化妝品的安全性評價PPT課件

1、1第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價容貌變“雪白粉嫩” 無異于“飲鴆止渴” w事件回放: 不久前，中國北京晨報的一則報道令人記憶猶新：一位31歲的女士應(yīng)用一家美容院出售的增白祛斑霜一個月后，皮膚發(fā)生了“翻天覆地”的變化，像嬰兒皮膚一樣細嫩。但只要停用這種祛斑霜面部立即變黑，膚質(zhì)比美容前還差，為了維持效果，6年里她花了不下10萬元。后來，她由于常感頭暈?zāi)垦６皺z測”了該祛斑霜和自己，才發(fā)現(xiàn)祛斑霜汞含量超標(biāo)7.4萬倍，而自己體內(nèi)汞含量超標(biāo)41倍！她患上了慢性汞中毒。 增白化妝品 w一是含汞類，也是最常見的有毒增白化妝品。 w二是含鉛類。 w三是氫醌。 氫醌可抑制酪氨酸酶，減少皮膚黑

2、色素形成，還明顯抑制細胞dna合成。氫醌局部應(yīng)用可引起紅斑、炎癥，皮膚色素缺失與沉著共同出現(xiàn)，高濃度使用可導(dǎo)致褐黃病、耳聾、關(guān)節(jié)炎、白細胞減少等。此外，氫醌是苯在體內(nèi)的主要中間代謝物之一，與苯的致白血病等惡性腫瘤性質(zhì)直接相關(guān)。動物實驗表明，在皮膚上每日涂抹氫醌丙酮溶液總量達20mg時，容易導(dǎo)致皮膚癌。 “天然的”“安全的” 增白化妝品中大量應(yīng)用的三種天然成分：一、果酸：它是從各種天然蔬果等天然物質(zhì)中提取的有機氫氧基酸。 果酸的果酸的“美容換膚美容換膚”原理原理：以酸腐蝕皮膚，使表皮剝落，同時一些淺表的暗斑、痤瘡、細小皺紋等也被去除了，而新表皮長出后皮膚就變得細嫩了。 不安全性在于：不安全性在于

3、：果酸濃度掌握不好會發(fā)生灼傷、果酸被皮膚吸收后可以引起過敏反應(yīng)。 因此，消費者不要頻繁、長期使用果酸化妝品。二、熊果苷（對一羥基苯-d-吡喃葡萄糖苷） ：它多是從沙梨樹、虎耳草等植物中提取的化學(xué)物質(zhì)，能抑制人體酪氨酸酶的活性。但熊果苷具有高度的光敏感性，因而其化妝品中要添加大量防曬劑，容易加速皮膚老化，敏感肌膚者更不宜使用；此外，熊果苷濃度較高時，反而會引起皮膚細胞內(nèi)的黑色素增加。三、曲酸（5-羥基-2-羥甲基-4-吡喃酮 ）：它是從醬曲等物質(zhì)中提取出來的。在人體皮膚中，酪氨酸在酪氨酸酶的催化作用下，與氧自由基經(jīng)復(fù)雜的氧化、聚合，最后合成黑色素。曲酸能抑制酪氨酸酶的合成，因而可以強烈抑制皮膚黑

4、色素的形成，不會產(chǎn)生白斑后遺癥，所以曲酸已被配入化妝水、面膜、乳液、護膚霜中，制成能有效治療雀斑、老人斑、色素沉著、粉刺等的高檔美白化妝品。20ug/ml濃度的曲酸就可抑制多種酪氨酸酶（或稱多酚氧化酶ppo）的7080%的活力，在化妝品中一般添加量為0.52.0%。 但研究認(rèn)為，曲酸有致癌性，使用時濃度不能過高。北京日化研北京日化研究所高級工程師楊能章。究所高級工程師楊能章。 1、帶、帶ph試紙去買洗面奶試紙去買洗面奶人體的皮膚是呈弱酸狀的，皮膚表面有一層弱酸膜，如果被破壞就會使皮膚變得脆弱，產(chǎn)生很多肌膚問題，導(dǎo)致細菌在堿性的環(huán)境下滋生。因此選用弱酸的洗面奶對清潔皮膚有著很好的幫助。如何檢測潔

5、膚產(chǎn)品是否呈堿性？一張ph試紙就能解決問題，將少量的產(chǎn)品涂于試紙上，幾分鐘后如果試紙變成深藍色，則表明該物質(zhì)中堿性成分過多。 化妝品選用小化妝品選用小tips2、銀戒判斷鉛多少、銀戒判斷鉛多少在使用一種化妝品之前先在手背或者耳根上試用，這兩個部位是人體感知最敏感的區(qū)域，均勻涂抹之后，將手邊的銀戒指(其他銀制品也可代替)在涂抹區(qū)域稍用力摩擦，如呈現(xiàn)黑色或有淺黑色痕跡，說明其中含有鉛等重金屬物質(zhì)?？诩t中都含有鉛，選擇口紅時要盡量找那些含鉛少的，而且要越少越好。然而，怎樣能知道口紅中含鉛量的多少呢？同樣可以用這個方法來判斷：在購買口紅時，將口紅樣品抹在自己的手背上，然后用銀戒指在上面磨擦，邊磨邊觀察

6、口紅的顏色變化，口紅變黑說明口紅中含鉛，黑色越深，含鉛量越大。 9 使用化妝品的目的, 是為了保持人體清潔、衛(wèi)生和健康, 美化容顏。可是, 如果化妝品中含有有害的成分, 皮膚在吸收有益成分的同時, 就很可能將有害的成分也吸收進去, 其結(jié)果將會事與愿違。因此, 我們必須提出化妝品的安全性問題。 化妝品與外用藥相比, 外用藥在達到治療效果的同時, 如有某些副作用, 只要其與治療作用相比較輕, 在多數(shù)情況下是容許的。但化妝品是較長期、連續(xù)、直接與人體皮膚接觸的, 所以不容許產(chǎn)生副作用。這就要求對化妝品從原料到產(chǎn)品的化學(xué)、物理和生物學(xué)性質(zhì), 特別是對皮膚的作用做出安全性的評價。第六章第六章 化妝品的安

7、全性評價化妝品的安全性評價10第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價一、化妝品安全性評價程序一、化妝品安全性評價程序 第一階段: 急性中毒和動物皮膚、粘膜試驗 1. 急性毒性試驗 (1) 急性皮膚毒性試驗 (2) 急性經(jīng)口毒性試驗 2. 動物皮膚、粘膜試驗 (1)皮膚刺激試驗 (2)眼刺激試驗 (3)皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗 (4)皮膚光毒和光變態(tài)反應(yīng)試驗 11一、化妝品安全性評價程序一、化妝品安全性評價程序 第二階段: 亞慢性毒性和致畸試驗 1. 亞慢性皮膚毒性試驗 2. 亞慢性經(jīng)口毒性試驗 3. 致畸試驗 第三階段: 致突變、致癌短期生物篩選試驗 1. 鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗(am

8、es試驗) 2. 體外哺乳動物細胞染色體畸變和sce檢測試驗 3. 哺乳動物骨髓細胞染色體畸變率檢測試驗 4. 動物骨髓細胞微核試驗 5. 小鼠精子畸形檢測試驗第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價12一、化妝品安全性評價程序一、化妝品安全性評價程序 第四階段: 慢性毒性和致癌試驗 1. 慢性毒性試驗 2. 致癌試驗 第五階段: 人體激發(fā)斑貼試驗和試用試驗第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價13一、化妝品安全性評價程序一、化妝品安全性評價程序 以上程序和方法適用于在我國生產(chǎn)和銷售的一切化妝品原料和化妝品產(chǎn)品, 但并非所有的原料或產(chǎn)品都要做所有項目的試驗, 國家標(biāo)準(zhǔn)對此

9、作了規(guī)定: 1. 凡屬于化妝品新原料, 必須進行五個階段的實驗。 2. 凡屬于含藥物化妝品必須進行動物急性毒性試驗、皮膚與粘膜試驗和人體試驗, 但是根據(jù)化妝品所含成份的性質(zhì)、使用方法和使用部位等因素, 可分別選擇其中幾項甚至全部試驗項目。 3. 凡屬于化妝品新產(chǎn)品必須進行動物急性毒性試驗、皮膚與粘膜試驗和人體試驗, 但是根據(jù)化妝品所含成份的性質(zhì)、使用方法和使用部位等因素, 可分別選擇其中幾項甚至全部試驗項目。 4. 凡進口化妝品應(yīng)由進口單位提供安全性評價資料。第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價14第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗

10、方法化妝品安全性評價試驗方法 (一) 急性皮膚毒性試驗 人體接觸化妝品主要途徑是皮膚。當(dāng)評價化妝品及其成分對人體健康的可能危害時, 進行皮膚毒性的研究是必不可少的。 1. 目的: 確定受試物能否經(jīng)皮膚滲透和短期作用所產(chǎn)生的毒性反應(yīng), 并為確定亞慢性試驗提供實驗依據(jù)。 2. 定義: 系指受試物涂敷皮膚一次劑量后所產(chǎn)生的不良反應(yīng)。 劑量表示方法: 以敷用受試物的質(zhì)量(g、mg)或以實驗動物平均單位體重敷用受試物的質(zhì)量(mg/kg)來表示。 一次敷用受試物引起50%受試動物死亡的劑量, 稱為半數(shù)致死量(ld50)。ld50值的單位為mg/或g/kg體重。15第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安

11、全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (一) 急性皮膚毒性試驗 3. 動物的準(zhǔn)備: 選用兩種性別成年大鼠、豚鼠或家兔均可。建議試驗起始動物體重范圍為大鼠200-300g, 豚鼠350-400g, 家兔2.0-3.0kg。 實驗動物應(yīng)在動物籠內(nèi)觀察3-5天, 使其適應(yīng)環(huán)境, 并觀察其健康狀況。 正式給藥前24h, 將動物背部脊柱兩側(cè)毛發(fā)剪掉或剃掉, 注意不要察傷皮膚,因為損傷能改變皮膚的滲透性, 受試物涂抹處, 不應(yīng)少于動物體表面積的10%。各類動物體表面積計算方法見附錄a。 4. 受試物的配制: 若受試物是固體, 應(yīng)磨成細粉狀, 并用適量水或無毒無刺激性賦形劑混

12、勻, 以保證受試物與皮膚良好的接觸。常用的賦形劑有橄欖油、羊毛脂、凡士林等。若受試物是液體, 一般不必稀釋。19第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (一) 急性皮膚毒性試驗 5. 劑量和分組: 將兩種性別的實驗動物分別隨機分為5-6組, 若用賦形劑, 需設(shè)賦形劑對照組。每組最好10只動物。各劑量組間要有適當(dāng)?shù)慕M距, 以使各劑量組產(chǎn)生一系列的毒性反應(yīng)或死亡率。最高劑量可達2000mg/kg。 6. 試驗方法: 將受試物均勻地涂敷于動物背部, 并用油紙和兩層紗布覆蓋, 再用無刺激性膠布或繃帶加以固定, 以防脫落和動物添食受

13、試物, 共敷藥24h。試驗結(jié)束后,可用溫水或適當(dāng)?shù)娜軇┣宄龤埩舻氖茉囄?。一般觀察一周。若給藥4天后仍有動物死亡時, 仍需繼續(xù)觀察一周。 給藥后注意觀察動物的全身中毒表現(xiàn)和死亡情況, 包括動物皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的變化, 呼吸、循環(huán)、自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動和行為方式等的變化。特別要注意觀察震顫、驚厥、流涎、腹瀉、嗜睡、昏迷等現(xiàn)象。 凡是試驗過程中死亡的動物和有毒性反應(yīng)的動物, 均應(yīng)進行尸檢和肉眼觀察。當(dāng)肉眼可見病變時, 還應(yīng)進行病理組織學(xué)鏡檢。20第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (一) 急性皮膚毒性試驗 7.

14、 結(jié)果評價: 兔半數(shù)致死量毒性ld505極毒44ld505劇毒350ld5044中等毒2180ld50350低毒ld502180實際無毒21第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (二) 急性經(jīng)口毒性試驗 當(dāng)化妝品成分的皮膚毒性低時, 很難測得其經(jīng)皮膚的ld50, 為了解該化學(xué)物質(zhì)與已知毒物的相對毒性, 以及由于嬰幼兒誤服化妝品的可能, 進行經(jīng)口毒性試驗也很必要。 1. 定義: 系指受試物一次經(jīng)口飼予動物所引起的不良反應(yīng)。劑量表示法同急性皮膚毒性試驗。 2. 動物的準(zhǔn)備: 分別選用兩種性別的成年小鼠和/或大鼠。小鼠體重18

15、-22g,大鼠180-200g, 或選擇其它敏感的動物。 實驗前, 一般禁食16h左右, 不限制飲水。 3. 受試驗溶液的配制: 常用水或食用植物油為溶劑。若受試物不溶于水或油中, 可用羧甲基纖維素、明膠、淀粉做成混懸液。給藥最大體積,小鼠不超過0.4ml/20g體重,大鼠不超過1.0ml/100g體重。23第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (二) 急性經(jīng)口毒性試驗 4. 劑量和分組: 一般分為5-6個劑量組。每組動物數(shù)5-10只, 根據(jù)所選ld50計算方法而定。各劑量組間間距大小, 隨受試物的毒性作用帶寬窄而異。通

16、常以較大組距和較少量動物進行預(yù)測, 找出其粗略致死劑量范圍, 然后再設(shè)計正式試驗的劑量組。 受試物最高劑量可達5000mg/kg體重。 5. 試驗方法: 正式試驗時,將動物稱量,并隨機分組, 然后用特制的灌胃針頭將受試物一次給予動物。若估計受試物毒性較低, 一次給藥容量太大, 可在24h內(nèi)分成2-3次給藥, 但合并作為一日劑量計算。 給藥后, 密切注意觀察并記錄動物的一般狀態(tài)、中毒表現(xiàn)和死亡情況, 并進行l(wèi)d50的計算。24第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (二) 急性經(jīng)口毒性試驗 6. 結(jié)果評價大鼠半數(shù)致死量毒性l

17、d501極毒1ld5050劇毒50ld50500中等毒500ld505000低毒ld505000實際無毒25第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (三) 皮膚刺激試驗 皮膚刺激是指皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的可逆性炎性癥狀。 1. 試驗方法的原則 (1)受試物應(yīng)以一次劑量或多次劑量涂(敷)于健康的無破損的皮膚上。 (2)每種受試物至少要用4只健康成年動物(家兔或豚鼠)。 (3)試驗均采用自身對照。 (4)受試物使用濃度, 一般情況下, 液態(tài)受試物采用原液或預(yù)計人應(yīng)用的濃度。固態(tài)受試物則用水或合適賦形劑(如花生油、凡士林、羊毛脂

18、等), 按1:1濃度調(diào)制。 (5)凡具有高度皮膚毒性, 或ph11.5的化學(xué)物質(zhì),均不進行本項實驗。26第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 2. 試驗方法 (1) 急性皮膚刺激試驗(一次皮膚涂抹實驗) a. 試驗前24h, 將實驗動物背部脊柱兩側(cè)毛剪掉, 不可損傷表皮, 去毛范圍左右各約36cm。 b. 取受試物0.1ml(g)滴在2.52.5cm大小的四層紗布上敷貼在一側(cè)皮膚上,或直接將受試物涂在皮膚上,然后用一層油紙覆蓋,再用無刺激性膠布或繃帶加以固定。另一側(cè)涂賦形劑作為對照。敷用時間一般為24h, 亦可一次敷用4

19、h。試驗結(jié)束后用溫水或無刺激性溶劑除去殘留受試物。 c. 于除去受試物后的1、24和48h觀察涂抹部位皮膚反應(yīng), 按表1和表2進行皮膚反應(yīng)積分和刺激強度評價。27第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價 表1 皮膚刺激反應(yīng)評分 紅 斑 形 成 積 分 無紅斑 勉強可見 明顯紅斑 中等-嚴(yán)重紅斑 紫紅色紅斑并有焦痂行程 01234水 腫 形 成 積 分無水腫 勉強可見 皮膚隆起輪廓清楚 水腫隆起約1 mm 水腫隆起超過1 mm, 范圍擴大 0123428第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價 強 度 分 值 無刺激性 輕刺激性 中等刺激性 強刺激性 0-0.40.5-1.9

20、2.0-5.96.0-8.0 表2 皮膚刺激強度評價29第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 2. 試驗方法 (2) 慢性皮膚刺激性試驗(多次皮膚刺激性測驗) a. 先將實驗動物背部脊柱兩側(cè)皮膚的毛剪掉或剃掉, 去毛范圍各為2.5cm2.5cm。 b. 取受試物0.1-0.5ml(g)涂抹在一側(cè)皮膚上, 另一側(cè)涂賦形劑作為對照, 每天涂抹1-2次, 連續(xù)涂抹14天。每次涂藥前要剪毛, 不得損傷皮膚, 保證受試物與皮膚充分接觸。 c. 每天觀察皮膚反應(yīng), 按表1評分。脫屑積分為1。 實驗結(jié)束, 用角膜環(huán)鉆取涂抹部位皮膚進行

21、病理組織學(xué)檢查, 按表3評分。(表3略）30第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (四) 眼刺激試驗 眼刺激性是指眼表面接觸受試物后產(chǎn)生的可逆性炎性變化。 1 試驗方法的原則 (1) 受試物應(yīng)以一次劑量或多次劑量滴(涂)入或噴灑眼內(nèi)。 (2) 每種受試動物的眼睛應(yīng)保證無任何炎性反應(yīng)和眼損傷。 (3) 每組試驗動物數(shù)至少4只, 采用自身對照, 首選動物為家兔。 (4) 受試物使用濃度一般用原液或用適當(dāng)無刺激性賦形劑配制的50%軟膏或其它劑型。 (5) 已證明有皮膚刺激性的物質(zhì), 不必進行本項試驗。31第六章第六章 化妝品的

22、安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (四) 眼刺激試驗 2 試驗方法 (1) 一次眼刺激試驗 a. 將液態(tài)或軟膏(0.1ml或100mg)受試物滴入(涂入)實驗動物一側(cè)結(jié)膜囊內(nèi),另一側(cè)眼作為對照。滴藥后使眼被動閉合5-10s, 記錄滴藥后6、24、48、和72h眼的局部反應(yīng), 第47天觀察恢復(fù)情況。觀察時用熒光素鈉檢查角膜損害, 最好用裂隙燈檢查角膜透明度、虹膜紋理改變。 b. 如果受試物明顯引起眼刺激反應(yīng), 可選用6只動物, 將受試物滴入一側(cè)角膜囊內(nèi), 接觸4s或30s后用生理鹽水沖洗干凈, 再觀察眼的刺激反應(yīng)。 c. 按表4所列眼損害分

23、級標(biāo)準(zhǔn)積分, 再按表5進行眼刺激強度的評價。32第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (四) 眼刺激試驗表4 眼損害的分級標(biāo)準(zhǔn) 眼 損 害積 分 角膜: a. 混濁(以最致密部位為準(zhǔn)) 無混濁 散光或彌漫性混濁, 虹膜清 晰可見 半透明區(qū)易分辨, 虹膜模糊不清 出現(xiàn)灰白色半透明區(qū), 虹膜細節(jié)不清，瞳孔大小勉強看清 角膜不透明, 由于混濁, 虹膜無法辨認(rèn) b. 角膜受損范圍 1/4 1/4-1/2 1/2-3/4 3/4-1 012341234積分：ab533眼 損 害積 分 虹膜: a.正常 皺褶明顯加深,充血、腫脹、角

24、膜周圍有輕度充血，瞳孔對光仍 有反應(yīng) 出血、肉眼可見破壞，對光無反應(yīng)(或出現(xiàn)其中之一反應(yīng))012積分：a5第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (四) 眼刺激試驗表4 眼損害的分級標(biāo)準(zhǔn) 34眼 損 害積 分 結(jié)膜：a充血，系指瞼結(jié)膜、球結(jié)膜部位 血管正常 血管充血呈鮮紅色 血管充血呈深紅色，血管不易分辨 彌漫性充血呈深紅色 b水腫 無 輕微水腫(包括瞬膜) 明顯水腫,伴有部分眼瞼外翻 水腫至眼瞼近半閉合 水腫至眼瞼超過半閉合 c.分泌物 無 少量分泌物 分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著 分泌物使整個眼區(qū)潮濕或粘著012301

25、2340123積分：（a+b+c）2總積分：角膜、虹膜、結(jié)膜三者之和表4 眼損害的分級標(biāo)準(zhǔn) 35第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (四) 眼刺激試驗表 5 眼刺激性評價標(biāo)準(zhǔn) 急性眼刺激積分指數(shù)（i、a、o、i）(最高數(shù))眼刺激的平均指數(shù)（m、i、o、i） 眼刺激個體指數(shù)（i、i、o、i） 刺激強度 055151530306060808011048h后為048h后54日后57日后207日后407日后(6/6動物30)(4/6動物10)7日后(6/6動物60) (4/6動物30)無刺激性輕刺激性刺激性中度刺激性中度重度刺

26、激性重度刺激性36第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (四) 眼刺激試驗 2 試驗方法 (2)多次性眼刺激試驗 將受試物原液0.1ml或配制成的50%軟膏約100mg滴入(涂入)一側(cè)結(jié)膜囊內(nèi), 另一側(cè)作為對照,每日一次,連續(xù)14天。實驗結(jié)束后, 繼續(xù)觀察7-14天, 按表4分級標(biāo)準(zhǔn)記錄眼的刺激反應(yīng), 并按表5眼刺激性評價標(biāo)準(zhǔn)進行眼刺激強度的評價。 3. 結(jié)果評價 按上述分級評價標(biāo)準(zhǔn)評定, 如一次或多次接觸受試物, 不引起角膜、虹膜和結(jié)膜的炎癥變化, 或雖引起輕度反應(yīng), 但這種反應(yīng)是可逆的, 則認(rèn)為受試物可以安全使用。

27、在許多情況下, 哺乳動物眼的反應(yīng)較人敏感, 從動物試驗結(jié)果外推到人可提供較有價值的依據(jù)。37第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (五) 皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗 皮膚變態(tài)反應(yīng)是指通過重復(fù)接觸某種物質(zhì)后機體產(chǎn)生免疫傳遞的皮膚反應(yīng)?；瘜W(xué)物質(zhì)引起的變態(tài)性接觸性皮炎, 屬型(即延遲型)變態(tài)反應(yīng)。在人類的反應(yīng)可能是瘙癢、紅斑、丘疹、水皰和大皰, 動物僅見皮膚紅斑和水腫。 1. 試驗方法的原則 (1) 由于接觸致敏的發(fā)病過程包括致敏(誘導(dǎo))和激發(fā)兩個階段, 動物在第一次接觸受試物后至少1周, 再次給予激發(fā)接觸。通過激發(fā)接觸能否引起皮膚反應(yīng)

28、確定有無致敏作用。 (2) 實驗首選動物為白色豚鼠, 每組動物數(shù)為10-25只。 (3) 受試物劑量(濃度)：致敏(誘導(dǎo))濃度允許引起皮膚輕度刺激反應(yīng)(即最高耐受濃度)。激發(fā)濃度一般應(yīng)低于致敏濃度, 不得引起原發(fā)刺激性皮膚炎癥反應(yīng)。38第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (五) 皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗 (4) 為避免出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果, 試驗中除要求使用的試劑、綁帶、膠布均無刺激性外, 并設(shè)立陽性或陰性對照組。 (5)為提高皮膚反應(yīng)的陽性率(增加敏感性), 通常采用福氏完全佐劑(fca), 而不影響實驗的評價。 注: 福

29、氏完全佐劑(fca)的制備: 輕質(zhì)石蠟油 50ml 羊毛脂(或吐溫80) 25ml 結(jié)核汗菌(滅活) 62mg 生理鹽水 25ml 制成油包水乳化劑后, 經(jīng)高壓消毒備用。39第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (五) 皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗 2. 豚鼠最大值試驗(皮內(nèi)和涂皮結(jié)合法, 簡稱gpmt) (1)試驗前24h在豚鼠頸背脊柱兩側(cè)46cm范圍內(nèi)剪毛或脫毛。 注: 脫毛劑配方: 可溶性淀粉 6 份 滑石粉 6 份 硫化鋇 6 份 顆粒狀陽離子表面活性劑 27份 用水調(diào)成糊狀涂在脫毛部位, 保留4min左右, 用水沖洗殘留脫

30、毛劑。 40第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (五) 皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗 (2)從頭部到尾部成對地做三次皮內(nèi)注射。注射0.1mlfca; 注射0.1ml受試物; 注射0.1ml受試物與fca的等量混合物。如圖3-1所示, 各點間距1.5cm。 圖 3-141第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (五) 皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗 (3)注射后第8天, 用24cm濾紙涂以用適當(dāng)賦形劑(花生油、凡士林、 羊毛脂等)配制的受試物, 將其貼敷在上背部的注射部位,

31、持續(xù)封閉固定48h, 作為第二致敏。為加強致敏作用, 對無皮膚刺激作用的化學(xué)物質(zhì), 可在第二次致敏前24h, 在注射部位涂抹10%十二烷基硫酸鈉(sds)。對照組僅用溶劑或賦形劑注射或涂抹。 (4)激發(fā)接觸, 即在末次致敏后14-28天, 分別用22cm的濾紙涂以受試物, 再次貼敷在上背部兩側(cè)的去毛區(qū), 持續(xù)封閉和固定24h。對照動物作同樣處理。 (5)激發(fā)接觸后24、48和72h觀察反應(yīng), 按表6進行皮膚反應(yīng)強度評分。42第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價 紅 斑 形 成 積 分 無紅斑輕微可見紅斑中度紅斑嚴(yán)重紅斑水腫性紅斑 01234水 腫 形 成 積 分無水腫 勉強可見 皮膚隆起輪廓清楚 水腫隆起約1 mm 水腫隆起超過1 mm, 范圍擴大 01234二二. . 化妝品安全性評價試驗方法化妝品安全性評價試驗方法 (五) 皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗表6 皮膚反應(yīng)強度評價43第六章第六章 化妝品的安全性評價化妝品的安全性評價二二. . 化妝品安