紅細(xì)胞血型系統(tǒng)

1、紅細(xì)胞血型系統(tǒng)臨檢與血檢教研室 一、輸血學(xué)定義 是圍繞將獻(xiàn)血者血液輸給患者進(jìn)行救治這一中心，研究、開(kāi)發(fā)、和應(yīng)用一切可采用的科學(xué)技術(shù)手段及管理措施，提高血液和血液制品（包括血液代用品和人造血液）的質(zhì)量和安全性，從而保證臨床輸血的安全性和有效性。輸血發(fā)展史兩個(gè)里程碑 1628年william harvey發(fā)現(xiàn)了循環(huán)系統(tǒng) 發(fā)表了著作心與血的運(yùn)動(dòng)被譽(yù)為生理學(xué)最重要的著作。 1900年karl landsteiner描述了第一個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)：abo血型系統(tǒng)，啟動(dòng)了現(xiàn)代輸血學(xué)的發(fā)展，開(kāi)啟了免疫血液學(xué)的大門。 karl landsteiner因1900年發(fā)現(xiàn)了a、b、o、ab四種血型中的前三種，而于193

2、0年獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)及生理學(xué)獎(jiǎng)。 現(xiàn)代輸血已經(jīng)成為一門獨(dú)立的臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科輸血學(xué) 與相關(guān)的生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科，如生物化學(xué)、低溫生物學(xué)、生理學(xué)、病理生理學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)、病毒學(xué)、醫(yī)用高分子學(xué)和衛(wèi)生管理學(xué)，相互交叉和滲透。免疫血液學(xué)基礎(chǔ) 一、抗原 免疫原性：可以誘發(fā)特異性免疫應(yīng)答和應(yīng)答產(chǎn)物，即產(chǎn)生特異性抗體和免疫效應(yīng)細(xì)胞。 抗原性：能和抗體等免疫應(yīng)答產(chǎn)物反應(yīng)。 （一）完全抗原 即同時(shí)顯示抗原性和免疫原性蛋白質(zhì) （二）半抗原 只顯示抗原性而無(wú)免疫原性-多糖、類脂 （三）抗原決定簇（表位）抗原上一種特異性的呈立體排列的化學(xué)基團(tuán)，每一個(gè)抗原有多個(gè)表位 血型抗原 是紅

3、細(xì)胞上的化學(xué)構(gòu)型，依生化性質(zhì)分為： 1、決定簇是糖分子的血型抗原 abh，lweis。，也稱組織血型抗原. 不僅分布紅細(xì)胞表面，而且存在于大部分上皮細(xì)胞，初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元，各種體液和分泌物中。 出生后逐漸發(fā)育成熟。 2、決定簇為多肽的有：mns、rh、kidd等血型系統(tǒng) 其化學(xué)組成為蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白 僅分布在紅細(xì)胞及其他血細(xì)胞膜上 大多數(shù)血型抗原出生時(shí)已經(jīng)成熟，但抗原性較弱 二、抗體 抗體是體內(nèi)免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，為對(duì)某種抗原起反應(yīng)所形成，且能與該抗原或關(guān)系相近的抗原發(fā)生特異性反應(yīng) 血型抗體是免疫球蛋白（ig）的一部分。 igg與igm抗體 1、 igm抗體是高效的凝集素，可有效地使補(bǔ)

4、體活化，能引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的紅細(xì)胞溶解。 在鹽水介質(zhì)中能夠直接凝集紅細(xì)胞的抗體，為完全抗體。 a型、b型的abo抗體以igm為主。 2、igg抗體是唯一能通過(guò)胎盤屏障的免疫球蛋白，有結(jié)合補(bǔ)體的能力。 不完全抗體多數(shù)為igg類，在鹽水介質(zhì)中能使紅細(xì)胞致敏，需通過(guò)抗人球蛋白或其他介質(zhì)使紅細(xì)胞凝集。 o型人抗-a,b以igg類抗體為主。紅細(xì)胞血型他們活著是為了什么the relationship between abo group and personality o有一種表現(xiàn)自己的性格,行動(dòng)受感情左右,喜歡政治,好勝心強(qiáng),對(duì)立斗爭(zhēng)有戒心與喜歡交友并存,能看清形勢(shì),很注意別人對(duì)自己的好惡.有信念和理想.率

5、直,具有現(xiàn)時(shí)與羅曼蒂克雙重性.言行帶有夸張性，講話帶有教育人和教訓(xùn)人的語(yǔ)氣a內(nèi)心想法不愿為人所知.對(duì)別人情緒及環(huán)境變化有敏銳反應(yīng),但對(duì)別人的想法缺乏客觀理解.思想行動(dòng)慎重而有規(guī)律,個(gè)性內(nèi)向,沒(méi)個(gè)性謹(jǐn)小慎微固步自封,遵從常理,重視家庭,富于計(jì)劃性.擅長(zhǎng)以說(shuō)服和說(shuō)明的調(diào)子講話b開(kāi)放型對(duì)人缺乏戒心,情緒善變,活動(dòng)力強(qiáng),不原受約束,行動(dòng)奔放光明正大反復(fù)無(wú)常,富于靈活性,歡熱鬧場(chǎng)合.固執(zhí)己見(jiàn),善于批評(píng),先下結(jié)論后作說(shuō)明ab善于待人接物,很注意合情合理,期望在社會(huì)上施展能力,注意別人對(duì)自己的感情,厭惡表里不一.個(gè)性中庸,富有實(shí)踐精神計(jì)劃性強(qiáng),不喜歡指手劃腳容易疲勞,表情不豐富,正式場(chǎng)合講話呆板,回避感情激

6、烈的講話或事件血 型（blood group） 1、血型的概念 狹義只指存在于紅細(xì)胞上的特異性同種抗原。 廣義應(yīng)包括血液各成分的抗原在個(gè)體間出現(xiàn)的差異 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并為國(guó)際輸血協(xié)會(huì)承認(rèn)的血型系統(tǒng)有30種，其中最重要的兩種為“abo血型系統(tǒng)”和“rh血型系統(tǒng)”。 血型是血液系統(tǒng)的一種遺傳多態(tài)性，血型系統(tǒng)基因是獨(dú)立遺傳的，是產(chǎn)生抗原抗體的遺傳性狀。 2、紅細(xì)胞血型的現(xiàn)狀 國(guó)際輸血協(xié)會(huì)（isbtthe international society of blood transfusion）的最新報(bào)告，紅細(xì)胞血型抗原為： 血型系統(tǒng)30個(gè)、近300個(gè)抗原 血型集合 5個(gè)、11個(gè)抗原 血型系列兩個(gè)，低頻抗原組7

7、00系列33個(gè)抗原，高頻抗原組901系列12個(gè)抗原 基本上已克隆了所有的血型基因一、abo血型系統(tǒng)abo血型系統(tǒng) （一）、概述 1、1900年被發(fā)現(xiàn)，在輸血工作中是最重要的血型抗原系統(tǒng)。 2、根據(jù)紅細(xì)胞膜上是否有a、b抗原可將人分為四種血型a、b、o、ab. 3、landsteiner分布規(guī)律:a型血清含有抗b, b型血清含有抗a, o型血清含有抗a抗b, ab型血清不含抗a抗b.妊娠56周胎兒rbc可測(cè)出abo抗原新生兒abo血型抗原性約為成人的20%20歲左右abo血型的抗原性最強(qiáng)人abo血型的抗原終身不變abo血型抗原的分布：rbc、wbc、plt 其他組織細(xì)胞 體液及分泌液 （二） a

8、bo血型的遺傳基礎(chǔ) 1、 abo抗原的遺傳 先后有兩種學(xué)說(shuō)，即“兩對(duì)獨(dú)立的等位基因”和“三復(fù)等位基因”，現(xiàn)一般接受后者 abo血型系統(tǒng)的產(chǎn)生由abo、hh、sese基因控制 abo遺傳座位在第9號(hào)染色體的長(zhǎng)臂3區(qū)4帶 基因hh和sese緊密相連在第9對(duì)染色體上。 a基因和b基因?qū)τ趏基因是顯性基因。abo血型的遺傳（三）abo血型的鑒定血液中持續(xù)存在abo抗體（除新生兒） 正定型（查抗原） 用已知的標(biāo)準(zhǔn)抗a和抗b血清來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的a抗原和b抗原 反定型（查抗體） 用已知的標(biāo)準(zhǔn)a型紅細(xì)胞和標(biāo)準(zhǔn)b型紅細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗a抗體和抗b抗體（四）、 abo血型表型的頻率 從北向西南的

9、方向，b基因頻率逐漸下降而o基因頻率逐漸升高 云、貴、川和長(zhǎng)江中下游a基因頻率升高 兩廣、福建、臺(tái)灣o型基因頻率較其他地區(qū)高 在不同人種，不同民族間abo血型分布也表現(xiàn)出差異。 在整個(gè)漢族中： b型血占20%，主要是有匈奴、突厥、鮮卑、女真、契丹、西夏融入于漢族的血液中造成的 a型血占40%，主要分布在南方，是由楚苗南蠻等古老民族融入華夏集團(tuán)演變而來(lái)的 ab是b型血人南下跟a型血人繁雜而成的。 o型血是一種非常古老的最早血型，主要分布在中原地區(qū)，血緣來(lái)源是黃帝集團(tuán)和東夷集團(tuán)。 （五）、 abo血型抗原的生化合成 abo基因產(chǎn)物是糖基轉(zhuǎn)移酶，轉(zhuǎn)移酶將糖基移到紅細(xì)胞膜前體物質(zhì)上，形成抗原。 abh

10、抗原的前身物質(zhì)： 主要為糖蛋白的糖脂（紅細(xì)胞寡糖連）sese基因 abh抗原不僅存在于血細(xì)胞上，其他組織細(xì)胞上也可發(fā)現(xiàn)。 血型物質(zhì)以唾液中有無(wú)分為分泌型和非分泌型 分泌型和非分泌型受控于sese基因 sese為分泌型80% sese，稱非分泌型 （六）、 abo血型系統(tǒng)的抗原亞型 亞型是指屬同一血型抗原，但抗原結(jié)構(gòu)和性能或抗原位點(diǎn)數(shù)有一定差異a亞型 a亞型最主要的血清學(xué)特征是紅細(xì)胞抗原數(shù)減少，紅細(xì)胞與試劑血清表現(xiàn)為弱凝集或不凝集，與抗-h反應(yīng)較強(qiáng)，某些人血清中有抗-a1 a抗原的主要兩種亞血型 a1和a2 (構(gòu)成a型血的99.99%） a2或a2b均不超過(guò)a型和ab型的1% a2抗原數(shù)比a1少

11、，糖基轉(zhuǎn)移酶的活性也較低 a1和a2表型鑒別簡(jiǎn)表血型抗原抗-a抗-a1a1a、a1+a2a+0abo血型系統(tǒng)的抗原亞型 a3、b3 ax、bx am、bm ael、bel aw、bwabo血型系統(tǒng)的抗原變異型 孟買型 基因型為hh 表型的個(gè)體紅細(xì)胞膜上缺乏a、b、h抗原，血清中含有抗a、抗b、抗h抗體 類孟買型 表型的個(gè)體紅細(xì)胞膜上缺乏h抗原，h基因受到抑制基因的影響，產(chǎn)生的少量h抗原在a或b基因的作用下轉(zhuǎn)化為a或b抗原.abo血型系統(tǒng)的抗原變異型 cisab型 母親是ab型，父親是o型，兩個(gè)子女均為ab型？ a與b基因均在同側(cè)染色體上遺傳 大多的順式ab型的血清有弱的抗b抗體 （六）abo血

12、型系統(tǒng)與臨床 1、輸血：選擇血型相同的供血者，進(jìn)行交叉配血完全相合才能輸血 2、母嬰abo血型不合引起的新生兒溶血病 3、器官移植時(shí)，受者與供者也必須abo血型相符才能移植。二、rh血型系統(tǒng)應(yīng)該怎么做？ 車禍傷者大出血，急需輸血 查為rh陰性血 醫(yī)院及血庫(kù)無(wú)rh陰性血 若不輸血患者生命垂危1.1.在緊急輸血時(shí)，在緊急輸血時(shí)，rhrh陰性的病人可以輸給同陰性的病人可以輸給同樣、樣、rhrh陽(yáng)性血液做為應(yīng)急之用陽(yáng)性血液做為應(yīng)急之用。2.2.若若rhrh陰性受血者沒(méi)有相同血型的血可用，陰性受血者沒(méi)有相同血型的血可用，型型rhrh陰性的紅血球是可以的選擇。陰性的紅血球是可以的選擇。3.rh3.rh陽(yáng)性

13、的血漿只要與受血者的紅血球合血陽(yáng)性的血漿只要與受血者的紅血球合血試驗(yàn)相合，可任意給試驗(yàn)相合，可任意給rhrh陰性的病人輸用。陰性的病人輸用。4.rh4.rh抗原亦不存在血小板表面，輸血小板時(shí)抗原亦不存在血小板表面，輸血小板時(shí)可取用含紅血球在四毫升以下的制品輸給可取用含紅血球在四毫升以下的制品輸給rhrh陰性的病人陰性的病人5.5.和醫(yī)生討論，是否可延后再輸血。和醫(yī)生討論，是否可延后再輸血。6.6.每個(gè)病人在輸血前都會(huì)做抗體篩檢試驗(yàn)，每個(gè)病人在輸血前都會(huì)做抗體篩檢試驗(yàn)，有抗抗體出現(xiàn)者，最好是輸有抗抗體出現(xiàn)者，最好是輸rhrh陰性的血陰性的血球，但在緊急情況下，亦可輸球，但在緊急情況下，亦可輸rh

14、rh陽(yáng)性血。陽(yáng)性血。 在必要、緊急的時(shí)機(jī)，變通的輸血考量在必要、緊急的時(shí)機(jī)，變通的輸血考量，是對(duì)病人最有利的處理方式；如果醫(yī)護(hù)，是對(duì)病人最有利的處理方式；如果醫(yī)護(hù)人員或家屬硬是堅(jiān)持要給病人輸完全相同人員或家屬硬是堅(jiān)持要給病人輸完全相同血型的血型的rhrh陰性的血液，可能反而延誤了病陰性的血液，可能反而延誤了病情，導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。情，導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。 輸血治療知情同意書(shū) 說(shuō)明有關(guān)輸血治療中可能出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn) 患者本人，患者家屬簽字rh是恒河猴（rhesus macacus）外文名稱的頭兩個(gè)字母科學(xué)家發(fā)現(xiàn)恒河猴和多數(shù)人體內(nèi)的紅細(xì)胞上存在rh血型的抗原物質(zhì)，故而命名。 獼猴適應(yīng)性強(qiáng)，容易馴養(yǎng)繁殖，生理上

15、與人類較接近，因此是生物學(xué)、心理學(xué)、醫(yī)學(xué)等多種學(xué)科研究工作中比較理想的試驗(yàn)動(dòng)物。恒河猴實(shí)驗(yàn) 證明了愛(ài)存在三個(gè)變量：觸摸、運(yùn)動(dòng)、玩耍。 1940年karllandsteiner和亞歷山大所羅門維納發(fā)現(xiàn)了rh因子，這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)拯救了很多從母親那里得到不匹配的rh因子胎兒的生命。 卡爾蘭德斯坦納(karllandsteiner)的生日每年的6月14日定為“世界獻(xiàn)血者日”rh血型系統(tǒng)（一）rh血型系統(tǒng)概述1、rh血型系統(tǒng)是最復(fù)雜的遺傳多態(tài)性血型系統(tǒng)之一2、 rh血型系統(tǒng)內(nèi)目前發(fā)現(xiàn)有50種抗原，d抗原最重要，臨床常根據(jù)其有無(wú)分為rh陽(yáng)性或陰性。其次為e，c，c，e 3、 大約85%的高加索人（白種人）或99

16、.6%的中國(guó)人為rh陽(yáng)性4、 rh血型系統(tǒng)有重要的臨床意義rh血型系統(tǒng)（二）rh血型系統(tǒng)的遺傳與命名 有兩種傳統(tǒng)理論,三種命名法rh血型系統(tǒng)的遺傳與命名1、fisher-race（cde命名法） rh血型有1 1號(hào)染色體斷臂上號(hào)染色體斷臂上三個(gè)緊密相連的基因位點(diǎn) 每個(gè)位點(diǎn)有一對(duì)等位基因.(d-d, c-c,e-e), 三個(gè)基因是以一個(gè)復(fù)合體的形式遺傳.如cde/cde, 有8種基因組合。 符合大多臨床現(xiàn)象，現(xiàn)在仍然使用rh血型系統(tǒng)的遺傳與命名2、 wiener（rh-hr）命名法 rh基因在染色體上只有一個(gè)基因位點(diǎn) 與fisher-race不同, wiener命名法把rh血型視為一個(gè)復(fù)合抗原

17、認(rèn)為rh基因產(chǎn)生的凝集原，包括一系列因子，每一個(gè)因子有一種抗體去識(shí)別。 命名相對(duì)簡(jiǎn)單rh血型系統(tǒng)的遺傳與命名3、 數(shù)字命名法 以抗原發(fā)現(xiàn)先后對(duì)抗原編號(hào),主要用于計(jì)數(shù)機(jī)錄入。三）rh血型系統(tǒng)的表型及基因型1、 rh血型系統(tǒng)的表型rh血型系統(tǒng)的表型種類與能獲得的抗血清有關(guān)，根據(jù)獲得抗血清的多少確定表現(xiàn)型種類,五種抗血清（抗d、抗e、抗c、抗e、抗c）rh血型系統(tǒng)的表型及基因型2、 rh血型系統(tǒng)的基因型 rh血型系統(tǒng)的抗原表達(dá)被認(rèn)為是受控于兩個(gè)基因 rhd和rhce 為兩個(gè)緊密連鎖的基因構(gòu)成，分別編碼d抗原以及ce抗原 沒(méi)有相應(yīng)的“d”基因，因此沒(méi)有“d”抗原和“d”抗體（四）rh血型抗原與抗體1.

18、rh血型抗原： rh血型的抗原性可能僅次于abo血型系統(tǒng) rh血型抗原中d抗原的抗原性最強(qiáng),依次為e、c、c、e. 紅細(xì)胞上正常d抗原數(shù) 1萬(wàn)到3.3萬(wàn) 弱d 抗原數(shù) 200-1萬(wàn) 增強(qiáng)d抗原數(shù) 7.5-20萬(wàn)rh血型抗原2、 d抗原的分類 正常的d抗原 弱d型（du型；weak d): 與正常的d抗原無(wú)質(zhì)差別,但數(shù)量很少。 弱d紅細(xì)胞與igm類抗-d試劑反應(yīng)呈陰性，抗球蛋白方法檢測(cè)為陽(yáng)性氨基酸改變位于細(xì)胞膜內(nèi)或是跨膜區(qū) 不完全d型（partial d ）: d抗原弱表達(dá)，并且血清中含有抗-d抗體的rh陽(yáng)性者?；虮磉_(dá)不完全的基因基礎(chǔ)主要是d基因和ce基因形成的雜交基因和d基因部分缺失。 氨基

19、酸改變位于細(xì)胞膜外 rh血型抗原不完全 du型（partial du 型） 抗原數(shù)量少，質(zhì)也不同于正常d抗原 增強(qiáng)d （-d-型） ce基因沉默，不表達(dá)其產(chǎn)物3、rh血型抗體 多數(shù)為igg抗體除抗d外,抗e最為常見(jiàn),次為抗c,抗e多為igg,偶有igm?？筫較少見(jiàn)有些rh抗體常在一起發(fā)生 通?？筫和抗c較多見(jiàn),但抗c不易檢出，故平常含有抗e的人受血時(shí),應(yīng)考慮抗c輸入ccdee型人的血液 五）d抗原和臨床 1. rhd(-)孕婦產(chǎn)生hnd hdn hdn 的發(fā)病示意圖的發(fā)病示意圖d抗原和臨床2、 d不完全型的相關(guān)問(wèn)題 常規(guī)檢測(cè)d抗原時(shí)，如果鹽水法為陰性，應(yīng)進(jìn)一步使用間接抗球蛋白試驗(yàn)檢測(cè) 弱d作為

20、獻(xiàn)血者為陽(yáng)性 弱d作為受血者為視為d陰性,只能接受d陰性血液 d不完全型的孕婦有機(jī)會(huì)產(chǎn)生hndrh血型抗原檢測(cè)（六）、rh(d)血型鑒定的常用方法 單克隆抗體igm類，可在鹽水介質(zhì)，室溫或37環(huán)境中凝集 igg采用間接抗球蛋白試驗(yàn) 玻片法 （單克隆試劑igm+igg) 試管法 （單克隆試劑igm+igg) 酶介質(zhì)法（ igg試劑) 微柱凝膠法臨床意義 1.新生兒溶血病 rh抗體引起hdn比abo溶血嚴(yán)重：發(fā)育程度，補(bǔ)體 2.溶血性輸血反應(yīng) 臨床輸血意義僅次于abo血型 2/3產(chǎn)生抗體三、紅細(xì)胞血型血清學(xué)紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)免疫血清學(xué)技術(shù)的基石血型抗原與抗免疫血清學(xué)技術(shù)的基石血型抗原

21、與抗體體一、血型抗原的發(fā)育一、血型抗原的發(fā)育 二、紅細(xì)胞血型抗體分類二、紅細(xì)胞血型抗體分類 規(guī)則抗體 指aboabo血型系統(tǒng)有規(guī)律產(chǎn)生的抗a a和抗b b，符合landsteiner規(guī)則，是反定型的依據(jù) 。 不規(guī)則抗體 是指抗a a、抗b b以外的抗體，這些抗體除少數(shù)可以天然產(chǎn)生外，主要是由輸血或妊娠使機(jī)體暴露于外來(lái)抗原免疫所致。 完全抗體 在鹽水介質(zhì)中與相應(yīng)的紅細(xì)胞血型抗原發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)的抗體稱為完全抗體。igmigm抗體絕大部分是完全抗體 不完全抗體 大部分iggigg抗體與具有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中能夠特異性結(jié)合，但不發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，該類抗體被稱為不完全抗體。很多i

22、ggigg類抗體是不完全抗體，但不是所有iggigg抗體都是不完全抗體，如o o型人血清中的iggigg抗體以及單克隆iggigg類的血型抗體也能在鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)。 按抗體與抗原反應(yīng)的最適溫度，分為冷型抗體（cold antibody）和溫型抗體 （warm antibody） 血型抗體的產(chǎn)生血型抗體的產(chǎn)生 出生時(shí)，正常的抗出生時(shí)，正常的抗 a a和抗和抗 b b還沒(méi)產(chǎn)生或較還沒(méi)產(chǎn)生或較弱，到三個(gè)月時(shí)，反應(yīng)基本上與成年人的弱，到三個(gè)月時(shí)，反應(yīng)基本上與成年人的一樣。一樣。5 51010歲時(shí)，抗體的產(chǎn)生達(dá)到高峰，歲時(shí)，抗體的產(chǎn)生達(dá)到高峰，具有較高效價(jià)。具有較高效價(jià)。 rhrh抗體

23、主要通過(guò)輸血或妊娠免疫而產(chǎn)生?？贵w主要通過(guò)輸血或妊娠免疫而產(chǎn)生。一般在初次免疫后一般在初次免疫后2 26 6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)，經(jīng)再個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)，經(jīng)再次免疫后，次免疫后，3 3周內(nèi)抗體濃度可達(dá)到高峰。周內(nèi)抗體濃度可達(dá)到高峰。二、血凝實(shí)驗(yàn) 血凝實(shí)驗(yàn)是指抗體和紅細(xì)胞在液體介質(zhì)中發(fā)生的肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)。 其原理是 凝集可分為直接凝集（direct direct agglutinationagglutination）和間接凝集（indirect indirect agglutinationagglutination）igmigm抗體造成的直接凝集抗體造成的直接凝集igg間接凝集反應(yīng)致敏階段間接凝集反應(yīng)致敏階段

24、間接凝集反應(yīng)真凝集階段間接凝集反應(yīng)真凝集階段在鹽水凝集法或低離子強(qiáng)度鹽水法的基礎(chǔ)上，加入抗人球蛋白抗體( (抗抗體) )，通過(guò)抗人球蛋白抗體特異性搭橋作用，促進(jìn)紅細(xì)胞的凝集。 載體不同 1.平板法 2.試管法 3.微孔板法試管中紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度的判斷試管中紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度的判斷凝集反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)試管法血凝實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)及應(yīng)用試管法血凝實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)及應(yīng)用 特點(diǎn)：快速、準(zhǔn)確、結(jié)果可靠，缺點(diǎn)是影響因素多，靈敏度低。 應(yīng)用：應(yīng)用極為廣泛，如血型的鑒定，交叉配血，抗體鑒定與iggigg效價(jià)測(cè)定等影響紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的因素影響紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的因素 反應(yīng)溫度：303037 37 溶液的phph值：ph6.8ph6.87.

25、2 7.2 孵育時(shí)間:30 mins :30 mins 離子濃度 降低抗原與抗體反應(yīng)介質(zhì)的離子，如nana、clcl的濃度，能夠使抗原抗體間相反電荷恢復(fù)和增加, ,增強(qiáng)吸引力, ,從而能提高抗原與抗體的結(jié)合速度。 抗原抗體的比例 增加抗原紅細(xì)胞數(shù)量，則會(huì)減少每個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合抗體的量，因而減弱其凝集。若適當(dāng)增加抗體比例, ,則有助于對(duì)弱反應(yīng)抗體的檢出, ,但要注意前帶現(xiàn)象。1 1、鹽水凝集法： 是操作最簡(jiǎn)單的方法，所需設(shè)備簡(jiǎn)單。 影響因素的干擾多，靈敏度相對(duì)較低，要求抗a a血清效價(jià)11：128128抗b b血清效價(jià)11：6464；而冷凝集素效價(jià)11：4 4；對(duì)抗原抗體反應(yīng)的親和力和特異性還有較高

26、要求 目前只有一些基層醫(yī)院血庫(kù)仍將此方法作為血型檢查的主要方法2、低離子強(qiáng)度鹽水法 當(dāng)降低介質(zhì)溶液的離子強(qiáng)度時(shí)，可減少紅細(xì)胞外圍的離子云的強(qiáng)度，促進(jìn)iggigg分子在兩個(gè)紅細(xì)胞間的橋連，進(jìn)一步促進(jìn)紅細(xì)胞間的凝集。abo血型全自動(dòng)微板法檢測(cè)技術(shù) 原理 待測(cè)微板進(jìn)入自動(dòng)掃描暗室中，掃描u型孔底中線上40個(gè)點(diǎn)的透光度。凝集孔的rbc凝塊聚集于孔中央，透光度小，而外周游離的rbc很少甚至沒(méi)有，透光度大，透光度曲線呈“u”型，設(shè)定此類曲線為陽(yáng)性參考曲線。非凝集孔的rbc均勻分布，透光度曲線平緩呈“-”型，設(shè)定此類曲線為陰性參考曲線，微孔板在酶標(biāo)儀上讀數(shù)后每孔的曲線與設(shè)定的參考曲線相比較，根據(jù)程序設(shè)定的a

27、bo血型正反定型結(jié)果模式統(tǒng)計(jì)判定樣本的血型優(yōu)點(diǎn) 1采用自動(dòng)化加樣，加樣量精確、迅速 2酶標(biāo)儀判讀，血型結(jié)果自動(dòng)打印 3由于離心、沉淀、振蕩，提高了弱抗體的檢出率 4試劑用量少，經(jīng)濟(jì) 5.降低了實(shí)驗(yàn)者的工作強(qiáng)度，減輕精神壓力酶處理試驗(yàn)技術(shù) rbc表面唾液酸所帶負(fù)電荷，使rbc之間保持相對(duì)穩(wěn)定距離，igg為單倍體，結(jié)合抗原跨度小于rbc間距離，不會(huì)引起凝集。某些蛋白水解酶，可減少負(fù)電荷的數(shù)量。最常用的酶有：木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶原理 蛋白水解酶，作用于紅細(xì)胞表面的多糖鏈，切斷帶有負(fù)電荷的羧基集團(tuán)的唾液酸，減少紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，縮短紅細(xì)胞之間的距離。分類 一步法 二步法三、微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn)(micr

28、ocolumn gel immuno-assay mgia) mgiamgia本質(zhì)本質(zhì)：是血凝實(shí)驗(yàn)，即紅細(xì)胞抗：是血凝實(shí)驗(yàn)，即紅細(xì)胞抗原抗體在微柱腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)中發(fā)生原抗體在微柱腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝聚反應(yīng)。肉眼可見(jiàn)的凝聚反應(yīng)。 抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。通過(guò)調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠的濃度來(lái)控制分子篩孔徑大小，使分子篩只允許游離紅細(xì)胞通過(guò)，從而達(dá)到分離凝集紅細(xì)胞和游離紅細(xì)胞的目的?？ㄊ綑z測(cè)法（微柱凝膠試驗(yàn)） 法國(guó)dr. yves lapierredr. yves lapierre在19901990年首先發(fā)明的一項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)新技術(shù)，是微柱凝膠技術(shù)與以上所有實(shí)驗(yàn)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。1

29、9941994年此項(xiàng)技術(shù)獲得了美國(guó)fdafda（food and drug administration food and drug administration ）的認(rèn)可。經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn)和臨床大量應(yīng)用，目前，在多數(shù)發(fā)達(dá)國(guó)家，此項(xiàng)技術(shù)已作為常規(guī)的紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于臨床。工作原理工作原理微柱：柱體上端、柱體過(guò)濾介質(zhì)：顆粒直徑26-103 26-103 nmnm的葡聚糖凝膠，凝膠間縫隙只允許游離紅細(xì)胞通過(guò)緩沖液：低離子介質(zhì)（加或不加抗血清）工作原理工作原理 紅細(xì)胞和抗血清加在凝膠上部, ,反應(yīng)、低速離心后觀察 凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽(yáng)

30、性 游離的紅細(xì)胞，被擠過(guò)裝有過(guò)濾介質(zhì)的小柱，而到達(dá)小柱的底部，證明未發(fā)生凝集，判斷凝集反應(yīng)陰性 微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)分類 中性膠 特異性膠：含有特意性抗體 抗球蛋白膠：抗球蛋白膠，可進(jìn)行igg類抗體的檢測(cè)結(jié)果判讀模式4+4+：紅細(xì)胞復(fù)合物位于膠表面。：紅細(xì)胞復(fù)合物位于膠表面。3+3+：大部份紅細(xì)胞復(fù)合物位于膠表面，小部分位于膠中上部。：大部份紅細(xì)胞復(fù)合物位于膠表面，小部分位于膠中上部。2+2+：大小部分位于膠中部，小部分位于膠中上部。：大小部分位于膠中部，小部分位于膠中上部。1+1+：復(fù)合物位于膠中近底部。復(fù)合物位于膠中近底部。+/-+/-：與陰性管結(jié)果對(duì)照，如有差別，即可判斷。：與陰性管結(jié)果對(duì)照

31、，如有差別，即可判斷。d.pd.p. .：對(duì)某特異性抗體，同時(shí)存在陰性與陽(yáng)性細(xì)胞，而發(fā)生混合反應(yīng)。：對(duì)某特異性抗體，同時(shí)存在陰性與陽(yáng)性細(xì)胞，而發(fā)生混合反應(yīng)。hemohemo. .：溶血反應(yīng)。：溶血反應(yīng)。- -：離心后紅細(xì)胞沉積在微柱凝膠管底部。離心后紅細(xì)胞沉積在微柱凝膠管底部。微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn)微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)的特點(diǎn) 靈敏度和準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好 簡(jiǎn)便，不需要清洗紅細(xì)胞 標(biāo)本用量少 有利于新生兒等標(biāo)本檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)全過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化 標(biāo)準(zhǔn)化的孵育時(shí)間、離心時(shí)間以及結(jié)果判讀 消除了主觀因素對(duì)弱反應(yīng)結(jié)果的判讀，減少了人為錯(cuò)誤的發(fā)生 實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀性強(qiáng)，而且穩(wěn)定，可以長(zhǎng)期保存微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn)微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn)臨

32、床應(yīng)用臨床應(yīng)用 紅細(xì)胞血型鑒定 交叉配血 抗體篩查 新生兒溶血病的檢測(cè)四、抗人球蛋白試驗(yàn)四、抗人球蛋白試驗(yàn)（antihuman globulin test，agt）（coombs試驗(yàn)）原 理 抗人球蛋白試驗(yàn)，又稱 coombs 試驗(yàn)，是檢查不完全抗體的 一種方法。用人血清免疫家兔，產(chǎn)生抗人球蛋白抗體，即抗抗體。將抗人球蛋白抗體（抗抗體） 加入已經(jīng)致敏的紅細(xì)胞鹽水懸液中，紅細(xì)胞表面的不完全抗體fc段與抗人球蛋白抗體的fab段發(fā)生特異性結(jié)合，使紅細(xì)胞發(fā)生凝集。本試驗(yàn)可分為直接抗人球蛋白試驗(yàn)和間接抗人球蛋白試驗(yàn)直接抗人球蛋白試驗(yàn)直接抗人球蛋白試驗(yàn)(direct antiglobulin test，d

33、at ) 檢測(cè)紅細(xì)胞是否在人體內(nèi)被不完全抗體致檢測(cè)紅細(xì)胞是否在人體內(nèi)被不完全抗體致敏的試驗(yàn)。敏的試驗(yàn)。間接抗人球蛋白試驗(yàn)間接抗人球蛋白試驗(yàn)(indirect antiglobulin test，iat ) 間接抗球蛋白試驗(yàn)是一種檢測(cè)血清中不完全血型抗體的方法。即用已知抗原的紅細(xì)胞測(cè)定受檢 血清中相應(yīng)的不完全抗體，或用已知抗血清測(cè)定受檢紅細(xì)胞上相應(yīng)抗原。iatiat的臨床應(yīng)用的臨床應(yīng)用 紅細(xì)胞血型定型 用已知特異性的不完全抗體與被檢紅細(xì)胞孵育，洗滌后加入抗人球蛋白試劑，可鑒定該紅細(xì)胞血型。 對(duì)輸血前患者、新生兒不完全抗體的篩查與鑒定 用已知血型抗原的紅細(xì)胞和被測(cè)血清孵育，可鑒定血清中的不完全抗體

34、。 抗體效價(jià)的檢測(cè) 將倍比稀釋的血清加入已知血型抗原的紅細(xì)胞中，孵育后加入抗人球蛋白試劑，可測(cè)定血清中不完全抗體的效價(jià)。 相容性配血datdat的臨床應(yīng)用的臨床應(yīng)用 新生兒溶血?。╤dnhdn）的診斷 母體的igg抗體穿過(guò)胎盤結(jié)合到胎兒紅細(xì)胞 免疫溶血性輸血反應(yīng)患者同種異體不完全抗體的確證 受血者輸人紅細(xì)胞后,免疫產(chǎn)生抗體。輸入的紅細(xì)胞可被該抗體致敏，而出現(xiàn)dat陽(yáng)性。 自身免疫溶血性貧血的輔助診斷 自身免疫溶血性貧血患者可產(chǎn)生針對(duì)自身紅細(xì)胞的抗體，這些抗體可結(jié)合到紅細(xì)胞膜上而使細(xì)胞存活期縮短，或直接溶血。rhrh血型鑒定的原理血型鑒定的原理酶介質(zhì)法酶介質(zhì)法凝聚胺試驗(yàn)?zāi)郯吩囼?yàn)抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)人源鹽水介質(zhì)抗人源鹽水介質(zhì)抗d d試驗(yàn)試驗(yàn)低離子強(qiáng)度溶液試驗(yàn)低離子強(qiáng)度溶液試驗(yàn) 在鹽水介質(zhì)中、在鹽水介質(zhì)中、 igg抗體抗體不凝集不凝集rbcigm抗體凝集抗體凝集rbc示意圖示意圖在鹽水介質(zhì)中在鹽水介質(zhì)中在