HLA-B27檢測(cè)及其臨床應(yīng)用

1、HLA-B27與強(qiáng)直性脊柱炎1強(qiáng)制性脊柱炎強(qiáng)制性脊柱炎ASl強(qiáng)制性脊柱炎強(qiáng)制性脊柱炎（AS）是一種主要累及脊柱，中軸骨和四肢大關(guān)節(jié)，以椎間盤纖維環(huán)及其附近結(jié)締組織纖維化和骨化及關(guān)節(jié)強(qiáng)直為病變特點(diǎn)的慢性炎癥。其特征是病變從骶髂關(guān)節(jié)開始，逐步上升蔓延至脊柱關(guān)節(jié)，造成骨性強(qiáng)直。病理變化病理變化l本病早期病理變化為肌腱，韌帶骨附著點(diǎn)炎，也可發(fā)生一定程度的滑膜炎癥，常以骶髂關(guān)節(jié)發(fā)病最早，以后可發(fā)生關(guān)節(jié)粘連，纖維性和骨性強(qiáng)直，組織學(xué)改變?yōu)殛P(guān)節(jié)囊，肌腱，韌帶的慢性炎癥，伴有淋巴細(xì)胞，漿細(xì)胞浸潤(rùn)，這些炎性細(xì)胞成團(tuán)分布于較小的滑膜血管周圍。l骶髂關(guān)節(jié)炎骶髂關(guān)節(jié)炎是強(qiáng)直性脊柱炎的病理標(biāo)志，也常是其最早的病理表現(xiàn)之

2、一，骶髂關(guān)節(jié)炎的早期病理變化包括軟骨下肉芽組織形成，組織學(xué)上可見滑膜增生和淋巴樣細(xì)胞及漿細(xì)胞聚集，淋巴樣濾泡形成以及含有IgG，IgA和IgM的漿細(xì)胞，骨骼的侵蝕和軟骨的破壞隨之發(fā)生，然后逐漸被退變的纖維軟骨替代，最終發(fā)生骨性強(qiáng)直，脊柱的最初損害是椎間盤纖維環(huán)和椎骨邊緣連接處的肉芽組織形成，纖維環(huán)外層可能最終被骨替代，形成韌帶骨贅，進(jìn)一步發(fā)展將形成X線所見的竹節(jié)樣脊柱。AS的檢查的檢查l體格檢查 l影像學(xué)檢查 早期表現(xiàn)為骶髂關(guān)節(jié)炎，可根據(jù)疾病不同時(shí)期選擇X線，CT,MRI檢查。l實(shí)驗(yàn)室檢查 活動(dòng)期可有ESR,CRP,PLT和血清IGA升高，類風(fēng)濕因子陰性 90%患者HLA-B27陽性HLA-B

3、27HLA-B27檢測(cè)及其臨床應(yīng)用檢測(cè)及其臨床應(yīng)用什么是HLA及HLA-B27MHC、HLA，HLA-B27HLA-B27與哪些疾病相關(guān)血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病 類型及特點(diǎn)強(qiáng)直性脊柱炎 特點(diǎn)及其與B27關(guān)聯(lián)機(jī)制HLA-B27 怎么檢測(cè)MLCT、FCM、PCR-SSP7HLA相關(guān)概念相關(guān)概念主要組織相容性抗原主要組織相容性復(fù)合體（ MHC 類)：H-2 SLA HLAMHC、HLA復(fù)合體基因MHC分子、HLA分子抗原HLA：人類白細(xì)胞抗原（ Human Leukocyte Antigen）8lHLA抗原是人類主要組織相容性復(fù)合體（Major Histocompatibity Complex， MHC）

4、的表達(dá)產(chǎn)物，在免疫系統(tǒng)中主要負(fù)責(zé)細(xì)胞之間的相互識(shí)別和誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的功能。根據(jù)HLA抗原結(jié)構(gòu)，功能與組織分布的不同，可分為三類：類分子為HLA-A、-B、-C系列抗原，廣泛分布于各組織有核細(xì)胞表面，包括血小板和網(wǎng)織紅細(xì)胞，成熟的紅細(xì)胞一般不含HLA抗原；類分子為HLA-D/DR、-DP、-DQ系列抗原，主要在B細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞上表達(dá)，這兩類抗原都與移植有關(guān)，其中類抗原更為重要；類分子為補(bǔ)體成分。lHLA-B27基因?qū)儆谛蚆HC基因，基本上表達(dá)在機(jī)體中所有含核的細(xì)胞上，尤其是淋巴細(xì)胞的表面有豐富的含量l早在二十多年前，人們就已發(fā)現(xiàn)HLA-B27抗原的表達(dá)與強(qiáng)直性脊椎炎有著高度相關(guān)性

5、，超過90%的強(qiáng)直性脊椎炎患者其HLA-B27抗原表達(dá)為陽性，普通人群中僅5-10%的為陽性，而強(qiáng)直性脊椎炎由于其癥狀與許多疾病相似而難以確診，因此HLA-B27的檢測(cè)在病情的診斷中有著重要意義。 HLA-B27相關(guān)疾病相關(guān)疾病 11疾病HLA-B27陽性率(%)強(qiáng)直性脊椎炎90銀屑病性關(guān)節(jié)炎 55Reiters綜合癥37反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎沙門氏菌感染29.7志賀氏菌感染20.7耶爾森氏菌感染17.6淋病雙球菌感染14.0正常人群 27HLA-B27相關(guān)疾病：強(qiáng)直性脊柱相關(guān)疾?。簭?qiáng)直性脊柱炎炎患病率：0.3%，20-30歲，男女比例 10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關(guān)節(jié)（骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱

6、旁軟組織）可伴發(fā)外周關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，嚴(yán)重者發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強(qiáng)直B27檢測(cè)可作為有相關(guān)癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類型！12強(qiáng)直性脊柱炎強(qiáng)直性脊柱炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎地區(qū)分布種族差異大世界性性別分布男女女男年齡20-3030-50家族史明顯不明顯類風(fēng)濕因子（）（）HLA-B27陰性的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27陰性AS患者的HLA-B27陽性率達(dá)90-95%我國(guó)漢族人群HLA-B27陽性率2-7%（3千萬-1億），AS患病率為0.3%（4百萬），大部分HLA-B27陽性者并不發(fā)生AS。HLA-B27與與AS13HLA-B27與與AS14健康

7、人群HLA-B27陽性率及AS患病率各地區(qū)、種族有顯著的差異HLAB27與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病有很強(qiáng)的相關(guān)性兩種錯(cuò)誤認(rèn)識(shí)需糾正：HLA-B27陽性AS！ HLA-B27陽性不會(huì)轉(zhuǎn)陰！HLA-B27與與AS的關(guān)聯(lián)機(jī)制的關(guān)聯(lián)機(jī)制連鎖不平衡學(xué)說分子模擬學(xué)說關(guān)節(jié)源性肽假說其他：T細(xì)胞受體庫(kù)假說超抗原假說B27修飾因子假說Cys67模型15張谷香醫(yī)學(xué)綜述，2012,18(4):498-501HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標(biāo)志。B27抗原與某些G（-）菌之間存在類似的分子結(jié)構(gòu)，能發(fā)生分子模擬或交叉反應(yīng)，機(jī)體免疫系統(tǒng)把B27

8、當(dāng)作病原體抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫損害。認(rèn)為關(guān)節(jié)源性肽只存在于關(guān)節(jié)組織中，特異性地由HLAB27提呈，正常情況下遞呈水平低，反應(yīng)T細(xì)胞處于耐受狀態(tài)；當(dāng)某些具有同源結(jié)構(gòu)蛋白的病毒或細(xì)菌感染時(shí)，則可致敏耐受的T細(xì)胞，從而識(shí)別以低水平遞呈的關(guān)節(jié)源性肽，引起自身免疫反應(yīng)而損傷組織。lAS發(fā)病原因機(jī)制目前尚未完全闡明，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其與遺傳，感染，免疫，環(huán)境因素等有關(guān)。 HLA-B27檢測(cè)方法檢測(cè)方法抗原水平微量細(xì)胞毒法 流式細(xì)胞術(shù)法 基因水平PCR-SSP 17微量細(xì)胞毒法（微量細(xì)胞毒法（MLCT）原理：如果受試者淋巴細(xì)胞表面表達(dá)有相應(yīng)的HLA-B27抗原，就可以與B27抗體結(jié)合，形成Ag-A

9、b復(fù)合物激活補(bǔ)體，發(fā)生對(duì)細(xì)胞膜的破壞及細(xì)胞殺傷作用，通過染色法觀察，死細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性改變，染料能夠進(jìn)入使之著色，而活細(xì)胞細(xì)胞膜完整不被染色。根據(jù)死細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分比，可以判斷受試者淋巴細(xì)胞表面是否存在HLA-B27抗原及其與抗體的反應(yīng)強(qiáng)度。優(yōu)點(diǎn)：不需特殊儀器設(shè)備，易于操作，一般的實(shí)驗(yàn)室都可開展。缺點(diǎn)：標(biāo)本存放不能超過8小時(shí)；感染可以使細(xì)胞膜表面的B27分子的數(shù)量或結(jié)構(gòu)改變，影響MLCT的結(jié)果，易出現(xiàn)假陰性。18J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189流式細(xì)胞術(shù)法流式細(xì)胞術(shù)法利用熒光標(biāo)記的H

10、LA-B27單克隆抗體，與細(xì)胞表面的B27抗原結(jié)合，使結(jié)合后的淋巴細(xì)胞具有一定的熒光強(qiáng)度，這種熒光強(qiáng)度可由流式細(xì)胞儀測(cè)得的通道值來反映，以其值的高低判斷HLA-B27抗原表達(dá)百分比，從而判斷HLA-B27是否陽性。優(yōu)點(diǎn)：全自動(dòng)儀器檢測(cè)，減少了人為因素的影響，重復(fù)性高，結(jié)果判斷準(zhǔn)確，為目前較為理想的方法，目前已將FCM法檢測(cè)HLA-B27作為AS 診斷的常規(guī)檢測(cè)方法。缺點(diǎn)：儀器昂貴，目前只在較大醫(yī)院應(yīng)用，且熒光易淬滅。19Levering WH，et al. JCytometry B Clin Cytom，2003,54(1):28-38PCR-SSP通過設(shè)計(jì)基因序列特異的引物SSP，特異性的擴(kuò)增出標(biāo)本中的HLA-B27基因片段，以瓊脂糖凝膠電泳分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，若出現(xiàn)目的條帶則表示HLA-B27為陽性。優(yōu)點(diǎn)：基因水平的檢測(cè) 直接對(duì)HLA-B27原基因進(jìn)行擴(kuò)增分型，靈敏度高，特異性強(qiáng)。缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)，需要跑電泳，需要特定的實(shí)驗(yàn)儀器及嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件，在臨床上普遍開展此項(xiàng)檢查有一定的難處。20Olerup OTissue Antigens，1994,43(4):253-