心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)課件

1、心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)1心肌酶和心肌蛋白檢測(cè)心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)2概 述 心臟是人體最重要的器官之一，它與血管組成人體的血液循環(huán)系統(tǒng)。擔(dān)負(fù)著氧、二氧化碳、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、中間代謝產(chǎn)物、激素等物質(zhì)的運(yùn)輸。 心血管疾病是發(fā)達(dá)國(guó)家的第一位死因 心肌損傷是指伴心肌細(xì)胞壞死的疾病，包括急性心肌梗死（心內(nèi)膜下心肌梗死，穿透性心肌梗死，非Q波性壞死）、不穩(wěn)定性心絞痛，心肌炎。 急性心肌梗死（AMI）是最常見的疾病之一，且發(fā)病率呈逐年增加的趨勢(shì)。因此急性心肌梗死的早期診斷對(duì)于治療是非常重要的心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)3AHA Supplement 19942004心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)4Leading Causes

2、of Death for All Males and Females United States: 2000A Total CVDBCancer CAccidentsD Chronic Lower Respiratory Diseases EDiabetes MellitusFInfluenza and PneumoniaAHA資料資料心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)5暫時(shí)性腦缺血暫時(shí)性腦缺血 (TIA) (TIA) 缺血性中風(fēng)缺血性中風(fēng)嚴(yán)重腿部缺血嚴(yán)重腿部缺血不穩(wěn)定心絞痛不穩(wěn)定心絞痛 (UA)血栓血栓急性心肌梗死急性心肌梗死 (AMI) (AMI)急性冠脈綜合征急性冠脈綜合征 (ACS)腦血管疾病腦血

3、管疾病外周血管疾病外周血管疾病 (PAD)穩(wěn)定性心絞痛穩(wěn)定性心絞痛間歇性跛行間歇性跛行心血管疾病心血管疾病 : Adapted from: Stary H.C. Circulation. 1995;92:1355-1374 Fuster V. Vasc Med. 1998;3:231-239 Ross R. NEJM. 1999;340:115-126心力衰竭心力衰竭心肌損傷心肌損傷斑塊斑塊心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)6CK/CK-MB集中在胞核、線粒體；cTn在肌漿中是細(xì)絲的一部分；Mb散在分布肌漿中。心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)7理想的心肌損傷標(biāo)志物條件 高敏感性和高特異性；主要或僅存在于心肌組織（特

4、異），在心肌中有較高的含量，在正常血液中不存在，可反映小范圍的損傷（敏感）能檢測(cè)早期心肌損傷，且窗口期長(zhǎng)； 能估計(jì)梗死范圍大小，判斷預(yù)后； 能評(píng)估溶栓效果；檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快速；其應(yīng)用價(jià)值已由臨床所證實(shí)心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)8急性心肌損傷生物化學(xué)標(biāo)志物一、傳統(tǒng)的心肌酶譜二、心肌蛋白心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)9（一）傳統(tǒng)的心肌酶譜（一）傳統(tǒng)的心肌酶譜 肌酸激酶(CK)-羥丁酸脫氫酶(HBDH)門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST/GOT)乳酸脫氫酶(LD)乳酸脫氫酶同功酶肌酸激酶同工酶及其亞型 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)10（1）LD及其同工酶 細(xì)胞的胞漿和線粒體中 H4(LD1)，MH3(LD2)，

5、M2H2(LD3)， M3H(LD4)， M4(LD5)； 肝臟和骨骼肌所含LD以LD4和LD5為主 心臟、腎臟和紅細(xì)胞所含的LD同工酶以LD1和LD2為主 ； LD的半壽期為57 170h， 1. 1. 分布分布 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)11二：參考值：總LD活性 104-245U/L同工酶 LD1 (32.74.60)% LD2 (45.13.53)% LD3 (18.52.96)% LD4 (2.900.89)% LD5 (0.850.55)% LD1 /LD2 0.450.7；心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)12臨床意義 LDH增高主要見于AMI、充血性心衰和心肌炎；還見于病毒性肝炎、肝硬化、原發(fā)

6、性肝癌、梗阻性黃疸、肌肉損傷、肌萎縮、某些惡性腫瘤（白血病，結(jié)腸癌）等。AMI在常測(cè)酶中，LDH升高最慢（810h），但升高時(shí)間最長(zhǎng)（510d），峰值可達(dá)10倍正常上限。在LDH同工酶 中LDH1LDH2，并可持續(xù)到兩周（部分病例總LDH正常）。心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)13（2）CK及其同工酶 細(xì)胞胞質(zhì) 由 M和B兩種亞單位組成的二聚體 CKBB(CK1)存在于腦組織中， CKMB(CK2) 和CKMM(CK3)存在各種肌肉組織中 ； CKMB可分為MB1和MB2（為主）兩種異型 CK-MB占心肌總CK的l5%25%（骨骼肌中為12%）。 CK半壽期：1012h 1. 1. 分布分布 心肌酶和心

7、肌蛋白的檢測(cè)14CKMB的質(zhì)量檢測(cè)：的質(zhì)量檢測(cè)：1985年，單克隆抗體年，單克隆抗體法，其診斷法，其診斷AMI較酶法更敏感、更穩(wěn)定、更較酶法更敏感、更穩(wěn)定、更快（快（10 40min），且可以自動(dòng)化。），且可以自動(dòng)化。 CK同工酶亞型：同工酶亞型：常用高壓電泳分離（快速、常用高壓電泳分離（快速、敏感）敏感）2. 2. 檢測(cè)檢測(cè) 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)153.臨床意義（CK及其同工酶）（1 1）CK-MBCK-MB：CK-MB/CK-MB/總總CKCK（測(cè)酶活性）（測(cè)酶活性） 總總CK100UL，CK-MB15UL， CKMB6，多考慮肌肉疾病，多考慮肌肉疾病， CKMB在在625%，AMI診斷

8、可成立診斷可成立 CKMB25，有，有CKBB或巨型或巨型CK存在。存在。 較早期診斷較早期診斷AMIAMI、估計(jì)梗死范圍大小或再梗死。、估計(jì)梗死范圍大小或再梗死。 （2 2）觀察再灌注的效果：）觀察再灌注的效果：溶栓后幾小時(shí)內(nèi)，溶栓后幾小時(shí)內(nèi)， CK-MBCK-MB繼續(xù)升高，然后下降（沖洗現(xiàn)象）。繼續(xù)升高，然后下降（沖洗現(xiàn)象）。 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)16u CK-MB CK-MB2 21.0U/L1.0U/L且且CK-MBCK-MB2 2/CK-MB/CK-MB1 11.51.5。u CK-MMCK-MM3 3/CK-MM/CK-MM1 10.50.5也可作為也可作為AMIAMI的診斷標(biāo)的

9、診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。準(zhǔn)之一。（3 3）MBMB2 2/MB/MB1 1和和MMMM3 3/MM/MM2 2的比值升高的比值升高( (正常人正常人1)1)均可作為診斷均可作為診斷AMIAMI的標(biāo)準(zhǔn)之一。的標(biāo)準(zhǔn)之一。心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)17 急性心肌梗死后心肌酶的時(shí)相變化急性心肌梗死后心肌酶的時(shí)相變化對(duì)單純性急性對(duì)單純性急性心肌梗死病人心肌梗死病人 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)18 心肌酶的生理變異心肌酶的生理變異在應(yīng)用心肌酶對(duì)在應(yīng)用心肌酶對(duì)AMIAMI進(jìn)行診斷時(shí)，需考慮生理因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。進(jìn)行診斷時(shí)，需考慮生理因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。1 1性別：性別：LDHLDH在出生時(shí)為成人兩倍，隨著年齡增長(zhǎng)逐漸下

10、降，到在出生時(shí)為成人兩倍，隨著年齡增長(zhǎng)逐漸下降，到1414歲時(shí)達(dá)成人水平。歲時(shí)達(dá)成人水平。2 2年齡：年齡：3 3運(yùn)動(dòng)：運(yùn)動(dòng)：血清血清CKCK在男性明顯高于女性，在男性明顯高于女性， 升高程度和運(yùn)動(dòng)量及持續(xù)時(shí)間有關(guān)，也與運(yùn)動(dòng)者是否經(jīng)常鍛煉有關(guān)，訓(xùn)練升高程度和運(yùn)動(dòng)量及持續(xù)時(shí)間有關(guān)，也與運(yùn)動(dòng)者是否經(jīng)常鍛煉有關(guān)，訓(xùn)練有素的運(yùn)動(dòng)員，其心肌酶升高幅度小。有素的運(yùn)動(dòng)員，其心肌酶升高幅度小。 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)19 3 3 血清心肌酶的測(cè)定對(duì)急性心肌梗死的診斷存在的不足之處血清心肌酶的測(cè)定對(duì)急性心肌梗死的診斷存在的不足之處： 特異性較差特異性較差酶活性升高出現(xiàn)較晚酶活性升高出現(xiàn)較晚持續(xù)時(shí)間短持續(xù)時(shí)間短心

11、肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)20二二 心肌蛋白檢測(cè)心肌蛋白檢測(cè) 肌紅蛋白 心肌肌鈣蛋白 脂肪酸結(jié)合蛋白心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)21（1）肌紅蛋白（myoglobin，Mb） 生物化學(xué)特性 Mb是一種氧結(jié)合蛋白，廣泛存在于各種肌肉中（特異性不高） ，約占肌肉中所有蛋白的2。 Mb分子量小，僅17.8kD，位于胞質(zhì)中，故AMI發(fā)生后出現(xiàn)較早釋放入血。 CK-MB（84kD） LD（134kD） 當(dāng)AMI病人發(fā)作后 0.5 2h即升高。512h達(dá)高峰，18 30h恢復(fù)至正常水平。心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)22臨床應(yīng)用與評(píng)價(jià) 在急性心肌梗死發(fā)作12h內(nèi)診斷敏感性很高，有利于早期診斷，是至今出現(xiàn)最早的急性心肌梗死標(biāo)志

12、物。 能用于判斷再灌注是否成功。 是判斷再梗死的良好指標(biāo)：Mb消除很快 在胸痛發(fā)作212h內(nèi)，Mb陰性可排除急性心肌梗死（ Mb的陰性預(yù)測(cè)價(jià)值為100）。心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)23 Mb與碳酸酐酶聯(lián)用可提高早期診斷AMI的特異性。心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)24肌鈣蛋白肌鈣蛋白TnC：與鈣離子結(jié)合部分：與鈣離子結(jié)合部分TnI：含抑制：含抑制(ATP酶酶)因子部分因子部分TnT：與原肌球蛋白結(jié)合部分：與原肌球蛋白結(jié)合部分Tn (troponin) cTn(cardiac troponin)：為心肌細(xì)胞所特有。為心肌細(xì)胞所特有。（2） 心肌肌鈣蛋白檢測(cè)1. 肌鈣蛋白肌鈣蛋白(Tn)的特性的特性 心肌酶和

13、心肌蛋白的檢測(cè)25 Troponin T (39.7 kD) 連接肌鈣蛋白復(fù)合物至原肌球蛋白細(xì)絲連接肌鈣蛋白復(fù)合物至原肌球蛋白細(xì)絲 Troponin C (18 kD) 結(jié)合鈣離子使肌肉收縮結(jié)合鈣離子使肌肉收縮 Troponin I (22.5 kD) 在靜止?fàn)顟B(tài)抑制收縮在靜止?fàn)顟B(tài)抑制收縮 肌鈣蛋白肌鈣蛋白 ( (Troponin，Tn) 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)262. 檢測(cè)方法 通過(guò)cTn的特異性單克隆抗體利用化學(xué)發(fā)光及電化學(xué)發(fā)光的方法進(jìn)行定量檢測(cè) 利用單克隆抗體制備的免疫層析法進(jìn)行定性檢測(cè)心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)27（2）cTnT的臨床意義 用于用于AMI的診斷，的診斷，發(fā)生發(fā)生6h后，敏感

14、性達(dá)后，敏感性達(dá)90以上以上（可達(dá)（可達(dá)5天以上）；天以上）； 應(yīng)用應(yīng)用cTnT對(duì)不穩(wěn)定心絞痛病人監(jiān)測(cè)對(duì)不穩(wěn)定心絞痛病人監(jiān)測(cè)可以發(fā)現(xiàn)一些可以發(fā)現(xiàn)一些輕度和小范圍心肌損傷；輕度和小范圍心肌損傷；cTnT還可用于評(píng)估溶栓療法的還可用于評(píng)估溶栓療法的成功成功與否與否，觀察冠，觀察冠狀動(dòng)脈是否復(fù)通；狀動(dòng)脈是否復(fù)通； （雙峰的出現(xiàn)）（雙峰的出現(xiàn)）cTnT與與CK-MB均常用于判斷均常用于判斷急性心肌梗死大小急性心肌梗死大小；對(duì)于心肌炎、不穩(wěn)定性心絞痛診斷，對(duì)于心肌炎、不穩(wěn)定性心絞痛診斷，cTnT是比是比CK-MB敏感。敏感。評(píng)估腎功能衰竭透析者的預(yù)后評(píng)估腎功能衰竭透析者的預(yù)后 升高者預(yù)后差升高者預(yù)后差心

15、肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)28（3）cTnI的臨床意義 cTnI是一個(gè)十分敏感和特異的是一個(gè)十分敏感和特異的AMI標(biāo)志物標(biāo)志物，心肌損傷后，心肌損傷后46h釋放入血；釋放入血； 和和cTnT一樣，一樣，cTnI可用于溶栓后再灌注的可用于溶栓后再灌注的判斷，判斷， cTnI可敏感地測(cè)出小灶性可逆性心肌損傷可敏感地測(cè)出小灶性可逆性心肌損傷存在：不穩(wěn)定心絞痛和非存在：不穩(wěn)定心絞痛和非Q 波波MI。 目前檢測(cè)的目前檢測(cè)的cTnI多以復(fù)合物形式存在：多以復(fù)合物形式存在：在在AMI中中90是是 cTnIcTnC復(fù)合物，復(fù)合物，5的的cTnIcTnT。 比比cTnT具有更高的心肌特異性具有更高的心肌特異性心肌酶和

16、心肌蛋白的檢測(cè)29心梗發(fā)作后心梗發(fā)作后cTn、CK、Mb的診斷敏感度的診斷敏感度 敏敏感感性性cTnCKMb癥狀發(fā)作后時(shí)間癥狀發(fā)作后時(shí)間(小時(shí)小時(shí))心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)30心梗后灌注成功與未再灌注病例心梗后灌注成功與未再灌注病例cTnT的變化的變化 未再灌注未再灌注灌注成功灌注成功心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)31（4）心肌肌鈣蛋白的評(píng)價(jià)（優(yōu)點(diǎn)） cTn的敏感度及檢測(cè)特異性均高于CK，而且能檢測(cè)微小損傷（如UA、心肌炎）； 有較長(zhǎng)的窗口期，有利于診斷遲到的AMI、UA和心肌炎的一過(guò)性損傷（ cTnT長(zhǎng)達(dá)7天，cTnI長(zhǎng)達(dá)10天，甚至14天）； 雙峰的出現(xiàn)，易于判斷再灌注成功與否； 與心肌損傷范圍大小

17、相關(guān)，可用于判斷病情輕重，指導(dǎo)正確治療； 胸痛發(fā)作6h后，血cTn濃度正?？膳懦鼳MI。 符合理想的心肌損傷的標(biāo)志物條件符合理想的心肌損傷的標(biāo)志物條件心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)3232（3）脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP） FABP是小分子量是小分子量(14 l5kD)胞漿蛋白，胞漿蛋白，心肌內(nèi)心肌內(nèi)FABP含量（含量（0.46mg/g心肌心肌,）比骨）比骨骼肌組織內(nèi)豐富許多。骼肌組織內(nèi)豐富許多。 FABP診斷早期診斷早期AMI的敏感性和特異性和的敏感性和特異性和Mb相近，比相近，比CK-MB高。高。 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)33糖原磷酸化酶 （GP） 三種同工酶：腦和心臟的三種同工酶：腦和心臟的GPBB

18、，骨骼肌的，骨骼肌的GPMM和肝臟的和肝臟的GPLL。 心肌缺氧、缺血時(shí)，處于糖原糖酵解狀態(tài)，心肌缺氧、缺血時(shí)，處于糖原糖酵解狀態(tài)，GPBB隨糖原降解加速進(jìn)入胞漿，透過(guò)胞膜進(jìn)隨糖原降解加速進(jìn)入胞漿，透過(guò)胞膜進(jìn)入循環(huán)。入循環(huán)。 GPBB被認(rèn)為是診斷心肌缺血的最為敏感指標(biāo)被認(rèn)為是診斷心肌缺血的最為敏感指標(biāo)之一。之一。 在急性心肌梗死時(shí)，在急性心肌梗死時(shí)，GPBB在胸痛在胸痛24h開始升開始升高，它的特異性與高，它的特異性與CK-MB相似。相似。 心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)34小小 結(jié)結(jié)心肌酶和心肌蛋白的檢測(cè)35心肌損傷標(biāo)志物心肌損傷標(biāo)志物心肌標(biāo)志物心肌標(biāo)志物分子量分子量(KD)半壽期半壽期(h)醫(yī)學(xué)決醫(yī)學(xué)決定水平定水平開始升高開始升高時(shí)間時(shí)間(h)峰時(shí)間峰時(shí)間(h)恢復(fù)時(shí)間恢復(fù)時(shí)間增加倍數(shù)