xì) 胞分裂素的比值較大）的培養(yǎng)，形成愈傷組織，胞分裂素的比值較

20、大）的培養(yǎng)，形成愈傷組織， 愈傷組織轉(zhuǎn)接在分化培養(yǎng)基（生長(zhǎng)素與細(xì)胞分愈傷組織轉(zhuǎn)接在分化培養(yǎng)基（生長(zhǎng)素與細(xì)胞分 裂素比值較小）上，分化出不定芽。如：長(zhǎng)壽裂素比值較?。┥?，分化出不定芽。如：長(zhǎng)壽 花實(shí)生苗葉片，經(jīng)表面消毒后，切花實(shí)生苗葉片，經(jīng)表面消毒后，切 成成.5cm.5cm0.5cm0.5cm的方塊，接種于的方塊，接種于MS+1mg/L2,4MS+1mg/L2,4 D+0.1mg/L BAD+0.1mg/L BA培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)3030天左右的培養(yǎng)，天左右的培養(yǎng)， 葉片邊緣開(kāi)始出現(xiàn)淡綠色顆粒狀突起，繼續(xù)培葉片邊緣開(kāi)始出現(xiàn)淡綠色顆粒狀突起，繼續(xù)培 養(yǎng)后顆粒突起逐漸擴(kuò)大，以后形成質(zhì)地致

21、密的養(yǎng)后顆粒突起逐漸擴(kuò)大，以后形成質(zhì)地致密的 淡綠色愈傷組織塊。淡綠色愈傷組織塊。 器官培養(yǎng)課件 經(jīng)繼代培養(yǎng)后，獲得大量愈傷組織。將愈傷組經(jīng)繼代培養(yǎng)后，獲得大量愈傷組織。將愈傷組 織切成織切成0.5cm0.5cm0.5cm0.5cm的大小，接種到培養(yǎng)基的大小，接種到培養(yǎng)基 MS+1mg/L BA +0.1mg/LNAAMS+1mg/L BA +0.1mg/LNAA上，上，1515天后愈傷天后愈傷 組織明顯轉(zhuǎn)綠和增大；組織明顯轉(zhuǎn)綠和增大；5050天左右開(kāi)始產(chǎn)生綠色天左右開(kāi)始產(chǎn)生綠色 芽點(diǎn)并陸續(xù)分化出芽，每塊愈傷組織可分化出芽點(diǎn)并陸續(xù)分化出芽，每塊愈傷組織可分化出 5 56 6株無(wú)根苗，在株無(wú)根苗

22、，在1/2MS1/2MS培養(yǎng)基上，全部長(zhǎng)出培養(yǎng)基上，全部長(zhǎng)出 不定根。不定根。 器官培養(yǎng)課件 楊樹(shù)、中華獼猴桃等植物常從葉柄或葉脈的切口楊樹(shù)、中華獼猴桃等植物常從葉柄或葉脈的切口 處形成愈傷組織。用綠巨人幼葉的葉柄，在含處形成愈傷組織。用綠巨人幼葉的葉柄，在含 5mg/L BA5mg/L BA的的MSMS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中培養(yǎng)，2 2個(gè)月后葉柄處個(gè)月后葉柄處 形成致密綠色愈傷組織，每塊愈傷組織上可分化形成致密綠色愈傷組織，每塊愈傷組織上可分化 8 81010個(gè)不定芽，當(dāng)不定芽長(zhǎng)至個(gè)不定芽，當(dāng)不定芽長(zhǎng)至0.5cm0.5cm時(shí)，將不定時(shí)，將不定 芽同一部分愈傷組織移入到含芽同一部分愈傷組織移入

23、到含2mg/L BA2mg/L BA和和 0.2mg/L NAA0.2mg/L NAA的培養(yǎng)基中，不定芽迅速伸長(zhǎng)并長(zhǎng)的培養(yǎng)基中，不定芽迅速伸長(zhǎng)并長(zhǎng) 成健壯小苗。大蒜貯藏葉及水仙的鱗片葉直接或成健壯小苗。大蒜貯藏葉及水仙的鱗片葉直接或 經(jīng)愈傷組織再生出球狀體或小鱗而發(fā)育成再生植經(jīng)愈傷組織再生出球狀體或小鱗而發(fā)育成再生植 株。株。 器官培養(yǎng)課件 葉離體培養(yǎng)可直接形成不定芽結(jié)構(gòu)。用綠葉離體培養(yǎng)可直接形成不定芽結(jié)構(gòu)。用綠 巨人幼葉接種到巨人幼葉接種到MSMS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基中，在0.20.20.5mg/L 0.5mg/L BABA和和0.70.72mg/L 2,42mg/L 2,4D D的誘導(dǎo)下，的

24、誘導(dǎo)下，5 5周后切口處周后切口處 出現(xiàn)綠色突起，再接種到不定芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)出現(xiàn)綠色突起，再接種到不定芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng) 基基(MS+2(MS+23mg/L BA +0.33mg/L BA +0.30.4mg/L NAA)0.4mg/L NAA)后，后， 3 34 4周形成不定芽，切割小芽繼續(xù)培養(yǎng)，每周形成不定芽，切割小芽繼續(xù)培養(yǎng)，每4 4周可周可 增殖增殖4 46 6倍。用大豆葉柄基部插入分化培養(yǎng)基倍。用大豆葉柄基部插入分化培養(yǎng)基 （1/2MS+1mg/L BAP1/2MS+1mg/L BAP）上誘導(dǎo)，）上誘導(dǎo)，2 2周后從葉柄基周后從葉柄基 部長(zhǎng)出小芽和叢芽，誘導(dǎo)率達(dá)部長(zhǎng)出小芽和叢芽，誘導(dǎo)

25、率達(dá)60%60%70%70%。 器官培養(yǎng)課件 第四節(jié)第四節(jié) 原球莖培養(yǎng)原球莖培養(yǎng) 在蘭科植物組培中在蘭科植物組培中, ,常從莖尖、側(cè)芽或常從莖尖、側(cè)芽或 種子培養(yǎng)中產(chǎn)生原球莖（前者可看成種子培養(yǎng)中產(chǎn)生原球莖（前者可看成 器官培養(yǎng)，后者可看成胚培養(yǎng)），原器官培養(yǎng)，后者可看成胚培養(yǎng)），原 球莖可以增殖萌發(fā)出小植株。球莖可以增殖萌發(fā)出小植株。 器官培養(yǎng)課件 一、以莖尖培養(yǎng)來(lái)誘導(dǎo)原球莖一、以莖尖培養(yǎng)來(lái)誘導(dǎo)原球莖 （一）取材及滅菌（一）取材及滅菌 從生長(zhǎng)的植株上切取從生長(zhǎng)的植株上切取5- 5- 15cm15cm的新芽，去掉苞葉，用流水沖洗干凈，的新芽，去掉苞葉，用流水沖洗干凈， 放入放入70%70%酒精中浸泡