武漢大學天然產物的提取虎杖

1、虎杖中白藜蘆醇虎杖中白藜蘆醇的提取的提取 200722030144總綱總綱 虎杖及白藜蘆醇簡介 分離方法簡介 發(fā)展現(xiàn)狀及前景簡介簡介 虎杖是什么？ 中藥虎杖為蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc. )的干燥根莖及根，性微寒、味微苦，具祛風利濕、散瘀定痛、止咳化痰等功效。 虎杖含蒽醌、二苯乙烯類(芪類) 、酚類、黃酮類等多種成分，其中二苯乙烯類主要為白藜蘆醇和白藜蘆醇苷(虎杖苷) ，蒽醌類主要以大黃素、大黃素甲醚為代表,也含有多種蒽醌苷。白藜蘆醇及其苷具有抗腫瘤、降血脂、抑制血小板聚集、調節(jié)脂蛋白代謝、保肝、抗氧化、抑菌等多種藥理作用 ，而虎杖蒽醌具有

2、抗菌、保肝、抗癌等功能，是虎杖中兩類主要的活性成分。臨床上以虎杖為主藥的制劑種類也很多。 白藜蘆醇 對白藜蘆醇生理功能的認識源于WHO的一項流行病學調查。流行病資料顯示，法國人心血管疾病的發(fā)病率明顯低于其他國家，這與其紅葡萄酒攝入量較高有關。進一步的研究證實，白藜蘆醇是紅葡萄酒中發(fā)揮心血管保護作用的主要物質。 白藜蘆醇(resveratro1)又稱芪三酚，化學名稱為 (E)一3,4,5一三羥基二苯乙烯。它是非黃酮類的多酚化合物，分子式為C14H12O3 相對分子質量為228.2。 白藜蘆醇苷(虎杖苷)是白藜蘆醇與葡萄糖結合的產物，它們均屬于虎杖成分中的芪類化合物。 白藜蘆醇為白色針狀晶體，易溶

3、于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有機溶劑，在波長365nm的紫外光照射下能產生熒光，并能和三氯化鐵一鐵氫化鉀起顯色反應。 隨著對白藜蘆醇的深人研究，顯示白藜蘆醇具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗炎等作用，可廣泛地應用于醫(yī)藥、保健品、食品、化妝品等領域。 虎杖中白藜蘆醇的含量較高，具有相當大的發(fā)展前景。分離方法簡介分離方法簡介 有機溶劑萃取法 大孔吸附樹脂法 膜分離法有機溶劑萃取法有機溶劑萃取法 試驗方法 精確稱取一定量預先干燥、粉碎的虎杖粗粉，加入提取溶劑，在一定溫度下進行攪拌，加熱回流提取一定時間。采用TLC法進行定性分 析，與標準品進行對照分析。使用紫外分光光度計在306nm處測其提取液

4、的吸光度，根據(jù)標準曲線計算其濃度，得出提取率。 標準曲線的繪制 精密稱取白藜蘆醇標準品，置于容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度定容。分別配制不同濃度的標準溶液，用紫外可見分光光度計在306 nm處測其吸光度值。 提取溶劑的選擇 選取甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯4種最常用的有機提取劑進行實驗。 提取劑濃度的確定 不同濃度的乙醇溶液具有不同的極性，根據(jù)相似相溶原理可知，不同極性的溶液必然會影響到白藜蘆醇的提取效果。 提取溫度的確定 提取溫度對天然產物提取是一個很重要的影響因素，而且白藜蘆醇具有熱敏性，其苯環(huán)上的羥基在高溫下易被氧化失去生物活性，也因為此原因限制了其有機合成的進展。 料液比的確定 料液比

5、對于提取工藝也有較重要的影響，料液比太小，達不到較優(yōu)的提取效果，即提取不完全；料液比太大，造成浪費，提高了生產成本。 結論 由虎杖提取白藜蘆醇的較優(yōu)的工藝條件：提取劑為濃度60的乙醇，提取溫度為50度，料液比為1:40，提取時間為2.5 h。大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂法 大孔吸附樹脂具有吸附快、解吸快、吸附容量大、易于再生、使用壽命長等優(yōu)點，現(xiàn)已廣泛應用于天然產物的分離和富集，但該法存在有機試劑和能量消耗大，對環(huán)境污染嚴重等問題。 樹脂的預處理 吸附原液的制備 虎杖粗碎加一定量的水，在一定的溫度下自然發(fā)酵酶解一定時間，加甲醇提取3次，每次2 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮回收甲醇，加適量水冷卻后

6、過濾得吸附原液，備用。 樹脂的靜態(tài)吸附量、解吸率測定 單位質量樹脂吸附白藜蘆醇的量是重要的參數(shù)，不僅要求樹脂吸附量大，而且必須解吸率要高，以保證有效成分最大限度的回收。 樹脂對白藜蘆醇靜態(tài)吸附的動力學研究 將t時刻樹脂吸附白藜蘆醇的量對時間t作圖即得樹脂的靜態(tài)吸附動力學曲線。 進行平衡吸附試驗，計算樹脂吸附量，以樹脂吸附量對白藜蘆醇的濃度作圖，得等溫吸附曲線。 洗脫劑及濃度的選擇 對已經(jīng)吸附樣品的樹脂進行脫附試驗，作出脫附曲線?？疾煜疵搫┑姆N類、濃度、用量等因素對樹脂脫附性能的影響，確定最佳的脫附工藝。 樹脂的連續(xù)使用次數(shù)及再生實驗 吸附樹脂除了吸附目標產物之外，還會吸附其它雜質，而這些雜質會

7、影響樹脂對目標產物的吸附量，樹脂經(jīng)多次使用，吸附量會逐漸下降，因此使用一定次數(shù)后必須對樹脂進行再生。 產品的制備 將白藜蘆醇洗脫液收集濃縮，去除溶劑，并冷凍干燥，得到白藜蘆醇初產品，采用高效液相色譜法測定其含量。 相關文獻顯示吸附樹脂用于虎杖中自藜蘆醇的分離，省去了傳統(tǒng)溶劑萃取法的煩瑣工藝，僅吸附脫附一步工藝即可得到高含量的白藜蘆醇，并且收率高、成本低(樹脂可再生，溶媒用量少)、操作簡便，可推廣應用。膜分離法膜分離法 膜分離技術是21世紀的一項高新技術，包括微濾、超濾、納濾、電滲析、反滲透、膜電解、膜蒸餾、膜萃取等各種技術。它具有能耗低、操作溫度低、無相變、不改變體系的化學性質，結構簡單、占地

8、小、操作簡便易于實現(xiàn)自動化、污染小等優(yōu)點。 實驗過程 虎杖苷液態(tài)發(fā)酵后濃縮，用60%的乙醇以1：8的料液比在常溫下提取，過濾得到濾液，然后將濾液連續(xù)投入微濾膜裝置中，收集其濾液，再將濾液投入超濾膜裝置中，收集其濾液。超濾膜的濃縮液中含有大黃素，可以回收利用。實驗過程中分別記錄時間、操作壓力、溫度、膜通量等數(shù)據(jù)。濃縮液虎杖苷液態(tài)發(fā)酵 濃縮 60%乙醇提取液 過濾 濾液 微濾膜 產品3 精制 濾液 超濾膜 濾液 干燥 產品2 干燥 濃縮液 產品1 膜的清洗 實驗完成后，微濾膜和超濾膜需要清洗，以恢復膜的水通量。先用復合清洗劑清洗 ，然后用次氯酸納漂洗，最后用清水洗至中性。觀察膜清洗前后的通量變化情

9、況。 查閱相關文獻知，整個實驗過程膜保持著良好的通量，微濾膜和超濾膜經(jīng)清洗后，膜通量恢復到原來的99%以上，而且相比大孔吸附樹脂法來說，整個過程無廢水產生，能耗低，可降低生產成本，實現(xiàn)清潔生產的目的。 發(fā)展現(xiàn)狀及前景 目前的研究一致證實了白藜蘆醇具有抗氧化、抗癌、保護心血管的作用。很多實驗表明:白藜蘆醇還具有雌激素調節(jié),對氧化DNA 具有保護作用,最近幾年國內外學者還發(fā)現(xiàn)了白藜蘆醇具有明顯的抗病毒作用,但目前的研究結果在對雌激素樣作用方面尚不一致。 今后應結合臨床試驗進一步深入研究,研制出白藜蘆醇制劑，應用在腫瘤、心血管疾病、病毒性疾病的預防治療。另一方面，對白藜蘆醇的安全性、有效性研究相當滯后，相應的毒理研究亦很少，尚需進行大量的研究工作。