病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)課件

1、病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒的純化、檢測(cè)和病毒病的診斷方法病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒的純化 Stanley 在1935年首次提純TMV 病毒純化對(duì)病毒學(xué)發(fā)展所起的作用十分巨大.病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒的純化前的預(yù)備工作 1.繁殖病毒自然感染病毒的生物體的器官組織或細(xì)胞的量往往難以滿足提純需求,需要用人工接種寄主來(lái)大量繁殖病毒.病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒的純化前的預(yù)備工作 首先要選擇最適合的寄主對(duì)植物病毒,長(zhǎng)期以來(lái)都是接種整體植物一般說(shuō),用機(jī)械摩擦接種比昆蟲媒介或嫁接等方法簡(jiǎn)便.病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒的純化前的預(yù)備工作 利用生物學(xué)方法純化病毒采集自然感染的生物體組織器官作

2、原材料來(lái)提純某種病毒時(shí),混合感染的概率很大生物學(xué)純化:病毒在很多植物或動(dòng)物細(xì)胞上產(chǎn)生一個(gè)個(gè)單個(gè)病毒株體病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒的純化前的預(yù)備工作病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒純化的基本原理 病毒的釋放和萃取病毒顆粒主要存在與寄主組織細(xì)胞內(nèi),因此提純的第一步是設(shè)法破碎寄主感病的細(xì)胞病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒純化的基本原理大多數(shù)病毒毒粒的等電點(diǎn)在PH4.0左右,而最穩(wěn)定、溶解度最大是在PH7.0左右此時(shí)可用0.1mol/L磷酸緩沖液來(lái)處理一般破碎細(xì)胞、萃取以及以后各提純步驟都在4左右進(jìn)行操作。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒萃取液的分級(jí)純化 清除較大的細(xì)胞器去除較大的細(xì)胞組分如：細(xì)胞核、線

3、粒體、葉綠體和細(xì)胞壁等病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒萃取液的分級(jí)純化 去除寄主蛋白質(zhì)1、沉淀法用各種沉淀劑來(lái)沉淀，最常用的是硫酸胺，其溶解度高，更經(jīng)濟(jì)。不同飽和度的硫酸胺可沉降水合化程度不同的病毒或蛋白質(zhì)病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒萃取液的分級(jí)純化 范圍廣泛的有機(jī)化合物的親水性程度不同，通過(guò)與蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)水分，使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。最常用的是乙醇和丙酮。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒萃取液的分級(jí)純化 離心法由于大多數(shù)病毒顆粒在某種介質(zhì)內(nèi)的沉降速度與寄主組分有差別，使用離心法可有效地純化病毒。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒萃取液的分級(jí)純化 差速離心法差速離心即將低速離心所得澄清液進(jìn)行超高速離心，使

4、大部分可溶性蛋白質(zhì)和小分子化合物留在上清液中，而病毒顆粒等則保留在沉降物中病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒萃取液的分級(jí)純化 密度梯度離心先在一個(gè)吊籃式離心管內(nèi)由下而上鋪以濃度遞減的惰性致密介質(zhì)，如蔗糖、甘油等病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒萃取液的分級(jí)純化 凝膠色譜法這是利用化合物分子大小和擴(kuò)散速率來(lái)區(qū)分它們的方法病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒萃取液的分級(jí)純化 電泳一般較少用電泳方法制備病毒，因制備量少且繁雜。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒的檢測(cè)定性或定量的病毒檢測(cè)的理論依據(jù)是病毒的理化性質(zhì)，不同的方法所依據(jù)的性質(zhì)不同，因此，檢測(cè)結(jié)果也不一定完全相同。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)侵染力的測(cè)定 侵染力

5、的測(cè)定是對(duì)病毒活性的測(cè)量，也就是病毒與寄主特異反應(yīng)的測(cè)定。 定量測(cè)定病毒活性又稱滴定。與寄主產(chǎn)生某種反應(yīng)所用最小病毒量叫侵染單位。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)侵染力的測(cè)定 某病毒制品的效價(jià)是指每單位體積中侵染單位的數(shù)量。 動(dòng)物病毒的滴定方法是計(jì)量病毒在鋪滿的菌落層或動(dòng)物單層細(xì)胞上產(chǎn)生的噬斑或濁斑數(shù)。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)侵染力的測(cè)定 一個(gè)病毒懸浮液的效價(jià)是以單位體積內(nèi)的侵染單位來(lái)表示，在一定條件下即相當(dāng)于毒粒數(shù)目。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒的培養(yǎng)1、原代細(xì)胞猴腎細(xì)胞、兔腎細(xì)胞、人胚胎腎細(xì)胞2、二倍體細(xì)胞纖維原細(xì)胞3、連續(xù)細(xì)胞系RD、MDCK、LLC-MK2病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)血清學(xué)

6、方法 病毒顆粒產(chǎn)生免疫原性的活性部分主要是外殼蛋白表面上的抗原決定簇.1、免疫沉淀法抗原和抗體在有電解質(zhì)存在下可以特異地結(jié)合形成沉淀病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)血清學(xué)方法 中和試驗(yàn)此法常用于測(cè)知人、畜體內(nèi)是否有中和抗體存在，及其該中和抗體的效價(jià)。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)血清學(xué)方法 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)此法主要利用補(bǔ)體的兩個(gè)特性：一是可與任何抗原抗體復(fù)合物結(jié)合；二是免疫裂解反應(yīng)必須有它的參與。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)血清學(xué)方法 凝膠擴(kuò)散法在瓊脂凝膠中擴(kuò)散的病毒或其抗原與其抗體相遇形成沉降帶病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)血清學(xué)方法 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法酶標(biāo)記的抗原或抗體間的特異性反應(yīng)，并通過(guò)檢測(cè)酶的顏色反應(yīng)而

7、定性定量檢測(cè)抗原或抗體的方法。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒核酸檢測(cè) 這類診斷方法針對(duì)的目標(biāo)是病毒的基因組核酸病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒核酸檢測(cè) 雜交法關(guān)鍵原理是在已知病毒基因組全序列或部分序列基礎(chǔ)上，針對(duì)某段特定序列設(shè)計(jì)一段與該序列互補(bǔ)的核酸序列，又稱為探針。進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，必須對(duì)探針進(jìn)行標(biāo)記。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒核酸檢測(cè) 聚合酶鏈反應(yīng)是一種對(duì)特定的DNA片段在體外進(jìn)行快速擴(kuò)增的方法。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒核酸檢測(cè) 反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)核心是在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化作用下，將RNA病毒的基因組通過(guò)隨機(jī)引物逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，再經(jīng)過(guò)PCR過(guò)程將cDNA進(jìn)行擴(kuò)增。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)

8、病毒核酸檢測(cè) 依賴核酸系列的擴(kuò)增 支鏈核酸信號(hào)放大系統(tǒng) 信號(hào)檢測(cè)技術(shù)和即時(shí)PCR 其他衍生PCR技術(shù) 微陣列技術(shù)病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒病核酸分子檢測(cè)的優(yōu)化和質(zhì)量控制 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的區(qū)域設(shè)置 尿苷酶防污染技術(shù) 檢測(cè)對(duì)照的設(shè)置 核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)的優(yōu)化 核酸樣品的分離純化病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)SARA 傳染性非典型肺炎是一種急性的呼吸系統(tǒng)感染，世界衛(wèi)生組織(WHO)將其名稱公布為嚴(yán)重急性呼吸道癥候群(SARS)。SARS是由一種新病原引起的，臨床主要表現(xiàn)為肺炎，在家庭和醫(yī)院有顯著的聚集現(xiàn)象。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎是什么??？ “非典型肺炎”發(fā)生，其英文

9、名為Atypical Pneumonias ,系指一組具有肺火表現(xiàn)，如發(fā)熱、頭痛、咳嗽、咳痰等癥狀，肺部X線片有浸潤(rùn)陰影等肺炎體征，而病原體并不明確或由非細(xì)菌性病原體引發(fā)的肺炎，總稱為非典型肺炎。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎是什么病病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎是什么??？ 既往有因?yàn)榉窝字гw、肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體、軍團(tuán)菌、立克次體等分別引發(fā)非典型肺炎流行的記載。1976年美國(guó)、西班牙、瑞典、荷蘭、英國(guó)等先后均有過(guò)因軍團(tuán)非典型肺炎暴發(fā)流行的報(bào)道。因其他病原體引發(fā)非典型肺炎流行也曾發(fā)生過(guò)。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎的病因是什么？ 在2003年4月16日世界衛(wèi)生組織

10、宣布，經(jīng)過(guò)全球科研人員的通力合作，終于正式確認(rèn)冠狀病毒的一個(gè)變種是引起此次非典型肺炎的病原體。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎的病因是什么？ 冠狀病毒直徑為80160nm，為有包膜的單股RNA病毒，屬冠狀病毒科，至少有4株可引起人類呼吸道感染，OC43株在成人中能引起發(fā)熱、胰腺炎、心包炎等。冠狀病毒感染在人群中很普遍， 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)冠狀病毒病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 非典型肺炎與一般肺炎（如同細(xì)菌引起的大葉性肺炎或支氣管肺炎）有相似的地方，其癥狀可為發(fā)熱、咳嗽、胸痛全身酸痛、肺部陰影等，總體表現(xiàn)與一般肺炎主要癥狀很相似。 病毒與健康3病毒的純

11、化檢測(cè)非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 它們也有不同之處： 非典型肺炎常表現(xiàn)不同程度的傳染性，短期內(nèi)形成不同范圍、不同程度的流行；一般肺炎不形成流行傳播，傳染性小。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 由于非典型肺炎病原體的相對(duì)不確定性，使其表現(xiàn)總有極其特殊的部分，特別是全身中毒癥狀重而突出，呼吸變化多而明顯，易出現(xiàn)呼吸衰竭；一般肺炎的病原體常為細(xì)菌，可以很快查明，表現(xiàn)相對(duì)規(guī)律，易于預(yù)測(cè)和把握。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 非典型肺炎有一部分在治療和預(yù)防上目前沒有十分有效的治療藥物，特別是病毒引發(fā)的非典型肺炎；一般肺炎對(duì)抗生素等藥物敏感，

12、治療有良好效果。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 一般肺炎可因細(xì)菌毒力極強(qiáng)而引發(fā)死亡，如金黃色葡萄球菌肺炎、鏈球菌肺炎等，但其主要發(fā)生在體質(zhì)或抵抗力較差的人群，其嚴(yán)重程度也也人體體質(zhì)關(guān)系密切；非典型肺炎同樣也存在相似誘在，發(fā)病也也體質(zhì)密切相關(guān)，但并沒有一般肺炎那么突出。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 非典型肺炎可出現(xiàn)突發(fā)的大量?jī)?nèi)霉素血癥引發(fā)患者死亡，并且不易被控制；一般肺炎的病情變化較容易預(yù)測(cè)，預(yù)后也較易預(yù)測(cè)。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 在科學(xué)研究中，一般肺炎比非典型肺炎在各方面的研究都清楚得多，這也與

13、非典型肺炎的不確定性有直接的關(guān)系。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎與一般肺炎有什么異同？ 非典型肺炎死亡率明顯高于一般肺炎的死亡率。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎是如何傳播的？ 本次流行的非典型肺炎病原體已經(jīng)確定為冠狀病毒的變異體，主要通過(guò)呼吸道飛沫傳播。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎是如何傳播的？ 推斷非典型肺炎流行特點(diǎn)及方式可能是近距離飛沫傳播，而飛沫接觸粘膜可能是主要傳播途徑，開放的粘膜包括鼻腔、口腔、眼結(jié)膜等。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎是如何傳播的？ 常規(guī)通風(fēng)條件好的環(huán)境下非典型肺炎不易傳播；天氣變熱，溫度高時(shí)，不利于病原體傳播，一般病毒或衣原體等在寒冷

14、天氣下存活時(shí)間較長(zhǎng)，而氣溫較高時(shí)病原體存活時(shí)間卻較短，不利其傳播，有利于對(duì)非典型肺炎的預(yù)防。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎是如何傳播的？ 冠狀病毒對(duì)理代因子的耐受力較差，56，10分鐘、37數(shù)小時(shí)即可使感染性喪失。乙醚、氯仿、吐溫、乙醇（70%）、甲醛、胰酶及紫外線等均可滅活病毒。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎的癥狀 1首先病人高燒、干咳，并沒有一般流感的流涕、咽痛等癥狀，也沒有通常感冒常見的白色或黃色痰液，偶有病人痰中帶血絲，病人出現(xiàn)呼吸急促的現(xiàn)象，個(gè)別病人出現(xiàn)呼吸窘迫綜合癥。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎的癥狀 2非典型肺炎病人白細(xì)胞正常或下降。 病毒與健康3病毒的純

15、化檢測(cè)非典型肺炎的癥狀 3X光胸片特點(diǎn)與臨床狀況分離，一般的肺炎先有很重的臨床表現(xiàn)，后在X光胸片上可以看到肺部有陰影變化；但此次則是在臨床癥狀還不嚴(yán)重時(shí)，X光片中已顯示病人肺部有絮狀陰影，并呈快速發(fā)展趨勢(shì)。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎的癥狀 4通常時(shí)高燒患者應(yīng)用抗生素都會(huì)有明顯效果，但此病用抗生素大多無(wú)效。大多數(shù)非典型肺炎病人可自愈，個(gè)別病情惡化兇險(xiǎn)，約有7%的病人需做人工呼吸。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎的癥狀 5男女之間發(fā)病無(wú)差別，從年齡看青壯年占70%，與既往的呼吸道傳染病患者老少較多不同。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎的癥狀 6因最初起病時(shí)防護(hù)措施不夠，醫(yī)務(wù)

16、人員屬非典型肺炎高發(fā)人群，在家庭和醫(yī)院有聚集現(xiàn)象。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)非典型肺炎的癥狀 7非典型肺炎第一代的傳播潛伏期在4天-5天，第二代在10天左右，其病原傳染力在傳播過(guò)程中逐漸下降。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)1. 避絕非典型肺炎病避絕非典型肺炎病毒毒 戴上口罩，以保護(hù)自己及保護(hù)其他人； 避免前往人煙稠密的地方； 打開窗戶，保持空氣流通； 如無(wú)必要，應(yīng)儘量避免到醫(yī)院。如有需要到醫(yī)院探病及與病人接觸，應(yīng)戴上口罩，先洗手洗面才接觸其他人； 有意外遊人士，如有呼吸道感染病徵，最好不要繼續(xù)旅程，並馬上見醫(yī)生； 若發(fā)現(xiàn)子女染病，不要讓他們上學(xué)或託兒

17、所。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)2. 加強(qiáng)個(gè)人衛(wèi)生加強(qiáng)個(gè)人衛(wèi)生 保持良好個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，打噴嚏、咳嗽和清潔鼻子後要徹底洗手； 勤洗手及洗澡，以保持雙手及身體清潔； 勤洗衣服，以徹底清潔可能沾染在衣服上的病毒。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)3. 加強(qiáng)抵抗力加強(qiáng)抵抗力 均衡飲食； 多喝開水：成人每人每日6-8杯開水，幫助排除毒素； 定時(shí)運(yùn)動(dòng)； 有足夠休息； 減輕壓力； 不要吸煙。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典” 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范

18、“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典”病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典” l. 加強(qiáng)個(gè)人衛(wèi)生，勤洗手。 病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典” 2. 室內(nèi)經(jīng)常通風(fēng)換氣，保持生活、工作環(huán)境的空氣流通。搞好環(huán)境衛(wèi)生，勤曬衣服和被褥等，經(jīng)常到戶外活動(dòng)，呼吸新鮮空氣，增強(qiáng)體質(zhì)。病毒與健康3病毒的純化檢測(cè)教你如何防范“非典” 3. 保持良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，打噴嚏、咳嗽和清潔鼻子后要洗手