USP藥典培訓(xùn)注射劑微粒檢查曾長(zhǎng)金PPT課件

1、1Contents 目錄1第一節(jié)概述2第二節(jié)光阻法與膜顯微鏡法介紹3第三節(jié)光阻法測(cè)試4第四節(jié)膜顯微鏡法測(cè)試5第五節(jié)總結(jié)第1頁/共54頁第一節(jié) 概述1、微粒檢查介紹2、不溶性微定義3、微粒檢查的意義4、微粒檢查的要求5、微粒評(píng)估第2頁/共54頁3一、微粒檢查介紹 在美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)USP中，就靜脈注射液和滴眼液進(jìn)行微粒檢查，主要涉及光阻法和膜顯微鏡法。這些方法并不是最好的，不一定對(duì)每一種配方和劑型都最合適（乳劑就不合適），但是它代表了微粒測(cè)定的基礎(chǔ)和標(biāo)準(zhǔn)的方法，可以理解成最常用的方法。就這些方法而言，許多公司積累了許多寶貴的和豐富了經(jīng)驗(yàn)和歷史數(shù)據(jù)。此外，分析方法和限度是隨著技術(shù)進(jìn)步而演化，標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定并不

2、是不變的，但是方法和限度的改變 受監(jiān)管機(jī)構(gòu)、市場(chǎng)、商業(yè)等方面的影響。第3頁/共54頁4二、什么是不溶性微粒？subject不溶性微粒是指在注射劑或溶液中不應(yīng)該出現(xiàn)的、外來的、流動(dòng)的物質(zhì)（不是氣泡）。任何半固體或固體，無論軟硬、透明與否，都可被作為微粒來計(jì)算。本質(zhì)：1、不溶的、流動(dòng)的固體或半固體；2、單體或集合物；3、單品種或多品種；4、化學(xué)作用形成。來源：1、工藝中的外來物；2、工藝或產(chǎn)品中的一部分（渣 、屑）；2、配方中固有的（如：蛋白質(zhì)產(chǎn)品在一定溫度下的沉降，或本身就有）。第4頁/共54頁5三、微粒檢查的意義微粒檢查是在可見異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射用無菌

3、粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無菌原料藥中不溶性微粒的大小及數(shù)量。微粒的定量檢測(cè)對(duì)于產(chǎn)品的質(zhì)量分析和控制是非常必要的。通過膜顯微鏡法對(duì)產(chǎn)品中出現(xiàn)的微粒進(jìn)行定性分析，可以有利于產(chǎn)品的質(zhì)量跟蹤和控制。此外，通過微粒分析可以對(duì)配方的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。第5頁/共54頁6微粒來源反映產(chǎn)品配方的不穩(wěn)定性：1、過程控制的失敗；2、配方的設(shè)計(jì)不好，影響了產(chǎn)品的使用、儲(chǔ)存和相容；3、就生物制劑而言，特別考慮產(chǎn)品的穩(wěn)定性；4、容器和密封系統(tǒng)的問題；5、包裝的問題（有的包裝隨時(shí)間的增加，會(huì)改性產(chǎn)生污染）；6、泄露或過量的氣體泄露；7、不可控或未知的輔料因素；8、活性成分（某些成分分解）。第6頁/共54頁7四、微粒

4、檢測(cè)要求靜脈注射液和滴眼液都是無菌液體，在產(chǎn)品放行前，在物理外觀和穩(wěn)定性應(yīng)該符合一定的要求，它們?cè)诜判星氨仨毞蟽蓚€(gè)關(guān)于微粒限度的測(cè)試。1、可見微粒必須基本沒有；2、顯微可見微粒含量必須很低。第7頁/共54頁8方法方法1 1：光阻法（：光阻法（LOLO）方法方法2 2：顯微鏡法：顯微鏡法注射液體積10 m25 m10 m25 m小容量注射液（體積小于100ml）6000個(gè)（每個(gè)容器）600個(gè)（每個(gè)容器）3000個(gè)（每個(gè)容器）此主要針對(duì)研發(fā)和有實(shí)力的單位。300個(gè)（每個(gè)容器）大容量注射液（體積大于100ml）25個(gè)（每ml）3個(gè)（每ml）12個(gè)（每ml）2個(gè)（每ml）第8頁/共54頁9五、微粒評(píng)

5、估1、終產(chǎn)品100%通過目視檢查 （微粒的限度：50100m）2、容器含有的顯微可見微粒應(yīng)受控并滿足最低標(biāo)準(zhǔn)（主要通過光阻法&膜顯微鏡法）。結(jié)合目視檢查和不溶性微粒的限度檢查可以檢查：1、產(chǎn)品的物理性狀的改變（色彩改變，混濁，沉淀，聚集，結(jié)晶，透明度改變）；2、悲劇性的微粒增加。第9頁/共54頁10測(cè)試方法目視法光阻法膜顯微鏡法第10頁/共54頁111、目視檢查法目視法是單借助人眼粗略的觀察產(chǎn)品是否變色，混濁，沉淀，聚集，結(jié)晶來估計(jì)產(chǎn)品的質(zhì)量。目視檢查法所能見的微粒大小位于光阻法的檢測(cè)上限，有許多局限性，帶有主觀性，重復(fù)性較差。光阻法檢測(cè)屬于儀器分析，有局限性（容易誤判），但重復(fù)性較好。第11

6、頁/共54頁122、限度檢查光阻法和膜顯微鏡法當(dāng)光阻法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定或供試品不適于用光阻法測(cè)定時(shí)，應(yīng)采用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定，并以顯微計(jì)數(shù)法的測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。光阻法不適用于黏度過高和易析出結(jié)晶的制劑，也不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)容易產(chǎn)生氣泡的注射劑。對(duì)于黏度過高，采用兩種方法都無法直接測(cè)定的注射液，可用適宜的溶劑經(jīng)適當(dāng)稀釋后測(cè)定。第12頁/共54頁133、雙重法不溶性微粒檢查的兩種方法均適用于批放行檢驗(yàn)或者穩(wěn)定性試驗(yàn)檢測(cè)，一般說來，首先采用光阻法，如果必要才采用膜顯微鏡法，每次檢查可以結(jié)合兩種方法一起用。條件：1、必需保證供試品溶液不被污染；2、通過藥品的生產(chǎn)進(jìn)度建立合適的批取樣檢測(cè)計(jì)劃；3

7、、在整個(gè)試驗(yàn)過程中采用純水清洗容器、純水稀釋樣品和純水作為空白；4、不溶性微粒檢查可以適用于大容量和微量注射液；第13頁/共54頁14第二節(jié) 光阻法與膜顯微鏡法 簡(jiǎn)述內(nèi)容Others可見度 visuality光阻法 Light Obscuration Particle Count Test膜顯微鏡法 Microscopic Particle Count Test對(duì)比 contrast第14頁/共54頁15一、微粒的可見度影響可見度的因素：1、實(shí)驗(yàn)人員的視力/實(shí)驗(yàn)儀器的靈敏度；2、微粒的物理特性；3、實(shí)驗(yàn)環(huán)境（背景和光線設(shè)置）。 許多藥品生產(chǎn)企業(yè)采用儀器和人聯(lián)合進(jìn)行系列檢查，同時(shí)培訓(xùn)質(zhì)量控制內(nèi)審

8、人員，以提高檢驗(yàn)的可靠性。第15頁/共54頁16二、光阻法原理：當(dāng)液體中的微粒通過一窄小的檢測(cè)區(qū)時(shí)，與液體流向垂直的入射光，由于被微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號(hào)降低，這種信號(hào)變化與微粒的截面積大小相關(guān)，光阻法檢查注射劑中不溶性微粒即依據(jù)此原理。第16頁/共54頁17第17頁/共54頁18光阻法1、顯微可見的固體微粒、液體和氣體微粒都被計(jì)數(shù)（缺點(diǎn)：造成測(cè)定值比較大）；2、樣品測(cè)試液需被量化(嚴(yán)格的取樣程序)；3、有相應(yīng)的日常校準(zhǔn)和取樣程序（儀器系統(tǒng)化標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試）；4、測(cè)試人員數(shù)目和環(huán)境要求受控；5、要有空白對(duì)照；6、有專門的測(cè)試供應(yīng)系統(tǒng)（水，專用的器皿工具，稀釋和匯集系統(tǒng)，文件化系統(tǒng)等）

9、；7、某些物質(zhì)不能用該法測(cè)試。第18頁/共54頁19三、膜顯微鏡法計(jì)數(shù)測(cè)試原理：將一個(gè)或多個(gè)容器中的產(chǎn)品中的固體物質(zhì)截留在過濾膜上，計(jì)算在膜表面上的亞可見的到可見的，固體或半固體顆粒。通過計(jì)算100倍復(fù)合雙眼光學(xué)顯微鏡上掃描截留表面上的顆粒計(jì)數(shù)。該方法高度依賴操作員，操作員對(duì)微粒和可接受性做出決策。此外，該法要求全部計(jì)數(shù)，也即對(duì)濾膜上的微粒一個(gè)接一個(gè)的數(shù)。但是部分計(jì)數(shù)是允許的，也即只數(shù)網(wǎng)格中的一部分，然后估算整個(gè)濾膜上的微粒數(shù)目，不過和沒有定義。建議：如果少于1000個(gè)微粒則應(yīng)當(dāng)全部計(jì)數(shù)，如果計(jì)數(shù)標(biāo)尺視野（GFOV）中央和邊緣的微粒計(jì)數(shù)小于2個(gè)那么就計(jì)算20個(gè)GFOV 25mm膜的總計(jì)數(shù)或計(jì)算

10、100個(gè)GFOV 47mm膜的總計(jì)數(shù)。第19頁/共54頁20膜顯微鏡法1、采用過濾的方式將單個(gè)容器或多個(gè)容器中的樣品中的不溶性微粒過濾在濾膜上；2、對(duì)于濾膜（孔徑小于1m）上收集的顯微可見微粒、固體和半固體微粒進(jìn)行計(jì)數(shù)；3、將濾膜放在視野放大100倍的顯微鏡下觀察進(jìn)行微粒計(jì)數(shù)；4、試驗(yàn)人員在計(jì)數(shù)的同時(shí)確定微粒的大小，同時(shí)對(duì)是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求做出判斷。依賴于實(shí)驗(yàn)員；膜顯微鏡法最理想的操作條件是在兩個(gè)靠得很近的單向氣流工作臺(tái)上進(jìn)行操作，濕的層流罩專用于過濾操作，干層流操作工作臺(tái)專用于顯微鏡檢查。膜顯微鏡法可適用于大小容量的注射液的不溶性微粒檢查，但是也可以適用于非常規(guī)機(jī)型的檢查（乳劑，懸液）；對(duì)于較

11、小量的供試品而言，可以不進(jìn)行稀釋至最小檢驗(yàn)體積就可以直接進(jìn)行測(cè)定。第20頁/共54頁21四、比較光阻法膜顯微鏡法對(duì)于乳劑或某些劑型不合適容易受氣體，不溶性油滴等的影響，測(cè)得數(shù)據(jù)往往較高，準(zhǔn)確度不是很好！微電子計(jì)數(shù)，重復(fù)性較高可以對(duì)注射劑直接測(cè)量，適用性較廣，對(duì)于小劑量昂貴的產(chǎn)品可以直接測(cè)量，不必匯集和稀釋到測(cè)量水平。很大程度上依賴于操作員操作，企業(yè)要有嚴(yán)格的操作員培訓(xùn)和考核機(jī)制。目視計(jì)數(shù)，依賴于操作員的判斷，重復(fù)性較差。光阻法其局限性在于微粒的形狀，優(yōu)勢(shì)在于球形顆粒。其將所有的微粒模擬成球形，當(dāng)微粒的外形與球形有差異時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)偏差。膜顯微鏡法直接將膜上的微粒與校準(zhǔn)過的直徑為10m和25m的圓

12、進(jìn)行比較，同時(shí)還有一個(gè)鏡臺(tái)標(biāo)尺。操作者還可以在操作的時(shí)候?qū)⒁曇爸械奈⒘Ｅc直徑為10m和25m的圓進(jìn)行比對(duì)計(jì)數(shù)。第21頁/共54頁22第三節(jié) 光阻法測(cè)試 詳細(xì)介紹內(nèi)容1. Introduction2. 條件3. 測(cè)試方法和步驟4. 結(jié)果判定第22頁/共54頁23一、Introduction注射劑及非口服輸液中的懸浮微粒是非故意存在于溶液中的可移動(dòng)的不溶性的粒子（非氣泡）。下文將陳述光阻法和膜顯微鏡法對(duì)注射劑及非口服輸液中的懸浮微粒進(jìn)行測(cè)試。光阻法已經(jīng)較好的應(yīng)用于注射劑及非口服輸液中的懸浮微粒的測(cè)試，但是有必要在光阻法測(cè)試基礎(chǔ)上結(jié)合膜顯微鏡法測(cè)試來確認(rèn)測(cè)試結(jié)果的可靠性和合理性。這兩種方法并不是適用

13、于對(duì)所有的非口服的注射或輸液進(jìn)行懸浮微粒測(cè)試。如：乳劑、膠體和脂質(zhì)體供試液不適合用光阻法測(cè)試，而用膜顯微鏡法比較合理。相類似，當(dāng)置入傳感器，會(huì)產(chǎn)生氣體或氣泡的產(chǎn)品，不適合用光阻法而選用膜顯微鏡法。如果供試品的粘度比較高，需要對(duì)其進(jìn)行稀釋后才能用兩種方法進(jìn)行分析測(cè)試。隨機(jī)的一個(gè)或一組樣本測(cè)試的結(jié)果并不能推測(cè)未被測(cè)試的產(chǎn)品微粒情況，因此可靠的符合統(tǒng)計(jì)學(xué)采樣的程序開發(fā)時(shí)非常重要的。對(duì)儀器的一般要求 儀器通常包括取樣器、傳感器和數(shù)據(jù)處理器三部分。測(cè)量粒徑范圍為250m，檢測(cè)微粒濃度為05000個(gè)/ml。儀器的校正與檢定 所用儀器應(yīng)至少每6個(gè)月校正一次。第23頁/共54頁24二、General prec

14、autions測(cè)試要求在微粒較少并受控的環(huán)境下進(jìn)行，最好是在層流生物安全柜里操作。用溫和的清洗劑小心地清洗要用的玻璃器皿及過濾設(shè)備（除過濾膜外），然后用大量的清潔水沖洗清洗劑。在設(shè)備使用前，從上到下，從外到內(nèi)地用無塵水沖洗設(shè)備。尤其是小量的供試液轉(zhuǎn)移至測(cè)試容器的過程中，小心不要產(chǎn)生氣泡于待測(cè)的供試液中。為了檢驗(yàn)環(huán)境是否適合于微粒限度測(cè)試，常進(jìn)行空白對(duì)照，具體程序是：在無微粒器皿和水準(zhǔn)備就緒條件下，測(cè)試5個(gè)裝有5ml無微粒水的空白品的微粒數(shù)。如果總共25ml的空白中大于等于10m的微粒數(shù)超過25個(gè)，那么準(zhǔn)備工作是做得不充分的，那么就得重新調(diào)整和采取措施，并再次測(cè)試直到環(huán)境器皿水適合測(cè)試為止。第2

15、4頁/共54頁251、推薦用層流臺(tái)；2、人員流動(dòng)控制在最??；3、專用的玻璃器皿；4、為產(chǎn)品容量和類別而開發(fā)的稀釋和匯集系統(tǒng)；5、已經(jīng)建立儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試（IST）與實(shí)驗(yàn)室控制；6、供應(yīng)商提供校準(zhǔn)支持或者自己建立有關(guān)程序文件支持的內(nèi)部體系。測(cè)定微粒的光阻計(jì)數(shù)儀器可能不同；通常儀器生產(chǎn)商在校準(zhǔn)、驗(yàn)證和技術(shù)支持上能給予強(qiáng)烈支持；試驗(yàn)人員（需要培訓(xùn)和資質(zhì)確認(rèn)，必需熟悉粒子計(jì)數(shù)的原理和測(cè)試操作）目標(biāo)是對(duì)注射劑中的微粒的大小和數(shù)目測(cè)定和良好的重現(xiàn)性。光阻法微粒測(cè)定儀器的校準(zhǔn)必需通過手動(dòng)校準(zhǔn)的方式進(jìn)行，儀器應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)化校準(zhǔn)的硬件和軟件。 要點(diǎn)第25頁/共54頁26儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試（IST）:1、流速的確認(rèn)；2、傳

16、感器的確認(rèn)和校準(zhǔn)（確定傳感器的測(cè)試濃度范圍、傳感器的靈敏度及檢測(cè)最小微粒的粒徑）；3、供試品取樣體積的準(zhǔn)確性確認(rèn)；4、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（微粒計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，系統(tǒng)確認(rèn)和實(shí)驗(yàn)室控制）。第26頁/共54頁校準(zhǔn)1、分離度判定傳感器分辨大小的能力，使用校準(zhǔn)微粒來判斷反應(yīng)的平均值或峰值。2、準(zhǔn)確度判定計(jì)數(shù)結(jié)果與外部標(biāo)準(zhǔn)的相似程度。3、計(jì)數(shù)比率判斷大小的界限是否設(shè)定正確，使用美國(guó)藥店標(biāo)準(zhǔn)品15m進(jìn)行設(shè)定。通過對(duì)部分供試品溶液中的微粒計(jì)數(shù)的結(jié)果來確定整個(gè)產(chǎn)品的微粒數(shù)目；小于25ml裝量的樣品要求多個(gè)容器取出混合；可以直接從注射液容器中取樣檢測(cè)；通過光從發(fā)生器中產(chǎn)生通過供試品溶液，被傳感器接收（當(dāng)微粒經(jīng)過光束時(shí)，引

17、起傳感器上電壓的增高，增高程度與被檢測(cè)到的微粒大小有關(guān)）。 27第27頁/共54頁28儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試（IST）取相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5%，平均粒徑為10m的標(biāo)準(zhǔn)粒子，制成每1ml中含10001500微粒數(shù)的懸浮液，靜置2分鐘脫氣，開啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定3次，記錄5m通道的累計(jì)計(jì)數(shù)，第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，后兩次測(cè)定結(jié)果的平均值與已知粒子數(shù)之差應(yīng)在20%以內(nèi)。第28頁/共54頁29傳感器分辨率取相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5%，平均粒徑為10m的標(biāo)準(zhǔn)粒子（均值粒徑的標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1m），制成每1ml中含10001500微粒數(shù)的懸浮液，靜置2分鐘脫氣，開啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免

18、氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定8m、10m和12m三個(gè)通道的粒子數(shù)，計(jì)算8m與10m兩個(gè)通道的差值計(jì)數(shù)和10m與12m兩個(gè)通道的差值計(jì)數(shù)，上述兩個(gè)差值計(jì)數(shù)與10m通道的累計(jì)計(jì)數(shù)之比都不得小于68%。若校正結(jié)果不符合規(guī)定，應(yīng)重新調(diào)試儀器后再次進(jìn)行校正，符合規(guī)定后方可使用。注：如所使用儀器附有自檢軟件，可進(jìn)行自檢。第29頁/共54頁30光阻法空白對(duì)照1、將容器敞開脫氣超聲脫氣（80120W ，30秒）、靜置脫氣、疏散樣品脫氣（也即增加與空氣接觸的表面積）；2、漩渦振搖借助手或渦旋儀振搖裝有空白對(duì)照的容器，將氣泡趕至液體表面。3、測(cè)定5個(gè)5ml的無塵潔凈水，保留所有計(jì)數(shù)；4、目標(biāo)：在混合的25ml樣品中大于等

19、于10m的微粒不超過25個(gè)（每ml不超過1個(gè)）。第30頁/共54頁31三、Method 測(cè)試程序 通過連續(xù)翻轉(zhuǎn)混合供試品樣本20次，必要時(shí)，謹(jǐn)慎放入密封的包裝中，用噴射的無微粒水清洗該外包裝以避免污染。通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄌ幚恚詼p少供試品中的氣泡，如：通過超聲處理2min脫氣泡。就大劑量的樣本而言，取一個(gè)樣本測(cè)試。For large-volume parenterals, single units are tested. For small-volume parenterals less than 25 ml in volume, the contents of 10 or more units

20、is combined in a cleaned container to obtain a volume of not less than 25 ml; the test solution may be prepared by mixing the contents of a suitable number of vials 小瓶 and diluting to 25 ml with particle-free water or with an appropriate particle-free solvent 溶劑 when particle-free water is not suita

21、ble. Small-volume parenterals having a volume of 25 ml or more may be tested individually. Powders for parenteral use are reconstituted 再現(xiàn)with particle-free water or with an appropriate particle-free solvent when particle-free water is not suitable. The number of test specimens 試樣 must be adequate t

22、o provide a statistically sound assessment. For large-volume parenterals or for small-volume parenterals having a volume of 25 ml or more, fewer than 10 units may be tested, based on an appropriate sampling plan. Remove four portions 份, each of not less than 5 ml, and count the number of particles e

23、qual to or greater than 10 m and 25 m. Disregard 忽略 the result obtained for the first portion, and calculate the mean number of particles for the preparation to be examined. 第31頁/共54頁32光阻法 采樣體積取樣注意：1、單個(gè)產(chǎn)品容量25ml 混合10個(gè)或更多的容器以保證足夠；2、單個(gè)產(chǎn)品容量大于25ml 至少一個(gè)容器3、單個(gè)產(chǎn)品很昂貴且量很少 優(yōu)先考慮膜顯微鏡法，可以多個(gè)匯集，但增加了成本。也可以稀釋，不過要驗(yàn)證稀釋

24、后液體的穩(wěn)定性。稀釋程序：將產(chǎn)品裝入或稀釋在無塵水或合適的溶劑中，20次反轉(zhuǎn)混合，至少5ml/分，脫氣，重復(fù)測(cè)定4次，舍棄第一次數(shù)據(jù)。 第32頁/共54頁33檢查法（1）標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，先倒出部分供試品溶液沖洗開啟口及取樣杯，再將供試品溶液倒入取樣杯中，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣，置于取樣器上（或?qū)⒐┰嚻啡萜髦苯又糜谌悠魃希ｉ_啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少3次，每次取樣應(yīng)不少于5ml，記錄數(shù)據(jù)；另取至少2個(gè)供試品，同法測(cè)定

25、。每個(gè)供試品第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。（2）標(biāo)示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免產(chǎn)生氣泡），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個(gè)供試品，同法測(cè)定。第一個(gè)供試品的數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。第33頁/共54頁34檢查法（1）和（2）項(xiàng)下的注射用濃溶液如黏度太大，不便直接測(cè)定時(shí)，可經(jīng)適當(dāng)稀釋，依法測(cè)定。也可采用適宜的方法，在層流凈化臺(tái)上

26、小心合并至少3個(gè)供試品的內(nèi)容物（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣，置于取樣器上。開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值，根據(jù)取樣體積與每個(gè)容器的標(biāo)示裝量體積，計(jì)算每個(gè)容器所含的微粒數(shù)。第34頁/共54頁35檢查法（3）靜脈注射用無菌粉末 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），小心蓋上瓶蓋，緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，超聲處理（80120W）30秒或靜置適當(dāng)時(shí)間（凍干靜注人免疫球蛋白不超過4小時(shí)）脫氣，小心開啟容器，

27、直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個(gè)供試品，同法測(cè)定。第一個(gè)供試品的數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。也可采用適宜的方法，取至少3個(gè)供試品，在凈化臺(tái)上用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，分別精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，小心合并容器中的溶液（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，超聲處理（80120W）30秒或靜置適當(dāng)時(shí)間（凍干靜注人免疫球蛋白不超過4小時(shí)）脫氣，置于取樣器上。開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少

28、4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值，計(jì)算每個(gè)容器所含的微粒數(shù)。（4）供注射用無菌原料藥 按品種項(xiàng)下規(guī)定，取供試品適量（相當(dāng)于單個(gè)制劑的最大規(guī)格量），置取樣杯或適宜的容器中，照上述（3）法，自“精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解”起，依法操作并測(cè)定。至少取3份供試品測(cè)定。計(jì)算每份所含的微粒數(shù)。第35頁/共54頁36四、Evaluation 評(píng)估 For preparations supplied in containers with a nominal volume of more than 100 ml, apply the cri

29、teria of test 1.A. For preparations supplied in containers with a nominal volume of less than 100 ml, apply the criteria of test 1.B. For preparations supplied in containers with a nominal volume of 100 ml, apply the criteria of test 1.B Note: Test 1.A is used in the Japanese Pharmacopoeia If the av

30、erage number of particles exceeds the limits, test the preparation by the Microscopic Particle Count Test. Test 1.A Solutions for parenteral infusion or solutions for injection supplied in containers with a nominal content of more than 100 mL. The preparation complies with the test if the average nu

31、mber of particles present in the units tested does not exceed 25 per mL equal to or greater than 10 m and does not exceed 3 per mL equal to or greater than 25 m. Test 1.B Solutions for parenteral infusion or solutions for injection supplied in containers with a nominal content of less than 100 ml. T

32、he preparation complies with遵守 the test if the average number of particles present in the units tested does not exceed 6000 per container equal to or greater than 10 m and does not exceed 600 per container equal to or greater than 25 m. 第36頁/共54頁37結(jié)果判定（1）標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液 除另有規(guī)定外，每1ml中含10m以上的

33、微粒不得過25粒，含25m以上的微粒不得過3粒。（2）標(biāo)示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料 除另有規(guī)定外，每個(gè)供試品容器（份）中含10m以上的微粒不得過6000粒，含25m以上的微粒不得過600粒。方法方法1 1：光阻法（：光阻法（LOLO）注射液體積10 m25 m小容量注射液（體積小于100ml）6000個(gè)（每個(gè)容器）600個(gè)（每個(gè)容器）大容量注射液（體積大于100ml）25個(gè)（每ml）3個(gè)（每ml）注：光阻法容易產(chǎn)生假陽性，所以要結(jié)合膜顯微鏡進(jìn)行測(cè)試。第37頁/共54頁38第四節(jié) 膜顯微鏡法測(cè)試 詳細(xì)內(nèi)容1. Introduction

34、2. 條件3. 測(cè)試方法和步驟4. 結(jié)果判定第38頁/共54頁39一、 Introduction 介紹Use a suitable binocular microscope, filter assembly for retaining particulate matter and membrane filter for examination. The microscope is equipped with an ocular micrometer calibrated with an objective micrometer, a mechanical stage capable of ho

35、lding and traversing the entire filtration area of the membrane filter, two suitable illuminators to provide episcopic illumination in addition to oblique illumination , and is adjusted to 100 10 magnifications. The ocular micrometer is a circular diameter graticule (see Figure 1) and consists of a

36、large circle divided by crosshairs into quadrants , transparent and black reference circles 10 m and 25 m in diameter at 100 magnifications , and a linear scale graduated in 10 m increments. It is calibrated using a stage micrometer that is certified by either a domestic or international standard in

37、stitution . A relative error of the linear scale of the graticule within 2 per cent is acceptable. The large circle is designated the graticule field of view (GFOV). Two illuminators are required. One is an episcopic brightfield illuminator internal to the microscope, the other is an external, focus

38、able auxiliary illuminator adjustable to give reflected oblique illumination at an angle of 10 to 20. The filter assembly for retaining particulate matter consists of a filter holder made of glass or other suitable material, and is equipped with a vacuum source and a suitable membrane filter. The me

39、mbrane filter is of suitable size, black or dark gray in color, non-gridded 非格子的or gridded, and 1.0 m or finer in nominal pore size. 第39頁/共54頁要求對(duì)儀器的一般要求 儀器通常包括層流凈化臺(tái)、顯微鏡、微孔濾膜及其濾器、平皿等。層流凈化臺(tái) 高效空氣過濾器孔徑，氣流方向由里向外，應(yīng)定期檢查風(fēng)速及凈化臺(tái)上空氣中的微粒數(shù)。顯微鏡 雙筒大視野顯微鏡，目鏡內(nèi)附標(biāo)定的測(cè)微尺（每格）。坐標(biāo)軸前后、左右移動(dòng)范圍均應(yīng)大于30mm，顯微鏡裝置內(nèi)附有光線投射角度、光強(qiáng)度均可調(diào)節(jié)的照

40、明裝置。檢測(cè)時(shí)放大100倍。微孔濾膜 白色，孔徑、直徑25mm或13mm，一面印有間隔3mm的格柵；膜上如有10m以上的不溶性微粒，應(yīng)在5粒以下，并不得有25m以上的微粒，必要時(shí)，可用微粒檢查用水沖洗使符合要求。檢查前的準(zhǔn)備 試驗(yàn)環(huán)境檢測(cè)符合規(guī)定后，在層流凈化臺(tái)上將濾器用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗至潔凈，用平頭無齒鑷子夾取測(cè)定用濾膜，用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗后，置濾器托架上；固定濾器，倒置，反復(fù)用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗濾器內(nèi)壁，瀝干后安裝在抽濾瓶上，備用。40第40頁/共54頁411、人員流動(dòng)控制在最小；2、濕過濾和干計(jì)數(shù)步驟在潔凈區(qū)進(jìn)行；3、專用玻璃器皿；4、

41、為產(chǎn)品容量和類別而開發(fā)的稀釋和匯集系統(tǒng)；5、建立實(shí)驗(yàn)室控制；6、操作人員必須進(jìn)行嚴(yán)格的培訓(xùn)；7、有必要的操作員績(jī)效評(píng)估。 測(cè)試環(huán)境與制備1、在實(shí)驗(yàn)室中最潔凈的區(qū)域進(jìn)行測(cè)試和分析（與人員流動(dòng)隔離，最好選擇層流工作臺(tái)，拆包在分析和測(cè)試區(qū)外面）；2、在空白對(duì)照制備前考慮包裝的影響（如何開啟，是否混合產(chǎn)品，有沒有部分取樣）；3、產(chǎn)品有沒有毒性。 要求第41頁/共54頁 儀器標(biāo)準(zhǔn)化1、儀器經(jīng)過驗(yàn)證；2、設(shè)備負(fù)責(zé)人；3、設(shè)備使用和維護(hù)程序（遵守相關(guān)的原則和方法）。 設(shè)備和要求1、100倍（10倍）放大，帶有計(jì)數(shù)視野的鏡頭；2、兩條照明路徑（垂直或斜射）；3、計(jì)數(shù)線窗（2%）；需要驗(yàn)證該計(jì)數(shù)線4、標(biāo)準(zhǔn)沒有要

42、求但很重要：日常校準(zhǔn)，空白對(duì)照，資格認(rèn)證（操作員，實(shí)驗(yàn)室等）；5、過濾設(shè)備6、無塵水7、過濾膜42設(shè)備第42頁/共54頁43二、General precautionsThe test is carried out under conditions limiting particulate matter, preferably in a laminar-flow cabinet. Very carefully wash the glassware and filter assembly used, except for the membrane filter, with a warm deter

43、gent solution and rinse with abundant amounts of water to remove all traces of detergent. Immediately before use, rinse both sides of the membrane filter and the equipment from top to bottom, outside and then inside, with particle-free water. In order to check that the environment is suitable for th

44、e test, that the glassware and the membrane filter are properly cleaned and that the water to be used is particle-free, the following test is carried out: determine the particulate matter of a 50 ml volume of particle-free water according to the method described below. If more than 20 particles 10 m

45、 or larger in size or if more than 5 particles 25 m or larger in size are present within the filtration area, the precautions taken for the test are not sufficient. The preparatory steps must be repeated until the environment, glassware, membrane filter and water are suitable for the test. 第43頁/共54頁

46、44三、Method 檢查法Mix the contents of the samples by slowly inverting the container 20 times successively. If necessary, cautiously remove the sealing closure. Clean the outer surfaces of the container opening using a jet of particle-free water and remove the closure, avoiding any contamination of the c

47、ontents. For large-volume parenterals, single units are tested. For small-volume parenterals less than 25 ml in volume, the contents of 10 or more units is combined in a cleaned container; where justified and authorized, the test solution may be prepared by mixing the contents of a suitable number o

48、f vials and diluting to 25 ml with particle-free water or with an appropriate particle-free solvent when particle-free water is not suitable. Small-volume parenterals having a volume of 25 ml or more may be tested individually. 第44頁/共54頁P(yáng)owders for parenteral use are constituted with particle-free w

49、ater or with an appropriate particle-free solvent when particle-free water is not suitable. The number of test specimens must be adequate to provide a statistically sound assessment. For large-volume parenterals or for small-volume parenterals having a volume of 25 ml or more, fewer than 10 units ma

50、y be tested, based on an appropriate sampling plan. Wet the inside of the filter holder fitted with the membrane filter with several milliliter of particle-free water. Transfer to the filtration funnel the total volume of a solution pool or of a single unit, and apply vacuum. If needed add stepwise

51、a portion of the solution until the entire volume is filtered. After the last addition of solution, begin rinsing the inner walls of the filter holder by using a jet of particle-free water. Maintain the vacuum until the surface of the membrane filter is free from liquid. Place the membrane filter in

52、 a Petri dish and allow the membrane filter to air-dry with the cover slightly ajar . After the membrane filter has been dried, place the Petri dish on the stage of the microscope, scan the entire membrane filter under the reflected light from the illuminating device, and count the number of particl

53、es that are equal to or greater than 10 m and the number of particles that are equal to or greater than 25 m. Alternatively , partial membrane filter count and determination of the total membrane filter count by calculation is allowed. Calculate the mean number of particles for the preparation to be

54、 examined. 45第45頁/共54頁第46頁/共54頁47第47頁/共54頁The particle sizing process with the use of the circular diameter graticule格子線 is carried out by transforming mentally the image of each particle into a circle and then comparing it to the 10 m and 25 m graticule reference circles. Thereby the particles are

55、not moved from their initial locations within the graticule field of view and are not superimposed on the reference circles for comparison. The inner diameter of the transparent graticule reference circles is used to size white and transparent particles, while dark particles are sized by using the o

56、uter diameter of the black opaque graticule reference circles. In performing the microscopic particle count test do not attempt to size or enumerate amorphous, semi-liquid, or otherwise morphologically indistinct materials that have the appearance of a stain or discoloration on the membrane filter. These materials show little or no surface relief and present a gelatinous or film-like appearance. In such cases the interpretation of enumeration may be aided by testing a sample of the solution by the light obscuration particle count test. 48第48頁/共54頁（1）標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射