蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)考題

1、1. 生物質(zhì)譜所用的內(nèi)肽酶是生物質(zhì)譜所用的內(nèi)肽酶是 。（北京大學(xué)。（北京大學(xué)2010試題；北試題；北京大學(xué)京大學(xué)2009試題）試題） a cpa b cpb c cpy d trypsin知識(shí)要點(diǎn)知識(shí)要點(diǎn)（1）cpa，cpb，cpy是羧肽酶是羧肽酶a、羧肽酶、羧肽酶b、羧肽酶、羧肽酶y。羧肽酶（羧肽酶（carboxypeptidase）是一類肽鏈外切酶，它能）是一類肽鏈外切酶，它能專一地從肽鏈的專一地從肽鏈的c-末端開始逐個(gè)降解，釋放出游離氨基酸，末端開始逐個(gè)降解，釋放出游離氨基酸，用于用于c-末端氨基酸殘基分析。末端氨基酸殘基分析。（2）trypsin是胰蛋白酶，是最常用的蛋白水解酶，專一性

2、是胰蛋白酶，是最常用的蛋白水解酶，專一性強(qiáng)，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。用固強(qiáng)，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。用固相法測(cè)序時(shí)，用胰蛋白酶裂解得到的肽段可以通過雙功能相法測(cè)序時(shí)，用胰蛋白酶裂解得到的肽段可以通過雙功能交聯(lián)劑交聯(lián)劑對(duì)苯二異硫氰酸直接偶聯(lián)到固相載體上。對(duì)苯二異硫氰酸直接偶聯(lián)到固相載體上。 解題思路解題思路 多注意常用酶的英文及縮寫根據(jù)知識(shí)要點(diǎn)多注意常用酶的英文及縮寫根據(jù)知識(shí)要點(diǎn)1、2，排除，排除a、b、c。 參考答案參考答案 d 2.簡(jiǎn)述2-3種檢測(cè)蛋白質(zhì)間相互作用的方法。 （北京大學(xué)2010試題；中國科學(xué)院2009試題）知識(shí)要點(diǎn)知識(shí)要點(diǎn)（1）蛋白質(zhì)）蛋白質(zhì)

3、-蛋白質(zhì)相互作用的研究已被納入蛋白質(zhì)組學(xué)的蛋白質(zhì)相互作用的研究已被納入蛋白質(zhì)組學(xué)的研究范疇。研究范疇。（2）蛋白質(zhì)相互作用的方法包括：酵母雙雜交、）蛋白質(zhì)相互作用的方法包括：酵母雙雜交、far western印跡技術(shù)、印跡技術(shù)、gst融合蛋白質(zhì)沉降技術(shù)、蛋白質(zhì)芯融合蛋白質(zhì)沉降技術(shù)、蛋白質(zhì)芯片技術(shù)、等離子表面共振技術(shù)、免疫共沉淀技術(shù)和熒光共片技術(shù)、等離子表面共振技術(shù)、免疫共沉淀技術(shù)和熒光共振能量轉(zhuǎn)移法等。振能量轉(zhuǎn)移法等。解題思路解題思路 首先要了解蛋白質(zhì)首先要了解蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)-dna相互作相互作用方法的區(qū)別，然后根據(jù)知識(shí)要點(diǎn)選取用方法的區(qū)別，然后根據(jù)知識(shí)要

4、點(diǎn)選取2-3種方法進(jìn)行闡種方法進(jìn)行闡述。述。參考答案參考答案（1）酵母雙雜交系統(tǒng)（）酵母雙雜交系統(tǒng)（yeast two-hybird system）：是利）：是利用雜交基因通過激活報(bào)道基因的表達(dá)探測(cè)蛋白用雜交基因通過激活報(bào)道基因的表達(dá)探測(cè)蛋白-蛋白的相互蛋白的相互作用。真核生物轉(zhuǎn)錄因子具有作用。真核生物轉(zhuǎn)錄因子具有dna結(jié)合結(jié)構(gòu)域（結(jié)合結(jié)構(gòu)域（bd）和轉(zhuǎn)）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（錄激活結(jié)構(gòu)域（ad）,這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域分開時(shí)仍分別具有功能，這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域分開時(shí)仍分別具有功能，但不能激活轉(zhuǎn)錄，只有它們以適當(dāng)途徑在空間上較為接近時(shí)，但不能激活轉(zhuǎn)錄，只有它們以適當(dāng)途徑在空間上較為接近時(shí)，才能重新具有轉(zhuǎn)錄因子活性，

5、并激活報(bào)道基因表達(dá)。才能重新具有轉(zhuǎn)錄因子活性，并激活報(bào)道基因表達(dá)。（2）免疫共沉淀（）免疫共沉淀（ip）：基本原理是抗原和抗體之間專一性）：基本原理是抗原和抗體之間專一性地相互作用而沉淀，從而保留下來，其是一種經(jīng)典的檢測(cè)蛋地相互作用而沉淀，從而保留下來，其是一種經(jīng)典的檢測(cè)蛋白質(zhì)相互作用的方法。其實(shí)驗(yàn)過程比較簡(jiǎn)單，裂解細(xì)胞后，白質(zhì)相互作用的方法。其實(shí)驗(yàn)過程比較簡(jiǎn)單，裂解細(xì)胞后，加入抗體，抗原被沉淀下來后洗滌，去除非特異性結(jié)合，再加入抗體，抗原被沉淀下來后洗滌，去除非特異性結(jié)合，再分析復(fù)合體?？贵w可以是單克隆，也可以使多克隆。分析復(fù)合體?？贵w可以是單克隆，也可以使多克隆。（3）蛋白質(zhì)芯片（）蛋白質(zhì)

6、芯片（protein chip）：蛋白質(zhì)芯片可以用來大）：蛋白質(zhì)芯片可以用來大規(guī)模篩選蛋白質(zhì)之間的相互作用，將一個(gè)蛋白質(zhì)芯片與熒光規(guī)模篩選蛋白質(zhì)之間的相互作用，將一個(gè)蛋白質(zhì)芯片與熒光標(biāo)記的探針蛋白孵育，洗脫非特異性結(jié)合的蛋白后，可以通標(biāo)記的探針蛋白孵育，洗脫非特異性結(jié)合的蛋白后，可以通過掃描芯片上的熒光點(diǎn)來檢測(cè)穩(wěn)定的相互作用蛋白點(diǎn)。過掃描芯片上的熒光點(diǎn)來檢測(cè)穩(wěn)定的相互作用蛋白點(diǎn)。8. 研究蛋白質(zhì)相互作用可以采用研究蛋白質(zhì)相互作用可以采用 、 、 等方法。等方法。（北京大學(xué)（北京大學(xué)2008試題）試題）14. 蛋白質(zhì)雙向電泳（蛋白質(zhì)雙向電泳（2-de）是根據(jù)蛋白質(zhì)分子量大小和）是根據(jù)蛋白質(zhì)分子量

7、大小和 的不同來分離蛋白質(zhì)的技術(shù)。（中山大學(xué)的不同來分離蛋白質(zhì)的技術(shù)。（中山大學(xué)2007試題）試題）5. 蛋白質(zhì)芯片技術(shù)基本上是基于（蛋白質(zhì)芯片技術(shù)基本上是基于（ ）方法中的原理。（深）方法中的原理。（深圳大學(xué)圳大學(xué)2009試題；中科院上海生命科學(xué)研究所試題；中科院上海生命科學(xué)研究所2006試題）試題） a northern blot b western blot c southern blot d eastern blot10. 用來研究蛋白質(zhì)用來研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間相互作用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)是（蛋白質(zhì)間相互作用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)是（ ）。）。（中國科學(xué)院（中國科學(xué)院2007試題）試題） a 酵母雙雜交技術(shù)

8、酵母雙雜交技術(shù) b 原位雜交技術(shù)原位雜交技術(shù) c race技術(shù)技術(shù) d sage 技術(shù)技術(shù)25. 免疫沉淀法（免疫沉淀法（immunoprecipitation）一般用于分離）一般用于分離（ ）。（中山大學(xué)）。（中山大學(xué)2008試題）試題） a dna b rna c 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) d 脂類脂類名詞解釋：1. edman降解(edman degradation) （蘇州大學(xué)2008試題；浙江大學(xué)2004試題）2. 等電聚焦（isoelectrofocusing，ief/ef） （蘇州大學(xué)2008試題；華南理工大學(xué)2005試題）3. 蛋白質(zhì)組學(xué)（proteomics） （深圳大學(xué)2010試題；武

9、漢大學(xué)2003試題）4. 蛋白質(zhì)組（proteome） （深圳大學(xué)2010試題；協(xié)和醫(yī)科大學(xué)2006試題；武漢大學(xué)2005試題）5. 雙向電泳（two-dimentionlal gel electrophoresis，2-de） （四川大學(xué)2006試題；軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院2000試題）6. 酵母雙雜交系統(tǒng)（yeast two-hybird system）（浙江大學(xué)2007試題；協(xié)和醫(yī)科大學(xué)2006試題）7. sds電泳（sds-page） （中國農(nóng)業(yè)大學(xué)2006試題；南開大學(xué)2006試題）8. 蛋白質(zhì)印跡法（western blotting） （南開大學(xué)2006試題）9. 蛋白質(zhì)測(cè)序 （prote

10、in sequencing） （軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院2000試題）10. 免疫沉淀（immunoprecipitation，ip） （浙江大學(xué)2008試題）2. 簡(jiǎn)述雙向電泳研究蛋白質(zhì)組的優(yōu)缺點(diǎn)。（北京大學(xué)2010試題）6. 請(qǐng)例舉三種蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定方法，并簡(jiǎn)述其原理。（中國海洋大學(xué)2003試題） 答：（答：（1）凝膠阻滯分析法（）凝膠阻滯分析法（emsa）：）：dna在電場(chǎng)中發(fā)生在電場(chǎng)中發(fā)生遷移，至一定位置形成條帶，其遷移距離與其分子大小、遷移，至一定位置形成條帶，其遷移距離與其分子大小、形狀和所帶電荷有關(guān)。形狀和所帶電荷有關(guān)。dna和蛋白質(zhì)結(jié)合后其大小和形狀和蛋白質(zhì)結(jié)合后其大小和形狀發(fā)生變化

11、，因而其在電泳時(shí)遷移的距離也會(huì)發(fā)生變化，形發(fā)生變化，因而其在電泳時(shí)遷移的距離也會(huì)發(fā)生變化，形成不同的條帶；（成不同的條帶；（2）dnase印跡法：印跡法：dna與蛋白質(zhì)結(jié)與蛋白質(zhì)結(jié)合后，結(jié)合部位的合后，結(jié)合部位的dna因受到蛋白質(zhì)的保護(hù)而不被因受到蛋白質(zhì)的保護(hù)而不被dnase降解，而未與蛋白質(zhì)結(jié)合的部位則對(duì)降解，而未與蛋白質(zhì)結(jié)合的部位則對(duì)dnase敏敏感；（感；（3）酵母單雜交：首先將已知的特定順式作用元件）酵母單雜交：首先將已知的特定順式作用元件構(gòu)建到最基本啟動(dòng)子的上游，把報(bào)告基因連接到最基本啟構(gòu)建到最基本啟動(dòng)子的上游，把報(bào)告基因連接到最基本啟動(dòng)子下游，然后將編碼待測(cè)轉(zhuǎn)錄因子動(dòng)子下游，然后將

12、編碼待測(cè)轉(zhuǎn)錄因子cdna與已知酵母轉(zhuǎn)與已知酵母轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域融合表達(dá)載體導(dǎo)入酵母細(xì)胞，該基因產(chǎn)物如錄激活結(jié)構(gòu)域融合表達(dá)載體導(dǎo)入酵母細(xì)胞，該基因產(chǎn)物如果能夠與順式元件相結(jié)合，就能激活最基本啟動(dòng)子，使報(bào)果能夠與順式元件相結(jié)合，就能激活最基本啟動(dòng)子，使報(bào)告基因表達(dá)；（告基因表達(dá)；（4）染色質(zhì)免疫共沉淀（）染色質(zhì)免疫共沉淀（chip）它的基本）它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)dna復(fù)合物，并將其復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的疫學(xué)方法沉淀

13、此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的dna片段，通過對(duì)目的片段的純化與檢測(cè)，從而獲得蛋白片段，通過對(duì)目的片段的純化與檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與質(zhì)與dna相互作用的信息。相互作用的信息。10.列出三種研究列出三種研究dna和蛋白質(zhì)相互作用的方法并和蛋白質(zhì)相互作用的方法并簡(jiǎn)要說明其原理。（中國科學(xué)院簡(jiǎn)要說明其原理。（中國科學(xué)院2010試題；蘭州大試題；蘭州大學(xué)學(xué)2008試題）試題）13.酵母雙雜交技術(shù)是利用其什么特點(diǎn)建立起來的？酵母雙雜交技術(shù)是利用其什么特點(diǎn)建立起來的？在科學(xué)研究中有什么作用？（武漢大學(xué)在科學(xué)研究中有什么作用？（武漢大學(xué)2008試題）試題） 答：酵母雙雜交技術(shù)是利用真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子

14、的組件答：酵母雙雜交技術(shù)是利用真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的組件式結(jié)構(gòu)特征，因?yàn)檫@些蛋白質(zhì)往往是由兩個(gè)以上相互獨(dú)立式結(jié)構(gòu)特征，因?yàn)檫@些蛋白質(zhì)往往是由兩個(gè)以上相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中dna結(jié)合結(jié)構(gòu)域（結(jié)合結(jié)構(gòu)域（bd）和轉(zhuǎn)錄激活）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（結(jié)構(gòu)域（ad）是轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮功能所必需的。單獨(dú)的）是轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮功能所必需的。單獨(dú)的bd能與特定基因的啟動(dòng)區(qū)結(jié)合，但不能激活基因的轉(zhuǎn)錄，而能與特定基因的啟動(dòng)區(qū)結(jié)合，但不能激活基因的轉(zhuǎn)錄，而由不同轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的由不同轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的bd和和ad所形成的雜核蛋白卻能行所形成的雜核蛋白卻能行使激活轉(zhuǎn)錄的功能。將擬研究的編碼使激活轉(zhuǎn)錄的功能。將擬研究

15、的編碼“獵物獵物”蛋白的基因蛋白的基因與與ad序列結(jié)合，編碼序列結(jié)合，編碼“誘餌誘餌”蛋白的基因與蛋白的基因與bd序列結(jié)合，序列結(jié)合，形成兩段融合基因，并在同一菌株內(nèi)表達(dá)，若形成兩段融合基因，并在同一菌株內(nèi)表達(dá)，若“誘餌誘餌”蛋蛋白與白與“獵物獵物”蛋白在核內(nèi)存在相互作用，就可以重新形成蛋白在核內(nèi)存在相互作用，就可以重新形成完整的有活性的轉(zhuǎn)錄因子，從而激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。因完整的有活性的轉(zhuǎn)錄因子，從而激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。因此根據(jù)報(bào)告基因的表達(dá)與否，即可判斷此根據(jù)報(bào)告基因的表達(dá)與否，即可判斷“誘餌誘餌”蛋白與蛋白與“獵物獵物”蛋白之間是否有相互作用。酵母雙雜交常用于研蛋白之間是否有相互作用。酵母

16、雙雜交常用于研究新蛋白質(zhì)的相互作用和發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的功能。究新蛋白質(zhì)的相互作用和發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的功能。11. 現(xiàn)有四種蛋白質(zhì)，其相對(duì)分子質(zhì)量和等電現(xiàn)有四種蛋白質(zhì)，其相對(duì)分子質(zhì)量和等電點(diǎn)分別為：點(diǎn)分別為：a,mr=62kda，pi=10；b,mr=12kda，pi=7；c,mr=28kda，pi=4；d,mr=9kda，pi=5，分別用，分別用cm-纖維柱層纖維柱層析，析，sephadex g-75，雙向電泳，雙向電泳，sds-page電泳分離這四種蛋白質(zhì)，試寫出前兩電泳分離這四種蛋白質(zhì)，試寫出前兩種方法的分離結(jié)果和后兩種方法的分離圖種方法的分離結(jié)果和后兩種方法的分離圖譜。（北京大學(xué)譜。（北京大學(xué)201

17、0試題）試題） 在纖維素與葡聚糖分子上結(jié)合有一定的離子基團(tuán)，當(dāng)結(jié)合在纖維素與葡聚糖分子上結(jié)合有一定的離子基團(tuán)，當(dāng)結(jié)合陽離子基團(tuán)時(shí)，可換出陰離子，則稱為陰離子交換劑。如陽離子基團(tuán)時(shí)，可換出陰離子，則稱為陰離子交換劑。如二乙氨乙基（二乙氨乙基（dicthylaminoethyl，deae）纖維素。在）纖維素。在纖維素上結(jié)合了纖維素上結(jié)合了deae，含有帶正電荷的陽離子纖維素，含有帶正電荷的陽離子纖維素oc6h14 n+ h，它的反離子為陰離子（如，它的反離子為陰離子（如cl- 等），等），可與帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)陰離子進(jìn)行交換。當(dāng)結(jié)合陰離子基可與帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)陰離子進(jìn)行交換。當(dāng)結(jié)合陰離子基團(tuán)時(shí)，可置換陽離子，稱為陽離子交換劑，如羧甲基團(tuán)時(shí)，可置換陽離子，稱為陽離子交換劑，如羧甲基（carboxymethy，cm）纖維素。纖維素分子上帶有負(fù)）纖維素。纖維素分子上帶有負(fù)電荷的陰離子（纖維素電荷的陰離子（纖維素och2 coo），其反離），其反離子為陽離子（如子為陽離子（如na+ 等）等）,可與帶正電荷蛋白質(zhì)陽離子進(jìn)可與帶正電荷蛋白質(zhì)陽