常見重要毒物的檢驗(yàn).PPT

1、1常見重要毒物的檢驗(yàn)常見重要毒物的檢驗(yàn)2毒物檢驗(yàn)的基本知識(shí)毒物檢驗(yàn)的基本知識(shí)124水溶性毒物的檢驗(yàn)水溶性毒物的檢驗(yàn)2揮發(fā)性毒物的檢驗(yàn)揮發(fā)性毒物的檢驗(yàn)3金屬毒物及微量元素的檢驗(yàn)金屬毒物及微量元素的檢驗(yàn)4農(nóng)藥的檢驗(yàn)農(nóng)藥的檢驗(yàn)5殺鼠藥的檢驗(yàn)殺鼠藥的檢驗(yàn)6黃曲霉毒素的檢驗(yàn)黃曲霉毒素的檢驗(yàn)73第一節(jié)第一節(jié) 毒物檢驗(yàn)的一般知識(shí)毒物檢驗(yàn)的一般知識(shí)4概念概念1.毒素：毒素：是一類特殊的毒物，是由活的機(jī)體分泌的具有生物活性的物質(zhì)。2.毒物檢驗(yàn)：毒物檢驗(yàn)：是運(yùn)用生物化學(xué)和物理學(xué)原理和方法，對(duì)可疑的飼料和進(jìn)入畜禽體內(nèi)的毒物進(jìn)行分離鑒定，以查清毒物及中毒原因，作為中毒病的診斷、急救及預(yù)防的科學(xué)依據(jù)。5一、毒物檢驗(yàn)的目

2、的一、毒物檢驗(yàn)的目的1、診斷性的目的診斷性的目的 通過(guò)對(duì)進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)的毒物的分離鑒定，查清毒物及中毒原因。即是否中毒，是什么毒物引起的中毒,為中毒的診斷、急救和預(yù)防提供科學(xué)的依據(jù)。如果查不清毒物，單憑病史、癥狀、病理變化等是很難對(duì)中毒病進(jìn)行確診的。2、預(yù)防性的目的預(yù)防性的目的 在人醫(yī)，有防疫站專門搞這項(xiàng)工作，我們獸醫(yī)部門，沒有防疫站專門搞此項(xiàng)工作。通過(guò)經(jīng)常對(duì)飼料、飲水、動(dòng)物所在的環(huán)境（如空氣、土壤、牧草等）及機(jī)體的某些生理指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，及早預(yù)防中毒病的發(fā)生。6二、毒物檢驗(yàn)中的幾個(gè)主二、毒物檢驗(yàn)中的幾個(gè)主要要環(huán)節(jié)環(huán)節(jié)毒物的種類很多，中毒的原因也很復(fù)雜，在進(jìn)行毒檢之前，要考慮以下幾個(gè)問(wèn)題：1、有無(wú)

3、中毒的可能，即是否為中毒？2、如果是中毒可能是何種毒物中毒？3、該取什么檢材？4、用什么方法進(jìn)行檢驗(yàn)。7 （一）中毒的一般診斷（一）中毒的一般診斷（回答1、2個(gè)問(wèn)題）對(duì)于第1和第2個(gè)問(wèn)題，主要是通過(guò)病史調(diào)查、臨床癥狀和尸體剖檢的觀察等一般的診斷來(lái)回答,前面講課中已講過(guò)了，這里再補(bǔ)充幾點(diǎn)：1、上述調(diào)查了解最好毒檢工作者親自到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行，掌握第一手資料。（集寧貂場(chǎng)的情況，不親臨現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查很難得到，有時(shí)當(dāng)事者怕承擔(dān)責(zé)任，不說(shuō)真話）2、向送檢人調(diào)查，仔細(xì)看送檢單。送檢單的內(nèi)容主要包括：病史（發(fā)病時(shí)間、病畜的數(shù)量、病前的飼養(yǎng)管理情況，臨床癥狀、防治措施及療效、死亡情況及尸體剖檢等）。檢材的種類、數(shù)量、包裝情

4、況，取材日期，送檢目的和要求等。送檢單的內(nèi)容要填入“毒物檢驗(yàn)記錄”中。8 （二）檢材的采取，保管和裝送（二）檢材的采取，保管和裝送（回答第3個(gè)問(wèn)題）通過(guò)一般診斷，大致上可確定是否為中毒和可能是哪種或哪幾類毒物中毒，接著要進(jìn)行的就是毒物檢驗(yàn)，毒檢的第一步就是檢材的采取、保管和裝送的基本要求：1、送檢要及時(shí)送檢要及時(shí)最好要當(dāng)天采集當(dāng)天送，送檢材料要低溫保存（夏季在冷藏瓶），以減少毒物的損失和防止檢材的腐敗，也可在不影響毒物檢驗(yàn)的情況下，置入純酒精中送檢。送檢時(shí)應(yīng)同時(shí)送酒精樣品（50-1250ml）以供對(duì)照檢驗(yàn)、檢材中不得加入福爾馬林，因其本身也是毒物，并且對(duì)某些毒物（如生物堿、苯酚、氰化物）的檢驗(yàn)

5、有妨礙。2 檢材的封裝要適當(dāng)檢材的封裝要適當(dāng)檢材要裝在潔凈的玻璃瓶或清潔無(wú)損的塑料袋內(nèi)，各種材料都要貼上標(biāo)簽，注明檢樣名稱，不能混放。瓶口要塞緊，袋口要扎牢，以防外漏。93 采集材料要準(zhǔn)確采集材料要準(zhǔn)確一般采集胃內(nèi)容物、嘔吐物、剩余飼料、可疑飼料、飲水等。重金屬中毒、氟中毒、硒中毒等可采集臟器、尿、被毛、土壤等，在剖檢死亡動(dòng)物中，應(yīng)根據(jù)動(dòng)物的種類及中毒時(shí)間選取材料。 急性中毒的動(dòng)物應(yīng)以取胃腸內(nèi)容物及肝臟、血液為主， 慢性中毒死亡者以取臟器及排泄物為主。 在未知毒物中毒時(shí)，取材應(yīng)盡可能全面，且數(shù)量要充足，以免事后無(wú)法彌補(bǔ)。檢驗(yàn)材料的采集數(shù)量見表4 送檢材料時(shí)必須附送檢單送檢材料時(shí)必須附送檢單 在

6、送檢單上寫清畜禽的飼喂情況、中毒發(fā)生的時(shí)間、畜種、中毒癥狀、治療和預(yù)防的措施及效果、死亡日期、死后剖檢變化、檢材采取得時(shí)間和送檢要求等，以便檢疫人員在擬定檢驗(yàn)計(jì)劃時(shí)參考10檢驗(yàn)材料的采集數(shù)量檢驗(yàn)材料的采集數(shù)量123檢材名稱檢材名稱 適宜數(shù)量適宜數(shù)量檢材名稱檢材名稱 適宜數(shù)量適宜數(shù)量胃內(nèi)容物 500g剩余飼料 500g嘔吐物 全部可疑飼料 500g發(fā)霉飼料 1000-1500g飲水 至少1000ml血液 50-100ml肝臟 1/3或全部腎臟 一只骨 500g被毛 至少10g土壤 1000g尿 1000ml11 （三）（三）檢驗(yàn)程序的擬定檢驗(yàn)程序的擬定（回答第（回答第4個(gè)問(wèn)題個(gè)問(wèn)題）1 經(jīng)過(guò)對(duì)中

7、毒的一般診斷，綜合分析，可能出現(xiàn)經(jīng)過(guò)對(duì)中毒的一般診斷，綜合分析，可能出現(xiàn)幾種情況：幾種情況：確定了是中毒，但方向不明確，要求檢驗(yàn)人員進(jìn)行系統(tǒng)的檢驗(yàn)，這種檢驗(yàn)是大海撈針，最費(fèi)時(shí)間，最費(fèi)檢材。有了較明確的方向，但具體的毒物不明確，例如，認(rèn)為是農(nóng)藥中毒，但農(nóng)藥的種類很多，是哪一種農(nóng)藥引起的還不明確，這 就需要在農(nóng)藥的范圍內(nèi)縮小包圍圈，查清具體的毒物。它比第一種情況省事。查清了可能引起中毒的具體毒物及其來(lái)源，就要確證一下就行了，這是最省事的。122 一般的檢驗(yàn)程序一般的檢驗(yàn)程序預(yù)試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)定性檢驗(yàn)定性檢驗(yàn)含量測(cè)定含量測(cè)定動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)13 預(yù)試驗(yàn)又稱指向性試驗(yàn)指向性試驗(yàn)，它是在不消耗檢材或消耗少量檢

8、材的情況下，利用簡(jiǎn)單的方法探索檢驗(yàn)方向的試驗(yàn)。預(yù)試驗(yàn)主要包括以下方面： 觀察檢材顏色觀察檢材顏色，如磷化鋅黑色的，氟乙酰紫紅色的； 注意氣味注意氣味，檢查檢材氣味最好在尸體剖檢或開封檢材的時(shí)候立即進(jìn)行，如有機(jī)磷具有蒜臭味；預(yù)試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)14 升華試驗(yàn)升華試驗(yàn)（燒灼），如從胃內(nèi)容物或可疑飼料中揀出的可疑物時(shí)，可取少量放入小試管中， 在火上灼燒，根據(jù)所產(chǎn)生的蒸汽或升華物的顏色，結(jié)晶性狀，可找到一些毒物的線索。如砷等金屬物質(zhì)，灼燒后在管壁上可見到升華物，置于顯微鏡下可見到不同形狀的結(jié)晶。如金屬砷汞等； 簡(jiǎn)單的化學(xué)方法簡(jiǎn)單的化學(xué)方法，如植物有毒成分的分析。 注意注意：預(yù)試驗(yàn)只起探索的作用，不能作為診斷的

9、依據(jù)，尚未做確診試驗(yàn)，不能作出結(jié)論。預(yù)試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)15又稱：確證試驗(yàn)確證試驗(yàn)。根據(jù)了解的情況或預(yù)試驗(yàn)所得到的線索，必須進(jìn)行一系列的定性反應(yīng)加以確證。定性反應(yīng)多數(shù)是化學(xué)反應(yīng)方法，根據(jù)被檢毒物的特殊化學(xué)反應(yīng)，判定毒物是否存在，因此，使用的化學(xué)反應(yīng)必須容易辨認(rèn)，如溶液顏色的改變、沉淀的生成或溶解、氣體的生成等。定性檢驗(yàn)定性檢驗(yàn)16注意注意： a、每種毒物的檢驗(yàn)要求做兩種以上兩種以上的檢驗(yàn)方法，方法要具有特異性，靈敏可靠，幾種方法結(jié)果一致方能確診，只有一種出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，不能確診。 b、檢驗(yàn)時(shí)同時(shí)作空白對(duì)照試驗(yàn)（陰性對(duì)照陰性對(duì)照）和已知樣品對(duì)照試驗(yàn)（陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照），陰性對(duì)照檢查試劑及器皿有無(wú)問(wèn)題，陽(yáng)性

10、對(duì)照檢驗(yàn)反應(yīng)是否正常進(jìn)行，并作為判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。陰性和陽(yáng)性樣品要同檢材做同樣的處理。定性檢驗(yàn)定性檢驗(yàn)17又稱：定量分析定量分析。在毒物檢驗(yàn)中，一般很少進(jìn)行含量測(cè)定，只要確定是什么毒物就可以了。但在某些情況下或?qū)δ撤N毒物進(jìn)行含量測(cè)定具有重要意義。如食鹽是動(dòng)物體內(nèi)必須的物質(zhì)，只有在進(jìn)行含量測(cè)定后，才能確定是否發(fā)生中毒。又如亞硝酸鹽定性檢驗(yàn)，食物呈弱陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，不一定會(huì)引起中毒，必要時(shí)需進(jìn)行含量測(cè)定。含量測(cè)定含量測(cè)定18 動(dòng)物試驗(yàn)在獸醫(yī)毒物檢驗(yàn)工作中也是常用的方法，它能初步探索到檢材中有無(wú)毒物存在和所含毒物量能否引起中毒。通過(guò)動(dòng)物中毒時(shí)所反映出的各種癥狀及病理變化，有助于提出進(jìn)一步檢驗(yàn)的方向。動(dòng)物試

11、驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)19 把可疑檢材接種給于動(dòng)物，觀察其臨床癥狀和剖檢變化，可推出毒物的種類。 實(shí)驗(yàn)所用的動(dòng)物有青蛙、小白鼠、家兔等。試驗(yàn)方法可直接飼喂或灌胃，亦可將毒物分離提取后給動(dòng)物ih、im、ip。如觀察檢材是否有刺激性或腐蝕性毒物存在，可涂于動(dòng)物的皮膚或粘膜上，以觀察結(jié)果。 由于許多毒物具有相同毒性作用，引起中毒癥狀也大致相同，因此，動(dòng)物試驗(yàn)最好在化學(xué)試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行，互為印證，才能得出正確結(jié)論。動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)20（四）做好檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作（四）做好檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作1、保證實(shí)驗(yàn)試劑和儀器的質(zhì)量、保證實(shí)驗(yàn)試劑和儀器的質(zhì)量（1）毒檢試驗(yàn)一般要求二級(jí)品（分析純）AR?！靖剑阂患?jí)品（優(yōu)級(jí)純）GR，三級(jí)品

12、（化學(xué)純）CR，四級(jí)品（實(shí)驗(yàn)室試劑）LR，五級(jí)品（生物試劑）BR?！浚?）準(zhǔn)備足夠的試劑和器皿。配試劑時(shí)，濃度要精確。（3）要求現(xiàn)用現(xiàn)配的試劑，一定要在使用前新配。（4）同一次試驗(yàn)中所用的移液管、滴定管、量筒、容量瓶、比色管等，規(guī)格、型號(hào)要盡量一致。2、正確選取與合理使用檢材、正確選取與合理使用檢材使用時(shí)用三三制：檢驗(yàn)用1/3，重做用1/3，保存用1/3（防止打官司）。21（五）毒物的提取（五）毒物的提取1、方法方法1）毒物的）毒物的分離分離提取方法很多，主要包括提取方法很多，主要包括：水汽蒸餾法：（酸性水汽蒸餾法，堿性水汽蒸餾）；透析法；溶劑萃取法；灰化法；消化法；層析法：（紙層析、薄層層析

13、、柱層析、氣相層析法、高效液相層析法)。2）揮發(fā)性毒物揮發(fā)性毒物提取提取常用常用的的方法方法水蒸氣蒸餾法；離心法；微量擴(kuò)散法；驅(qū)氣 法與抽氣法；頂空氣相色譜法。3）金屬毒物的提取方法）金屬毒物的提取方法干灰化法、 濕消化法、微波消解法 22（五）毒物的提?。ㄎ澹┒疚锏奶崛?、 毒物提取時(shí)注意毒物提取時(shí)注意事項(xiàng)事項(xiàng)：1）、要按照毒物的化學(xué)性質(zhì)選擇提取方法。既要把毒物充分提取出來(lái)，又要不使之揮散或受到破壞。如有機(jī)磷農(nóng)藥易溶于有機(jī)溶劑，因而可以用有機(jī)溶劑浸泡或振搖提取。但有機(jī)磷遇熱易揮發(fā)，在提出后揮散有機(jī)溶劑時(shí)，溫度不可過(guò)高。2）、在盡可能不損失毒物的前提下，所用的提取方法，應(yīng)能將干擾物質(zhì)充分排除，

14、必要時(shí)可進(jìn)一步凈化或提純，以提高反應(yīng)的靈敏度。對(duì)某些化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的有毒物質(zhì)，要設(shè)法使之分離。23 3）、要嚴(yán)格控制好提取過(guò)程中的各種條件。因?yàn)橐环N成熟的提取方法所規(guī)定的各種條件（如溫度、PH、時(shí)間、試劑加入的方式與程序等。）都是根據(jù)所檢毒物的化學(xué)特性及各種反應(yīng)過(guò)程中的反應(yīng)特點(diǎn)來(lái)確定的，違反這些條件，就有使提取工作失敗，甚至發(fā)生事故的可能。4）、為了減少毒物在提取過(guò)程中的損耗，提取方法應(yīng)盡可能簡(jiǎn)化，提取液轉(zhuǎn)移、脫水、脫色時(shí)，應(yīng)將原器皿及殘?jiān)蠚埩舻亩疚锍浞窒疵撆c收集。5）、提取過(guò)程中往往有毒氣體或有機(jī)溶劑的蒸汽揮散，工作人員要注意防護(hù)。24三三、層析法原理及其在毒物檢驗(yàn)中的應(yīng)用層析法原理及其在毒

15、物檢驗(yàn)中的應(yīng)用 層析技術(shù)層析技術(shù)是利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)(分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、 分子親和力、分配系數(shù)等)的不同，使各組分以不同程度分布在固定相和流動(dòng)相中，當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)，各組分以不同的速度移動(dòng)，而達(dá)到分離的技術(shù)。 層析技術(shù)操作簡(jiǎn)便，樣品可多可少，既可用于實(shí)驗(yàn)室的研究工作，又可用于工業(yè)生產(chǎn)， 還可與其他分析儀器配合，組成各種自動(dòng)分析儀器。 251、層析技術(shù)的分類 (1) 按流動(dòng)相的狀態(tài)分類：用液體作為流動(dòng)相的稱為液相層析，或稱液相色譜；以氣體作為流動(dòng)相的稱為氣相層析，或稱氣相色譜。 (2) 按固定相的使用形式分類：可分為柱層析 、紙層析、薄層層析、薄膜層析等。 (

16、3) 按分離過(guò)程所主要依據(jù)的物理化學(xué)原理分類：可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析、分子排阻層析、親和層析等。 262、薄層層析概念概念：是利用混合物中各組分的物理、化學(xué)性質(zhì)的差別，各組分可不同程度的分布在兩個(gè)不相混溶的物相中，其中一個(gè)為固定的（固定相），另一個(gè)為流過(guò)固定相的（流動(dòng)相），在同樣的時(shí)間內(nèi)各組分以不同的速度遷移，從而達(dá)到分離的目的。薄層層析的方法薄層層析的方法：點(diǎn)樣，展開，顯色，定性與定量分析 273、高效液相層析法高效液相層析法(high performance liquid chromatography, HPLC)，又稱高壓液相色譜法 、高速液相色譜法、現(xiàn)代液相色譜法等，是

17、在經(jīng)典液相色譜和氣相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的分析技術(shù)。特別適用于高沸點(diǎn)、不能氣化或熱穩(wěn)定性差的有機(jī)物分離分析，在生物化學(xué)與分子生物學(xué)中的應(yīng)用日益廣泛。284、高效液相層析法有哪些？1）.吸附層析2）.分配層析3）.離子交換層析4）.凝膠滲透層析295、HPLC的特點(diǎn) 具有高壓、高速、高效、高靈敏度等特點(diǎn)，因此廣泛應(yīng)用于氨基酸、蛋白質(zhì)、甾族化合物、糖類、有機(jī)酸、生物堿、藥物、農(nóng)藥、抗菌素、維生素、高聚物以及各種無(wú)機(jī)鹽類的分離與分析。30四四、檢驗(yàn)記錄及檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告檢驗(yàn)記錄及檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告（一）檢驗(yàn)記錄（一）檢驗(yàn)記錄 毒物檢疫人員對(duì)每次收到的檢材按規(guī)定要求多出詳細(xì)的記錄，與送檢人員核對(duì)送檢單上所訴

18、采集材料的時(shí)間、名稱、重量、包裹情況，并注明驗(yàn)檢日期。對(duì)檢驗(yàn)單上未詳述的內(nèi)容，特別是發(fā)病前后的情況，如臨床癥狀、尸體剖檢變化、現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查的初步印象、治療效果及要求檢驗(yàn)的項(xiàng)目等要與送檢人員座談并把詳細(xì)情況記錄下來(lái)。31 （二）檢驗(yàn)結(jié)果的判定和報(bào)告（二）檢驗(yàn)結(jié)果的判定和報(bào)告毒物檢驗(yàn)及結(jié)果通知單毒物檢驗(yàn)及結(jié)果通知單 編號(hào)編號(hào)檢驗(yàn)編號(hào)檢驗(yàn)編號(hào)接收時(shí)間接收時(shí)間 年年 月月 日日送檢單位送檢人送檢材料采樣時(shí)間采樣重量包裝發(fā)病情況送檢要求檢驗(yàn)結(jié)果 通知時(shí)間 編號(hào)321、檢驗(yàn)結(jié)果與臨床記錄完全符合。、檢驗(yàn)結(jié)果與臨床記錄完全符合。檢驗(yàn)的各項(xiàng)結(jié)果均為陽(yáng)性（如可疑飼料、胃內(nèi)容物、嘔吐物等）與中毒病畜的臨癥、尸變完全一

19、致，可做出某種毒物中毒的結(jié)論。2、檢驗(yàn)結(jié)果與臨床記錄部分符合。、檢驗(yàn)結(jié)果與臨床記錄部分符合。檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，現(xiàn)場(chǎng)也發(fā)現(xiàn)致病毒物，但與尸變不一致，首先考慮送檢材料是否是該中毒動(dòng)物的檢驗(yàn)材料。3、檢驗(yàn)結(jié)果與臨床記錄完全相反。、檢驗(yàn)結(jié)果與臨床記錄完全相反。檢驗(yàn)結(jié)果陰性，但臨癥和尸變與該種毒物引起的中毒表現(xiàn)一致，要考慮送檢的檢材采集的部位是否合適。檢驗(yàn)結(jié)果的判定檢驗(yàn)結(jié)果的判定33第二節(jié)水溶性毒物的檢驗(yàn)第二節(jié)水溶性毒物的檢驗(yàn)34（一）水浸法（一）水浸法將檢材研碎，用蒸餾水浸泡1h并稍加熱，攪拌，然后進(jìn)行過(guò)濾或離心分離，濾液或離心分離液供檢驗(yàn)用。如顏色過(guò)深，可加活性炭脫色。（二）透析法（二）透析法原理原理

20、無(wú)機(jī)化合物或低分子有機(jī)化合物的離子或小的分子，在溶液 中可以通過(guò)半透膜；而一些分子結(jié)構(gòu)大的化合物，如脂肪、蛋白質(zhì)等卻不能通過(guò)半透膜，從而得以分離。一、水溶性毒物的提取一、水溶性毒物的提取35操作操作1、半透膜的制作、半透膜的制作 取火棉膠數(shù)毫升，傾于潔凈干燥的小燒杯（或其他理想的容器）中迅速轉(zhuǎn)動(dòng)燒杯，使火棉膠均勻地分布在燒杯內(nèi)壁上，形成一層薄膜，將多余的火棉膠倒回原瓶中，待膜稍干，輕輕用刀尖將邊緣剝離，向薄膜和燒杯之間輕輕吹氣或注水，即可完全取下，將其放置在一個(gè)裝有水的燒杯中，待用。2、透析、透析 將檢材研碎或剪細(xì)后，裝入半透膜內(nèi)，將半透膜口捆扎在一根玻璃管上，然后將其放于適當(dāng)大小的燒杯內(nèi)，從

21、玻璃管向透析膜內(nèi)加入蒸餾水，使液面淹沒檢材，再往燒杯內(nèi)加蒸餾水至與檢材液面同一水平，透析1h，膜外的透析液供檢驗(yàn)用。為了增加透析速度及提高透析效率，可將燒杯適當(dāng)加熱（不超過(guò)50）。如要透析完全，則需時(shí)間長(zhǎng)些（最好在冰箱內(nèi)進(jìn)行，防止檢材腐敗），并更換膜外的蒸餾水?dāng)?shù)次，然后合并透析液，在水浴濃縮后供檢驗(yàn)用。36 亞硝酸鹽中毒亞硝酸鹽中毒是由于采食是由于采食富含富含亞硝酸鹽或硝酸鹽亞硝酸鹽或硝酸鹽的的飼料，引起飼料，引起高鐵（高鐵（FeFe3+ 3+ ）血紅蛋白）血紅蛋白血癥血癥，導(dǎo)致組織缺氧，導(dǎo)致組織缺氧的一種急性、亞急性中毒。的一種急性、亞急性中毒。臨床上以臨床上以黏膜發(fā)紺、血液褐變、呼吸困難、

22、胃腸道炎癥黏膜發(fā)紺、血液褐變、呼吸困難、胃腸道炎癥為特征。主要發(fā)生為特征。主要發(fā)生豬豬，牛、羊、馬也有發(fā)生。，牛、羊、馬也有發(fā)生。二、亞硝酸鹽的檢驗(yàn)二、亞硝酸鹽的檢驗(yàn)37（一）檢材及處理（一）檢材及處理亞硝酸鹽為水溶性毒物，故可采取剩余飼料、嘔吐物、胃內(nèi)容物及血液等作檢材，檢材用水浸法或透析法處理，取濾液或透析液作檢液。胃內(nèi)容物、嘔吐物、剩余飼料中亞硝酸鹽的提?。喝∩鲜鰴z材10到20克加適量蒸餾水調(diào)成糊狀，過(guò)濾，濾液若有顏色，可用活性炭脫色。 血清：靜脈采血后離心沉淀，分離血清備用。 38樣品采取時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)：應(yīng)當(dāng)無(wú)化學(xué)污染或殘?jiān)?；樣品不能用水沖洗，可能除去殘毒；水可污染樣品；樣品保存條件：

23、組織樣品，應(yīng)在冰凍條件下送往實(shí)驗(yàn)室；血清和血液樣品，不應(yīng)冰凍，但可低溫保存；樣品內(nèi)不要加防腐劑或福爾馬林，除非有特殊原因應(yīng)加以說(shuō)明；樣品應(yīng)注明畜主姓名、畜別或號(hào)數(shù)、死亡日期、取料日期、送檢要求及送檢單位等。39（二）定性檢驗(yàn)（二）定性檢驗(yàn)1、高鐵血紅蛋白的鑒定高鐵血紅蛋白的鑒定 （1）.取血液少許與小試管內(nèi),用力振搖,血液不變色,可認(rèn)為是高鐵血紅蛋白.通常血液會(huì)與空氣中的氧結(jié)合呈鮮紅色。 （2）.取血液少許與小試管內(nèi),滴入數(shù)滴1%KCN溶液,若有高鐵血紅蛋白,血液立即由棕褐色變?yōu)轷r紅色。402、格利斯（、格利斯（Griess）反應(yīng)（）反應(yīng)（靈敏度1：5000000）原理原理 亞硝酸鹽在酸性溶液

24、中與氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，再與甲-萘胺作用生成洋紅色的偶氮色素。試劑試劑 格利斯試劑：取甲萘胺1g，對(duì)氨基苯磺酸10g，酒石酸89g，置于乳缽中，研細(xì)，混勻，保存于密封的棕色瓶中，備用。操作操作 取檢液（或血清） 12ml 放入小試管中，加入格利斯試劑0.10.2g，振蕩試管，觀察顏色變化，如有亞硝酸鹽存在，立即呈現(xiàn)紅色紅色，顏色的深淺視含量而定，粗略比例見下表。41亞硝酸鹽概略定量表亞硝酸鹽概略定量表溶 液 的 顏 色NO-的含量（mg/L）剛剛呈現(xiàn)玫瑰色淡玫瑰色玫瑰色鮮艷玫瑰色深紅色小于0.010.01-0.10.1-0.20.2-0.5大于0.5本反應(yīng)亦可在白瓷反應(yīng)板上進(jìn)行，其操

25、作方法是取格利斯試劑干粉少許于白瓷反應(yīng)板凹窩中，加檢液35滴，用小玻璃棒攪勻，如有亞硝酸鹽存在，即顯紫紅色，陰性不顯色。423、聯(lián)苯胺冰醋酸反應(yīng)、聯(lián)苯胺冰醋酸反應(yīng)（靈敏度1：400000）原理原理 亞硝酸鹽在酸性溶液中，將聯(lián)苯胺重氮化生成一種醌式化合物，而呈現(xiàn)棕紅色或黃紅色。試劑試劑 聯(lián)苯胺冰醋酸溶液：取聯(lián)苯胺0.1g溶于10ml冰醋酸中，加蒸餾水稀釋至100ml。過(guò)濾，濾液盛于棕色瓶中備用。操作操作 取檢液12滴，置白瓷反應(yīng)板上，加12滴聯(lián)苯胺冰醋酸溶液，如有亞硝酸鹽存在，即出現(xiàn)紅棕色紅棕色。亞硝酸鹽含量大時(shí)，試劑需多加數(shù)滴，才能出現(xiàn)顏色。43儀器：儀器：YN-CLVI型智能化農(nóng)藥殘留快速檢

26、測(cè)儀(農(nóng)藥殘毒、重金屬、亞硝酸鹽、甲醛四合一綜合測(cè)速儀)44第三節(jié)第三節(jié) 揮發(fā)性毒物的檢驗(yàn)揮發(fā)性毒物的檢驗(yàn)45一、揮發(fā)性毒物的分離提取一、揮發(fā)性毒物的分離提取方法方法1、水蒸餾法水蒸餾法揮發(fā)性毒物多具有較高的蒸汽壓，當(dāng)遇酸性溶液同時(shí)加熱時(shí)，可在較原沸點(diǎn)為低溫度下隨水蒸氣蒸餾出來(lái)，根據(jù)這一特性達(dá)到分離目的。2、離心法、離心法血液及尿液檢樣不適宜用水蒸氣蒸餾法分離提取揮發(fā)性毒物，可采取離心分離提取，取血液及尿液10ml與50ml離心管中，加冰乙酸、碳酸鉀充分混合，離心取上清液供檢。463、微量擴(kuò)散法、微量擴(kuò)散法適用于各種揮發(fā)性毒物的分離提取，特別是被檢樣量很小時(shí)，不宜進(jìn)行水蒸氣蒸餾，用此方法分離極

27、為方便。主要儀器為康威（conway）擴(kuò)散池47二、氫氰酸和氰化物的檢驗(yàn)二、氫氰酸和氰化物的檢驗(yàn)氫氰酸中毒是家畜采食富含氰甙類植物或被氰化物污染的飼料、飲水后、體內(nèi)生成氫氰酸、導(dǎo)致以呼吸困難、震顫、驚厥等組織性缺氧為特征的一種急劇性中毒病。一般多見于牛和羊，馬、豬、犬偶爾發(fā)生。48富含氰甙的植物富含氰甙的植物：高粱屬植物亞麻，主要是亞麻葉、亞麻籽及亞麻籽餅；木薯苦杏仁、銀杏、枇杷仁各種豆類牧草誤食或吸入氰化物農(nóng)藥誤食或吸入氰化物農(nóng)藥病因49（一）檢材（一）檢材 供檢驗(yàn)氫氰酸和氰化物最適宜的檢材是中毒動(dòng)物吃剩的飼料，病畜的嘔吐物，其次是肺、腦、肝和血液。本實(shí)驗(yàn)采取水蒸氣蒸餾法提取口粘膜、食道和胃

28、及胃內(nèi)容物。 氫氰酸為無(wú)色易揮發(fā)的液體，有苦杏仁味，沸點(diǎn)26.5，在室溫中即可揮發(fā)，特別是在酸性環(huán)境中很快分解，故應(yīng)及時(shí)檢驗(yàn)。嚴(yán)重腐敗的檢材，很難檢出氫氰酸或氰化物。50（二）定性檢驗(yàn)（二）定性檢驗(yàn)1、快速普魯士藍(lán)法、快速普魯士藍(lán)法（靈敏度0.110g）原理原理 酸化的檢樣受熱后，氰化物變成氫氰酸逸出，在堿性條件下與硫酸亞鐵作用，生成亞鐵氰絡(luò)鹽，用酸酸化后，與高鐵離子反應(yīng)，生成普魯士藍(lán)：試劑試劑（1）10%酒石酸溶液。（2）10%硫酸亞鐵溶液（用時(shí)現(xiàn)配）。（3）10%氫氧化納溶液。（4）10%鹽酸。51操作操作 . 取檢樣5-10g置于三角燒瓶中，加蒸餾水，使成粥狀，加10%酒石酸酸化，立即在

29、瓶口上蓋一張濾紙，并迅速向?yàn)V紙的中央加10%硫酸亞鐵1-2滴，稍干，再加10%氫氧化鈉1-2滴，然后緩緩加熱，當(dāng)微沸有蒸氣產(chǎn)生時(shí)，把濾紙取下（瓶口再蓋一張濾紙，重復(fù)操作），向?yàn)V紙上滴加10%鹽酸或?qū)V紙浸于10%鹽酸溶液中，如有氰化物，濾紙立即顯藍(lán)色藍(lán)色，若含量低，可顯藍(lán)綠色藍(lán)綠色。52說(shuō)明說(shuō)明本方法不需水蒸餾，可用檢樣直接檢驗(yàn)，所以具有操作簡(jiǎn)便，快速等優(yōu)點(diǎn)。若檢樣是血液時(shí)，可加20%三氯乙酸酸化并使蛋白質(zhì)凝固。也可用蒸餾液進(jìn)行此反應(yīng)，其方法是取堿性接收液2ml于試管中，加10%硫酸亞鐵溶液2-3滴，微熱，加10%鹽酸酸化，如有氰化物存在，即產(chǎn)生藍(lán)色或藍(lán)綠色，含量高時(shí)，可產(chǎn)生藍(lán)色沉淀。532、

30、苦味酸試紙法、苦味酸試紙法（靈敏度15ug）原理原理 氰化物在弱酸性條件下受熱產(chǎn)生氫氰酸，遇碳酸鈉生成氰化鈉，再遇苦味酸即生成異紫酸鈉，呈玫瑰色。試劑試劑（1） 10%酒石酸溶液。（2） 10%苦味酸溶液。（3）飽和碳酸鈉溶液。54 操作操作 取檢樣5-:10g置于三角瓶中，加蒸餾水使呈粥狀，加10%酒石酸酸化，立即在瓶口上懸一條事先準(zhǔn)備好的堿性苦味酸試紙條，蓋好膠塞，在小火上緩緩加熱，如有氰化物存在則試紙條變?yōu)槊倒寮t色玫瑰紅色。堿性苦味酸試紙制法: 可取定性濾紙一條在10%苦味酸溶液中浸濕，并用濾紙吸去多余溶液，再滴加飽和碳酸鈉溶液，陰干即可應(yīng)用。說(shuō)明說(shuō)明（1）本反應(yīng)不是氰化物的專一反應(yīng)，酮

31、、醛、硫化氫等還原物質(zhì)也可呈陽(yáng)性反應(yīng)，因此，需做空白對(duì)照試驗(yàn)，或用其他試驗(yàn)確證。（2）此方法可與快速普魯士藍(lán)法同時(shí)進(jìn)行，即將堿性苦味酸試紙條懸于瓶?jī)?nèi)，瓶口蓋上濾紙做快速普魯士藍(lán)反應(yīng)。 55第四節(jié)第四節(jié) 金屬毒物及微量元素的檢驗(yàn)金屬毒物及微量元素的檢驗(yàn)5657一一、汞化合物的檢驗(yàn)、汞化合物的檢驗(yàn)(砷化物的檢驗(yàn)砷化物的檢驗(yàn))汞含金屬汞、無(wú)機(jī)汞和有機(jī)汞金屬汞、無(wú)機(jī)汞和有機(jī)汞三種形式，其中有機(jī)汞的毒性較大。畜禽攝取了被汞及其化合物污染的飼料和飲水能引起中毒，在臨床上以呈現(xiàn)胃腸炎、腎炎和神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙為特征胃腸炎、腎炎和神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙為特征。各種家畜都能發(fā)生中毒，但以牛、羊?qū)顬槊舾?。汞中毒不僅能

32、造成畜禽大批死亡，而且受其污染的動(dòng)物性食品被人食用后也能危害人的健康。5859汞及其無(wú)機(jī)化合物和汞蒸氣:如升汞、甘汞、汞撒利等，有機(jī)汞包括:甲基汞、乙基汞、賽力散、富民隆等都可以引起中毒。中毒途徑大致如下：（1）吸入汞蒸氣 汞可以升華，許多使用金屬汞的廠礦附近，因汞蒸氣使人畜產(chǎn)生慢性中毒；（2）誤食用含汞藥物噴灑過(guò)的飼料（毒谷），或因消毒的廄舍和草地而中毒；面向21世紀(jì)多媒體課件汞中毒60（3）水體受到汞的污染 水中微生物可把無(wú)機(jī)汞轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)汞（甲基汞），使毒性猛增，危害人畜；（4）水生植物和動(dòng)物有富集汞的能力 在一定汞濃度的水中生活的魚不一定中毒致死；但人和動(dòng)物食用魚、魚粉或其他魚制品后，可

33、產(chǎn)生中毒，日本水俁病及狂貓?zhí)＞褪沁@一原因引起的；（5）過(guò)去生產(chǎn)的有機(jī)汞殺蟲劑 至今在環(huán)境中殘留，動(dòng)物食后亦可引起慢性中毒。面向21世紀(jì)多媒體課件汞中毒61無(wú)機(jī)汞急性中毒已很少見。但用升汞消毒，汞撒利、甘汞作臨床應(yīng)用時(shí)，被犢牛、貂添食可引起局部強(qiáng)烈腐蝕作用，產(chǎn)生口炎、舌炎、胃腸炎，開始流涎，進(jìn)而腹痛、拉稀、排綠色糞便、腐臭味。從呼吸道吸入的，鼻分泌物增多，鼻卡他，咳嗽及呼吸困難，常有蛋白尿，尿汞增加。汞慢性中毒，以神經(jīng)癥狀為主。幼畜進(jìn)行性消瘦，厭食，生長(zhǎng)阻滯，動(dòng)作不協(xié)調(diào)，無(wú)目的行走，失明，空嚼，呆滯，衰竭，昏睡狀態(tài)下死亡。有些動(dòng)物皮膚發(fā)癢，啃咬皮膚、擦癢等。繼而皮膚增厚，脫毛和皮屑增多。面向2

34、1世紀(jì)多媒體課件汞中毒62有機(jī)汞吸收率比無(wú)機(jī)汞高得多，因而毒性作用也特別大，半衰期長(zhǎng)，常引起慢性中毒。以中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害為主，如無(wú)食欲、平衡失調(diào)、視力障礙甚至失明、聽力障礙、痙攣、輕癱、昏睡和死亡?？谇弧⒛c道炎癥，牙齒松動(dòng)或脫落，瘙癢脫毛，預(yù)后多不良。有機(jī)汞可順利通過(guò)胎盤屏障而影響胎兒，而且可以通過(guò)乳汁而傳遞給幼畜，引起幼畜肢端震顫，甚至死亡。面向21世紀(jì)多媒體課件汞中毒63病史調(diào)查：主要由于誤食了含有西力生、賽力散等汞制劑處理的種子，或含汞制劑的農(nóng)藥密閉不嚴(yán)，使豬受到汞蒸氣的危害而引起。臨床特征：急性汞中毒以胃腸炎、氣管炎、支氣管炎、卻氣管肺炎、皮膚炎為特征，慢性汞中毒的典型病變?yōu)榭谇谎?、齒

35、齦炎和神經(jīng)系統(tǒng)的中毒變化。含量監(jiān)測(cè)：病死動(dòng)物內(nèi)臟、肝、腎、毛、糞中汞測(cè)定，有助于診斷，當(dāng)腎汞達(dá)到10-15mg/kg即可認(rèn)為是汞中毒。一般動(dòng)物飼料中含汞量不得超過(guò)0.1mg/kg，飼養(yǎng)場(chǎng)地空氣中有機(jī)汞含量應(yīng)不超過(guò)0.01mg/ m3，無(wú)機(jī)汞不超過(guò)0.1mg/ m3。面向21世紀(jì)多媒體課件汞中毒64本病主要作預(yù)防，很難治愈，且治療費(fèi)用較大。治療宜解毒，可用如下處方。（1）10%二巰基丙醇注射液125-250mg，一次肌肉注射。首次用量按1kg體重2.5-5mg用藥，以后每隔6h減半量使用。二巰基丙醇的副作用大，連用3d后，改為每天一次。（2）5%二巰基丙磺酸鈉注射液350-500mg，一次皮下或

36、肌肉注射，按1kg體重7-10mg用藥。（3）注射用硫代硫酸鈉1-3g加注射用水10-20ml，溶解后，一次靜脈注射，每天2-3次。面向21世紀(jì)多媒體課件汞中毒65（一）檢材及處理（一）檢材及處理 急性中毒以剩余飼料、嘔吐物和尿液為最好，其次為血液、胃腸內(nèi)容物、肝、腎、腸等。慢性中毒則以腎最好，其次為肝、毛（羽）和腦。剩余飼料、嘔吐物、胃內(nèi)容物、尿可直接進(jìn)行雷因希(Reinsch)試驗(yàn)，當(dāng)陽(yáng)性時(shí)，進(jìn)一步做汞的確證試驗(yàn)。肝、腎、血液等檢材最好破壞有機(jī)質(zhì)后再進(jìn)行檢驗(yàn)。汞、砷砷檢驗(yàn)66（二）（二）預(yù)預(yù)試驗(yàn)試驗(yàn)雷因希試驗(yàn)雷因希試驗(yàn)原理原理 金屬銅在鹽酸酸性溶液中，能使毒物中的汞還原成汞元素并鍍?cè)阢~的表

37、面上，使銅片（銅絲）變成銀白色。試劑試劑：（1）2.25mol/L硝酸溶液。取15ml硝酸（A.R）加蒸餾水至100ml。（2）銅片510mm或用玻璃棒將20號(hào)銅絲繞成十圈螺旋狀。（3）濃鹽酸（A.R）或6%鹽酸（濃鹽酸比水為1:5）。（4）氯化亞錫鹽酸溶液。取氯化亞錫2g用濃鹽酸100ml溶解。67操作操作（1）取銅片或銅絲2-3片（卷）于試管中，加入2.25mol/L硝酸處理，待銅片干凈明亮后，先用水洗，再用乙醇，后用乙醚洗滌，用濾紙吸干（不能用手拿，以避免污染），備用。（2）取粉碎的固體檢材（飼料、胃腸內(nèi)容物、組織等）5-10g于100ml燒懷中，加6%鹽酸50ml。若為液體檢材，可取檢

38、液50ml，加濃鹽酸10ml。再加氯化亞錫酸溶液1ml，在燒懷上標(biāo)明液面的高度。先在水浴上加熱10min，以除去硫化物的干擾。然后投入銅片（卷）2-3片（卷），直火加熱30-60min，取出銅片用清水洗凈，觀察銅片顏色。銅片表面變成銀白色，可能含有汞化合物，再做汞的確證試驗(yàn)。在加熱過(guò)程中要不斷補(bǔ)加6%的鹽酸，使保持原有的體積和酸度。68 說(shuō)明說(shuō)明（1）本試驗(yàn)中鹽酸濃度宜在2%-8%之間，濃度過(guò)高可引起汞揮發(fā)，過(guò)低反應(yīng)不易進(jìn)行。（2）操作過(guò)程中經(jīng)常觀察銅片變化，一旦變?yōu)殂y白色，應(yīng)立即取出，否則因含量較高，加熱過(guò)久則生成物脫落，造成判斷錯(cuò)誤。（3）已腐敗的樣品做此試驗(yàn)時(shí)，最好將樣品調(diào)節(jié)至酸性后在水

39、浴上先加熱10min，以除去硫化氫，再加入銅片，防止銅片表面生成硫化物變黑。（4）含油脂的樣品能使銅片表面形成油膜，汞難于附著在銅片上，此時(shí)應(yīng)進(jìn)行有機(jī)質(zhì)破壞后再做試驗(yàn)。69（5）如含汞量低時(shí)，可用鹽酸肼代替鹽酸進(jìn)行試驗(yàn)，其方法是取鹽酸肼0.2-0.5g放入試管中，加入銅片（或銅絲）及檢液適量，加熱至微沸5min再觀察結(jié)果。此法與雷因氏法比，反應(yīng)迅速，消耗檢樣量少，一般樣品僅數(shù)滴即可檢出，靈敏度0.5-1.0ppm。（6）雷因希試驗(yàn)也是砷、銻、鉍、銀等金屬的預(yù)試驗(yàn)，陰性反應(yīng)時(shí)（銅片不變色），可肯定不存在此5種金屬，當(dāng)出現(xiàn)顏色反應(yīng)時(shí)，其區(qū)別在于銅片變色不同，砷為黑砷為黑色，銻為灰紫色，鉍為暗灰色，

40、銀為灰白色。色，銻為灰紫色，鉍為暗灰色，銀為灰白色。即使如此，仍需進(jìn)一步做確證試驗(yàn)。70二二、鉛的檢驗(yàn)鉛的檢驗(yàn)71鉛中毒是動(dòng)物直接或間接食入含鉛物，引起流涎、腹痛引起流涎、腹痛、興奮不安和貧血、興奮不安和貧血為主要臨床特征的疾病。鉛為蓄積毒物，小劑量持續(xù)地進(jìn)入體內(nèi)能逐漸積累而呈現(xiàn)毒性作用。各種毒物均可發(fā)生，反芻動(dòng)物最敏感，主要發(fā)生于牛、羊、家禽。鉛中毒主要是工業(yè)污染和意外大量接觸。鉛礦污染、農(nóng)藥污染、舔食含鉛油漆染料、汽車尾氣（汽油中加有含鉛防爆劑，公路兩旁青草含鉛量500mg/kg,動(dòng)物采食可中毒）72二二、鉛的檢驗(yàn)鉛的檢驗(yàn)（一）（一） 、檢樣的采集與處理、檢樣的采集與處理急性中毒的病畜以血

41、液、尿液、嘔吐物、糞、剩余飼料為檢材。中毒時(shí)間較長(zhǎng)者取其肝、腎、腦、骨為宜。檢材需做有機(jī)質(zhì)破壞，如有機(jī)質(zhì)含量不多，可直接灼燒，殘?jiān)?%硝酸在水浴上溶解，供檢。73（二二） 、定性檢驗(yàn)、定性檢驗(yàn)（鉻酸鉀法）（鉻酸鉀法）原理原理 鉛鹽與鉻酸鉀和重鉻酸鉀在中性或弱酸性溶液中生成鉻酸鉛黃色沉淀。試劑試劑 10%鉻酸鉀或重鉻酸鉀溶液操作操作 取檢液少許，加取檢液少許，加10%鉻酸鉀或重鉻酸鉀溶液數(shù)滴，如有鉛離子存在，則出現(xiàn)黃色沉淀，該沉淀能溶于氫氧化鈉及硝酸中。74三三、食鹽的檢驗(yàn)食鹽的檢驗(yàn)動(dòng)物因食入過(guò)量的食鹽，同時(shí)飲水受到限制時(shí)所引起的一種以胃腸炎、腦水腫及神經(jīng)癥狀為主要特征的疾病。（一）（一）中毒

42、癥狀中毒癥狀 分急性食鹽中毒和慢性食鹽中毒兩種分急性食鹽中毒和慢性食鹽中毒兩種 豬豬臨床癥狀為食欲減少，口渴，流涎，頭碰撞物體，步態(tài)不穩(wěn)，轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)。大多數(shù)病例呈間歇性癲癇樣神經(jīng)癥狀。 禽禽病禽表現(xiàn)為燥渴而大量飲水和驚慌不安的尖叫。口鼻內(nèi)有大量的粘液流出，嗉囊軟腫，拉水樣稀糞。運(yùn)動(dòng)失調(diào)，時(shí)而轉(zhuǎn)圈，時(shí)而倒地，步態(tài)不穩(wěn)， 75（二二） 、眼結(jié)膜囊內(nèi)液氯化鈉的檢驗(yàn)、眼結(jié)膜囊內(nèi)液氯化鈉的檢驗(yàn)原理原理 氯化鈉中的氯離子在酸性條件下與硝酸銀中的銀離子結(jié)合，生成不溶性的氯化銀白色沉淀。試劑試劑酸性硝酸銀溶液：硝酸銀1.75g、硝酸25ml、蒸餾水75ml充分混合并溶解。操作操作 取蒸餾水2-3ml，放試管中，

43、再用小吸管吸取眼結(jié)膜囊內(nèi)液少許，放入試管中，然后加入酸性硝酸銀溶液1-2滴，如有氯化物存在就成白色渾濁，量多時(shí)渾濁程度加大。76第五節(jié)第五節(jié) 農(nóng)藥的檢驗(yàn)農(nóng)藥的檢驗(yàn)77一、一、掌握薄層層析的原理和操作方法二、二、學(xué)會(huì)有機(jī)磷農(nóng)藥的化學(xué)檢驗(yàn)方法78一、吸附薄層層析一、吸附薄層層析吸附薄層層析（以下簡(jiǎn)稱薄層層析）是50年代以后在吸附柱層析和紙層析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種色層分析方法，與柱層析和紙層析相比較，薄層層析具有以下優(yōu)點(diǎn)。1、設(shè)備簡(jiǎn)單、容易操作。2、分離速度快。做一次吸附薄層層析只需要幾分鐘至幾十分鐘；而紙層析需用數(shù)小時(shí)至數(shù)十小時(shí)；柱層析需時(shí)更長(zhǎng)，常常是數(shù)十小時(shí)乃至數(shù)日。3、分離效率高?？梢允剐再|(zhì)

44、相似的化合物，得到分離。4、薄層層析展開后可以用各種方法顯色?？梢杂脧?qiáng)腐蝕性顯色劑，甚至可以高溫灼燒。5、應(yīng)用面廣?？梢赃M(jìn)行定性鑒定，也可以進(jìn)行含量測(cè)定。因此薄層層析不僅被用于生物化學(xué)、植物分析、藥物成分鑒定、毒物檢驗(yàn)等方面，而且許多工廠也把薄層層析廣泛地應(yīng)用于反應(yīng)終點(diǎn)控制、工藝條件選擇、產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)和未知試樣剖析等方面。79 原理原理 薄層層析是把固定相固定相（吸附劑）均勻的在支持物（玻璃板）上鋪一薄層，層析就在薄層板上進(jìn)行。把檢樣點(diǎn)在薄層板的一端，檢樣即被吸附劑吸附，當(dāng)點(diǎn)樣端浸入流動(dòng)相點(diǎn)樣端浸入流動(dòng)相（展開劑）時(shí)，展開劑不斷地向前移動(dòng)，當(dāng)遇到檢樣時(shí)，檢樣就溶解在展開劑中并隨之向前移動(dòng)，于是

45、檢樣中各組分由于極性不同，在兩相中不斷發(fā)生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配過(guò)程。檢樣中吸附能力強(qiáng)的組分，不易發(fā)生溶解，在薄層板上移動(dòng)速度慢、距離短；反之，吸附能力弱的組分，容易溶解，在薄層板上移動(dòng)速度快、距離長(zhǎng)，從而使檢樣中各組分將按其吸附能力強(qiáng)弱不同得以分離。檢樣在薄層板上的移動(dòng)距離常用比移值（Rf值）來(lái)表示，Rf值的意義為：Rf = 原點(diǎn)到組分點(diǎn)中心的距離 原點(diǎn)到展開劑前沿的距離注注：如果被分離的是有色物，組分點(diǎn)可直接看到；若分離的是無(wú)色物，可通過(guò)顯色確定組分點(diǎn)。80 （一）薄層板的制備（一）薄層板的制備試劑與儀器試劑與儀器1、吸附劑、吸附劑 毒物檢驗(yàn)工作中最常用的吸附劑是氧化鋁和硅膠，此

46、外也可用聚酰胺、活性炭和硅藻土等。2、粘合劑、粘合劑 為使吸附劑與支持物貼附得牢固，不易脫落。若在吸附劑中加入一定量的粘性物質(zhì)即粘合劑，便可制成較牢固的薄層板。常用的粘合劑有煅石膏、羧甲基纖維素鈉（CMC）、淀粉等。為了得到較好的分離效果，應(yīng)根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)來(lái)選擇粘合劑。81 3、支持物、支持物 即玻璃板，可根據(jù)需要裁成不同規(guī)格。用于預(yù)試驗(yàn)可裁成27cm或210cm;定性試驗(yàn)常用520cm、1020cm或2020cm；若用于分離提純某種組分，則根據(jù)需要可制成大板。裁好的玻璃邊緣用砂輪磨光。玻璃表面應(yīng)光潔平整。鋪層前應(yīng)用洗液浸洗，再用自來(lái)水、蒸餾水洗凈烘干，防止有油污和水漬。824、制膜器（

47、涂布器）、制膜器（涂布器）（1）軟板制膜器 在一根玻璃棒或表面光滑的細(xì)金屬棒的兩端分別套上厚度為0.21mm的塑料套圈，套圈間的距離可根據(jù)支持板的寬度進(jìn)行調(diào)整。（2）硬板制膜器 在一塊寬30cm、長(zhǎng)3540cm的玻璃板（底板）的中間放一塊薄層支持板，在支持板的兩側(cè)各貼一條膠布（橡皮膏），再取二條與支持板同樣厚，比支持板稍長(zhǎng)的玻璃條，貼上同樣大小的膠布，然后將兩膠布用膠水粘合在一起，即制成一簡(jiǎn)單的制膜器。83鋪板方法鋪板方法1、薄層板的種類、薄層板的種類 根據(jù)制板時(shí)所用吸附劑的種類不同，薄層板可以分為氧化鋁板、硅膠板、聚酰胺板等等；根據(jù)制板時(shí)是否加粘合劑，薄層板又可分成兩大類，即干板將吸附劑直接

48、鋪在支持板上，這種板也叫軟板；濕板將吸附劑用水（或其他溶劑）調(diào)成糊狀，或把吸附劑和粘合劑充分混勻后調(diào)成糊狀鋪板，此板干后較硬，可以隨意拿動(dòng)，所以又稱硬板。由于加粘合劑的種類不同，硬板又分為多種，常用的有以下幾種：84 （1）硅膠（氧化鋁）硅膠（氧化鋁）H板板 是不加粘合劑的硬板，直接將吸附劑調(diào)成糊狀后鋪板，這種板制成后板面較軟，易破壞。（2）硅膠）硅膠GF254板板 表示加有粘合劑（煅石膏）和在254nm波長(zhǎng)的紫外線下能發(fā)熒光的熒光物質(zhì)。（3）硅膠（氧化鋁）硅膠（氧化鋁）CMC板板 表示加有1%羧甲基纖維素鈉（CMC）為粘合劑的薄層板。1%CMC的配法是取CMC1g置乳缽中，加少量蒸餾水研磨成

49、均勻的糊狀，再補(bǔ)充水至100ml研勻?；蛘呷MC1g于燒杯中，加蒸餾水100ml，在液面外和燒杯上劃一標(biāo)記，然后直火加熱至完全溶解，并補(bǔ)足消耗的水分。1%的CMC配好后，按比例加入吸附劑調(diào)勻后即可鋪板。（4）硅膠（氧化鋁）淀粉板）硅膠（氧化鋁）淀粉板 一般淀粉的含量為5%，把淀粉和吸附劑混勻，加2倍量的水調(diào)和并在85水浴中或直火加熱數(shù)分鐘，當(dāng)?shù)矸圩兊糜姓承院笤佥o層。852、干鋪板法、干鋪板法 取150-200目的層析用氧化鋁（或硅膠）撒于玻璃支持板上，調(diào)節(jié)好干板制膜器兩端塑料套圈的距離，兩手捏住制膜器的兩端，均勻的緩緩向前移動(dòng)，即可鋪成平滑、均勻的薄層。這樣鋪好的薄層板即為干板（軟板）。干法

50、制板簡(jiǎn)單快速，隨用隨鋪，展開速度快。但干板板面容易破壞，移動(dòng)時(shí)要特別小心，而且不易保存。干板展開后必須立即顯色，否則展開劑揮發(fā)后易將板面吹散。由于干板吸附劑顆粒較粗（太細(xì)推不成薄層），展開后斑點(diǎn)不太集中，所以分離效果稍差。863、濕鋪板法、濕鋪板法（1）制膜器鋪板 取一定量的吸附劑，按比例（表15）加入水（或其他溶劑），仔細(xì)調(diào)成均勻糊狀（或在乳缽中調(diào)研均勻），不要有氣泡，然后裝入濕板制膜器中，立即在事先擺好的玻璃支持板上勻速向前移動(dòng)，可連續(xù)鋪成多塊均勻的薄層板。（2）手動(dòng)制板 將調(diào)好的一定量糊狀吸附劑倒在支持板上，并用玻棒大致攤開，然后手持支持板輕輕振動(dòng)，使糊狀吸附劑均勻鋪開。以上各種制好的薄

51、層板，應(yīng)放在水平臺(tái)上使其慢慢陰干，然后置于干烤箱中，在一不定溫度下（表15）烘干并活化，保存在干燥器中備用。87不同吸附劑薄層的制備條件不同吸附劑薄層的制備條件吸附劑溶劑吸附劑：溶劑活化條件硅膠G氧化鋁G聚酰胺硅膠（5%淀粉）硅膠（CMC）蒸餾水蒸餾水甲醇蒸餾水1%CMC水溶液1：231：131：4101：21：2105-11030min2004h8015min10530min10530min88(二二) 點(diǎn)樣點(diǎn)樣 點(diǎn)樣是一項(xiàng)細(xì)致的工作，要求樣點(diǎn)集中，直徑不能大于3mm。樣點(diǎn)的位置距薄層板底邊23cm，兩個(gè)樣點(diǎn)間距離1.5cm，點(diǎn)樣常用的方法是直接樣法。直接點(diǎn)樣法 如果作定性檢驗(yàn)，可直接用毛細(xì)

52、管點(diǎn)樣。若進(jìn)行含量測(cè)定，要用微量注射器或血色素吸管（預(yù)先將管口磨平）準(zhǔn)確吸取檢樣，仔細(xì)地滴加在確定好的點(diǎn)樣處。如果點(diǎn)樣量較大或?yàn)榱藵饪s的目的需要反復(fù)點(diǎn)樣時(shí)，每次點(diǎn)樣的量不可過(guò)大，樣點(diǎn)直徑必須控制在3mm以內(nèi)，重復(fù)點(diǎn)樣時(shí)，必須待前次點(diǎn)樣的樣點(diǎn)干后再點(diǎn)，以免樣點(diǎn)直徑擴(kuò)大。點(diǎn)樣時(shí)要防止把板面點(diǎn)穿，影響分離效果。89點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)注意以下方面：（1）最好用與展開劑同樣的溶劑溶解檢樣，否則點(diǎn)樣后必須待檢樣溶劑揮干后再展開。（2）點(diǎn)樣量應(yīng)根據(jù)薄層厚度、檢樣和吸附劑的性質(zhì)、顯色劑的靈敏度以及含量測(cè)定的方法而定。若點(diǎn)樣量太小，微量組分無(wú)法檢出；點(diǎn)樣量過(guò)大，超過(guò)了吸附劑的線性分離范圍，會(huì)使斑點(diǎn)重疊、分離不清。（3）點(diǎn)

53、樣時(shí)毛細(xì)管（或血紅素吸管）必須垂直于層析板，否則不易點(diǎn)樣或?qū)迕纥c(diǎn)破。（4）點(diǎn)樣速度要快，以免影響薄層板的活度，使分離效果受到影響。90（三）（三）展開 展開就是把點(diǎn)好樣板的點(diǎn)樣端浸于展開劑中（切勿使樣點(diǎn)浸入展開劑中），使展開劑沿薄層板移動(dòng)，同時(shí)帶動(dòng)檢樣中的組分移動(dòng)，而達(dá)到分離目的。1、展開劑的選擇、展開劑的選擇 常用的展開劑是某種有機(jī)溶劑或混合有機(jī)溶劑。展開劑應(yīng)具備以下條件。（1）應(yīng)是純的試劑（GR或AR），若含有雜質(zhì)會(huì)影響展開能力。（2）與檢樣和吸附劑不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。（3）能溶解檢樣中的各種成分。（4）粘度小、易流動(dòng)，否則展開太慢。（5）容易與檢樣中所需組分分開。912、展開方式及展開法、

54、展開方式及展開法 展開需在密閉的容器“展開槽”中進(jìn)行。展開槽可分為立式和臥式兩種。常用的展開方式有上行法、下行法展開法。（1）上行展開法）上行展開法近水平上行近水平上行展開法。近垂直上行近垂直上行展開法。（2）下行展開法）下行展開法3、薄層展開時(shí)的注意事項(xiàng)、薄層展開時(shí)的注意事項(xiàng)（1）展開容器必須是密閉的，最好是磨砂玻璃蓋。（2）展開劑的量。將展開槽平放在臺(tái)面上時(shí)，液層厚度以57mm為宜；斜放與臺(tái)成1520度角時(shí)，以液面不浸及樣點(diǎn)為度。（3）由于展開劑易揮發(fā)，混合展開劑的比例易發(fā)生改變，所以展開劑不宜反復(fù)使用和保存，特別是含有低沸點(diǎn)組分的展開劑，只能展開一次。92（四）顯色（四）顯色 有些物質(zhì)展

55、開后即能顯示不同顏色的斑點(diǎn)如染料；而大多數(shù)物質(zhì)展開后看不到斑點(diǎn)位置，必須經(jīng)顯色才能確定斑點(diǎn)的位置。所以顯色是鑒定物質(zhì)的重要環(huán)節(jié)。在毒物檢驗(yàn)工作中常用的顯色方法有噴霧顯色、蒸氣顯色和紫外光下顯色。1、噴霧顯色、噴霧顯色 如果薄層層析用的是干板，從展開槽中取出后必須立即噴顯色劑，以免溶劑揮干后吹散吸附劑；如果是濕板，可揮干展開溶劑后再噴顯色劑。噴霧顯色后多數(shù)可使斑點(diǎn)顯現(xiàn)出來(lái)。但也有些化合物仍看不清斑點(diǎn)的位置，還需要加熱或紫外光照射才能顯示斑點(diǎn)。932、蒸氣顯色、蒸氣顯色 把易揮發(fā)的某種試劑置于密閉的容器內(nèi)（如標(biāo)本缸、干燥器等），使其蒸汽充滿整個(gè)容器，然后將已揮干展開劑的薄層板放入，使蒸汽與檢樣斑點(diǎn)

56、作用面顯色。常用的試劑有固體碘、液體溴、濃氨水等。顯色后的薄層板應(yīng)立即觀察，否則置于空氣中過(guò)久，斑點(diǎn)上的顏色會(huì)因揮發(fā)而褪去。3、紫外光下顯色、紫外光下顯色 有些化合物本身能發(fā)熒光，揮去展開劑后的薄層板可置于紫外光燈下觀察熒光斑點(diǎn)，并用針尖或鉛筆等在斑點(diǎn)位置上劃以標(biāo)記，以免停止紫外光照射后熒光消失，無(wú)法確定斑點(diǎn)位置。有些化合物本身不發(fā)熒光，可用硅膠GF254板分離，在紫外光燈照射下整個(gè)板面顯黃綠色熒光，斑點(diǎn)部分呈暗色。94（一）樣品的采取及處理（一）樣品的采取及處理1、樣品的采取、樣品的采取 有機(jī)磷農(nóng)藥中毒時(shí)，最適宜的檢樣：若經(jīng)消化道引起的中毒，生前可取病畜的嘔吐物，洗胃時(shí)第一次導(dǎo)出液，血液；有

57、些有機(jī)磷農(nóng)藥（敵百蟲、對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷等）中毒時(shí)，還可取尿液；死后可取胃及胃內(nèi)容物、血液、肝臟；此外還可取病畜吃剩的飼料或飲水。若經(jīng)呼吸道引起的中毒，可取呼吸道分泌物、血液、肺臟及肝臟。若因污染了皮膚而引起中毒，可取被污染部位的皮膚及皮下組織、血液和肝臟。二、有機(jī)磷農(nóng)藥的檢驗(yàn)二、有機(jī)磷農(nóng)藥的檢驗(yàn)952、提取與分離、提取與分離 有機(jī)磷農(nóng)藥絕大多數(shù)是脂溶性毒物，易溶解在有機(jī)溶劑中。但不同的有機(jī)磷農(nóng)藥的極性強(qiáng)弱不同，敵百蟲、敵敵畏、樂(lè)果等屬于極性強(qiáng)的有機(jī)磷；3911、1240等屬于弱極性有機(jī)磷；而1605、1059等屬于中等極性有機(jī)磷。提取時(shí)原則上極性強(qiáng)的有機(jī)磷，用強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑提取。極性弱的有

58、機(jī)磷用極性弱的有機(jī)溶劑提取。但由于檢驗(yàn)前很難確定是哪種農(nóng)藥引起的中毒，所以通常用苯、苯、氯仿、二氯甲烷氯仿、二氯甲烷，可將絕大多數(shù)有機(jī)磷農(nóng)藥提取出來(lái)。比較常用的是氯仿和苯。有機(jī)磷農(nóng)藥在堿性溶液中易水解，有些有機(jī)磷農(nóng)藥具有揮發(fā)性，因此一般應(yīng)在中性或弱酸性條件下提取。在濃縮時(shí)，溫度不宜過(guò)高，應(yīng)控制在60以下。根據(jù)檢樣的種類不同，農(nóng)藥的性質(zhì)不同，常采用下述方法進(jìn)行提取。96（1）固體檢樣的提取）固體檢樣的提取 取被檢樣50g于具塞三角瓶中。加氯仿或苯（40-30-20ml）浸泡，并不斷振搖，1h后過(guò)濾，收濾液于蒸發(fā)皿中，殘?jiān)寐确禄虮较磧纱?，合并洗液于蒸發(fā)皿中，在60以下水浴上蒸發(fā)近干，供檢。（2）

59、半固體檢樣的提取）半固體檢樣的提取 取被檢樣適量于蒸發(fā)皿中，加適量無(wú)水硫酸鈉研磨脫水，移入具塞 三角瓶中，按固體檢樣的提取方法進(jìn)行提取。（3）液體檢樣的提?。┮后w檢樣的提取 若檢樣是水或尿液可取適量置于分液漏斗中，加氯仿或苯振搖提取，分出氯仿或苯于蒸發(fā)皿中，再重復(fù)提取12次，合并提取液，在水浴上蒸發(fā)近干，待檢。973、凈化、凈化 被檢樣經(jīng)有機(jī)溶劑提取并濃縮后，如果含雜質(zhì)較少，可直接檢驗(yàn)。若含雜質(zhì)較多，則需進(jìn)一步凈化，凈化一般用活性炭脫色就可以了。98（二）膽堿酯酶活性測(cè)定（二）膽堿酯酶活性測(cè)定原理原理 乙酰膽堿遇血液中膽堿酯酶分解為膽堿和乙酸，乙酸產(chǎn)生的多少，可引起PH值的改變，用溴麝香草酚藍(lán)

60、（BTB）作指示劑，在一定溫度、一定時(shí)間內(nèi)，觀察顏色變化，推測(cè)酶的活力。試劑試劑 乙酰膽堿試紙制備?？扇′鬻晗悴莘铀{(lán)0.14g，溴代乙酰膽堿0.23g，加無(wú)水乙醇20ml溶解，用0.4mol/L氫氧化鈉溶液 調(diào)PH值為7.47.6（溶液應(yīng)呈灰褐色），將質(zhì)量好的定性濾紙浸入，2min后取出陰干，剪成1cm2的小片，貯于磨口棕色瓶中，于干燥處避光保存。操作操作 取乙酰膽堿試紙兩片置于載玻片兩端，分別加被檢病畜血和健康同種動(dòng)物血（或健康馬血）1滴，標(biāo)記后，立即加蓋另一載玻片，用橡皮筋扎緊，置37濕箱中或腋下保溫20min后取出，觀察紙片顏色變化。根據(jù)顏色變化估計(jì)酶的活性。99膽堿酯酶活性與膽堿酯酶試