3 煙草中農(nóng)殘檢測技術(shù)LC-MSMS

1、煙草及煙草制品煙草及煙草制品 多種農(nóng)藥殘留量多種農(nóng)藥殘留量的測定的測定 LC-MS/MSLC-MS/MS 國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心 ( (一）、一）、LC-MS/MSLC-MS/MS簡介簡介（二）、方法原理（二）、方法原理 ( (三）、適用農(nóng)藥三）、適用農(nóng)藥（四）、檢測流程（四）、檢測流程（五）、檢測中常見問題（五）、檢測中常見問題主要內(nèi)容主要內(nèi)容n以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)。樣品在以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)。樣品在液相色譜部分分離，經(jīng)質(zhì)譜離子化，質(zhì)量分析器將離液相色譜部分分離，經(jīng)質(zhì)譜離子化，質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖。

2、子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖。 n色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢結(jié)合，應(yīng)用廣泛。色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢結(jié)合，應(yīng)用廣泛。 適用于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)適用于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分析。定性差的化合物的分析。適于復(fù)雜基質(zhì)樣品適于復(fù)雜基質(zhì)樣品, ,特別是農(nóng)產(chǎn)品，生物特別是農(nóng)產(chǎn)品，生物樣品中的農(nóng)獸藥殘留的定性定量分析。樣品中的農(nóng)獸藥殘留的定性定量分析。利于多組分分析。利于多組分分析。 實驗原理 粉碎后的干燥樣品在調(diào)節(jié)含水量之后使用乙腈振蕩粉碎后的干燥樣品在調(diào)節(jié)含水量之后使用乙腈振蕩提取，然后用無水硫酸鎂和氯化鈉振蕩促使其分層；提取，然后用無水硫酸鎂和氯化鈉振蕩促使其分層；采用采用PSAP

3、SA（primary secondary amineprimary secondary amine）吸附劑去除）吸附劑去除提取液色素、脂肪酸等實現(xiàn)凈化，用高效液相色譜提取液色素、脂肪酸等實現(xiàn)凈化，用高效液相色譜- -串接質(zhì)譜儀實現(xiàn)檢測，內(nèi)標(biāo)法定量。串接質(zhì)譜儀實現(xiàn)檢測，內(nèi)標(biāo)法定量。適用農(nóng)藥適用農(nóng)藥A A、有機(jī)磷類有機(jī)磷類 安硫磷、毒蟲畏、毒死蜱、二嗪磷、樂果、滅線磷、苯線磷、氧樂果、倍硫磷、馬拉硫磷、久效磷、甲拌磷、伏殺硫磷、辛硫磷、甲基嘧啶磷、殺蟲畏、敵百蟲、蚜滅磷、磷胺B B、氨基甲酸酯類氨基甲酸酯類 涕滅威、甲萘威、克百威、丁硫克百威、甲硫威、滅多威、 殺線威、抗蚜威、殘殺威、硫雙威C C

4、、殺菌劑殺菌劑 腈菌唑、霜霉威、氟嗎啉、霜脲氰、咪鮮胺和咪鮮胺錳鹽、阿拉酸式苯-S-甲酸、苯霜靈、多菌靈、甲基硫菌靈、噁霉靈、稻瘟靈、苯菌靈、噁唑菌酮、烯酰嗎啉、戊菌唑、惡霜靈、三唑醇、三唑酮D D、除草劑除草劑 異噁草松、雙苯酰草胺、吡氟禾草靈、喹禾靈、克草敵、敵草胺、甲草胺、異丙甲草胺E E、其它殺蟲劑、其它殺蟲劑啶蟲脒、除蟲脲、吡蟲啉、吡蚜酮、噻蟲嗪常見檢出的農(nóng)藥殺菌劑：殺菌劑：腈菌唑、霜霉威、甲霜靈、苯霜靈、多菌靈、甲基硫菌靈、稻瘟靈、烯酰嗎啉、惡霜靈、三唑醇、三唑酮、異菌脲除草劑：除草劑：甲草胺、二甲戊靈、異噁草松其它殺蟲劑：其它殺蟲劑：啶蟲脒、吡蟲啉測定條件測定條件步驟步驟時間（時

5、間（min）流速（流速（L/min）水水（%）乙腈乙腈（%）00.00200901011.00200505025.002005050316.002004060425.002002080530.00200595640.00200595740.012009010845.002009010 液相色譜條件液相色譜條件色譜柱：色譜柱： C18液相色譜分析柱液相色譜分析柱 (柱長柱長 150 mm ，內(nèi)徑，內(nèi)徑 2.1 mm ， 固定相粒徑固定相粒徑3 m) 或相當(dāng)者；或相當(dāng)者；柱溫：柱溫：25 ；進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：10 L；推薦：AtlantisdC18 3m 質(zhì)譜條件質(zhì)譜條件掃描方式：正離子掃描掃描方式

6、：正離子掃描/負(fù)離子掃描；負(fù)離子掃描；監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；電噴霧電壓：電噴霧電壓：5500 V；霧化氣壓力：霧化氣壓力：0.414 MPa；離子源溫度：離子源溫度：500 ；測定條件測定條件檢測流程檢測流程樣本采集樣本采集測定測定制備制備凈化凈化確證確證提取提取前處理過程前處理過程內(nèi)標(biāo)：內(nèi)標(biāo)：磷酸三苯酯磷酸三苯酯 Rp以干基計的農(nóng)藥殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg） cr從基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到的被測組分在試樣萃 取液中的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）； V提取步驟提取劑乙腈的使用體積，單位為毫升（mL）； m樣品質(zhì)量，單位為克（g）； w樣品的水分含量，%

7、（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。計算公式計算公式不同稀釋倍數(shù)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線響應(yīng)強(qiáng)度變化 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 分別移取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液 1000L、 500 L、250 L、100 L 及50 L到5個10 mL容量瓶中，加入100 L內(nèi)標(biāo)工作液，用乙腈定容?？瞻讟悠诽崛∫嚎瞻讟悠诽崛∫?標(biāo)準(zhǔn)工作溶液標(biāo)準(zhǔn)工作溶液+乙腈乙腈空白樣品空白樣品提取及凈化提取及凈化空白樣品提取液空白樣品提取液基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液LC-MS/MS分析分析相對等濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)強(qiáng)度（相對等濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)強(qiáng)度（1ppb）不同基質(zhì)對信號的影響需要注意的問題需要注意

8、的問題 樣品含水率對于萃取乃至回收率影響很大樣品含水率對于萃取乃至回收率影響很大調(diào)整樣品含水率，調(diào)整樣品含水率，2g樣品添加樣品添加10mL水水基質(zhì)效應(yīng)基本上引起響應(yīng)信號的下降基質(zhì)效應(yīng)基本上引起響應(yīng)信號的下降不同基質(zhì)的影響趨勢一致，但幅度有差別不同基質(zhì)的影響趨勢一致，但幅度有差別相同基質(zhì)對不同目標(biāo)物的影響差別很大相同基質(zhì)對不同目標(biāo)物的影響差別很大基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的應(yīng)用，結(jié)合內(nèi)標(biāo)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的應(yīng)用，結(jié)合內(nèi)標(biāo)稀釋有助于減小基質(zhì)效應(yīng)，但效果有限稀釋有助于減小基質(zhì)效應(yīng)，但效果有限適當(dāng)稀釋適當(dāng)稀釋需要注意的問題需要注意的問題 靈敏度低檢查步驟靈敏度低檢查步驟 若若FIA正常，則再繼續(xù)接上色譜柱采樣，判斷是色

9、譜柱問題還是流動相問題。正常，則再繼續(xù)接上色譜柱采樣，判斷是色譜柱問題還是流動相問題。 樣品本身的問題，如樣品沒有完全溶解，濃度不夠，所用溶劑與流動相不匹樣品本身的問題，如樣品沒有完全溶解，濃度不夠，所用溶劑與流動相不匹配等。配等。 樣品存貯時間過長，保存條件不好，分解或吸附了。樣品存貯時間過長，保存條件不好，分解或吸附了。 放在自動進(jìn)樣器中的樣品小瓶內(nèi)套管底部有氣泡，沒取到樣品，或針頭位置放在自動進(jìn)樣器中的樣品小瓶內(nèi)套管底部有氣泡，沒取到樣品，或針頭位置太高，而樣品液面太低。太高，而樣品液面太低。 前處理步驟中，標(biāo)準(zhǔn)品、內(nèi)標(biāo)樣品是否加進(jìn)，提取過程中有無遺灑。前處理步驟中，標(biāo)準(zhǔn)品、內(nèi)標(biāo)樣品是否

10、加進(jìn)，提取過程中有無遺灑。 離子對質(zhì)量數(shù)輸入準(zhǔn)確否，有無錯誤？離子對質(zhì)量數(shù)輸入準(zhǔn)確否，有無錯誤？ 管路漏液管路漏液:樣品沒有完全進(jìn)到離子源里。樣品沒有完全進(jìn)到離子源里。 管路部分堵塞管路部分堵塞:噴霧時斷時續(xù)噴霧時斷時續(xù),小流量信號好小流量信號好,大流量信號差。大流量信號差。 先調(diào)出安裝儀器時的先調(diào)出安裝儀器時的PPG等方法，用注射泵等方法，用注射泵SYRINGE PUMP，進(jìn)，進(jìn)PPG看看，看看，質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)漂移否質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)漂移否,若質(zhì)量校準(zhǔn)不對，造成質(zhì)量數(shù)無法選準(zhǔn)，要重新校準(zhǔn)儀器。若質(zhì)量校準(zhǔn)不對，造成質(zhì)量數(shù)無法選準(zhǔn)，要重新校準(zhǔn)儀器。 若注射泵采集若注射泵采集PPG強(qiáng)度和質(zhì)量校準(zhǔn)正常，則再看標(biāo)

11、準(zhǔn)品樣品，強(qiáng)度和質(zhì)量校準(zhǔn)正常，則再看標(biāo)準(zhǔn)品樣品，COMPOUND等參數(shù)是否正確，質(zhì)量數(shù)是否準(zhǔn)確。等參數(shù)是否正確，質(zhì)量數(shù)是否準(zhǔn)確。儀器設(shè)備因素儀器設(shè)備因素重復(fù)性差檢查步驟重復(fù)性差檢查步驟 氣簾氣氣簾氣(Curtain Gas)太低，會有周期性降低現(xiàn)象。太低，會有周期性降低現(xiàn)象。 采樣時間采樣時間(Dwell Time)太長，每個色譜峰采樣點(diǎn)太少，至少十幾點(diǎn)，采樣時太長，每個色譜峰采樣點(diǎn)太少，至少十幾點(diǎn)，采樣時間間太短則噪聲太高，信噪比不好。太短則噪聲太高，信噪比不好。 新色譜柱沒有充分平衡，舊色譜柱老化，重新清洗活化，或更換。新色譜柱沒有充分平衡，舊色譜柱老化，重新清洗活化，或更換。 源溫度太高，樣品分解。源溫度太高，樣品分解。 加樣前與標(biāo)準(zhǔn)液分別平行做處理，觀察有無區(qū)別加樣前與標(biāo)準(zhǔn)液分別平行做處理，觀察有無區(qū)別, 若標(biāo)準(zhǔn)品溶液無問題，而樣若標(biāo)準(zhǔn)品溶液無問題，而樣品重復(fù)性差，則問題可能出在基質(zhì)的干擾或前處理方法不當(dāng)。品重復(fù)性差，則問題可能出在基質(zhì)的干擾或前處理方法不當(dāng)。 稀釋配制樣品的移液槍，移液管，容量瓶等有無污染問題。稀釋配制樣品的移液槍，移液管，容量瓶等有無污染問題。 梯度洗脫后平衡時間不夠，或臟東西沒洗干凈，累積使得重復(fù)性差梯度洗脫后平衡時間不夠，或臟東西沒洗干凈，累積使得重復(fù)性差 重復(fù)性差重復(fù)性差 重復(fù)性差重復(fù)性差 重復(fù)性差，應(yīng)徹底沖洗柱子。重復(fù)性差，應(yīng)徹底