苯硫脲嘗味遺傳大實(shí)驗(yàn)ppt課件

1、LOGO1www. 遺傳學(xué)大實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)遺傳學(xué)大實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1實(shí)驗(yàn)的每一步都要詳細(xì)地記錄操作內(nèi)容、時(shí)間、步驟、結(jié)果等，以備查實(shí)驗(yàn)的每一步都要詳細(xì)地記錄操作內(nèi)容、時(shí)間、步驟、結(jié)果等，以備查詢。詢。 2對(duì)任何自己不熟悉的實(shí)驗(yàn)儀器都不要隨意操作（尤其是微量移液器）。對(duì)任何自己不熟悉的實(shí)驗(yàn)儀器都不要隨意操作（尤其是微量移液器）。在操作的過程中發(fā)現(xiàn)任何意外的現(xiàn)象都要及時(shí)向任課教師匯報(bào)。在操作的過程中發(fā)現(xiàn)任何意外的現(xiàn)象都要及時(shí)向任課教師匯報(bào)。3在實(shí)驗(yàn)的過程中制造的任何垃圾都要丟到垃圾筐里（或先放在自己的桌在實(shí)驗(yàn)的過程中制造的任何垃圾都要丟到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一角），嚴(yán)禁隨地投棄！特別注意對(duì)廢棄細(xì)

2、菌的殺滅和有毒垃圾的定面一角），嚴(yán)禁隨地投棄！特別注意對(duì)廢棄細(xì)菌的殺滅和有毒垃圾的定點(diǎn)投放。點(diǎn)投放。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要把用過的器皿清洗后歸放整齊并清點(diǎn)數(shù)目，向教師匯報(bào)征實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要把用過的器皿清洗后歸放整齊并清點(diǎn)數(shù)目，向教師匯報(bào)征得同意后方可離開實(shí)驗(yàn)室。得同意后方可離開實(shí)驗(yàn)室。 2www. 1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?（1）測(cè)定人群中）測(cè)定人群中PTC 嘗味基因的表現(xiàn)型和基因型，理解孟德爾遺傳基因型與表現(xiàn)型嘗味基因的表現(xiàn)型和基因型，理解孟德爾遺傳基因型與表現(xiàn)型的對(duì)應(yīng)關(guān)系。的對(duì)應(yīng)關(guān)系。（2）了解酶切擴(kuò)增多態(tài)序列（）了解酶切擴(kuò)增多態(tài)序列（cleaved amplified polymorphic sequ

3、ence，CAPS）（又稱為（又稱為PCR-RFLP）技術(shù)的原理，學(xué)會(huì)用）技術(shù)的原理，學(xué)會(huì)用CAPS 技術(shù)檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性技術(shù)檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）。在分子水平上測(cè)定）。在分子水平上測(cè)定PTC 嘗味的基因型。嘗味的基因型。（3）計(jì)算群體中）計(jì)算群體中PTC 嘗味的基因頻率，判斷群體是否達(dá)到嘗味的基因頻率，判斷群體是否達(dá)到Hardy-weiberg 平衡。平衡。3www. 2. 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理2.1 苯硫脲嘗味的遺傳形式苯硫脲嘗味的遺傳形式 苯硫脲（苯硫脲（phenylthiocarbamide，PTC）是硫脲的）是硫脲的 苯基衍生物（圖苯基衍生物（圖2.1），為），為白色結(jié)晶粉末，

4、因含有硫代酰胺基（白色結(jié)晶粉末，因含有硫代酰胺基（N-C=S）官能團(tuán)而有苦澀味。能嘗）官能團(tuán)而有苦澀味。能嘗1/750,0001/50,000 PTC 濃度溶液味道的人（苦澀味，少數(shù)人感到甜味）稱濃度溶液味道的人（苦澀味，少數(shù)人感到甜味）稱為苯硫脲為苯硫脲“嘗味者（嘗味者（taster）”；只能嘗出；只能嘗出PTC 濃度大于濃度大于1/24,000 溶液的味溶液的味道（甚至對(duì)道（甚至對(duì)PTC 的結(jié)晶物也嘗不出苦味）的人稱為苯硫脲的結(jié)晶物也嘗不出苦味）的人稱為苯硫脲“味盲者味盲者（nontaster）”。4www. PTC 嘗味能力是受單基因控制的孟德爾遺傳性狀，是由位于嘗味能力是受單基因控制的

5、孟德爾遺傳性狀，是由位于7 號(hào)染色體號(hào)染色體上（上（7q35-7q36）的一種苦味味覺感受器基因）的一種苦味味覺感受器基因TAS2R38 決定的，屬于常染色決定的，屬于常染色體不完全顯性遺傳。嘗味者中顯性基因體不完全顯性遺傳。嘗味者中顯性基因T的純合子的純合子(TT)能嘗出能嘗出1750,000 16,000,000的的PTC 溶液的苦味，雜合子溶液的苦味，雜合子(Tt) 只能嘗出只能嘗出1480,000l380,000 的的PTC 溶液的苦味。因此可以利用對(duì)溶液的苦味。因此可以利用對(duì)PTC 的嘗味能力測(cè)定家族中的的嘗味能力測(cè)定家族中的基因傳遞和人群中的基因頻率?；騻鬟f和人群中的基因頻率。5

6、www. 2.2 人類苯硫脲嘗味的基因人類苯硫脲嘗味的基因 人類的人類的 PTC 嘗味基因嘗味基因Homo sapiens taste receptor, type 2, member38(TAS2R38)(NM_176817)，又名，又名PTC、T2R38 或或 T2R61。絕大多數(shù)嘗。絕大多數(shù)嘗味者與味盲者的區(qū)別在于三處單核苷酸多態(tài)性（味者與味盲者的區(qū)別在于三處單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs)：6www. 第一處：第一處：145 位，味盲者為位，味盲者為G145（編碼丙氨酸（編碼丙氨酸ala），嘗味者為），嘗味者為C145（編碼脯氨

7、酸（編碼脯氨酸pro）；）； 第二處：第二處：785 位，味盲者為位，味盲者為T785（編碼纈氨酸（編碼纈氨酸val），嘗味者為），嘗味者為C785（編碼丙氨酸（編碼丙氨酸ala）；）； 第三處：第三處：886 位，味盲者為位，味盲者為A886（編碼異亮氨酸（編碼異亮氨酸ile），嘗味者為），嘗味者為G886（碼纈氨酸（碼纈氨酸val）。）。7www. 因此味盲者因此味盲者PTC 多肽中三處對(duì)應(yīng)的氨基酸分別是多肽中三處對(duì)應(yīng)的氨基酸分別是ala49、val262 和和ile262，被稱為，被稱為AVI 等位基因，而嘗味者的三處是等位基因，而嘗味者的三處是pro49、ala262 和和val262

8、，被稱為被稱為PAV 等位基因（圖等位基因（圖2.2，2.3）。）。8www. 9www. 圖 2.2 味盲者PTC 嘗味基因編碼區(qū)（CDS）序列10www. 圖2.3 味盲者PTC 多肽11www. 味盲者的味盲者的PTC 編碼區(qū)有五個(gè)限制性內(nèi)切編碼區(qū)有五個(gè)限制性內(nèi)切Fnu4H1 的識(shí)別位點(diǎn)（識(shí)別序列的識(shí)別位點(diǎn)（識(shí)別序列5-GCNGC-3），如果是嘗味者，則其第），如果是嘗味者，則其第785 位位SNP 恰好形成了一個(gè)額外的恰好形成了一個(gè)額外的Fnu4H1 識(shí)別位（識(shí)別位（GCTGC）。因此可以利用這個(gè)）。因此可以利用這個(gè)SNP 造成的限制性位點(diǎn)多態(tài)性，設(shè)計(jì)引物造成的限制性位點(diǎn)多態(tài)性，設(shè)計(jì)引

9、物擴(kuò)增包含擴(kuò)增包含785 位位SNP 位點(diǎn)的位點(diǎn)的PTC 基因編碼區(qū)的一部分，然后用基因編碼區(qū)的一部分，然后用Fnu4H1切割擴(kuò)增產(chǎn)切割擴(kuò)增產(chǎn)物，根據(jù)是否能把擴(kuò)增產(chǎn)物切開而判定是某個(gè)人的單倍型（物，根據(jù)是否能把擴(kuò)增產(chǎn)物切開而判定是某個(gè)人的單倍型（haplotype）。）。12www. 4. 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 （1）講解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線。）講解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線。 （2）講解口腔上皮細(xì)胞總）講解口腔上皮細(xì)胞總DNA 的快速提取、基因的快速提取、基因PCR 擴(kuò)增、擴(kuò)增、DNA 電泳、電泳、PCR 產(chǎn)物純化、產(chǎn)物純化、DNA 酶切、遺傳學(xué)分析等實(shí)驗(yàn)方法及注意事項(xiàng)。酶切、

10、遺傳學(xué)分析等實(shí)驗(yàn)方法及注意事項(xiàng)。 （3）講解高壓蒸氣滅菌鍋、高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、電泳儀、水平電）講解高壓蒸氣滅菌鍋、高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、渦旋振蕩器、磁力攪拌器、電子天平、泳槽、渦旋振蕩器、磁力攪拌器、電子天平、PCR 儀、微波爐、紫外分光光儀、微波爐、紫外分光光度計(jì)、電磁爐、恒溫水浴鍋、恒溫干熱議、凝膠成像儀、制冰機(jī)、超凈工作度計(jì)、電磁爐、恒溫水浴鍋、恒溫干熱議、凝膠成像儀、制冰機(jī)、超凈工作臺(tái)、通風(fēng)櫥、恒溫振蕩搖床、臺(tái)、通風(fēng)櫥、恒溫振蕩搖床、37培養(yǎng)箱、培養(yǎng)箱、pH 計(jì)、微量移液器、冰箱、計(jì)、微量移液器、冰箱、-80超低溫冰箱等主要儀器設(shè)備以及必須的電腦軟件

11、的使用方法、注意事項(xiàng)；超低溫冰箱等主要儀器設(shè)備以及必須的電腦軟件的使用方法、注意事項(xiàng)；13www. 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備 高壓蒸氣滅菌鍋、磁力攪拌器、電子天平、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、冰高壓蒸氣滅菌鍋、磁力攪拌器、電子天平、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、冰箱。箱。 潔凈、經(jīng)潔凈、經(jīng)121高壓滅菌高壓滅菌20min 的容量瓶、量筒、燒杯、螺口試劑瓶，一的容量瓶、量筒、燒杯、螺口試劑瓶，一次次 性醫(yī)用無(wú)菌性醫(yī)用無(wú)菌PE 手套、乳膠手套、塑料滴管，一次性紙杯，記號(hào)筆。手套、乳膠手套、塑料滴管，一次性紙杯，記號(hào)筆。4.2 PTC 嘗味能力的測(cè)定嘗味能力的測(cè)定

12、14www. 試劑和材料試劑和材料 （1）材料：受試者為全體修讀遺傳學(xué)大實(shí)驗(yàn)的學(xué)生。）材料：受試者為全體修讀遺傳學(xué)大實(shí)驗(yàn)的學(xué)生。 （2）試劑：苯硫脲（）試劑：苯硫脲（PTC）結(jié)晶，娃哈哈純凈水。）結(jié)晶，娃哈哈純凈水。15www. 溶液配制溶液配制 （1）原液（）原液（1 號(hào)液）：稱取號(hào)液）：稱取PTC 結(jié)晶結(jié)晶0.65 g，加娃哈哈純凈水，加娃哈哈純凈水500 ml，在室溫，在室溫(20左右左右)下溶解下溶解l2d（經(jīng)常搖晃）（或（經(jīng)常搖晃）（或60水浴中水浴中1 h 充分溶解），充分溶解），PTC 濃度約為濃度約為1750，過濾滅菌。，過濾滅菌。 （2）稀釋液

13、：用娃哈哈純凈水逐級(jí)稀釋原液）稀釋液：用娃哈哈純凈水逐級(jí)稀釋原液214 倍，編為倍，編為2-14 號(hào)（表號(hào)（表4.1）。）。 將配好的將配好的14 種濃度的種濃度的PTC 溶液，過濾滅菌，分別置于滅菌過的溶液，過濾滅菌，分別置于滅菌過的100 ml 螺口螺口試劑瓶中。另取娃哈哈純凈水作為第試劑瓶中。另取娃哈哈純凈水作為第15 號(hào)液。號(hào)液。16www. 17www. 4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法 （1）讓受試者正坐，仰頭張嘴伸舌，用滴管滴）讓受試者正坐，仰頭張嘴伸舌，用滴管滴23 滴滴 15 號(hào)液于受試者舌根部，讓受號(hào)液于受試者舌根部，讓受試者慢慢咽下反復(fù)咂嘴品味液體嘗味，然后用純凈水做同樣的試

14、驗(yàn)，交替給試者慢慢咽下反復(fù)咂嘴品味液體嘗味，然后用純凈水做同樣的試驗(yàn)，交替給 受試者嘗味，避免受試者的臆意猜測(cè)而影響結(jié)果的準(zhǔn)確。受試者嘗味，避免受試者的臆意猜測(cè)而影響結(jié)果的準(zhǔn)確。 （2）詢問受試者能否鑒別此兩種溶液的味道。）詢問受試者能否鑒別此兩種溶液的味道。 （3）若不能鑒別或鑒別不準(zhǔn)，則依次用）若不能鑒別或鑒別不準(zhǔn)，則依次用 141 號(hào)溶液號(hào)溶液 重復(fù)試驗(yàn)，直到能明確鑒別出重復(fù)試驗(yàn)，直到能明確鑒別出PTC 的苦味為止。的苦味為止。 （4）復(fù)嘗味）復(fù)嘗味3 次，次，3 次結(jié)果相同時(shí)，才是可靠。次結(jié)果相同時(shí)，才是可靠。 （5）記錄所品出苦味的液體的編號(hào)和稀釋濃度。）記錄所品出苦味的液體的編號(hào)和

15、稀釋濃度。18www. 注：統(tǒng)計(jì)民族、生源地是想調(diào)查注：統(tǒng)計(jì)民族、生源地是想調(diào)查PTC 味盲分布與民族和地理位置是否有相關(guān)性。味盲分布與民族和地理位置是否有相關(guān)性。（此生源地統(tǒng)計(jì)的不是受試者戶籍所在地，而是其家族或家庭成員長(zhǎng)期生活（此生源地統(tǒng)計(jì)的不是受試者戶籍所在地，而是其家族或家庭成員長(zhǎng)期生活的地方）的地方）19www. 20www. 21www. 22www. 23www. 24www. 25www. 26www. 27www. 4.3 人口腔上皮細(xì)胞總?cè)丝谇簧掀ぜ?xì)胞總 DNA 的提取的提取4.3.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備 高壓蒸氣滅菌鍋、磁力攪拌器、

16、電子天平、超凈高壓蒸氣滅菌鍋、磁力攪拌器、電子天平、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、渦旋振蕩器、高速離心機(jī)、工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、渦旋振蕩器、高速離心機(jī)、恒溫振蕩搖床、微量移液器、電磁爐、冰箱、恒溫振蕩搖床、微量移液器、電磁爐、冰箱、-80超低溫冰箱、計(jì)時(shí)器、超低溫冰箱、計(jì)時(shí)器、pH 計(jì)。計(jì)。 潔凈、經(jīng)潔凈、經(jīng) 121高壓滅菌高壓滅菌 20min 的量筒、燒杯、螺口試劑的量筒、燒杯、螺口試劑瓶、牙簽、瓶、牙簽、1.5 mL滅菌微量離心管、微量移液器滅菌微量離心管、微量移液器吸頭（槍頭），離心管架，一次性醫(yī)用無(wú)菌吸頭（槍頭），離心管架，一次性醫(yī)用無(wú)菌 PE 手套、乳膠手套、口罩，記號(hào)筆。手套、乳膠手套、口

17、罩，記號(hào)筆。 28www. 4.3 人口腔上皮細(xì)胞總?cè)丝谇簧掀ぜ?xì)胞總 DNA 的提取的提取 試劑和材料試劑和材料 （1）材料：每實(shí)驗(yàn)小組選?。┎牧希好繉?shí)驗(yàn)小組選取 1 名受試者，用滅名受試者，用滅 菌牙簽刮取口腔上皮細(xì)胞。菌牙簽刮取口腔上皮細(xì)胞。 （2）試劑：滅菌水，）試劑：滅菌水，pH 標(biāo)準(zhǔn)液，細(xì)胞基因組標(biāo)準(zhǔn)液，細(xì)胞基因組 DNA 提取試劑盒提取試劑盒 29www. 4.3 人口腔上皮細(xì)胞總?cè)丝谇簧掀ぜ?xì)胞總 DNA 的提取的提取4.3.2 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法 （1）在）在 1.5 ml 滅菌微量離心管中加入滅菌微量離心管中加入 100 L 滅菌水。滅菌水。 （2）受試者用無(wú)菌牙簽

18、輕刮口腔腮內(nèi)側(cè)，刮下來(lái)）受試者用無(wú)菌牙簽輕刮口腔腮內(nèi)側(cè)，刮下來(lái) 的細(xì)胞在滅菌水中漂洗。的細(xì)胞在滅菌水中漂洗。 （3）渦旋振蕩器渦旋振蕩混勻）渦旋振蕩器渦旋振蕩混勻 10 s， （4）離心機(jī)瞬時(shí)離心）離心機(jī)瞬時(shí)離心 10 s。 （5）沸水浴中煮沸）沸水浴中煮沸 5 min。 （6）離心機(jī)）離心機(jī) 13200rpm 離心離心 2 min。 （7）基因組）基因組 DNA 4C 保存?zhèn)浔４鎮(zhèn)?30www. 4.5 PTC 基因基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè) 4.5.1. 4.5.1. 主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備 高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、電子天平、微波爐、凝膠高速離

19、心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、電子天平、微波爐、凝膠成像儀、制冰機(jī)、超凈工作臺(tái)、通風(fēng)櫥、微量移液器、冰箱、成像儀、制冰機(jī)、超凈工作臺(tái)、通風(fēng)櫥、微量移液器、冰箱、-80-80超低溫冰箱。超低溫冰箱。 潔凈、經(jīng)潔凈、經(jīng)121121高壓滅菌高壓滅菌20min 20min 的、微量移液器吸頭（槍頭），離心管架，的、微量移液器吸頭（槍頭），離心管架， PCRPCR管管架，三角瓶，一次性醫(yī)用無(wú)菌架，三角瓶，一次性醫(yī)用無(wú)菌 PEPE手套，記號(hào)筆，保鮮袋，微波爐用手套，三角瓶手套，記號(hào)筆，保鮮袋，微波爐用手套，三角瓶，搪瓷盤。，搪瓷盤。31www. 4.5.2. 4.5.2. 試劑和材料試劑和材料

20、 （1 1）材料：受試者）材料：受試者PTC PTC 基因基因PCR PCR 產(chǎn)物產(chǎn)物 （2 2）試劑：）試劑：Tris Tris 堿，冰乙酸，堿，冰乙酸，NaNa2 2EDTA.2HEDTA.2H2 2 O, O,溴化乙錠，瓊脂糖，溴化乙錠，瓊脂糖，Marker I Marker I 4.5.3. 4.5.3. 溶液配制溶液配制 （1 1）5050 TAE TAE 電泳緩沖液（儲(chǔ)存液，電泳緩沖液（儲(chǔ)存液，pHpH約約8.58.5）：）：Tris Tris 堿堿 242g242g，57.1ml 57.1ml 冰乙酸，冰乙酸，37.2g Na37.2g Na2 2 EDTA.2HEDTA.2H2

21、 2 O O ，去離子水定容至，去離子水定容至1L 1L （2 2）1 1 TAE TAE 電泳緩沖液（工作液）：取電泳緩沖液（工作液）：取5050TAE TAE 電泳緩沖液，去離子水稀釋電泳緩沖液，去離子水稀釋5050倍倍 32www. (3(3）0.5mg/ml 0.5mg/ml 溴化乙錠（溴化乙錠（EBEB）（）（10001000 儲(chǔ)存液）：儲(chǔ)存液）：50mg 50mg 溴化乙錠溶于溴化乙錠溶于100mL 100mL dd dd waterwater，4 4C C 避光儲(chǔ)存）。避光儲(chǔ)存）。 (4) (4) 溴化乙錠（溴化乙錠（EBEB）工作液：）工作液：0.5mg/ml EB0.5mg/

22、ml EB（10001000 儲(chǔ)存液），去離子水稀釋儲(chǔ)存液），去離子水稀釋 10001000倍。（注：倍。（注：EBEB為扁平分子，可以嵌入為扁平分子，可以嵌入DNADNA，為潛在誘變劑，接觸時(shí)須帶一次性，為潛在誘變劑，接觸時(shí)須帶一次性醫(yī)用無(wú)菌醫(yī)用無(wú)菌PEPE手套，但也不是洪水猛獸，不小心濺到皮膚上時(shí)，不會(huì)被皮膚吸收只手套，但也不是洪水猛獸，不小心濺到皮膚上時(shí)，不會(huì)被皮膚吸收只是停留在表面，用大量流水沖洗即可）。是停留在表面，用大量流水沖洗即可）。33www. （1 1）配制）配制 1.2%1.2%瓊脂糖凝膠：稱取瓊脂糖凝膠：稱取 0.6g 0.6g 瓊脂糖粉，放入三角瓶，加入瓊脂糖粉，放入三

23、角瓶，加入50ml 1 50ml 1 TAE TAE電泳緩沖液，放入微波爐中加熱，并不斷取出混勻，注意觀察燒瓶中的瓊電泳緩沖液，放入微波爐中加熱，并不斷取出混勻，注意觀察燒瓶中的瓊脂糖粉末，直至完全熔解（燙，戴手套）。脂糖粉末，直至完全熔解（燙，戴手套）。50ml 50ml 正好倒一塊大膠（切不可讓膠正好倒一塊大膠（切不可讓膠溶液溢出到微波爐中！）。溶液溢出到微波爐中?。?。（2 2）將膠液置桌面上室溫冷卻致熱但不燙手（約）將膠液置桌面上室溫冷卻致熱但不燙手（約50-6050-60）。）。 4.5.2 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法34www. （3 ）把梳子插到凝膠灌制模具的正確位置后緩緩倒入膠溶液。膠溶液

24、倒至與）把梳子插到凝膠灌制模具的正確位置后緩緩倒入膠溶液。膠溶液倒至與模具的矮邊緣相平即可。在桌面上靜置模具的矮邊緣相平即可。在桌面上靜置10-20 分鐘待膠完全凝固分鐘待膠完全凝固.（剩下的膠（剩下的膠溶液封口后留待以后再熔化使用），小心拔出梳子，凝膠沒入電泳槽電泳液中，溶液封口后留待以后再熔化使用），小心拔出梳子，凝膠沒入電泳槽電泳液中，凝膠上有樣品孔的一側(cè)要朝向電泳槽的負(fù)極。凝膠上有樣品孔的一側(cè)要朝向電泳槽的負(fù)極。 35www. （4）?。┤?1 片光面紙，點(diǎn)片光面紙，點(diǎn) 5uL 滅菌水、滅菌水、2uL 6加樣緩沖液，再加入加樣緩沖液，再加入 5uL PCR 產(chǎn)物制成產(chǎn)物制成10uL D

25、NA 樣品。樣品。 （5）在凝膠上選擇相鄰的加樣孔。用）在凝膠上選擇相鄰的加樣孔。用10ul 的吸液頭的吸液頭分別依次加入分別依次加入5uL Marker I對(duì)照，各小組對(duì)照，各小組12uL PCR 產(chǎn)物電泳樣品（互相比較）產(chǎn)物電泳樣品（互相比較） （6）根據(jù)電泳槽的長(zhǎng)度把電泳儀的電壓調(diào)至）根據(jù)電泳槽的長(zhǎng)度把電泳儀的電壓調(diào)至120V(10V/cm)，電泳，電泳2030min。（注意正負(fù)電極的位置連。（注意正負(fù)電極的位置連接正確）。接正確）。 （7）把凝膠小心放入盛有）把凝膠小心放入盛有 EB的搪瓷盤中，染色的搪瓷盤中，染色 10分鐘分鐘后，取出用自來(lái)水浸泡后，取出用自來(lái)水浸泡10min 。 （8）放入凝膠成像系統(tǒng)中拍照。）放入凝膠成像系統(tǒng)中拍照。 36www. 4.6.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備 高壓蒸氣滅菌鍋、高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、渦旋振蕩器、磁力攪拌器、高壓蒸氣滅菌鍋、高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、渦旋振蕩器、磁力攪拌器、恒溫水浴鍋、恒溫干熱議、制冰機(jī)、紫外分光光度計(jì)、微量移液器、冰箱、恒溫水浴鍋、恒溫干熱議、制冰機(jī)、紫外分光光度計(jì)、微量移液器、冰箱、-80超低溫冰箱。超低溫冰箱。 潔凈、經(jīng)潔凈、經(jīng)121高壓滅菌高壓滅菌20min 的的1.5 mL 滅菌微量離心管、微量移液器吸頭滅菌微量離心管、微量移