廣東醫(yī)學(xué)院2003級(jí)碩士研究生開題報(bào)告

1、廣東醫(yī)學(xué)院廣東醫(yī)學(xué)院2003級(jí)級(jí)碩士研究生開題報(bào)告碩士研究生開題報(bào)告p16p16在宮頸癌發(fā)生中的作用及在宮頸癌發(fā)生中的作用及其機(jī)制的研究其機(jī)制的研究 n 研究生：研究生： 鄧飛鄧飛n 導(dǎo)師：導(dǎo)師： 胡新榮胡新榮 教授教授n 時(shí)間：時(shí)間： 2004年年10月月22日日 立題依據(jù)立題依據(jù)n腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟的長(zhǎng)期過(guò)程，其中多個(gè)基因的改變導(dǎo)致細(xì)胞周期失調(diào)，細(xì)胞增殖失控在腫瘤形成的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。np16基因又稱mts1（多腫瘤抑制基因）是人們發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)直接作用于細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞分裂的基因。np16在諸多腫瘤中的改變，使它在腫瘤發(fā)生中的作用日益受到人們的重視。一、一、p16p16

2、的基因結(jié)構(gòu)和功能的基因結(jié)構(gòu)和功能 1 1、p16p16的基因結(jié)構(gòu)的基因結(jié)構(gòu) np16基因定位于9p21，全長(zhǎng)8.5kb，由三個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成，三個(gè)外顯子的長(zhǎng)度分別為126、307、11bp，其cdna全長(zhǎng)450bp。p16基因啟動(dòng)子和外顯子1、2含有多個(gè)可甲基化的5cpg島。np16基因編碼產(chǎn)物p16蛋白，由148個(gè)氨基酸構(gòu)成，為16kd 2 2、p16p16的功能的功能rbe2frbppppe2fink4ap16cyclind1cdk4/6pcdkcyclind1cdk4/6cyclind1cdk4/6cdk4/6p競(jìng)爭(zhēng)性抑制二、二、p16p16與腫瘤與腫瘤 n研究表明，p16基因的

3、缺失、突變和甲基化存在于多種人腫瘤細(xì)胞，提示其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系。 np16除了調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞異常增殖以外，還與腫瘤細(xì)胞中端粒酶活性的調(diào)節(jié)和腫瘤細(xì)胞的永生化有關(guān)。 n大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)使人們相信在大多數(shù)腫瘤中p16扮演者抑癌基因的角色。三、三、p16p16與宮頸癌與宮頸癌 n宮頸癌是婦女常見腫瘤之一，其發(fā)生機(jī)制尚不清楚。對(duì)于p16與宮頸癌關(guān)系的研究，已成為近幾年來(lái)宮頸癌發(fā)生機(jī)制研究中的熱點(diǎn)。 n同在大多數(shù)腫瘤中一樣。p16基因也被認(rèn)為在宮頸癌發(fā)生中的扮演著抑癌基因的角色，其主要依據(jù)有 ：n1、宮頸腫瘤組織中，普遍都能檢測(cè)到p16基因的失活。n2、p16基因及其編碼蛋白在體外實(shí)

4、驗(yàn)中能抑制宮頸癌細(xì)胞系的生長(zhǎng)。然而，在對(duì)p16的進(jìn)一步研究中，人們用免疫組化檢測(cè)臨床病例標(biāo)本的p16蛋白表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，p16蛋白的表達(dá)會(huì)隨著宮頸癌病情的進(jìn)展而呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì) 。這一發(fā)現(xiàn)使人們對(duì)p16在宮頸癌發(fā)生中的作用產(chǎn)生了疑問(wèn)：（1）p16在宮頸癌發(fā)生過(guò)程中起什么作用，是否與在其他腫瘤中一樣起著抑癌作用。（2）如果p16是抑癌基因，為什么其失活率隨宮頸癌的發(fā)生而逐漸增加的同時(shí)，表達(dá)也逐漸升高。 以上問(wèn)題迄今為止，都還沒有得到滿意合理的解釋，國(guó)內(nèi)也缺乏此類相關(guān)研究。本實(shí)這些驗(yàn)即是針對(duì)以上問(wèn)題展開初步的探討。實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、研究p16在宮頸癌的發(fā)生過(guò)程的表達(dá)趨勢(shì)。 2、研究p16在宮頸癌

5、發(fā)生中的作用及機(jī)制。 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題1、p16在宮頸癌發(fā)生過(guò)程中表達(dá)是否升高。 2、高表達(dá)的p16與cyclind1競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合cdk4/6的能力是否改變。 3、p16高表達(dá)與prb磷酸化的關(guān)系。 4、體外實(shí)驗(yàn)中p16表達(dá)對(duì)cyclind1與cdk4/6的結(jié)合能力及prb的磷酸化水平的影響。 擬采取的研究方法擬采取的研究方法（1）ihc（2）co-ip、ip、western-blot（3）sirna轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞系技術(shù)路線技術(shù)路線 一、臨床實(shí)驗(yàn)1、p16表達(dá)的檢測(cè)：臨床病例標(biāo)本切片、he同一組織來(lái)源不同組織來(lái)源癌前病變宮頸癌癌前病變宮頸癌p16p16的表達(dá)趨勢(shì)圖像分析ihc2、

6、p16功能檢測(cè)p16高表達(dá)的宮頸癌標(biāo)本 p16低表達(dá)的宮頸癌標(biāo)本 提取組織塊中的蛋白質(zhì)p16-cdk4/6 prb-p 對(duì)比不同組結(jié)果，研究p16表達(dá)與prb磷酸化的關(guān)系 對(duì)比不同組的結(jié)果，研究p16表達(dá)升高對(duì)其功能的影響。co-ip、westernipwestern二、體外實(shí)驗(yàn)p16高表達(dá)的宮頸癌細(xì)胞篩選p16表達(dá)缺失的宮頸癌細(xì)胞 cyclind1-cdk4/6prb-p cyclind1-cdk4/6prb-p co-ip、ip、western-blot 對(duì)比分析得出結(jié)論sirna腺病毒轉(zhuǎn)染預(yù)期結(jié)果預(yù)期結(jié)果 n1、p16在宮頸癌的發(fā)生過(guò)程中表達(dá)逐漸升高。 n2、臨床實(shí)驗(yàn)中，p16高表達(dá)組比低表達(dá)組，p16與cdk4/6的結(jié)合增加，prb的磷酸化水平升高。n3、體外實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染前后，cyclind1與cdk4/6的結(jié)合增加，prb的磷酸化水平降低，進(jìn)度安排進(jìn)度安排 n2004.102005.7 臨床病理標(biāo)本的收集。細(xì)胞系的篩選，細(xì)胞轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染后篩選。n2005.82006.1 ihc、co-ip、ip、western-blot。n2006.22006.