反相高效液相色譜法測定地榆中金絲桃苷的含量

1、DOC格式論文，方便您的復制修改刪減反相高效液相色譜法測定地榆中金絲桃苷的含量（作者：單位：郵編：）【摘要】目的建立地榆中金絲桃苷的高效液相色譜含量測定方法。方法采用RP-HPLC測定，C18 柱,流動相為甲醇-0.2% 磷酸溶液（46 54），用三乙胺調(diào)pH至3.0，流速1.0 ml min-1，檢 測波長370 nm ;供試品溶液的制備采用甲醇超聲提取。結(jié)果測定了 不同產(chǎn)地不同批次的地榆藥材，金絲桃苷質(zhì)量分數(shù)在0.052% 0.291%。結(jié)論該方法靈敏快速，準確可靠，可用于地榆的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】地榆金絲桃苷反相高效液相色譜法Abstract:ObjectiveTo establish

2、a determ in ati on method of hyperoside in San guisorba offici nalis. MethodsRP-HPLC analytical method was established on a Polaris C18column with Methanol-0.2%H3PO4 solution(46:54) as the mobile phase, the flow rate was 1.0 ml mi n-1, and the detecti on wavele ngth was 370 nm. The method of sample

3、was ultrasonic wave withdraws by Methanol. ResultsThe content of hyperoside was from 0.052 0.291% in different groups of S. officinalis collected from the differe nt locati ons. Con clusi on The method is accurate and can be used for the quality of San guisorba offic in alis.Key words:Sa nguisorba o

4、ffici nalis; Hyperoside ; RP-HPLC地榆為薔薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.或長葉地榆Sanguisorba officinalis L.var.longifolia（Bert.）Yu et Li 的干燥根。其味苦、酸、澀，微寒，具有涼血止血、解毒斂瘡之功效1, 2 ?，F(xiàn)代藥理研究表明其具有顯著的鎮(zhèn)痛作用3,主要有效成分為黃酮類化合物，但藥典記載質(zhì)量標準的定量檢測方法僅為紫外-可見分光 光度法測定其鞣質(zhì)含量，該法操作繁瑣。金絲桃苷為地榆藥材中提取 得到的黃酮類化合物。研究表明，地榆中的金絲桃苷是其止痛作用的 有效成分之一。本實驗采用

5、RP-HPLC法對不同產(chǎn)地中藥材市場商品 地榆的金絲桃苷成分進行了定量分析，考察了流通商品地榆的質(zhì)量狀 況，為進一步提高地榆藥材的質(zhì)量控制提供了科學依據(jù)。1儀器與試藥Agile nt 1100高效液相色譜儀，含在線脫氣機、四元梯度泵、 自動進樣器、智能柱溫箱、紫外可見光檢測器（VWD）、化學工作站。 KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。地榆藥材于200607中下旬從青海省各地中藥材市場抽取，由 青海省藥品檢驗所主任藥師劉海青鑒定為地榆S. officinalis L.的干燥根或飲片。實驗中將樣品粉碎后過100目篩，置干燥器中備用。金絲桃苷（111521-200303，國藥品

6、生物制品檢定所，供含量測 定用）。甲醇為色譜純，實驗用水為 Milli-Q超純水。其他試劑均為分 析純。2方法與結(jié)果2.1對照品溶液的制備精密稱取金絲桃苷13.25 mg，置量瓶中，加甲醇定容至25 ml, 其金絲桃苷含量為 0.53 mg ml-1。再精密吸取金絲桃苷對照品溶液 2.0 ml，加甲醇定容至50 ml量瓶中，其金絲桃苷含量為 0.021 2 mg ml-1。2.2供試品溶液的制備取地榆干燥藥材或飲片的粉末（過100 目） 1 g，分別精密稱定， 至具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 ml，稱定重量，超聲提取1 h， 放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用 0.45呵微孔

7、 濾膜濾過，用續(xù)濾液作為供試品溶液。2.3色譜條件Hypersil ODS2 分析柱（4.6 mm X250 mm，5 呵）;流動相甲 醇-0.2%磷酸溶液（46:54），用三乙胺調(diào)pH至3.0;流速1.0 ml min-1 ; 檢測波長370 nm ;柱溫25 C；進樣量10 4;在選定的色譜條件下， 理論塔板數(shù)以金絲桃苷峰計算不低于3 000。分離度大于1.5，拖尾因子在0.951.05。色譜圖見圖1。2.4檢測波長的選擇取金絲桃苷對照品適量，用甲醇溶解后作紫外全波長掃描，入286 , 370 nm,因286 nm下非黃酮物質(zhì)也有吸收，為避免干擾，選 擇檢測波長為370 nm。2.5線性關(guān)

8、系的考察分別精密吸取0.021 2 mg ml-1的金絲桃苷對照品溶液2, 4, 6, 8, 10, 12 , 16山注入液相色譜儀，測定峰面積，以金絲桃苷含 量（X ）為橫坐標，其峰面積吸收度積分值（Y）為縱坐標，繪制標 準曲線，其回歸方程為：Y = 2 263.9X+2.963 5 , r = 0.999 8 （n =7）, 表明金絲桃苷在0.04 0.34血線性關(guān)系良好。2.6精密度實驗精密吸取0.021 2 mg ml-1金絲桃苷對照品溶液10譏連續(xù)進 樣5次，測得峰面積積分值 RSD為0.86%，表明精密度良好。2.7重復性實驗精密稱取同一樣品粉末1 g （5份），按供試品溶液的制備

9、方法 制備，進樣10譏 測得金絲桃苷含量的 RSD為0.99%，表明該方 法的重復性好。2.8穩(wěn)定性實驗同一供試品溶液，從制備完畢開始放置，分別于0, 2, 4, 6, 8, 10 h進樣檢測，其峰面積積分值 RSD為1.9%。 表明供試品溶液在10 h內(nèi)比較穩(wěn)定。2.9加樣回收率實驗取已知含量的藥材（6號含量1.60 mg g-1）樣品6份，每份0.50 g ,精密稱定，計算樣品中金絲桃苷量，分別加入適量的金絲 桃苷對照品，按樣品制備方法和測試條件進行測定，計算加樣回收率 結(jié)果見表1。表1地榆中金絲桃苷的加樣回收率（略）2.10樣品測定分別精密吸取各樣品10 gl進樣測定，計算含量，結(jié)果見表

10、2 表2不同產(chǎn)地地榆樣品的金絲桃苷含量（略）3討論3.1提取條件的選擇根據(jù)金絲桃苷的溶解性能，選擇乙醇、甲醇、醋酸乙酯作為提 取溶劑，比較了 3種提取溶劑提取方法（超聲、回流及索氏提?。┖?不同提取時間（0.5，1.0，1.5 h）對提取效果的影響。結(jié)果顯示采用 超聲提取方法的提取率最高，甲醇提取效果最好，含量結(jié)果表明超聲 提取1.0 h可使待測成分提取完全。實驗證實，含量并未隨著提取時 間延長而有所增加，超過1h時含量甚至有下降的趨勢。3.2流動相的選擇由于金絲桃苷為黃酮類化合物，本實驗采用甲醇和0.2%磷酸溶 液的二元流動相體系，但實驗中發(fā)現(xiàn)色譜峰有拖尾現(xiàn)象。 經(jīng)反復實驗 發(fā)現(xiàn)，在1 00

11、0 ml的0.2%磷酸溶液中加入1.8 ml三乙胺時的分離效 果最佳，經(jīng)多次，多批樣品測試，系統(tǒng)具有良好的重復性和穩(wěn)定性， 三乙胺能與ODS柱中鍵合相的殘余硅醇基相互作用，提高分離度， 有助于改善峰形。因此以甲醇-0.2%磷酸溶液（46 ：4）用三乙胺調(diào) pH至3.0為優(yōu)，分離效果較好，保留時間適中，且無干擾3。本 方法操作簡便、快速、重復性好，適用于地榆中金絲桃苷含量的測定。3.3樣品分析本文對不同產(chǎn)地地榆中的金絲桃苷含量進行了測定， 結(jié)果表明， 不同產(chǎn)地金絲桃苷的含量存在著一定的差異， 有必要對其進行質(zhì)量控 制。中國藥典中地榆質(zhì)量標準的定量檢測方法操作較為繁瑣，根據(jù)本實驗的測定結(jié)果，RP-HPLC可以較好地對金絲桃苷進行有效分離， 方法簡