組織胺H2受體拮抗劑的分析

1、第十三章組織胺H2受體拮抗劑的分析 消化道潰瘍疾病是一種常見病、多發(fā)病，直接原因是胃酸、胃蛋白酶分泌過 多，超過了胃自身分泌的粘液對胃的保護(hù)能力，含有胃酸、胃蛋白酶的胃液使胃 壁消溶損傷而引起潰瘍。在1964年H受體拮抗劑出現(xiàn)以前，對消化道潰瘍很少 有滿意的治療方法，所用的藥物大多是中和胃酸的無機(jī)物和保護(hù)胃粘膜的凝膠 劑。H受體拮抗劑能特異性地阻斷胃壁細(xì)胞的H2受體，拮抗組胺或組胺受體激動 劑所致的胃酸分泌，緩解或在一定程度上治愈消化道潰瘍疾病。H2受體拮抗劑的 化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是以甲硫乙胺的側(cè)鏈取代H1受體拮抗劑的乙基胺鏈，常用的藥物 可分為咪唑類、呋喃類、噻唑類和哌啶甲苯類。咪唑類如西咪替丁(

2、Cimetidine )、 依烴替丁( Etintidine )、奧美替丁( Oxmetidine),呋喃類如雷尼替丁 (Ranitidine )，噻唑類如法莫替丁( Famotidine )、尼扎替丁( Nizatidine )， 哌啶甲苯類如羅沙替丁( Roxatidine )等。本章以西咪替丁、雷尼替丁、法莫替 丁為例，介紹H2受體拮抗劑的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)、體內(nèi)過程和測定方法。 第一節(jié)代表藥物 一、西咪替丁 西咪替丁分子式CoHeZS,分子量252.34，為白色或類白色結(jié)晶性粉末；幾 乎無臭，味苦。在甲醇中易溶，乙醇中溶解，異丙醇中略溶，水中微溶，稀鹽酸 中易溶。其鹽酸溶液(0.9 1000)

3、在218nm處的吸收系數(shù)(E1%1cm)為751-797 熔點(diǎn)：139C 144C。 西咪替丁的化學(xué)穩(wěn)定性良好。在室溫干燥密閉狀態(tài)下，5年內(nèi)未見分解；加 熱至100C持續(xù)48小時仍是穩(wěn)定狀態(tài)。紫外線對西咪替丁無催化分解作用。用 3%勺過氧化氫處理西咪替丁，可生成西咪替丁的硫氧化物。 N CH2SCH2CH2NCNHCH 3 NH 、雷尼替丁 雷尼替丁分子式C3H22N4QS,分子量314.4，游離堿很難結(jié)晶，常用其鹽酸鹽, 為類白色至淡黃色結(jié)晶性粉末；有異臭，味微苦帶澀；極易潮解，吸潮后顏色變 深。在水和甲醇中易溶，乙醇中略溶，在丙酮中幾乎不溶。本品水溶液的紫外吸 收入 max在 228nm與

4、 314nm 熔點(diǎn)：137C 143C。 雷尼替丁的穩(wěn)定性受溫度影響較大。把雷尼替丁的鹽酸鹽在溫度40 C、 50%r60%勺相對濕度的條件下放置 5天，僅有5%筆解；若在溫度60C、100%勺相 對濕度的條件下放置5天，則有11.5%的降解。在室溫、干燥條件下，保存3 年, 含量不下降。 g ,NCH2CH2SCH2CH2NH-CNHCH 3 H3CO CH一NO2 三、法莫替丁 法莫替丁分子式C8H52QS,分子量337.45,為白色或類白色結(jié)晶粉末，無臭、 味略苦，遇光后顏色變深。易溶于二甲基甲酰胺和冰醋酸，微溶于甲醇，極微溶 于丙酮，不溶于水、氯仿和乙醚。本品磷酸鹽緩沖液（pH4.5）

5、的紫外吸收入max 在 266nm 熔點(diǎn)：160C 165C。 法莫替丁的穩(wěn)定性較好。以2mg/mL的濃度溶于5%勺葡萄糖溶液或0.9%的生 理鹽水中，4C下放置14天，保持穩(wěn)定不變。在室溫條件下，存在于氨基酸、葡 萄糖、脂肪、電解質(zhì)、維生素和微量元素的營養(yǎng)液系統(tǒng)中，72h穩(wěn)定不變。 h2n X=N H2N CH 2SCH 2CH 2-C NH2 Nf SO2NH2 第二節(jié) 體內(nèi)過程 H2 受體拮抗劑大多口服吸收良好，部分藥物有首過效應(yīng)，在體內(nèi)代謝生成 S-氧化物、N-氧化物等，大部分以原形經(jīng)腎臟排出。 一、西咪替丁 西咪替丁是第一個用于臨床的 H2 受體拮抗劑，它能明顯抑制食物、組胺或 五肽

6、胃泌素等刺激引起的胃酸分泌， 使胃中酸度降低， 對因化學(xué)刺激引起的腐蝕 性胃炎有預(yù)防和保護(hù)作用， 對應(yīng)激性胃潰瘍和上消化道出血也有一定療效。 口服 300mg后，迅速由小腸吸收，半小時即達(dá)有效血藥濃度（0.5卩g/mL）,達(dá)峰時間 4590min,平均Cmax為1.44卩g/mL,有效血藥濃度可保持 4h。西咪替丁口服 生物利用度約為 70%，年輕人對本品的吸收情況往往較老年人為好；肌注與靜脈 注射生物利用度基本相同。血漿蛋白結(jié)合率為15%r20% ti/2為22.5h （慢性腎 功能不全病人ti/2明顯延長，約為4.9h ）, Vd為2.1土 1L/kg，腎清除率為12 3ml/kg/min

7、 。藥物進(jìn)入體內(nèi)后， 一部分代謝為無活性的亞砜， 另一部分以原形從 尿中排出，12h可排出口服量的80%r90%。 西咪替丁副作用較多，可致便秘、腹瀉、腹脹、頭痛、頭暈、心動過緩、面 部潮紅等，長期應(yīng)用可致男性陽痿、乳房腫大，可能是其與雄性激素受體結(jié)合， 妨礙二氫睪丸素對雄性激素受體的激動作用以及增加血液中雌二醇的濃度有關(guān)。 西咪替丁可抑制肝藥酶，通過其咪唑環(huán)與細(xì)胞色素P450結(jié)合而降低藥酶活性， 所以與西咪替丁同時使用的其它藥物將會出現(xiàn)代謝緩慢、毒性上升的現(xiàn)象。 二、雷尼替丁 雷尼替丁為一種選擇性的 H2受體拮抗劑，能有效地抑制組胺、五肽胃泌素 及食物刺激后引起的胃酸分泌， 降低胃酸和胃蛋白

8、酶的活性， 但對胃泌素及性激 素的分泌無影響。雷尼替丁口服吸收迅速， 12h 可達(dá)血藥濃度高峰，不受食物 和抗酸藥物的影響，生物利用度約為50%。藥物進(jìn)入體內(nèi)后分布廣泛，11/2約為 22.7h,較西咪替丁稍長。雷尼替丁口服后30%經(jīng)肝臟代謝為S-氧化物、N-氧 化物和N-去甲基物，至少有50%以原形由腎臟經(jīng)尿排泄。 雷尼替丁作用比西咪替丁強(qiáng) 58倍，對胃及十二指腸潰瘍的療效高， 具有速 效和長效的特點(diǎn)；副作用小而且安全；無抗雄激素作用，對內(nèi)分泌的影響小，也 沒有西咪替丁那樣的中樞副作用。 三、法莫替丁 法莫替丁是繼西咪替丁和雷尼替丁后出現(xiàn)的又一種H2 受體拮抗劑，其作用 強(qiáng)度比西咪替丁大 3

9、0100倍，比雷尼替丁大 610 倍。健康人及消化性潰瘍患者 口服本品20mg對基礎(chǔ)分泌和因給予各種刺激而引起的胃酸及胃蛋白酶分泌增加 有抑制作用。靜脈注射20mg能抑制基礎(chǔ)分泌和因五肽胃泌素等刺激所致的分泌； 口服20mg對夜間7h內(nèi)胃酸和胃蛋白酶分泌量的抑制率分別為 91.8%和71.8%。 本品作用時間較西咪替丁和雷尼替丁長約30% 口服20mg對胃酸分泌量的抑制 作用能持續(xù)12h以上。本品對失血及給予組胺所致的大鼠胃出血具有抑制作用， 上消化道出血的雙盲比較試驗也證明本品有止血效果。 法莫替丁口服后血藥濃度在給藥 24h 后達(dá)高峰，生物利用度為 40%50%， ti/2約為34h，體內(nèi)

10、無蓄積傾向。本品在體內(nèi)分布廣泛，消化道、胃、肝、頜下 腺及胰腺有高濃度分布；但不透過胎盤屏障。其代謝產(chǎn)物僅見S-氧化物，主要 自腎臟排泄，24h原形尿排泄率為35%41%，膽汁排泄量少，也可自乳汁排出。 法莫替丁副作用小， 不改變胃排空速率， 不干擾胰腺功能， 對心血管系統(tǒng)和 腎臟系統(tǒng)也無不良影響， 不抑制肝藥酶。 本品不同于西咪替丁， 但與雷尼替丁有 相似之處， 即長程大劑量治療時無并發(fā)雄激素拮抗的副作用和男性乳房發(fā)育、 陽 痿、性欲缺乏及女性乳房腫痛，溢乳等副作用。 第三節(jié) 體內(nèi)測定方法 H2受體拮抗劑是堿性藥物，極性較強(qiáng)。該類藥物人體內(nèi)的血藥濃度較低，變 化范圍小， 測定所選用的生物樣品

11、一般為血漿， 也可用尿樣。 通常在堿性條件下 用有機(jī)溶劑萃取， 提取溶劑有醋酸乙酯、 氯仿、二氯甲烷和異丙醇 -醋酸乙酯等。 體內(nèi)測定方法一般采用高效液相色譜法。 、血樣的處理 取待測血樣， 肝素抗凝， 經(jīng)離心后分離出血漿， 在堿性條件下用適合的有機(jī) 溶劑萃取，萃取出的有機(jī)相經(jīng)揮干，用流動相溶解后即可進(jìn)樣分析 二、體內(nèi)測定方法 1. 西咪替丁 西咪替丁為咪唑類 H受體拮抗劑，通常在堿性條件下用有機(jī) 溶劑提取。提取溶劑有醋酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、異丙醇 - 醋酸乙酯等。加熱 濃縮時，西咪替丁易轉(zhuǎn)化為亞砜，因此多在氮?dú)饬飨赂稍?。用C18 固相萃取小柱 處理樣品，藥物幾乎不損失。西咪替丁體內(nèi)測定方法

12、多數(shù)采用反相色譜法，用 C18、C8柱作固定相，乙腈-磷酸鹽緩沖液或乙腈-醋酸鹽緩沖液作流動相，流動相 pH值一般在7左右。常用的檢測方法為紫外檢測。 例1. RP-HPLC測定血漿中的西咪替丁 樣品制備 取待測血漿1ml,置于具塞離心試管中，加入內(nèi)標(biāo)液（25卩g/mL, 甲硝唑的水溶液）0.1ml、2mol/L NaOH液0.1ml、醋酸乙酯4ml,渦旋混合15min, 離心 10min（3000r/min ），取上層有機(jī)相置于另一試管中。水相再用醋酸乙酯提 取一次，合并兩次提取液，空氣流吹干，殘渣溶于 0.1ml 甲醇中，離心通過 0.5 卩m濾膜，取15卩l(xiāng)濾液進(jìn)樣。 色譜條件 色譜柱為

13、YWG-C柱，25cmx 4.6mm 10卩m 流動相為甲醇-水- 二乙胺-磷酸（36:64:0.1:0.06）調(diào)節(jié)pH值7.0，流速1ml/min ;檢測器為紫外 檢測器， 225nm。 結(jié)果 色譜圖見圖 13-1 。保留時間：內(nèi)標(biāo)物， 4.2min ，西咪替丁， 7.1min ; 圖 13-1 血漿中西咪替丁的高效液相色譜圖 方法 平均 回收 率： 97.1% 102.7%（ RSD 為 2.3%3.5%， n=3 ）；日內(nèi) RSD2.0%3.7%（ n=5）,日間 RSD3.1%4.01%（ n=5）;線性范圍：1258000ng/mL; 檢測限（ S/N=3）： 50ng/mL。 例

14、2 RP-HPLC 測定血漿中的西咪替丁 2 樣品制備 取血漿100卩l(xiāng)，加入內(nèi)標(biāo)液（50卩g/mL,雷尼替丁的甲醇液） 10卩l(xiāng)，6mol/L NaOH溶液15卩l(xiāng)，混合。加入異丙醇-醋酸乙酯（4:96 ） 500卩l(xiāng) , 渦旋混合1min,離心，取有機(jī)層置另一試管中，80E氮?dú)饬鞔蹈?，殘渣?0卩l(xiāng) 甲醇溶解后，取40卩l(xiāng)進(jìn)樣。 色譜條件色譜柱為 卩Bondapak C18柱（10cmX 8mm 10卩m）。流動相： 5.0mmol/L 磷酸鹽緩沖液（ pH5.1） -乙腈（92:8），流速 3.0ml/min 。檢測器：紫 外檢測器， 225nm。 結(jié)果 保留時間：西咪替丁 6min，內(nèi)

15、標(biāo)物8min?；厥章剩何鬟涮娑『蛢?nèi)標(biāo) 物 85%r95%0 日內(nèi) RSDW 6%，日間 RSD5%。線性范圍 0.23.0 卩 g/mL。 2. 雷尼替丁 雷尼替丁為呋喃類 H2 受體拮抗劑，其生物樣品的提取方法是 在堿性條件下用有機(jī)溶劑萃取， 為進(jìn)一步純化， 也可用酸性水溶液反萃取。 常用 的提取溶劑有醋酸乙酯、二氯甲烷、異丙醇 -醋酸乙酯等。使用氰基固相萃取小 柱進(jìn)行提取，提取效率高，可實現(xiàn)操作自動化。反相C8、苯基和氰基固定相都 可用于雷尼替丁的測定。也可調(diào)節(jié)流動相 pH值在酸性范圍內(nèi)，使雷尼替丁及其 代謝產(chǎn)物和質(zhì)子結(jié)合， 生成陽離子， 用離子交換色譜法將其分離。 常用的檢測方 法為紫外

16、檢測。 例 1 RP-HPLC 測定血漿中的雷尼替丁 3 樣品制備 取待測血漿1.0ml，加入內(nèi)標(biāo)液（10mg/L，普魯卡因酰胺的甲醇 溶液）25卩l(xiāng)，6mol/L NaOH溶液15卩l(xiāng)，異丙醇-醋酸乙酯（4:96） 2.0ml，振搖 20min，離心10min, 3000r/min，取有機(jī)層至另一離心管中，于40C氮?dú)饬鞔蹈桑?殘渣用100卩l(xiāng)甲醇溶解后，取75卩l(xiāng)進(jìn)樣。 色譜條件 色譜柱為卩Bondapak 6 柱（15cmX 3.9mm， 10卩n） 流動相: 10mol/L磷酸二氫鉀（pH5.1）-乙腈（92:8），流速2.5ml/min。紫外檢測器，330nm 結(jié)果 保留時間：雷尼替

17、丁 5.8min，內(nèi)標(biāo)物3.8min。平均提取回收率為90%。 日內(nèi) RSD4.095.81%,日間 RSD7.5%9.51%。線性范圍 0.051.0mg/L。 例 2. 離子交換色譜法測定血漿和尿中雷尼替丁及其代謝產(chǎn)物 4 樣品制備 血漿：取血漿1ml置于具塞玻璃試管中（試管塞用鋁箔包好）， 加入內(nèi)標(biāo)液（ phenylpyramidol hydrochloride 溶于乙腈） 1ml， 10mol/L NaOH 溶液40卩l(xiāng)，乙腈-醋酸乙酯（1:1 ） 4ml，渦旋混合70s，離心10min。取約4.7ml 有機(jī)相，于45C減壓蒸發(fā)溶劑，殘渣加 60卩l(xiāng)流動相溶解，渦旋混合10s，取 20

18、卩l(xiāng)進(jìn)樣。尿樣：取尿樣 0.2ml，加入內(nèi)標(biāo)液（同上）0.2ml，渦旋混合，取 1020卩l(xiāng)進(jìn)樣。 色譜條件 色譜柱：強(qiáng)陽離子交換樹脂 Partisil SCX 柱（25cmx 4.6mm， 10卩n）o流動相：0.1mol/L醋酸鹽緩沖液（用冰醋酸調(diào)節(jié) pH至5 ）-乙腈-四氫 呋喃（ 56.5:36:7.5 ）。流速： 1.9ml/min 。紫外檢測器波長 :320nm。 結(jié)果 對照品溶液和口服雷尼替丁后人血漿的色譜圖見圖 13-2。保留時間： 內(nèi)標(biāo)2.8min，雷尼替丁 N-氧化物3.6min，去甲基雷尼替丁 4.5min，雷尼替丁 5.3min，雷尼替丁 S-氧化物7.5min。 圖

19、13-2 人血漿中雷尼替丁及其代謝物的高效液相色譜圖 對照品溶液（ a） 口服 300mg 雷尼替丁 6h 后樣品血漿（ b）; 1. 內(nèi)標(biāo)， 2. 雷尼替丁 N- 氧化物， 3. 去甲基雷尼替丁， 4. 雷尼替丁， 5. 雷尼替丁 S- 氧化物 方法準(zhǔn)確度和精密度 提取回收率（血漿） ：雷尼替丁， 99.32%100.36%； 雷尼替丁 N-氧化物，29.76%31.05%;雷尼替丁 S-氧化物，73.41%74.95%;去 甲基雷尼替丁，79.70%80.70%;內(nèi)標(biāo)物，98.20%。日內(nèi)RSD （血漿，n=6）:雷 尼替丁，1.76%3.46%;雷尼替丁 N-氧化物，2.70%5.65%

20、;雷尼替丁 S-氧化物， 3.32%9.21%;去甲基雷尼替丁，3.66%8.85%0日間RSD （血漿，n=5）:雷尼 替丁，5.02%7.41%;雷尼替丁 N-氧化物，4.30%6.91%;雷尼替丁 S-氧化物， 5.42%6.82%;去甲基雷尼替丁，5.98%6.05%。日內(nèi)RSD （尿樣，n=6）:雷尼 替丁及其代謝產(chǎn)物，4.70%。日間RSD （尿樣，n=5）:雷尼替丁及其代謝產(chǎn)物， 4.70%。 線性范圍和檢測限 線性范圍：血漿中雷尼替丁， 404000ng/mL;血漿中 代謝物，201250ng/mL;尿中雷尼替丁上限：350卩g/mL;尿中雷尼替丁 N-氧化 物上限：100卩g

21、/mL;尿中雷尼替丁 S-氧化物和去甲基雷尼替丁上限：60卩g/mL。 檢測限（S/N=3）:血漿中雷尼替丁，5ng/mL;血漿中雷尼替丁 N-氧化物，15ng/mL; 血漿中雷尼替丁 S-氧化物，10ng/mL;血漿中去甲基雷尼替丁， 4ng/mL;尿中雷 尼替丁、雷尼替丁 N-氧化物和去甲基雷尼替丁， 0.15卩g/mL;尿中雷尼替丁 S- 氧化物，0.2卩g/mLo 3. 法莫替丁 法莫替丁為噻唑類H受體拮抗劑，其生物樣品在-15 C可貯存 幾個月。血樣、尿樣堿化后用醋酸乙酯、乙醚、乙腈等有機(jī)溶劑提取。由于法莫 替丁在有機(jī)溶劑中溶解度太小（如在氯仿、醋酸乙酯中小于0.01%），所以提取

22、效率低， 且回收率不穩(wěn)定。 由于法莫替丁分子中具有極性基團(tuán)， 在硅膠固定相上 可獲得保留，因此讓生物樣品通過硅膠萃取柱，水沖洗雜質(zhì)后用乙腈洗脫藥物， 提取效率能大大提高。反相C8、C8、氨基和氰基固定相都可用于法莫替丁的測定， 流動相大都采用乙腈 -磷酸鹽緩沖液或甲醇 -磷酸鹽緩沖液。 常用的檢測方法為紫 外檢測。 例1.固相萃取-HPLC測定人血漿中的法莫替丁 樣品制備 取肝素抗凝的待測血漿1.0ml，加入乙腈2ml，渦旋混合3min， 以3500r/min離心15min，吸取上清液至另一試管中，于 50C水浴下氮?dú)獯蹈桑?加1ml蒸餾水溶解殘渣，并通過硅膠預(yù)處理小柱（小柱預(yù)先用 1ml甲醇

23、、1ml蒸 餾水潤濕），5ml水洗后，用乙腈2ml洗脫，收集乙腈洗脫液，于 50C水浴下氮 氣吹干，殘渣用0.17mol/L的醋酸溶液50卩l(xiāng)溶解，吸取20卩l(xiāng)進(jìn)樣。 色譜條件 色譜柱：YWG-C柱，200mM 4.6mm, 10卩m 流動相：乙腈 -0.019mol/L磷酸溶液（10:90 ）,用二乙胺調(diào)至pH3.5。流速：1ml/min。檢測: 紫外，267nm 靈敏度：0.001AUFS外標(biāo)法定量。 結(jié)果 色譜圖見圖13-3。保留時間：法莫替丁，5.63min ;血漿內(nèi)源性雜質(zhì), 7.53min。 圖13-3人血漿中雷尼替丁及其代謝物的高效液相色譜圖 法莫替丁血漿（10卩g/L ）提取液

24、（a）空白血漿（b）; I.法莫替丁， II.血漿內(nèi)源性雜質(zhì) 方法回收率： 99.8%。萃取回收率：81.2%。血漿中藥物最低檢出濃度為 10 卩g/mL,在10200卩g/mL血藥濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。日內(nèi)和日間 RSD（ n=7） 均小于6% 例2.固相萃取-HPLC測定血漿、尿樣及胃液中的法莫替丁 樣品制備 血漿：肝素抗凝血漿離心后于-20 C冷凍，提取之前融化、攪拌 并離心30min。取1ml注入Bond-Elut硅膠萃取柱（預(yù)先依次用甲醇1ml、水2ml 處理），用水5ml沖洗，乙腈2ml洗脫。收集洗脫液，離心15min,經(jīng)0.45卩m 濾膜濾過，減壓用氮?dú)饬鞔蹈?，殘渣溶?200卩

25、l流動相中，渦旋混合，取100 卩l(xiāng)進(jìn)樣。尿樣：于-20 C貯存，測定前融化。取 5ml注入硅膠萃取柱（同上法 預(yù)處理），用水3ml沖洗，二甲基甲酰胺-水（1:1 ） 2ml洗脫，收集洗脫液，取 100卩l(xiāng)進(jìn)樣。胃液：處理方法與 血漿相似。 色譜條件 色譜柱：Supelcosyl LC-8 柱(25cm 4.6mm, 5卩m);保護(hù)柱： pelliguard 柱(40 卩 m)；流動相：甲醇-乙腈-0.016mol/L 磷酸(10:10:80 ), 流速： 1.0ml/min ；紫外檢測檢測波長： 254nm。 結(jié)果 方法準(zhǔn)確度和精密度 提取回收率： 血漿，80%87%；尿樣，85%90%。 日間和日內(nèi) RSD 血漿，2.2%3.75% (n=5);尿樣，2.5%4.3% ( n=5)。 線性范圍和檢測限線性范圍：血漿和唾液，0.12.0卩g