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1、虎杖中白藜蘆醇虎杖中白藜蘆醇的提取的提取 200722030144總綱總綱 虎杖及白藜蘆醇簡介 分離方法簡介 發(fā)展現(xiàn)狀及前景簡介簡介 虎杖是什么? 中藥虎杖為蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc. )的干燥根莖及根,性微寒、味微苦,具祛風(fēng)利濕、散瘀定痛、止咳化痰等功效。 虎杖含蒽醌、二苯乙烯類(芪類) 、酚類、黃酮類等多種成分,其中二苯乙烯類主要為白藜蘆醇和白藜蘆醇苷(虎杖苷) ,蒽醌類主要以大黃素、大黃素甲醚為代表,也含有多種蒽醌苷。白藜蘆醇及其苷具有抗腫瘤、降血脂、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)脂蛋白代謝、保肝、抗氧化、抑菌等多種藥理作用 ,而虎杖蒽醌具有
2、抗菌、保肝、抗癌等功能,是虎杖中兩類主要的活性成分。臨床上以虎杖為主藥的制劑種類也很多。 白藜蘆醇 對白藜蘆醇生理功能的認識源于WHO的一項流行病學(xué)調(diào)查。流行病資料顯示,法國人心血管疾病的發(fā)病率明顯低于其他國家,這與其紅葡萄酒攝入量較高有關(guān)。進一步的研究證實,白藜蘆醇是紅葡萄酒中發(fā)揮心血管保護作用的主要物質(zhì)。 白藜蘆醇(resveratro1)又稱芪三酚,化學(xué)名稱為 (E)一3,4,5一三羥基二苯乙烯。它是非黃酮類的多酚化合物,分子式為C14H12O3 相對分子質(zhì)量為228.2。 白藜蘆醇苷(虎杖苷)是白藜蘆醇與葡萄糖結(jié)合的產(chǎn)物,它們均屬于虎杖成分中的芪類化合物。 白藜蘆醇為白色針狀晶體,易溶
3、于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有機溶劑,在波長365nm的紫外光照射下能產(chǎn)生熒光,并能和三氯化鐵一鐵氫化鉀起顯色反應(yīng)。 隨著對白藜蘆醇的深人研究,顯示白藜蘆醇具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗炎等作用,可廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品、食品、化妝品等領(lǐng)域。 虎杖中白藜蘆醇的含量較高,具有相當大的發(fā)展前景。分離方法簡介分離方法簡介 有機溶劑萃取法 大孔吸附樹脂法 膜分離法有機溶劑萃取法有機溶劑萃取法 試驗方法 精確稱取一定量預(yù)先干燥、粉碎的虎杖粗粉,加入提取溶劑,在一定溫度下進行攪拌,加熱回流提取一定時間。采用TLC法進行定性分 析,與標準品進行對照分析。使用紫外分光光度計在306nm處測其提取液
4、的吸光度,根據(jù)標準曲線計算其濃度,得出提取率。 標準曲線的繪制 精密稱取白藜蘆醇標準品,置于容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋到刻度定容。分別配制不同濃度的標準溶液,用紫外可見分光光度計在306 nm處測其吸光度值。 提取溶劑的選擇 選取甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯4種最常用的有機提取劑進行實驗。 提取劑濃度的確定 不同濃度的乙醇溶液具有不同的極性,根據(jù)相似相溶原理可知,不同極性的溶液必然會影響到白藜蘆醇的提取效果。 提取溫度的確定 提取溫度對天然產(chǎn)物提取是一個很重要的影響因素,而且白藜蘆醇具有熱敏性,其苯環(huán)上的羥基在高溫下易被氧化失去生物活性,也因為此原因限制了其有機合成的進展。 料液比的確定 料液比
5、對于提取工藝也有較重要的影響,料液比太小,達不到較優(yōu)的提取效果,即提取不完全;料液比太大,造成浪費,提高了生產(chǎn)成本。 結(jié)論 由虎杖提取白藜蘆醇的較優(yōu)的工藝條件:提取劑為濃度60的乙醇,提取溫度為50度,料液比為1:40,提取時間為2.5 h。大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂法 大孔吸附樹脂具有吸附快、解吸快、吸附容量大、易于再生、使用壽命長等優(yōu)點,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離和富集,但該法存在有機試劑和能量消耗大,對環(huán)境污染嚴重等問題。 樹脂的預(yù)處理 吸附原液的制備 虎杖粗碎加一定量的水,在一定的溫度下自然發(fā)酵酶解一定時間,加甲醇提取3次,每次2 h,過濾,合并濾液,減壓濃縮回收甲醇,加適量水冷卻后
6、過濾得吸附原液,備用。 樹脂的靜態(tài)吸附量、解吸率測定 單位質(zhì)量樹脂吸附白藜蘆醇的量是重要的參數(shù),不僅要求樹脂吸附量大,而且必須解吸率要高,以保證有效成分最大限度的回收。 樹脂對白藜蘆醇靜態(tài)吸附的動力學(xué)研究 將t時刻樹脂吸附白藜蘆醇的量對時間t作圖即得樹脂的靜態(tài)吸附動力學(xué)曲線。 進行平衡吸附試驗,計算樹脂吸附量,以樹脂吸附量對白藜蘆醇的濃度作圖,得等溫吸附曲線。 洗脫劑及濃度的選擇 對已經(jīng)吸附樣品的樹脂進行脫附試驗,作出脫附曲線。考察洗脫劑的種類、濃度、用量等因素對樹脂脫附性能的影響,確定最佳的脫附工藝。 樹脂的連續(xù)使用次數(shù)及再生實驗 吸附樹脂除了吸附目標產(chǎn)物之外,還會吸附其它雜質(zhì),而這些雜質(zhì)會
7、影響樹脂對目標產(chǎn)物的吸附量,樹脂經(jīng)多次使用,吸附量會逐漸下降,因此使用一定次數(shù)后必須對樹脂進行再生。 產(chǎn)品的制備 將白藜蘆醇洗脫液收集濃縮,去除溶劑,并冷凍干燥,得到白藜蘆醇初產(chǎn)品,采用高效液相色譜法測定其含量。 相關(guān)文獻顯示吸附樹脂用于虎杖中自藜蘆醇的分離,省去了傳統(tǒng)溶劑萃取法的煩瑣工藝,僅吸附脫附一步工藝即可得到高含量的白藜蘆醇,并且收率高、成本低(樹脂可再生,溶媒用量少)、操作簡便,可推廣應(yīng)用。膜分離法膜分離法 膜分離技術(shù)是21世紀的一項高新技術(shù),包括微濾、超濾、納濾、電滲析、反滲透、膜電解、膜蒸餾、膜萃取等各種技術(shù)。它具有能耗低、操作溫度低、無相變、不改變體系的化學(xué)性質(zhì),結(jié)構(gòu)簡單、占地
8、小、操作簡便易于實現(xiàn)自動化、污染小等優(yōu)點。 實驗過程 虎杖苷液態(tài)發(fā)酵后濃縮,用60%的乙醇以1:8的料液比在常溫下提取,過濾得到濾液,然后將濾液連續(xù)投入微濾膜裝置中,收集其濾液,再將濾液投入超濾膜裝置中,收集其濾液。超濾膜的濃縮液中含有大黃素,可以回收利用。實驗過程中分別記錄時間、操作壓力、溫度、膜通量等數(shù)據(jù)。濃縮液虎杖苷液態(tài)發(fā)酵 濃縮 60%乙醇提取液 過濾 濾液 微濾膜 產(chǎn)品3 精制 濾液 超濾膜 濾液 干燥 產(chǎn)品2 干燥 濃縮液 產(chǎn)品1 膜的清洗 實驗完成后,微濾膜和超濾膜需要清洗,以恢復(fù)膜的水通量。先用復(fù)合清洗劑清洗 ,然后用次氯酸納漂洗,最后用清水洗至中性。觀察膜清洗前后的通量變化情
9、況。 查閱相關(guān)文獻知,整個實驗過程膜保持著良好的通量,微濾膜和超濾膜經(jīng)清洗后,膜通量恢復(fù)到原來的99%以上,而且相比大孔吸附樹脂法來說,整個過程無廢水產(chǎn)生,能耗低,可降低生產(chǎn)成本,實現(xiàn)清潔生產(chǎn)的目的。 發(fā)展現(xiàn)狀及前景 目前的研究一致證實了白藜蘆醇具有抗氧化、抗癌、保護心血管的作用。很多實驗表明:白藜蘆醇還具有雌激素調(diào)節(jié),對氧化DNA 具有保護作用,最近幾年國內(nèi)外學(xué)者還發(fā)現(xiàn)了白藜蘆醇具有明顯的抗病毒作用,但目前的研究結(jié)果在對雌激素樣作用方面尚不一致。 今后應(yīng)結(jié)合臨床試驗進一步深入研究,研制出白藜蘆醇制劑,應(yīng)用在腫瘤、心血管疾病、病毒性疾病的預(yù)防治療。另一方面,對白藜蘆醇的安全性、有效性研究相當滯后,相應(yīng)的毒理研究亦很少,尚需進行大量的研究工作。
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