畢業(yè)論文散尾葵葉枯病病原菌鑒定和生物學(xué)特性研究

1、散尾葵葉枯病病原菌鑒定和生物學(xué)特性研究海 南 大 學(xué)畢 業(yè) 論 文（設(shè)計）題 目：散尾葵葉枯病病原鑒定及其生物 學(xué)特性 學(xué) 號： 姓 名： 年 級： 07制藥工程（農(nóng)藥方向） 學(xué) 院： 環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院 系 別： 制藥工程系 專 業(yè)： 制藥工程（農(nóng)藥方向） 指導(dǎo)教師： 完成日期： 2010年 11 月 5 日 摘 要散尾葵（chrysalidocarpuslutescens h.wendl）葉枯病是散尾葵上的一種重要病害，該病嚴(yán)重影響了散尾葵的生長發(fā)育及其觀賞價值。目前，國內(nèi)對該病的防治報道較多，但還未查到對其病原物相關(guān)研究的報道，為了進(jìn)一步做好防治工作，本文對該病害病原的鑒定及生物學(xué)特性進(jìn)

2、行了基礎(chǔ)性研究。散尾葵葉枯病病原主要危害散尾葵葉部，尤其是幼嫩葉尖，輕者使整片葉片干枯，重者會導(dǎo)致植株整株死亡。通過試驗及相關(guān)資料顯示，該病原菌為真菌門半知菌類，絲孢綱，叢梗孢目，叢梗孢科，帚梗柱孢屬，帚梗柱枝菌（cylindrocladium quinqueseptatu figueredo）。該屬真菌常引起植物焦枯病害（如桉樹焦枯病eucaly puts dicback）和根、莖腐敗病（如水稻葉鞘腐敗病rice sheath rot）等，對種植農(nóng)業(yè)、園藝行業(yè)等有較大影響。關(guān)鍵詞：散尾葵；葉枯?。昏b定；生物學(xué)特性abstractchrysalidocarpus lutescens （chry

3、salidocarpuslutescens h.wendl）leaf blight is an important disease on the chrysalidocarpus lutescens, chrysalidocarpus lutescens the disease has seriously affected the growth and development and ornamental value. at present, there is no report on the prevention and treatment of disease, but has not y

4、et found its coverage of pathogen research, in order to further improve relevant prevention and control work, this pathogen in the disease and the biological characteristics of the basic research .chrysalidocarpus lutescens leaf blight pathogen primarily affecting san chrysalidocarpus lutescens leav

5、es, especially the young tip,the light so that the entire piece dry leaves, weight of whole plant could cause death. by testing and related information, the pathogen fungus is fungi imperfect, hyphomycetes, moniliales, moniliaceae, cylindrocladium，cylindrocladium quinqueseptatu figueredo . the fungi

6、 cause plant scorch diseases and more (such as eucaly puts dicback) and the root and stem rot disease (such as rice sheath rot) and so on for agricultural, horticultural industries have a greater impact. keywords chrysalidocarpus lutescens； leaf blight；identification； biological characteristics；目 錄1

7、 材料與方法 41.1 材料來源 41.2 病原菌的分離及菌種的純化 41.3 分離菌株致病性測定 5 1.4 生物學(xué)特性測定 51.4.1 不同溫度對菌絲生長的影響 51.4.2 不同光照對菌絲生長的影響 51.4.3 不同ph值對病原菌菌絲生長的影響 51.4.4 不同碳源對病原菌菌絲生長的影響 61.4.5 不同氮源對病原菌菌絲生長的影響 61.4.6 病原菌菌絲致死溫度測定 61.4.7 病原菌產(chǎn)孢誘導(dǎo)及病原菌鑒定 62 結(jié)果與分析 72.1 癥狀描述 72.2 病原菌致病性測定 82.3 不同溫度對菌絲生長的影響 92.4 不同光照對菌絲生長影響 102.5 不同ph值對病原菌菌絲生

8、長的影響 102.6 不同碳源對病原菌菌絲生長的影響 112.7 不同氮源對病原菌菌絲生長的影響 122.8 病原菌菌絲致死溫度測定 142.9病原菌產(chǎn)孢誘導(dǎo)及病原菌鑒定 143 結(jié)論與討論 15致謝 17參考文獻(xiàn) 18散尾葵葉枯病病原菌鑒定及其生物學(xué)特性散尾葵（chrysalidocarpus lutescens h.wendl），又名黃椰子，為叢生常綠灌木或小喬木，棕櫚科 palmaceae，散尾葵屬 chrysalidocarpus h. wendl.植物1。散尾葵原產(chǎn)非洲的馬達(dá)加斯加島，世界各熱帶地區(qū)多有栽培，我國引種栽培廣泛，常栽種于草地、樹蔭、宅旁，也用于盆栽，是布置客廳、餐廳、會

9、議室、家庭居室、書房、臥室或陽臺的高檔盆栽觀葉植物。散尾葵易發(fā)生葉枯病、根腐病和介殼蟲類危害等，尤以葉枯病為害較重。散尾葵葉枯病是一種常見病害，其植株發(fā)病率高達(dá)36%，其中病株單株葉片發(fā)病率平均約為23%，對散尾葵生長影響很大，輕者使葉片干枯，重者會導(dǎo)致植株整株死亡。病菌最先侵染葉尖和葉緣，發(fā)病初期染病處呈褐色斑點或條塊狀斑塊，中期斑點或斑塊逐漸擴(kuò)大并相互連接，后期葉片呈現(xiàn)灰白狀干枯，嚴(yán)重影響到了散尾葵的觀賞性2。為了更深入地了解該病害病原菌及其病害特點，筆者對該病害病原進(jìn)行了鑒定及其生物學(xué)特性的測定。 1 材料與方法1.1 材料來源散尾葵病葉于2009年10月采自儋州兩院。1.2 病原菌的分

10、離及菌種的純化采用常規(guī)組織分離法34分離病原菌。采集田間自然發(fā)病典型的散尾葵葉片，剪取病健交界處組織，大小約為5mm5mm；用70%乙醇消毒10s，0.1%hgcl2(g/v)表面消毒30s；滅菌水沖洗34次，無菌操作接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（pda）5上，培養(yǎng)34d。在平板上標(biāo)記上面pda長出的不同類型的菌落，編號1號、2號，無菌操作分別將1號、2號菌種接種到pda平板上，培養(yǎng)45d。采用單菌絲分離純化（由于未觀察到孢子，所以選擇使用菌絲段純化）4，用分別用滅菌水將1號、2號菌株配置成菌絲懸浮液（注意打散菌絲，使菌絲成為單個菌絲段，不互相纏繞），用接種環(huán)取1環(huán)菌絲懸浮液與10ml已融化的

11、pda培養(yǎng)基（約40）充分混合，倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，置于28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2d后，從培養(yǎng)皿中挑取單個分散的菌落移植到pda培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)入pda試管斜面保存5。1.3 分離菌株致病性測定根據(jù)柯赫氏法則6進(jìn)行寄主活體接種測定。在田間選取健康的散尾葵葉片18片，用無菌水清洗葉片表面，在每其中9片葉面用消毒過的針輕輕刺傷葉片表皮，將純培養(yǎng)在pda上的1號、2號菌打菌餅（菌餅大小約為3mm）然后接種到葉片的傷口處，以無菌的pda培養(yǎng)基塊做對照并進(jìn)行分組為a（1號）、b（2號）、c（ck），每組三個重復(fù)，剩余9片葉片按上述方法進(jìn)行無傷接種處理（不刺傷葉片表皮），分別依次編號為d（1號）

12、、e（2號）、f(ck)，保溫保濕，5d后觀察。如果該病原菌能使散尾葵發(fā)病，并與田間自然發(fā)病癥狀相比較，若存在相同癥狀則將長出的病斑采用1.2所述方法分離得到病原菌，并將兩次獲得的病原菌作比較，判斷兩次提取的病原菌是否相同，以確定該菌為致病菌。1.4 生物學(xué)特性測定1.4.1 不同溫度對菌絲生長的影響在無菌操作條件下，將直徑5mm菌齡相同的菌餅移到pda培養(yǎng)基平板中央，分別置于15、20、25、28、30和37的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察菌絲生長情況，每天測量菌落直徑，比較在不同溫度下菌絲生長速率。5d后用十字交叉法測量菌落直徑。每處理三個重復(fù)。1.4.2 不同光照對菌絲生長的影響將直徑為5mm的

13、菌齡相同（培養(yǎng)4d）的菌餅接種到pda培養(yǎng)基平板中央，分別置于24h完全光照，12小時光照和黑暗交替，24小時完全黑暗3中環(huán)境中，在28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6d后測量菌落直徑。每處理三個重復(fù)。1.4.3 不同ph值對菌絲生長的影響制作pda培養(yǎng)基，用0.1mol/l的hcl和naoh將其ph值分別調(diào)節(jié)到4、5、6、7、8、9、10這7個梯度，濕熱滅菌（121,20min），再用無菌的0.1mol/l的hcl和naoh重新調(diào)節(jié)ph值后倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中制成平板7；用直徑為5mm的打孔器，取菌落邊緣的菌餅（在pda平板上培養(yǎng)4d），接種到不同ph值的培養(yǎng)基平板中央，置于28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6d后

14、觀察菌落狀況。每處理值三個重復(fù)。1.4.4 不同碳源對菌絲生長的影響使用czapek固體培養(yǎng)基8為基礎(chǔ)培養(yǎng)基：mgso47h2o 0.5g, kh2po4 1g，kcl 0.5g，feso47h2o 0.01g，nano3 2g(純氮約0.3294g)，瓊脂 20g，蒸餾水定容至1000ml。另外，分別以等當(dāng)量的葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、d-果糖、d-甘露糖、d-木糖作為碳源（以20g葡萄糖含碳量為標(biāo)準(zhǔn)），配置成不同碳源7的培養(yǎng)基，濕熱滅菌（121，20min），然后制成平板，在平板中央接入直徑為5mm菌齡相同的菌餅；置于28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5d后觀察菌落狀況。每處理三個重復(fù)。1.4.5

15、不同氮源對菌絲生長的影響使用czapek固體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基：mgso47h2o 0.5g, kh2po4 1g，kcl 0.5g，feso47h2o 0.01g，葡萄糖 20g，瓊脂 20g，蒸餾水定容至1000ml。另外，分別以等當(dāng)量硝銨酸2.00g、硫氨酸1.53g、色氨酸2.40g、肌氨酸1.00g、蛋白胨4.00g、l-苯丙氨酸4.00g、磷酸二氫銨2.70g為氮源，配置成不同氮源的培養(yǎng)基，濕熱滅菌（121,20min），然后制成平板，在平板中央接入直徑為5mm菌齡相同的菌餅；置于28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5d后觀察菌落狀況。每處理三個重復(fù)。1.4.6菌絲致死溫度測定將病原菌菌餅（5m

16、m）移入已滅菌的試管內(nèi)，塞上橡皮塞，分別45、50、55、60、65和70恒溫水浴處理10min，然后再分別接種到pda培養(yǎng)基平板中央，以未處理菌餅接種到pda培養(yǎng)基平板中央為對照，28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5d后觀察菌落狀況。每處理三個重復(fù)。1.4.7 病原菌產(chǎn)孢誘導(dǎo)及病原菌鑒定由于未在培養(yǎng)基上獲得病原菌孢子，設(shè)計了以下促使孢子產(chǎn)生的方法（表1）；觀察菌落及分生孢子顏色、形態(tài)、以及分生孢子梗形態(tài)并測量孢子大小。表1 促使孢子產(chǎn)生的方法培養(yǎng)基處理方式散尾葵葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8d。散尾葵瓊脂培養(yǎng)基28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8d。燕麥片瓊脂培養(yǎng)基28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8d。馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基2

17、8恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8d。散尾葵葉組織pda培養(yǎng)基28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8d。散尾葵植株活體嫩葉保溫保濕直到葉病部灰白干枯，長出小黑點pda28正常培養(yǎng)4d，紫外燈（200275nm）照射20min，28恒溫培養(yǎng)4d。pda28正常培養(yǎng)4d， 12小時光暗交替，28恒溫培養(yǎng)4d。pda28，正常培養(yǎng)5d后，將培養(yǎng)皿置于5低溫條件下2天，再轉(zhuǎn)入28恒溫培養(yǎng)3d。pda28正常培養(yǎng)5d后，將菌絲挑出接種于無菌蒸餾水上，28恒溫培養(yǎng)5d。注：1、散尾葵葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基配制營養(yǎng)為：新鮮散尾葵葉組織20g，葡糖糖2g，瓊脂2g，蒸餾水100ml。2、散尾葵葉組織pda培養(yǎng)基制作方法：將新鮮健康的散尾葵葉片表

18、面消毒，剪成小塊（約3mm3mm）散置于pda培養(yǎng)基平板上。2 結(jié)果與分析2.1 癥狀描述該病原菌主要危害葉部，尤其是上部嫩葉。病菌最先侵染葉尖和葉緣，發(fā)病初期染病處呈褐色斑點或條塊狀斑塊，中期斑點或斑塊逐漸擴(kuò)大并相互連接，漸擴(kuò)展為條斑，并可匯合成不規(guī)則的壞死塊，后期葉片呈現(xiàn)灰白狀干枯，邊緣有深色線條圍繞；溫濕條件下病部散生一些小黑點，輕者使葉片干枯，重者會導(dǎo)致植株整株死亡。（如圖1ad）2.2 分離菌株致病性測定用田間自然發(fā)病的散尾葵病株分離獲得純菌種，按照柯赫氏法則進(jìn)行接種，結(jié)果表明：刺傷接種a處理組3d后病原菌接種部位開始發(fā)病，出現(xiàn)水漬狀小斑點，5d后染病處呈褐色斑點或條塊狀斑塊，約10

19、d后斑點或斑塊逐漸擴(kuò)大并相互連接，漸擴(kuò)展為條斑，并可匯合成不規(guī)則的壞死塊，最后葉片呈現(xiàn)灰白狀干枯，邊緣有深色線條圍繞，溫濕條件下病部散生一些小黑點，其發(fā)病率達(dá)100%；b處理組和c無發(fā)病現(xiàn)象。無傷接種d處理組5d后病原菌接種部位開始發(fā)病，其發(fā)病過程與刺傷接種a處理大體相似，發(fā)病率為66%，無傷接種e、f處理組無發(fā)病現(xiàn)象。用獲得的菌種接種后出現(xiàn)的癥狀與田間自然發(fā)病癥狀相同，從接種發(fā)病的植株分離獲得的病原菌與田間自然發(fā)病獲得的病原菌相同；對照植株生長良好，同樣進(jìn)行組織分離，無病原菌存在，證實分離菌是散尾葵葉枯病的致病菌。a： 葉尖易受害；b：漸擴(kuò)展為條斑，并可匯合成不規(guī)則的壞死塊；c：病斑中心灰白

20、色，邊緣有深色線條圍繞；d：葉片有一半以上干枯卷縮圖1 散尾葵葉枯病發(fā)病癥狀 圖2 病原菌在pda上的菌落 圖3 光照對病原菌菌絲生長的影響2.3 不同溫度對菌絲生長的影響結(jié)果表明：病原菌在2037均能生長；溫度在1528，菌落直徑隨著溫度的升高而逐漸增加；溫度在2837范圍內(nèi)，菌落直徑隨著溫度的升高而逐漸減小。試驗中最適宜菌絲生長的溫度為28，培養(yǎng)5d菌落平均直徑達(dá)到41.5mm；15條件下菌絲生長受阻止或不能生長。所以菌絲生長的最適溫度范圍在2530，而菌絲能否生長的低溫臨界溫度在為1520之間。（表2）表2 溫度對菌絲生長的影響溫度temperature菌落直徑（5d/mm）diamet

21、er of colony（5d/mm）菌落特征（5d）colony character（5d）150.0aa菌絲不生長，未有任何菌絲特征2026.1bb菌落圓形、邊緣較整齊、淺褐色、棉絮狀，邊緣菌絲稀疏，未產(chǎn)孢。2535.0cc菌落圓形、邊緣較整齊、褐色，菌絲生長旺盛，棉絮狀，菌落平整，背面有褐色色素，未產(chǎn)孢。2841.5dd菌落圓形、邊緣較整齊、紅褐色，菌絲生長旺盛，棉絮狀，菌落平整，背面有黑褐色色素，未產(chǎn)孢3030.3eb菌落圓形、邊緣較整齊、褐色，菌絲生長旺盛，棉絮狀，菌落平整，背面有深褐色色素，未產(chǎn)孢。3711.0ff菌落不規(guī)則形、灰白至淺褐色，菌絲稀疏，棉絮狀，未產(chǎn)孢。注：差異顯著性

22、使用lsr法計算，小寫字母代表=0.05水平差異顯著性；大寫字母代表=0.01水平差異顯著性。2.4 不同光照對菌絲生長影響不同光照下，菌絲生長有所不同（圖3），從菌絲生長速率和菌絲顏色上來看：24h光照處理組的菌落直徑最大，其次是12h光暗交替處理組，24h黑暗處理組的菌落直徑相對較??；24h光照處理組的菌落深褐色、表面有大量白色菌絲，12h光暗交替處理組菌落深褐色、表面有少量白色菌絲，24h黑暗處理組菌落深黃褐色。（表3）表3光照對菌絲生長影響處理菌落直徑（6d/mm）菌落特征（6d）24h全光照57.3aa菌落較規(guī)則圓形、深紅褐色，表面有大量白色菌絲，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。12h光暗交

23、替53.5bb菌落不規(guī)則形、深紅褐色，表面有少量白色菌絲，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。24h全黑暗52.0bb菌落不規(guī)則形、深黃褐色，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。注：差異顯著性使用lsr法計算，小寫字母代表=0.05水平差異顯著性；大寫字母代表=0.01水平差異顯著性。2.5 不同ph值對菌絲生長的影響試驗結(jié)果表明：ph值在410的范圍內(nèi)，菌絲均能良好生長，除ph=4處理組外，其他組生長速率沒有顯著差異，但各ph值對菌絲疏密程度及顏色有明顯影響。其中，ph=6、7、8三處理組無顯著差異但對ph=4處理組生長速率有極顯著差異，ph=5、9處理組對ph=4處理組生長速率有顯著差異，所以菌絲生長最適ph值是

24、在ph=68。（表4）表4 ph值對病原菌菌絲生長的影響ph值菌落直徑（6d/mm）菌落特征（6d）443.7aa菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊，菌絲較密、較長、淺紅褐色，未產(chǎn)孢。551.0bab菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊，菌絲較密、較長、紅褐色略帶紫色，未產(chǎn)孢。655.0bb菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊、中部隆起，菌絲較密、較長、紅褐色，未產(chǎn)孢。753.3bb菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊、中部隆起，菌絲較密、較長、紅褐色，未產(chǎn)孢。855.3bb菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊、中部隆起，菌絲較密、較長、淺褐色，未產(chǎn)孢。950.7bab菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊，菌絲較密、較長、淺褐至灰白色，未產(chǎn)孢。1048.3abab菌落形狀規(guī)

25、則、邊緣整齊，菌絲較密、較長、灰白色，未產(chǎn)孢。注：差異顯著性使用lsr法計算，小寫字母代表=0.05水平差異顯著性；大寫字母代表=0.01水平差異顯著性。2.6 不同碳源對菌絲生長的影響從菌落5d生長直徑來看(圖4)，在供試的含有不同碳源的czapek固體培養(yǎng)基上，該菌在只含有葡萄糖或麥芽糖做碳源的培養(yǎng)基中生長狀況最好，顯著優(yōu)于在只含有乳糖、蔗糖、d-果糖、d-甘露糖或d-木糖的培養(yǎng)基上的生長狀況，而在只含有d-甘露糖做碳源的培養(yǎng)基上生長狀況最差，顯著差于在只含有其他六種糖類培養(yǎng)基上的生長狀況。（表5）表5 不同碳源對病原菌菌絲生長的影響碳源菌落直徑（5d）菌落特征（5d）葡萄糖29.3aa菌

26、絲致密，紅褐色，平鋪，菌落不規(guī)則形，底部黑褐色，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。乳糖25.7bab菌絲疏松，淺褐色，平鋪，菌落圓形，周圍輻射狀菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。麥芽糖29.7aa菌絲致密，淺褐色至褐色，平鋪，菌落不規(guī)則形，底部褐色，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。蔗糖23.0bb菌絲致密，紅褐色，平鋪，菌落不規(guī)則形，底部黑褐色，周圍菌絲致密、灰白色，未產(chǎn)孢。d-果糖23.0bb菌絲致密，淺褐色至褐色，平鋪，菌落近圓形形，底部褐色，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。d-甘露糖18.7ccb菌絲致密，褐色，平鋪，菌落近圓形，底部褐色，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。d-木糖23.0bb菌絲致密，褐色，平鋪，菌落近圓形，底部褐色，

27、周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。注：差異顯著性使用lsr法計算，小寫字母代表=0.05水平差異顯著性；大寫字母代表=0.01水平差異顯著性。圖4 不同氮源的對病原菌菌絲生長的影響2.7 不同氮源對菌絲生長的影響從圖5可以看出，在供試的含不同氮源的czapek固體培養(yǎng)基上，該菌在只含有肌氨酸做氮源的培養(yǎng)基上菌絲生長狀況最好，極顯著優(yōu)于在只含有其它六種氮源的培養(yǎng)基上的生長狀況；在只含有色氨酸或蛋白胨做氮源的培養(yǎng)基上菌絲生長狀況較好，極顯著優(yōu)于只含有硝銨酸、磷酸二氫鉀、l-苯丙氨酸或磷酸二氫銨的培養(yǎng)基上的生長狀況。（表6）圖5 不同氮源對病原菌菌絲生長的影響表6 不同氮源對病原菌菌絲生長的影響氮源菌落直徑（

28、5d）菌落特征（5d）硝酸銨24.7aa菌絲致密，淺褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色，周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。硫酸銨22.3aa菌絲致密，淺褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色，周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。色氨酸35.7bb菌絲致密，褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色，周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。肌氨酸45.7cc菌絲較疏松，褐色至黃褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色，周圍菌絲輻射狀、黃褐色，未產(chǎn)孢。蛋白胨36.0bb菌絲致密，褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色，周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。l-苯丙氨酸27.7aa菌絲致密，褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色，周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。磷酸二氫銨28.

29、0aa菌絲致密，褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色，周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)孢。注：差異顯著性使用lsr法計算，小寫字母代表=0.05水平差異顯著性；大寫字母代表=0.01水平差異顯著性。2.8 菌絲致死溫度測定經(jīng)過45恒溫水浴10min處理的病原菌菌絲生長狀態(tài)良好，5d菌落平均直徑達(dá)到41mm，且生長過程及菌落平均直徑均與ck組并無明顯差異（ck組菌絲1d后開始生長，5d菌落平均直徑為42mm）；經(jīng)過50恒溫水浴10min處理的病原菌生長較差，5d菌絲生長直徑僅為14mm，約為ck的1/3，且在培養(yǎng)第4d才開始生長，較ck晚兩天，說明50恒溫水浴10min處理對菌絲生長產(chǎn)生了較大影響；55、6

30、0、65和70恒溫水浴10min處理組菌絲5d不生長，說明該病原菌菌絲致死溫度應(yīng)該是55。2.9 病原菌產(chǎn)孢誘導(dǎo)及病原菌鑒定 圖6 分生孢子梗 圖7 細(xì)而伸長的分枝端生球形膨大物 圖8 分生孢子長圓柱形、3隔4細(xì)胞 圖9 分生孢子由粘液保持在一起成束病原菌在pda培養(yǎng)基平板上的菌落形態(tài)為：菌絲生長速度為55mm（6d）；菌落形態(tài)為較規(guī)則圓形、紅褐色、邊緣為灰白色，較整齊；菌絲生長旺盛，較密、棉絮狀、中部稍微隆起，菌落背面有黑褐色色素，菌絲稠密或疏松呈放射狀；未產(chǎn)孢。（如圖2）誘導(dǎo)產(chǎn)孢顯示：病原菌在散尾葵葉組織pda培養(yǎng)基上能少量產(chǎn)生孢子，在散尾葵植株活體嫩葉接種處的病斑上能刮下大量分生孢子；而

31、其他處理組均未觀察到孢子產(chǎn)生?？赡茉驗椋?、該病原菌只能在寄主上通過孢子繁殖；2、當(dāng)前使用的培養(yǎng)基缺少某些營養(yǎng)元素或者某些營養(yǎng)元素比例不能提供該病原菌產(chǎn)生孢子的條件。在顯微鏡下觀察散尾葵葉枯病病原菌孢子梗及分生孢子的特征是：分生孢子梗直立，無色，規(guī)則和重復(fù)二叉或三叉分枝(圖6)，每端有2到3個小梗，部分有細(xì)而伸長的分枝端生球形膨大物（圖7）；分生孢子無色至微綠色，長圓柱形（圖8），單個著生但通常由粘液保持在一起成束（圖9），每個分生孢子3隔4細(xì)胞（圖8），大小為24.148.5（42.6）m2.33.6（3.1）m。結(jié)合對病原菌菌落及菌絲的觀察結(jié)果，通過真菌形態(tài)學(xué)的比對，鑒定出該病原菌為帚梗

32、柱枝菌（cylindrocladium quinqueseptatu figueredo）9。3 結(jié)論與討論該病原菌在pda固體培養(yǎng)基上菌絲生長狀態(tài)良好，但未能觀察到孢子產(chǎn)生。該病原菌菌絲生長對ph值適應(yīng)范圍廣，在ph=410范圍均能生長，在ph=68時生長最好；菌絲在2037均能生長，最適溫度范圍在2530之間，溫度低于15菌絲不生長，其致死溫度在5055之間。該菌對葡萄糖或麥芽糖的利用率較好，其次是乳糖、蔗糖、d-果糖、d-木糖和d-甘露糖；其對肌氨酸的利用率明顯優(yōu)于色氨酸、蛋白胨、硝銨酸、磷酸二氫鉀、l-苯丙氨酸和磷酸二氫銨。通過試驗及相關(guān)資料顯示，該病原菌為真菌門半知菌類，絲孢綱，絲孢目，絲孢科，帚梗柱孢屬中的帚梗柱枝菌(hughes-tubaki-barron分類系統(tǒng))101112。該屬真菌還常引起水稻葉鞘腐敗?。╮ice sheath rot）等，水稻葉鞘腐敗病（rice sheath rot