第十二單元移植免疫學檢測

1、2021/6/71 第十二單元 移植免疫學檢測移植免疫學檢測 2021/6/72 實驗一實驗一 HLA微量淋巴細胞毒試驗微量淋巴細胞毒試驗 2021/6/73 微量淋巴細胞毒試驗（微量淋巴細胞毒試驗（Microcytotoxicity assay）是）是 在經典的補體依賴的淋巴細胞毒試驗（在經典的補體依賴的淋巴細胞毒試驗（complement dependent cytotoxicity，CDC）基礎上發(fā)展而來的一項）基礎上發(fā)展而來的一項 實驗技術，目前已經廣泛應用于器官移植供、受者間的實驗技術，目前已經廣泛應用于器官移植供、受者間的 交叉配型、復發(fā)性流產的封閉抗體檢測等多個領域。在交叉配型、

2、復發(fā)性流產的封閉抗體檢測等多個領域。在 器官移植的文獻中提及的器官移植的文獻中提及的CDC法多指微量淋巴細胞毒法。法多指微量淋巴細胞毒法。 微量淋巴細胞毒試驗概念微量淋巴細胞毒試驗概念 2021/6/74 v器械器械 微量淋巴細胞毒反應板（泰薩奇板）、倒置熒光顯微微量淋巴細胞毒反應板（泰薩奇板）、倒置熒光顯微 鏡、鏡、 微量移液器、吸管、溫箱、離心機、磁架等微量移液器、吸管、溫箱、離心機、磁架等 。 v試劑試劑 淋巴細胞分離液淋巴細胞分離液(Ficoll, 1.077)、T/B淋巴細胞分離淋巴細胞分離 磁珠及洗滌液、凍干補體、熒光染色液、供者全血磁珠及洗滌液、凍干補體、熒光染色液、供者全血23

3、ml （EDTA或或ACD抗凝）、受者血清抗凝）、受者血清2ml、陰性對照血清、陰性對照血清 （可用（可用1640培養(yǎng)液或培養(yǎng)液或PBS替代）、陽性對照血清（抗全淋替代）、陽性對照血清（抗全淋 巴細胞抗體巴細胞抗體ALG/ATG）。）。 實驗器材和材料實驗器材和材料 2021/6/75 v淋巴細胞的分離（淋巴細胞的分離（FicollFicoll法）：法）： 1. 將供者全血用將供者全血用PBS(pH7.4)緩沖液緩沖液 按按1:1稀釋，混勻備用；稀釋，混勻備用； 2. 取取15ml離心管一支，加入一定體積的離心管一支，加入一定體積的Ficoll液，用吸取稀釋液，用吸取稀釋 后的供者全血，沿試管

4、壁緩慢加入，使全血置于后的供者全血，沿試管壁緩慢加入，使全血置于Ficoll上層。上層。 Ficoll液與稀釋后的全血體積之比為液與稀釋后的全血體積之比為1:2； 3. 15002000rpm/min（半徑（半徑15cm水平轉子）離心水平轉子）離心10min； 4. 取出離心管，吸取中間白膜層，置于另一干凈離心管中；取出離心管，吸取中間白膜層，置于另一干凈離心管中； 5. 加入加入PBS，洗滌；，洗滌； 6. 2000rpm/min離心離心5min，傾出上清液；，傾出上清液； 7. 重復步驟重復步驟5、6； 8. PBS液調整細胞濃度為液調整細胞濃度為2109/L。 實驗方法實驗方法 2021

5、/6/76 v 淋巴細胞毒反應（一步法）淋巴細胞毒反應（一步法） 1. 于泰薩奇板每孔中加入于泰薩奇板每孔中加入5l石蠟油，以防反應物揮發(fā)；石蠟油，以防反應物揮發(fā)； 2. 建立反應格局，每位待測標本均應設立陰性對照、陽性建立反應格局，每位待測標本均應設立陰性對照、陽性 對照；對照； 3. 分別于各相應孔中加入分別于各相應孔中加入1l淋巴細胞（混合淋巴細胞、淋巴細胞（混合淋巴細胞、T 淋巴細胞、淋巴細胞）、淋巴細胞、淋巴細胞）、1l待測血清以及待測血清以及2l補體；補體； 4. 2225溫度下孵育溫度下孵育1h； 5. 熒光染色液染色并終止反應。熒光染色液染色并終止反應。 2021/6/77 結

6、果應在染色后結果應在染色后10分鐘內觀察，以防熒光猝滅。特分鐘內觀察，以防熒光猝滅。特 殊情況不能立即觀察時，應將反應板用避光紙包緊，置殊情況不能立即觀察時，應將反應板用避光紙包緊，置 于于4冰箱中，盡早觀察結果。死亡細胞由于熒光染料進冰箱中，盡早觀察結果。死亡細胞由于熒光染料進 入而呈紅色（染料中的入而呈紅色（染料中的EB與與DNA結合），體積略為增大。結合），體積略為增大。 活細胞因為細胞膜完整而呈明亮的綠色（染料中的活細胞因為細胞膜完整而呈明亮的綠色（染料中的CFDA 與細胞膜蛋白結合），具有強折光性。與細胞膜蛋白結合），具有強折光性。 結果觀察結果觀察 2021/6/78 根據(jù)死亡細胞

7、占全部細胞的百分比來計分，根據(jù)死亡細胞占全部細胞的百分比來計分， 目前普遍采用國際通用的目前普遍采用國際通用的NIH計分方法，如下表。計分方法，如下表。 判斷死細胞的百分比需要操作者具備一定的工作判斷死細胞的百分比需要操作者具備一定的工作 經驗，大致原則為：可疑經驗，大致原則為：可疑2分，分，30為為4，過半記，過半記6， 強陽寫強陽寫8。 結果判斷結果判斷 2021/6/79 淋巴細胞毒試驗記分標準淋巴細胞毒試驗記分標準 死細胞（死細胞（%）記分記分意義意義 0100陰性陰性 11202陰性可疑陰性可疑 21404陽性可疑陽性可疑 41806陽性陽性 808強陽性強陽性 2021/6/710

8、 1. 每份標本都必須設立陰、陽性對照；每份標本都必須設立陰、陽性對照； 2. 溫度過低有可能產生假陰性結果；溫度過低有可能產生假陰性結果； 3. 只有當陰性和陽性對照結果準確時，該實驗的只有當陰性和陽性對照結果準確時，該實驗的 陽性和陰性結果方能成立。陽性和陰性結果方能成立。 注意事項注意事項 2021/6/711 v淋巴細胞毒試驗是測定患者機體內是否含有特異性針對供淋巴細胞毒試驗是測定患者機體內是否含有特異性針對供 者的淋巴細胞毒抗體，檢測的是者的淋巴細胞毒抗體，檢測的是HLA特異性的特異性的IgG和和IgM 抗體，包括抗體，包括HLA-I類抗體和類抗體和II類抗體。由于混合淋巴細胞類抗體

9、。由于混合淋巴細胞 中主要為中主要為T淋巴細胞，淋巴細胞，B淋巴細胞數(shù)量較少，而淋巴細胞數(shù)量較少，而HLA-II類類 抗體在抗體在T淋巴細胞表面不表達，僅在淋巴細胞表面不表達，僅在B淋巴細胞表面表達，淋巴細胞表面表達， 因而，利用混合淋巴細胞進行因而，利用混合淋巴細胞進行CDC試驗時，對試驗時，對HLA-I類抗類抗 體陰性、體陰性、II類抗體陽性的患者，易產生漏檢，而造成這種類抗體陽性的患者，易產生漏檢，而造成這種 結果的原因是由于混合淋巴細胞中結果的原因是由于混合淋巴細胞中B淋巴細胞占全部細胞淋巴細胞占全部細胞 的比例較少所致。的比例較少所致。 v為了更加真實、全面地反應患者的免疫狀態(tài)，我們

10、應該如為了更加真實、全面地反應患者的免疫狀態(tài)，我們應該如 何改善上述局限性對實驗結何改善上述局限性對實驗結 果造成的影響？果造成的影響？ 南方醫(yī)科大學南方醫(yī)科大學 裘宇容裘宇容 實驗討論實驗討論 2021/6/712 實驗二實驗二 群體反應性抗體檢測群體反應性抗體檢測 2021/6/713 群體反應抗體（群體反應抗體（Pannel reactive antibody）是指存）是指存 在于某些人體內的抗人類白細胞在于某些人體內的抗人類白細胞(HLA)抗體，可通過輸抗體，可通過輸 血、輸血小板、妊娠以及器官移植等免疫途徑獲得。血、輸血小板、妊娠以及器官移植等免疫途徑獲得。 PRA測定即是檢測患者體

11、內是否存在測定即是檢測患者體內是否存在HLA抗體、抗體抗體、抗體 的水平高低以及抗體特異性如何。的水平高低以及抗體特異性如何。PRA對于患者是否發(fā)對于患者是否發(fā) 生排斥、移植物的存活狀態(tài)以及器官功能的實現(xiàn)都有著生排斥、移植物的存活狀態(tài)以及器官功能的實現(xiàn)都有著 不可忽視的作用。不可忽視的作用。 群體反應性抗體的概念群體反應性抗體的概念 2021/6/714 實驗原理實驗原理 將涵蓋不同地域、不同人種的將涵蓋不同地域、不同人種的HLA-I類和類和II類純化類純化IgG 抗原預先包被于泰薩奇微孔板中，與待測、血清反應，再加抗原預先包被于泰薩奇微孔板中，與待測、血清反應，再加 入堿性磷酸酶標記的二抗，

12、孵育后加入酶作用底物，待顯色入堿性磷酸酶標記的二抗，孵育后加入酶作用底物，待顯色 反應完成后終止反應。如果待測血清中存在反應完成后終止反應。如果待測血清中存在HLA-I類抗體，類抗體， 則相應的則相應的HLA-I類混合抗原孔中會發(fā)生特異性的抗原抗體反類混合抗原孔中會發(fā)生特異性的抗原抗體反 應，反應孔呈現(xiàn)藍色的陽性反應結果；若無相應抗體，則反應，反應孔呈現(xiàn)藍色的陽性反應結果；若無相應抗體，則反 應孔中為無色陰性結果。應孔中為無色陰性結果。 2021/6/715 v器械：器械： 各種移液器、吸頭、溫箱、離心機各種移液器、吸頭、溫箱、離心機 、微量酶標儀等。、微量酶標儀等。 v試劑：試劑： 抗原微孔

13、板（以抗原微孔板（以LAT mix tray為例）為例） 對照血清（對照血清（10serum control） 去離子水去離子水(sterile deionized water) 酶標二抗（酶標二抗（100alkaline phosphatase-conjugated anti- human IgG) 抗體稀釋液（抗體稀釋液（1antibody diluent） 洗液（洗液（10wash buffer） 底物底物A和和B（1colorimetric enzyme substrate A&B） 反應終止液（反應終止液（1stop reagent） 實驗器材和材料實驗器材和材料 2021/6/71

14、6 v 試劑準備試劑準備 1. 在第一次使用時，至少提前在第一次使用時，至少提前20min取出凍干對照血清以取出凍干對照血清以2ml去離子水輕去離子水輕 輕搖震使其徹底溶解。將溶解后的對照血清溶液分裝，每管輕搖震使其徹底溶解。將溶解后的對照血清溶液分裝，每管100l， 儲存在儲存在-20冰箱中，每次實驗前取出，恢復至室溫后使用；冰箱中，每次實驗前取出，恢復至室溫后使用； 2. 將洗液用去離子水將洗液用去離子水(sterile deionized water)按按1：9稀釋，可根據(jù)工作頻稀釋，可根據(jù)工作頻 率一次性配制一定量的工作液，率一次性配制一定量的工作液，4冰箱貯存?zhèn)溆?；冰箱貯存?zhèn)溆茫?3

15、. 將待測標本用抗體稀釋液（將待測標本用抗體稀釋液（antibody diluent)按按1：2稀釋，約稀釋，約60l/test； 4. 酶標二抗（酶標二抗（alkaline phosphatase-conjugated anti-human IgG)在第一次在第一次 洗滌之前用抗體稀釋液按洗滌之前用抗體稀釋液按1：100稀釋，稀釋，50l/test； 5. 底物底物A、B (colorimetric enzyme substrate A&B)在第二次洗滌之前按在第二次洗滌之前按1： 1比例混勻，比例混勻，50l/test。 實驗方法實驗方法 2021/6/717 v 酶聯(lián)免疫吸附反應酶聯(lián)免疫

16、吸附反應 1. 根據(jù)反應格局表，將待測血清和各種對照品加入相應的孔中，每孔根據(jù)反應格局表，將待測血清和各種對照品加入相應的孔中，每孔10l（陰性對（陰性對 照孔加入抗體稀釋液，陽性對照孔和質控孔加入對照血清）；照孔加入抗體稀釋液，陽性對照孔和質控孔加入對照血清）； 2. 蓋好反應板，蓋好反應板，2225孵育孵育60min； 3. 用力將反應板中的血清甩出，并在墊有紙巾的實驗臺面上叩擊反應板兩至三次，用力將反應板中的血清甩出，并在墊有紙巾的實驗臺面上叩擊反應板兩至三次， 在加入下一液體前，請注意加蓋，保持反應孔濕潤；在加入下一液體前，請注意加蓋，保持反應孔濕潤； 4. 于每孔中加入洗液于每孔中加

17、入洗液(wash buffer) 20-30l， 輕輕晃動反應板，甩出洗液，叩擊輕輕晃動反應板，甩出洗液，叩擊 反應板兩至三次；反應板兩至三次； 5. 再重復步驟再重復步驟9兩次；兩次； 6. 加入加入10ul酶標二抗，輕輕晃動反應板酶標二抗，輕輕晃動反應板, 2225孵育孵育40min； 7. 重復步驟重復步驟9三次；三次； 8. 每孔加入每孔加入10l混合好的底物，混合好的底物，37避光孵育避光孵育1015min（一般不要超過（一般不要超過15min）；）； 9. 待質控孔和陽性對照變成深藍色后待質控孔和陽性對照變成深藍色后, 每孔加入每孔加入5l 終止液終止液(stop reagent)

18、，蓋上反應，蓋上反應 板，板，15分鐘后觀察結果。分鐘后觀察結果。 2021/6/718 肉眼觀察反應結果，藍色或深藍色為陽性肉眼觀察反應結果，藍色或深藍色為陽性, 無色為陰性，無色為陰性， 陽性結果的顏色深淺程度與待測標本陽性結果的顏色深淺程度與待測標本HLA抗體水平的高低抗體水平的高低 成正比。有條件時可在微量酶標儀上讀取吸光度值，并根據(jù)成正比。有條件時可在微量酶標儀上讀取吸光度值，并根據(jù) 陰、陽性對照的吸光度值判定標本的陰、陽性。盡量在顯色陰、陽性對照的吸光度值判定標本的陰、陽性。盡量在顯色 終止反應后終止反應后1小時內讀取反應結果，上機前請移去反應板蓋。小時內讀取反應結果，上機前請移去

19、反應板蓋。 如因特殊情況需延遲觀察結果時，請將反應板貯存于如因特殊情況需延遲觀察結果時，請將反應板貯存于25 冰箱中，此情況下可能會引起反應孔吸光度值降低，產生假冰箱中，此情況下可能會引起反應孔吸光度值降低，產生假 陰性結果。陰性結果。 觀察結果觀察結果 2021/6/719 注意事項注意事項 v 洗滌洗滌 洗滌是洗滌是ELISA實驗中關鍵的步驟，如洗滌不充分，實驗中關鍵的步驟，如洗滌不充分， 則可能出現(xiàn)本底過高的現(xiàn)象；但洗滌過度，亦可能丟失一則可能出現(xiàn)本底過高的現(xiàn)象；但洗滌過度，亦可能丟失一 些陽性反應；些陽性反應； v 溫度溫度 除二抗反應過程外，本實驗以除二抗反應過程外，本實驗以2225

20、為宜，溫度為宜，溫度 過高或過低都會對實驗結果產生不同性質的干擾；過高或過低都會對實驗結果產生不同性質的干擾； v 對于強陽性標本，可加大稀釋倍數(shù)后再進行檢測；對于強陽性標本，可加大稀釋倍數(shù)后再進行檢測； v 本實驗的難點為陽性結果的評價和判斷，因此，如果操作本實驗的難點為陽性結果的評價和判斷，因此，如果操作 者具備豐富的者具備豐富的HLA專業(yè)基礎知識，將會大大提高本實驗專業(yè)基礎知識，將會大大提高本實驗 結果判斷的可靠性和準確性。結果判斷的可靠性和準確性。 2021/6/720 v 結果評價標準結果評價標準 1. 依據(jù)實驗條件不同，各實驗室結果具有不同的波動范圍；依據(jù)實驗條件不同，各實驗室結果

21、具有不同的波動范圍； 2. 當空白對照、陰性對照、陽性對照以及質控孔的當空白對照、陰性對照、陽性對照以及質控孔的OD值均值均 在試劑盒可接受范圍時，說明實驗結果準確可靠；在試劑盒可接受范圍時，說明實驗結果準確可靠； 3. 肉眼判斷結果時，應根據(jù)反應孔的顏色深淺計分，計分方肉眼判斷結果時，應根據(jù)反應孔的顏色深淺計分，計分方 法同法同“微量淋巴細胞毒試驗微量淋巴細胞毒試驗”，以，以0，2，4，6，8分來表分來表 示反應由弱至強的程度。示反應由弱至強的程度。 4. 對于對于HLA混合抗體檢測，建議混合抗體檢測，建議4分以上為陽性。對于分以上為陽性。對于2分結分結 果的定義是本實驗的難點，應結合患者機

22、體免疫狀態(tài)而定。果的定義是本實驗的難點，應結合患者機體免疫狀態(tài)而定。 結果分析結果分析 2021/6/721 vCut-off值的確定值的確定 v不同的不同的HLA抗體檢測試劑盒，可設置不同的調節(jié)抗體檢測試劑盒，可設置不同的調節(jié)Cut- off值，建議在值，建議在HLA抗體初篩時適當下調抗體初篩時適當下調Cut-off值；值； v對于對于HLA抗體特異性及抗體水平的檢測，可根據(jù)試劑抗體特異性及抗體水平的檢測，可根據(jù)試劑 盒類型（盒類型（LAT1240/1288/1HD/240）相應上調）相應上調Cut-off值。值。 v調節(jié)調節(jié)Cut-off值的計算：值的計算： v調節(jié)調節(jié)Cut-off（陽性

23、孔均值空白均值）（陽性孔均值空白均值）校正系校正系 數(shù)數(shù)空白均值空白均值 vPRA值的計算值的計算 PRA陽性孔數(shù)陽性孔數(shù)/總檢測孔數(shù)總檢測孔數(shù)100% 2021/6/722 南方醫(yī)科大學南方醫(yī)科大學 裘宇容裘宇容 如孔如孔2A2E均為陽性，根據(jù)反應工作表格局，說均為陽性，根據(jù)反應工作表格局，說 明抗體特異性為抗明抗體特異性為抗HLA-A1抗體；如孔抗體；如孔2A2E中有中有3 孔強陽性，而孔強陽性，而2孔陰性，應該如何分析？孔陰性，應該如何分析？ 實驗討論實驗討論 2021/6/723 實驗三實驗三 病例討論病例討論 2021/6/724 v 病歷病歷 患者吳xx,女性，39歲，漢族，廣東省

24、汕頭籍，家住汕頭市鱸崗 鎮(zhèn)，2007年5月18入院。 主訴：主訴： 尿檢、腎功異常6年，加重半年。緣于2001年5月無明顯誘因出現(xiàn) 頭暈，腰酸痛，在當?shù)蒯t(yī)院就診，査尿常規(guī)提示尿蛋白（+），腎功 異常（肌酐130umol/L左右），給予對癥治療（具體不詳），癥狀緩 解。此后病情平穩(wěn)。監(jiān)測腎功肌酐逐步上升，2006年9月為 200umol/L,11月再次出現(xiàn)頭暈，伴惡心，嘔吐，測肌酐達700umol/L, 就診于西安某醫(yī)院，診斷“慢性腎功不全尿毒癥期”，行左前臂內 瘺術，術后內瘺栓塞。擬行腎移植術，但因無合適供體，回當?shù)蒯t(yī)院 繼續(xù)治療。2007-5-15復查肌酐1400umol/L,為行腎移植術，

25、就診我院， 門診以“慢性腎功能不全尿毒癥期”收入科。病程中精神、飲食一 般。24小時尿量1400ml左右，大便正常，體重無明顯變化?；橛罚?患者23歲已婚，生有2子3女，流產1次 2021/6/725 v 查體：查體： 體溫 36.6 0C，脈搏80次/分，呼吸18次/分，血壓150/100mmHg 發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，神志清楚，精神欠佳，慢性病容，貧血貌，全 身皮膚、黏膜無黃染，全身淺表淋巴結未觸及腫大。頸靜脈無怒張， 頸動脈無異常搏動，未捫及包塊，甲狀腺不腫大，氣管居中，頸軟無 抵抗。胸廓對稱無畸形，無局限性隆起，雙側乳房對稱，未捫及腫塊。 胸壁未見靜脈曲張，胸式呼吸存在，節(jié)律規(guī)整，叩診

26、呈清音，肺肝界 位于右鎖骨中線第5肋間，雙肺呼吸音清，未聞及干濕性羅音及胸膜 摩擦音。心前區(qū)無隆起，心尖搏動不明顯，未見異常搏動，心界不大， 心率80次/分，律齊，各瓣膜聽診區(qū)未聞及病理性雜音，無心包摩擦 音。腹平坦，腹肌軟，全腹無壓痛及反跳痛，未捫及包塊，肝脾肋緣 下未觸及。肝脾及雙腎區(qū)無叩擊痛，移動性濁音陰性，腸鳴音正常3 5次/分。生理反射存在，病理反射未引出。?？茩z查: 雙側肋脊角 未見異常隆起，皮膚無紅腫，雙腎區(qū)平坦，未觸及包塊，雙側肋脊點 無明顯壓痛，雙腎區(qū)無叩擊痛，未聞及血管雜音。雙側輸尿管行徑無 壓痛點，恥骨上區(qū)無膨隆及壓痛，膀胱叩診空虛。 2021/6/726 v 實驗室檢查

27、：實驗室檢查： 血常規(guī)：WBC 4.42G/L，NEU% 68.5%，RBC 2.37G/L，HGB 60g/L，HCT 0.193,PLT 132G/L；血型：“B”型；血生化：BUN 25.4mmol/L，Cr 975umol/L,GLU 4.7mmol/L，K+ 3.51mmol/L，Ca2 2.13mmol/L，TG1.35mmol/L，Tco2 21.1mmol/L；肝功能轉氨酶、膽 紅素結果正常；ALB 39.8g/L；自身抗體陰性；凝血四項基本正常； 乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病及結核相關檢查均陰性；腫瘤標記物檢查 未見異常；尿常規(guī)：尿蛋白（+），尿白細胞（+），尿隱血（+）。 PR

28、A40。 v 心電圖：心電圖：1.竇性心律，2.左室肥厚。 v 胸片：胸片：心影增大，符合尿毒癥性心肌病。 v 腹部腹部B超：超：1.雙腎縮小，實質回聲增強，左腎囊腫，2.右側附件區(qū)囊 性占位，建議定期復查，3.肝、膽、胰、脾未見明顯異常。 v 超聲心動圖：超聲心動圖：1.左房輕度增大，2.主動脈瓣反流（輕度），3.左室 順應性減低。 v 胃鏡：胃鏡：十二指腸球炎。 2021/6/727 v 討論討論 患者高PRA,腎移植術前、術后注意事項。 患者出現(xiàn)高患者出現(xiàn)高PRAPRA的可能原因有哪些？的可能原因有哪些？ 等待移植的患者術前如果接受過輸血治療、或者前一次移植后因 排斥而導致移植物失功以及

29、女性患者曾經生育過孩子（妊娠），那 么患者體內的免疫系統(tǒng)有可能受到來自其他個體（同種異體）的人 類白細胞抗原（HLA）分子刺激（致敏），導致患者的免疫系統(tǒng)產 生針對同種異體HLA分子的特異性抗體，并釋放到外周血液中，我 們將這些抗體稱為群體反應性抗體（Panel Reactive Antibody, PRA）， 簡稱為PRA。PRA陽性受者稱為致敏受者，PRA40%的受者稱為高 致敏受者?；颊呱?子3女，流產1次。這可能是高PRA的主要原因。 高高PRAPRA患者的器官移植存在哪些危害？患者的器官移植存在哪些危害？ 研究表明，PRA在實體器官（腎、心、肺、肝等）移植排斥反 應中扮演了重要角色，不僅與腎移植超急性排斥反應密切相關，而 且與移植物功能延遲、急性排斥、慢性排斥以及移植物存活率下降 也有關系 。 2021/6/728 v PRA陽性陽性患者在移植配型上應嚴格注意哪些問題？患者