醫(yī)學檢驗技能操作

1、精品文檔交流紅細胞計數1加稀釋液取小試管1支，加紅細胞稀釋液 2ml。2、 加血 用清潔干燥微量吸管或一次性微量吸管采集末梢血或抗凝血10ul ,擦去管外余血，輕輕加至紅細胞稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管2-3次，立即混勻。3、 充池 混勻后用微量吸管或玻璃棒將紅細胞懸液充入計數池，室溫下平放3-5分鐘，待 細胞下沉后于顯微鏡下計數。4、 計數 用高倍鏡依次計數中央大方格內4角和正中5個中方格內的紅細胞。5、計算12紅細胞 /L=N/200 X 10 /LN:表示5個中方格內數得的紅細胞數。白細胞計數1、 加稀釋液用吸管吸取白細胞稀釋液 0.38ml于小試管中。2、 吸取血液 用微量吸管吸取

2、新鮮全血或末梢血 20ul，擦去管尖外部余血，將吸管插入小 試管中白細胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上層白細胞稀釋液清洗吸管2-3次。3、混勻 將試管中血液與稀釋液混勻，待細胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?、 充池 再次將小試管中的細胞懸液混勻。用滴棒蘸取細胞懸液1滴，充入改良Neubauer計數板的計數池中，室溫靜置2-3分鐘，待白細胞完全下沉。5、計數 在低倍鏡下計數四角 4個大方格內的白細胞總數。6、 計算白細胞=4個大方格內白細胞數（N） /20 X 109/L白細胞分類計數1、將血涂片用瑞氏染液染色，沖洗干凈，自然干燥后待用。2、 鏡下觀察低倍鏡下觀察白細胞的分布和染色情況。3、觀察

3、選擇血涂片體尾交界處細胞分布均勻、著色良好的區(qū)域，按一定的方向順序對所見到的每1個白細胞進行分類，并用白細胞分類計數器作好記錄，共計數100個白細胞。計算 求出各類細胞所占的百分比率。血涂片的制備和瑞氏染色1、 采血：用微量吸管在距載玻片一端1cm處加1滴抗凝血。2、推片：左手平執(zhí)載波片，右手持推片從后方或前方接近血滴，使血液沿推片邊緣展開成 適當的寬度，立即將推片與載波片呈 30度到45度角，輕壓推片邊緣將血液推制成厚薄適宜 的血涂片，血涂片應呈舌、頭、尾三部分。3、干燥：將推好的血涂片在空氣中晃動，使其迅速干燥。4、標記：在載玻片的一端用記號筆編號。5、染色：血涂片自然干燥后，用蠟筆在兩端

4、畫線，以防染色時染液外溢。隨后將玻片平置于染色架上，滴加染液 3-5滴，使其蓋滿血涂片，大約 1分鐘后，滴加等量或稍多的II液，用吸耳球輕輕混勻。6、沖洗：1分鐘后，用流水沖去染液，待干。7、觀察結果：將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。用低倍鏡觀察血涂片體尾交界處的血細 胞。ABO血型鑒定（一）正定型法1、 5%被檢紅細胞生理鹽水懸液制備抗凝血離心或紅細胞自然沉降后取下層紅細胞2滴于精品文檔交流小試管中，加入生理鹽水 2 ml，用尖滴管將紅細胞與生理鹽水充分混勻，2500r/min離心3分鐘后棄去上清液，重復洗滌三次后自管底吸取1滴血紅細胞加入19滴生理鹽水中，此即為5%的紅細胞生理鹽水懸液。2

5、、 標記試管取小試管2支，分別標記抗 A、抗B。3、 加標準抗血清分別加入抗A、抗B標準血清各1滴于相應標記的試管中。4、 加入紅細胞懸液分別加入被檢者 5%紅細胞生理鹽水懸液 1滴于各試管中，混勻，立即以 1000r/min，離心 1min。5、 觀察結果先觀察上層液有無溶血現象，再斜持試管輕輕搖動或輕輕彈動，使管底的紅細胞慢慢浮起，肉眼觀察有無凝集、再用低倍鏡觀察凝集強弱程度，如輕微凝集或不見凝集，必須將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡觀察。6、判斷結果（1）凝集結果判斷標準：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，顯微鏡下紅細胞分散存在，無凝集靠攏現象為陰性；紅細胞出現凝集為陽性。（二）反定型法1、分

6、離血清 2500r/min ，離心3min，分離血清。2、 標記并加被檢者血清取小試管3支，分別標記 A、B、O字樣，于各管加入被檢者血清 1滴。3、 加標準紅細胞按標記分別加入 5%的A、B O型標準紅細胞生理鹽水懸液1滴，混勻，立即以1000r/min，離心1min。4、 觀察結果先觀察上層液有無溶血現象，再斜持試管輕輕搖動或輕輕彈動，肉眼觀察有 無凝集，再用低倍鏡觀察。5、判斷結果6、凝集結果判斷標準：同正定型法。網織紅細胞計數1、 加染液 取煌焦油藍生理鹽水溶液2滴，再加入新鮮全血2滴，立即混勻，置室溫下15-20分鐘。2、 制備涂片取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。3、觀察在低倍鏡下選

7、擇紅細胞分布均勻的部位進行觀察。4、計數 在油鏡下計數至少1000個紅細胞中的網織紅細胞數。5、 計算 網織紅細胞分數數=計數的網紅細胞數/1000尿蛋白定性檢查（加熱乙酸法）1、加尿液 取大試管1支，各加清晰尿液 5ml。2、 加熱傾斜試管下端，在酒精燈上加熱尿液上1/3段，煮沸即止。3、 觀察輕輕直立試管，在黑色背景下觀察煮沸部分有無渾濁。4、加酸后再加熱 滴加5%的乙酸溶液2-4滴，再煮沸后立即觀察結果。5、判斷結果 判斷陽性程度及蛋白質的含量。革蘭染色1制玻片 用接種環(huán)挑取一環(huán)生理鹽水放在載玻片中央，再挑取一環(huán)菌種放入生理鹽水中涂片。2固定將涂片在火焰外焰上過2-3回，放涼。3初染滴加

8、結晶紫染色液，染1mi n,沖洗，甩干。4媒染滴加革蘭氏碘液，作用1mi n，沖洗，甩干。5脫色 滴加95%酒精脫色，約 30s，或將酒精滴滿整個涂片，立即傾去，再用酒精滴滿整個涂片，脫色10s，沖洗，甩干。精品文檔交流6復染 滴加復染液，復染 30s，沖洗，甩干，鏡檢?？顾崛旧?）初染用玻片夾夾持涂片標本，滴加石炭酸復紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標本冷卻后用水沖洗。2）脫色3縊酸酒精脫色30秒1分鐘；用水沖洗。3）復染用堿性美蘭溶液復染 1分鐘，水洗，用吸水紙吸干后用油鏡觀察。藥敏實驗1在“超凈臺”中，

9、用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養(yǎng)物，以劃線方式將 細菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式；用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂 菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密）2將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基 緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結果，要求藥敏片能有規(guī)律的分 布于平皿培養(yǎng)基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片

10、（外周一般可貼七片） 每種藥敏片的名稱要記住。3將平皿培養(yǎng)基置于 37 C溫箱中培養(yǎng)24小時后，觀察效果。瓊脂平板分區(qū)劃線分離法（1）滅菌接種環(huán)，待冷，取 1環(huán)葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液。（2）瓊脂平板倒放于桌面，左手抓握起平板底部，盡量直立使瓊脂面靠近酒精燈火焰，以免雜菌污染。右手持沾菌接種環(huán)在平板表面上端來回劃線，涂成一薄膜（第1區(qū)，約占平板面積的1/5）。劃線時接種環(huán)與瓊脂表面呈30。45,用指力輕輕來回滑動密集劃線，切忌劃破瓊脂。英（3）滅菌接種環(huán)，殺死環(huán)上剩余的細菌，待冷，轉動培養(yǎng)皿約6070,將接種環(huán)通過第1區(qū)34次，作連續(xù)劃線為第2區(qū)，約占平板面積1/4,待冷劃第3、4區(qū)（圖1-3-1）。（4）劃線完畢，蓋好皿蓋，在平板底部用記號