2009基因工程試題

1、第七章 重組克隆的篩選與鑒定一、填空題1 重組體的篩選有兩層涵義，一是將 - ，二是將 - 。2 目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構(gòu)思巧妙、具有極高準確性的篩選方法。大致可以分為： (1) - (2) - (3) -(4) 等。3 噬菌斑形成選擇法有兩種判斷標(biāo)準，一是 - ，二是 -4 PCR 擴增篩選重組體是比較簡便的篩選方法，它適合于 - 5.核酸雜交探針可分為兩大類：DNA探針和RNA探針。其中DNA探針又分為一探針和 -探針。6.如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DN/產(chǎn)生3突出的黏性末端，則可以用 進行3末端標(biāo)記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割DNA產(chǎn)生的是3突出的黏性末端，可以用一

2、- 一進行3末端標(biāo)記。7. 單鏈DNA探針的標(biāo)記可以采用下列方法：(1) - (2) - (3)-。8 根據(jù) Northern 雜交的結(jié)果可以說明： - 。9 差示雜交 (differential hybridization)技術(shù)需要 - 。10. RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜)上，同一放射DNA 探針雜交的技術(shù)稱 - 。11.在一一- 技術(shù)中，DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(或尼龍膜)上，然后與放射性的 DNA探針雜交。12 - 使用核酸探針檢測細胞和組織中特定核苷酸序列的位置。13為了鑒定某一具有特殊功能蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，可

3、以用一個容易檢測的報告蛋白制備，然后跟蹤報 告蛋白在細胞中的行為即可。14.可用T4DNA聚合酶進行平末端的 DNA標(biāo)記，因為這種酶具有一一 -和一 一的活性。15硝酸纖維素膜(NC)結(jié)合DNA的能力為一一，尼龍膜(Nylon)為16.如果對一個克隆的基因進行遺傳操作，使互補的鏈轉(zhuǎn)錄，會產(chǎn)生同正常的RNA轉(zhuǎn)錄物互補的一-分子17.在Southern印跡中，DNA轉(zhuǎn)移的速度取決于 - 和一-18根據(jù)噬菌斑的清晰程度篩選重組體主要是cI 基因的一 - .19.用不對稱PCR合成單鏈DNA探針時，兩個引物的濃度比為：一 - .20.微細胞是一種 E. coli 的突變體，通常只有正常細胞的，而且不含

4、 -.21.點雜交的主要缺點是 - .22.根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因素：(1) -(2) - (3) - 。23.阻斷翻譯雜交法是 - 同 - 的雜交。24.在切口移位標(biāo)記探針時，DNAasel處理DNA的溫度應(yīng)控制在一 - ，溫度過高， - ，不利于標(biāo)記 .25. Northern 印跡和 Southern 印跡有兩點根本的區(qū)別：(1) - (2) - .26.放射免疫篩選的原理基于以下三點： (1)- (2) - (3) - 。二、判斷題1. 以入噬菌體為載體的篩選方法比較簡便，凡能形成噬菌斑的就一定是重組體o2. 核酸雜交探針就是帶有放射性標(biāo)記的 DNA分子.

5、3. 在Northern雜交中，為了防止 RNA形成部分環(huán)狀發(fā)夾結(jié)構(gòu)，影響遷移率，所以要用變性緩沖液 進行電泳。4 探針的離體標(biāo)記實際上是酶法標(biāo)記。5. 切口移位法(nicktranslation) 只能標(biāo)記線性雙鏈 DNA不能標(biāo)記環(huán)狀雙鏈 DNA.6 通過原位菌落雜交得到的陽性克隆即是重組體，但不能判斷插入的外源基因是否進行了表達。7. 尼龍膜(nylon membrane)是核酸雜交的一種固體支持物，具有同DNA結(jié)合能力強、韌性強，可反復(fù)洗脫使用，并且雜交信號本底低等優(yōu)點，就是成本高。8. 如果DNA序列的某種變異在群體中是稀有的，稱為突變；若是普遍的，則稱為多態(tài)性。9. 用寡聚DNA進行

6、高度嚴緊的雜交可用于胎兒遺傳病的診斷，可檢測到因單個核苷 酸變化而造成的基因突變。10由于基因家族中成員之間是密切相關(guān)的，因此可以用其中一個成員作為探針進行高度嚴緊的雜交來檢測其他成員。11通過用化學(xué)標(biāo)記法取代放射性標(biāo)記法，并采用一種抗體來特異性地識別這種化學(xué)修飾，使得原位 雜交的分辨率大大提高。12在雜交之前先用凝膠電泳將粗提取物中的RNA或DNA分子進行分離，假定雜交后只有一種或少數(shù)幾種大小的片段被探針雜交上了，就能肯定這種雜交是特異性的。13根據(jù)某一感興趣蛋白質(zhì)的序列、抗原性以及配基結(jié)合性質(zhì)制備探針，可從DNA文庫中篩選到相應(yīng)的基因。14如果用其他的方法對某種蛋白質(zhì)已進行過鑒定，那么要確

7、定某一克隆是否含有該蛋 白編碼基因就相當(dāng)容易了。15.用DNA探針進行雜交反應(yīng)非常敏感并具有選擇性，可用來測定某一特定DNA序列在細胞基因組中的拷貝數(shù)。16雙重藥物選擇法富集哺乳動物細胞中稀有重組體的原理是：一種藥物用于選擇以任意方式整合外源DNA的細胞，第二種藥物殺死帶有隨機整合DNA的細胞。17.就像對培養(yǎng)中的鼠胚性干細胞進行遺傳操作獲得突變鼠一樣，用DNA轉(zhuǎn)染培養(yǎng)中的單個植物細胞，能夠創(chuàng)造轉(zhuǎn)基因植物。18. NC(硝酸纖維素膜)和尼龍膜都可作為電轉(zhuǎn)移DNA支持物。19單克隆抗體是淋巴細胞和瘤細胞雜交后形成的單個雜交瘤細胞經(jīng)無性繁殖而產(chǎn)生的特異性抗體。20用免疫化學(xué)法篩選重組體不需要外源基

8、因的表達。21.用DNA探針同RNA分子雜交在測定一已知基因在某一細胞中是否表達時是很有用的，但不能用于檢測轉(zhuǎn)錄起始位點、終止位點或內(nèi)含子的位置。22.核酸雜交的原理是根據(jù) DNA分子間互補。23突出的 3末端或凹缺的 3末端都可以用 Klenow 大片段酶進行末端標(biāo)記。24.用多核苷酸激酶進行 5末端標(biāo)記前，DNA必須進行脫磷酸，否則無法標(biāo)記。25. X-gal顯色反應(yīng)的基本原理是使載體上與受體互補的a肽失活。26 Northern 印跡和 Southern 印跡的基本原理是一樣的，都是用于檢測結(jié)構(gòu)基因的表達。27在液相液相和液相固相雜交中，它們的雜交效率都是一樣的。三、選擇題 ( 單選或多

9、選 )1 下列各項中，需要進行液相雜交的是 ( )(a) Southern 印跡 (b)Northern 印跡(c)Slot 印跡 (d)S1 作圖(a)既能標(biāo)記DNA又能標(biāo)記RNA(b)既能標(biāo)記雙鏈DNA又能標(biāo)記單鏈DNA(c)只能標(biāo)記突出的 5端不能標(biāo)記其他類型末端(d)DNA 或RNA必須有5-0H的存在3Southern 印跡的DNA探針()雜交。(a)只與完全相同的片段(b)可與任何含有相同序列的 DNA片段(c)可與任何含有互補序列的 DNA片段(d)可與用某些限制性內(nèi)切核酸酶切成的DNA片 段(e)以上都是4用下列方法進行重組體的篩選，只有( ) 說明外源基因進行了表達。(a)S

10、outhern 印跡雜交 (b)Northern印跡雜交(c)Western 印跡 (d) 原位菌落雜交5 下列哪一個不是 Southern 印跡法的步驟 ?( )(a)用限制酶消化 DNA(b)DNA 與載體的連接(c)用凝膠電泳分離DNA片段(d)DNA 片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上(e)用一個標(biāo)記的探針與膜雜交6報告基因 ( )(a)以其易于分析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列(b)以其易于分析的啟動子區(qū)代替感興趣基因的啟動子區(qū)(c)能用于檢測啟動子的活性(d)能用于確定啟動子何時何處有活性7當(dāng)用過量的RNA與有限的DNA雜交時，()(a)所有的RNA雜交(b)所有的DNA雜交(c)50%

11、的RNA雜交下面關(guān)于用 T4 多核苷酸激酶標(biāo)記 5端制備探針的描述中 ( ) 是不正確的。(d)50 %的DNA雜交(e)沒有RNA雜交，所有的DNA復(fù)性為雙鏈DNA8.在利用 lacZ 失活的顯色反應(yīng)篩選法中，IPTG 的作用是 (a)誘導(dǎo)宿主的a肽的合成(b)誘導(dǎo)宿主的3肽的合成(c)作為酶的作用底物(d)作為顯色反應(yīng)的指示劑9.用菌落雜交法篩選重組體時，()(a)需要外源基因的表達(b) 不需要外源基因的表達(c)要根據(jù)克隆基因同探針的同源性(d)上述說法都正確10 .微細胞是一種大腸桿菌突變體，( )(a)它不帶任何 DNA(b)它的體積為正常細胞的 110(c)它帶有染色體DNA但不

12、能表達(d)它帶有質(zhì)粒DNA可以表達11 .切口移位是指在 () 作用下，使( )帶上放射性標(biāo)記。(a)DNA 聚合酶 I，RNA (b)DNA 聚合酶 I ，DNA(c)DNA 聚合酶山，RNA (d)DNA 聚合酶山，DNA12用于核酸分子雜交的探針可以是放射性標(biāo)記的 ( )(a)DNA (b)RNA (c) 抗體 (d) 抗原13.下面關(guān)于細菌人工染色體 (BAC)的特點描述，除了()外都是正確的。(a)通過電激法將大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌比酵母的轉(zhuǎn)化率提高了10100倍(b) BAC 載體在細胞中以環(huán)型超螺旋狀態(tài)存在，使分離操作起來相對容易(c) BAC 載體在大腸桿菌宿主保持高拷貝(d)克

13、隆到BAC載體上的外源片段可以直接進行測序以獲得末端序列14.用免疫化學(xué)法篩選重組體的原理是 ( )(a) 根據(jù)外源基因的表達 (b) 根據(jù)載體基因的表達(c) 根據(jù)mRNA同DNA的雜交 (d) 根據(jù)DNA同 DNA的雜交15.隨機引物標(biāo)記探針，下列各項中哪一項是不正確的 ?()(a) 雙鏈DNA單鏈DNA RNA都是可以標(biāo)記的(b)不需要用 DNaseI 預(yù)處理精品文檔你我共享(C)反應(yīng)時可用 Klenow 酶(d)反應(yīng)時可用DNA聚合酶I16.在切口移位標(biāo)記 DNA探針時只能使用()(a)Klenow 酶 (b)DNA 聚合酶 I(c)DNA 聚合酶U (d)DNA聚合酶山17.要對一雙

14、鏈的DNA分子進行3末端標(biāo)記，可用()(a)Klenow 酶 (b)DNA 聚合酶 I(c)T4DNA 聚合酶 (d)T7DNA 聚合酶18.關(guān)于噬菌斑篩選法的原理，下面哪一種說法不正確 ?( )(a)噬菌斑顏色變化 (b)c I 基因失活造成的噬菌斑的變化(c)對IPTG的分解能力(d) 對X-gal的分解與否19 .下列篩選重組體的方法中，不屬于遺傳學(xué)的方法是： ( )(a)插入失活法 (b) 顯色反應(yīng)選擇法(c)噬菌斑選擇法 (d)R 環(huán)分析法四、簡答題1 .點印跡與 Southern 印跡相比，有何優(yōu)點和缺點 ?2 .你在做Southern印跡分析，并且剛完成了凝膠電泳這一步。根據(jù)方案

15、，下面一步驟是用NaOH溶液浸泡凝膠，使DNA變性為單鏈。為了節(jié)省時間，你略過了這一步，直接將DNA從凝膠轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上。然后用標(biāo)記探針雜交，最后發(fā)現(xiàn)放射自顯影片是空白。錯在哪里 ?3 .切口移位 (nicktranslation)標(biāo)記探針的主要步驟有哪些 ?4 .插入失活和插入表達法篩選重組體的主要差別是什么?5 .一個攜帶有氨芐和卡那霉素抗性基因的質(zhì)粒被僅在卡那霉素基因中有識別位點的EcoRI 消化。 消化物與酵母DNA連接后轉(zhuǎn)化對兩種抗生素都敏感的正coli菌株(1)利用哪一種抗生素抗性選擇接受了質(zhì)粒的細胞?(2)怎樣區(qū)分接受了插入酵母 DNA的質(zhì)粒的克??？6 .用EcoRI和Hin

16、d山分別切割同一來源的染色體DNA并進行克隆，在前者的克隆中篩選到A基因，但在后者的克隆中未篩選到A基因，請說明原因7 .什么是 Western 印跡?它與 Southern 印跡有什么不同 ?8 .用一限制性內(nèi)切核酸酶切割Lac+TetR的質(zhì)粒載體，已知該酶識別的是4個堿基序列，并產(chǎn)生有兩個堿基突出的單鏈末端，該酶在 lac 基因內(nèi)有切割位點，并在第二個氨基酸密碼子內(nèi)，該位點可以被任何氨知識改變命運基酸所取代而不影響酶活性。用該酶切割后，用DNA聚合酶將單鏈末端補齊為雙鏈的平末端，然后重新連接成環(huán)，轉(zhuǎn)化LacTetS受體菌，篩選Tetr轉(zhuǎn)化子，問：Lac的基因型是什么？并說明原因。9.嚴緊雜

17、交實驗是如何控制的？10. RNA與基因組DNA復(fù)性已被廣泛用于檢測不同類 DNA勺轉(zhuǎn)錄。DNA驅(qū)動的復(fù)性頭驗與RNA驅(qū)動的復(fù) 性實驗有何不同？11.在基因工程中，為了在細菌細胞中表達真核生物的基因產(chǎn)物，為什么通常要用cDNA而不用基因組DNA為什么要在cDNA前加上細菌的啟動子？五、問答題1.什么是遺傳學(xué)檢測法？2.以pBR322 DNA為載體，從四環(huán)素抗性基因區(qū)克隆外源 DNA時，可采用環(huán)絲氨酸富集法篩選重組體， 說明其基本原理和基本操作過程。3.放射性抗體檢測法(radioactive antibody test)的基本原理是什么？4.何謂液相雜交？舉例說明在分子生物學(xué)中的應(yīng)用。5.什么是活體標(biāo)記法(in vivo labeling)?6. 單鏈RNA作為探針，具有哪些單鏈 DNA探針?biāo)鶝]有的優(yōu)點？7.什么是隨機引物(random primer)? 如何標(biāo)記DNA?8.良好的固相支持物必須具備哪些優(yōu)良特性？9.以硝酸纖維濾膜(nitrocellulose filtermembra ne作為雜交的固相支持物具有哪些優(yōu)點?10.什么是印跡(blotting) 雜交？11.什么是斑點雜交(dot hybridization)與狹縫雜交(slot hybridization)