色譜純度HPLC分析方法驗(yàn)證報(bào)告樣式

1、×××色譜純度分析方法驗(yàn)證報(bào)告目錄設(shè)備驗(yàn)證方案歷史記錄×××色譜純度分析方法驗(yàn)證報(bào)告批準(zhǔn) -31. 驗(yàn)證目的 -42. 色譜純度分析方法 -42.1 儀器 -42.2 試劑 -42.3 標(biāo)準(zhǔn)品 -42.4 色譜條件 -42.5 溶液配制 -52.6 進(jìn)樣操作 -53. 方法驗(yàn)證 -63.1 專屬性 -63.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) -93.3 精密度 -93.4 線性及范圍 -113.5 準(zhǔn)確度 -173.6 檢測(cè)限及定量限 -204驗(yàn)證評(píng)價(jià)及結(jié)論 -215. 附件 -21×××色譜純度分析方法驗(yàn)證報(bào)告批準(zhǔn)對(duì)本

2、驗(yàn)證方案批準(zhǔn)表示同意其驗(yàn)證項(xiàng)目和可接受標(biāo)準(zhǔn)、驗(yàn)證方法和本方案內(nèi)的各種表格格式、內(nèi)容。在執(zhí)行本方案的過(guò)程中可能會(huì)遇到阻礙本方案精確地完成的缺陷。較小的偏差可以在偏差報(bào)告內(nèi)陳述。較大的偏差，如，方法的修改，測(cè)試/評(píng)估參數(shù)，接受標(biāo)準(zhǔn)等只有在附帶有經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)的補(bǔ)充材料的情況下才予以承認(rèn)。所有經(jīng)批準(zhǔn)的偏差報(bào)告和補(bǔ)充材料都應(yīng)附在批準(zhǔn)前的驗(yàn)證報(bào)告內(nèi)。方案起草簽名日期質(zhì)檢中心方案審核簽名日期質(zhì)檢中心qc總工程師質(zhì)量部qa方案批準(zhǔn)簽名日期質(zhì)量副總1摘要我們按照usp30專論的方法測(cè)定×××的色譜純度。方法的原理是采用hplc方法，在233nm檢測(cè)波長(zhǎng)下測(cè)定，以××

3、×為參考標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行色譜純度的定量分析。該方法用于×××原料藥在放行及穩(wěn)定性試驗(yàn)中色譜純度的測(cè)定。經(jīng)評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)室色譜純度的條件，包括色譜柱、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)、進(jìn)樣量、濃度等條件完全與usp專論規(guī)定的一致。雜質(zhì)a, c, d，以及雜質(zhì)xa、雜質(zhì)xb和雜質(zhì)xc是×××實(shí)際存在和潛在的雜質(zhì)。為了評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的儀器、人員、環(huán)境等能否滿足色譜純度測(cè)定的要求，按照ich指南q2a和q2b的要求，對(duì)分析方法進(jìn)行了驗(yàn)證，驗(yàn)證的項(xiàng)目包括專屬性、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、精密度、線性、范圍、準(zhǔn)確度、定量限和檢測(cè)限, 驗(yàn)證結(jié)果表明，每個(gè)驗(yàn)證項(xiàng)目均符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。

4、usp色譜純度的分析方法適合于×××原料藥中雜質(zhì)的測(cè)定和控制。驗(yàn)證結(jié)果摘要如下：a. 專屬性：溶劑對(duì)雜質(zhì)的測(cè)定沒(méi)有干擾，×××與相鄰雜質(zhì)xa和雜質(zhì)d的分離度依次為21.1和13.2, 較相鄰的雜質(zhì)d和雜質(zhì)a的分離度為1.8，雜質(zhì)xb和xc的分離度為1.6，均大于1.5，表明×××與每個(gè)雜質(zhì)以及每個(gè)雜質(zhì)之間分離度均符合要求。b. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在系統(tǒng)適用性溶液的色譜圖中，3-苯甲?；郊姿岷?#215;××的分離度r為13.3，大于4；以×××峰計(jì)算色譜柱

5、的理論塔板數(shù)n為20328，大于2250；×××峰的拖尾因子t為 0.83，小于2.0；標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，其主峰面積的rsd為0.51%，小于5%。c. 精密度：標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，在重復(fù)性項(xiàng)下，雜質(zhì)c, 雜質(zhì)xa, ×××, 雜質(zhì)d, 雜質(zhì)a, 雜質(zhì)xb和雜質(zhì)xc峰面積的rsd依次為0.24%, 0.41%, 0.51%, 0.54%, 0.21%, 1.6%和0.86%, 均小于5%；在中間精密度項(xiàng)下測(cè)得的rsd依次為0.20%, 0.23%, 0.60%, 0.60%, 0.24%, 1.1%和0.49%, 均小于5%；f

6、-test結(jié)果表明，每個(gè)組分的f值均小于f0值5.05, 表明方法的中間精密度和重復(fù)性之間的精密度無(wú)顯著性差異。d. 線性和范圍：雜質(zhì)a的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=153.713x-0.214，相關(guān)系數(shù)為0.99996；雜質(zhì)c的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=62.854x-0.236，相關(guān)系數(shù)為0.9999; 雜質(zhì)d的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=27.520x-0.423，相關(guān)系數(shù)為0.9999; 雜質(zhì)xa的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=86.007x-0.725，相關(guān)系數(shù)為0.9999; 雜

7、質(zhì)xb的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=13.160x-0.325，相關(guān)系數(shù)為0.9997; 雜質(zhì)xc的含量在0.02%0.25%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=65.240x-1.546，相關(guān)系數(shù)為0.9998; 代表其它雜質(zhì)的×××含量在0.02%0.25%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=33.579x-0.558，相關(guān)系數(shù)為0.9998; 每個(gè)雜質(zhì)的相關(guān)系數(shù)均大于0.999, 表明它們的峰面積與濃度均呈線性關(guān)系。e. 準(zhǔn)確度：雜質(zhì)a、雜質(zhì)c、雜質(zhì)d、雜質(zhì)xa、雜質(zhì)xb、雜質(zhì)xc和×××的回收率依次為99.4%, 9

8、9.2%, 98.5%, 99.0%, 98.7%, 98.5%和100.5%，回收率的rsd依次為1.2%, 1.8%, 1.4%, 1.8%, 2.9%, 2.5%和2.4%；每個(gè)雜質(zhì)的回收率均介于95.0%105.0%之間。f. 定量限和檢測(cè)限：雜質(zhì)a、雜質(zhì)c、雜質(zhì)d、雜質(zhì)xa、雜質(zhì)xb、雜質(zhì)xc和×××的檢測(cè)限依次為0.0002%, 0.0002%, 0.002%, 0.0004%, 0.005%, 0.001%, 它們的定量限依次為0.001%, 0.001%, ×%, 0.002%, 0.02%, 0.005%,結(jié)果表明，方法的靈敏度適合雜質(zhì)

9、的檢測(cè)和控制。2. 分析方法×××usp30專論2.1 儀器：高效液相色譜儀 agilent 1100 hplc2.2試劑：a. 乙腈 (色譜純)b. 磷酸二氫鉀 (分析純)c. 純化水2.3 標(biāo)準(zhǔn)品：a. ×××標(biāo)準(zhǔn)品b. 3-苯甲?；郊姿?.4色譜條件：a) 色譜柱：ymc pack ods-a，4.6mm×150mm，3µm；b) ph3.5緩沖液：稱取68.0g磷酸二氫鉀，用水溶解并稀釋至1000ml，用磷酸調(diào)ph值為3.50±0.05，過(guò)濾。c) 流動(dòng)相：水-乙腈- ph3.5緩沖液=550:

10、430:20配制方法：用適宜的量筒分別量取過(guò)濾的水550ml，乙腈430ml和ph3.5緩沖液20ml，于一合適的試劑瓶中，充分混勻。在超聲波上脫氣10分鐘。也可按照待測(cè)樣品的數(shù)量，按照比例配制適量的流動(dòng)相。d) 檢測(cè)波長(zhǎng)：233nm；e) 流速：1.0ml/min；f) 進(jìn)樣量：20µl。2.5 溶液制備a) 系統(tǒng)適用性溶液：量取0.5ml標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液和3-苯甲?；郊姿豳A備溶液1.0ml至10ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混合均勻。×××和3-苯甲?；郊姿岬臐舛纫来渭s為0.01mg/ml和0.005mg/ml。3-苯甲?；郊姿豳A備溶液：稱取3

11、-苯甲?；郊姿針?biāo)準(zhǔn)品5.0mg，置100ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，混合均勻。b) 標(biāo)準(zhǔn)溶液：標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：稱取×××標(biāo)準(zhǔn)品約10.0mg，置50ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，混合均勻。精密量取1.0ml至100ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混合均勻。濃度約為0.002mg/ml。c) 供試溶液：稱取×××樣品約100mg，精密稱定，置100ml棕色容量瓶中，加適量流動(dòng)相，用超聲波使溶解，放冷至室溫，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混合均勻。該溶液制備應(yīng)避光操作。2.6 進(jìn)樣操作2.6.1儀器準(zhǔn)備按照高效液相色譜儀操作

12、規(guī)程準(zhǔn)備儀器，設(shè)定流速為1.0ml/min，設(shè)定檢測(cè)器波長(zhǎng)為233nm。待儀器平衡后，開(kāi)始進(jìn)樣操作。2.6.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：系統(tǒng)平衡后，取系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，3-苯甲?；郊姿岷?#215;××的相對(duì)保留時(shí)間依次為0.8和1.0；3-苯甲?；郊姿岷?#215;××的分離度r至少為4。以×××峰計(jì)算色譜柱的理論塔板數(shù)n，應(yīng)不少于2250；×××峰的拖尾因子t，不大于2.0。標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，其主峰面積的rsd5%。2.6.3空白測(cè)試：取流動(dòng)相進(jìn)樣，記錄色譜圖。在樣品

13、的測(cè)試中忽略溶劑峰。2.6.4樣品測(cè)定取供試品溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的7倍，以峰面積計(jì)算雜質(zhì)的含量。2.6.5計(jì)算公式：按公式 (1)計(jì)算×××中單個(gè)雜質(zhì)含量；按公式 (2)計(jì)算×××中總雜質(zhì)的含量。單個(gè)雜質(zhì)含量 (%) 公式 (1)總雜質(zhì)含量 (%) 公式 (2)式中：ws×××標(biāo)準(zhǔn)品的重量，mg；wi×××的樣品的重量，mg；ai樣品色譜圖中單個(gè)雜質(zhì)的峰面積；as標(biāo)準(zhǔn)溶液中主峰的峰面積。p×××usp標(biāo)準(zhǔn)品的含量樣品色譜圖中總雜質(zhì)

14、的峰面積，等于a總面積a×××。2.6.6 結(jié)果判定：供試品中單個(gè)雜質(zhì)不大于0.2%，總雜質(zhì)不大于1.0%。3方法驗(yàn)證3.1專屬性3.1.1空白測(cè)試:取溶劑流動(dòng)相進(jìn)樣，記錄色譜圖，做為空白，確定溶劑對(duì)雜質(zhì)測(cè)定有無(wú)干擾，在樣品測(cè)定圖譜中溶劑峰應(yīng)忽略。色譜圖見(jiàn)kp0-blank000000.d。3.1.2單個(gè)雜質(zhì)的定性3.1.2.1雜質(zhì)定性溶液：依次取“3.4.1.1雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)貯備液”項(xiàng)下雜質(zhì)a、雜質(zhì)c、雜質(zhì)d和雜質(zhì)xa、雜質(zhì)xb、雜質(zhì)xc的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液2.0ml，各至一個(gè)25ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混合均勻。3.1.2.2取每個(gè)雜質(zhì)溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。

15、記錄每個(gè)雜質(zhì)的保留時(shí)間，用保留時(shí)間對(duì)每個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行定性，結(jié)果填寫(xiě)在表1-1。按照保留時(shí)間順序，雜質(zhì)c, xa, d, a, xb, xc的保留時(shí)間依次為2.218min, 5.168min, 11.402min,12.019min, 17.191min, 17.960min。它們的色譜圖見(jiàn)kp0-000001.d，kp0-000003.d，kp0-000005.d，kp0-000006.d，kp0-000008.d，kp0-000009.d。表1-1 各雜質(zhì)的定性雜質(zhì)名稱濃度（g/ml）保留時(shí)間（min）雜質(zhì)c8.02.218雜質(zhì)d8.211.402雜質(zhì)a8.012.0193.1.3 雜質(zhì)和&#

16、215;××的分離度測(cè)試以重復(fù)性項(xiàng)下的色譜圖進(jìn)行評(píng)價(jià)，記錄各組分的出峰順序和保留時(shí)間，并計(jì)算相鄰組分之間的分離度r，數(shù)據(jù)見(jiàn)表1-2。色譜圖見(jiàn)kp0-000014.d。3.1.4×××加入已知雜質(zhì)的分離度測(cè)試3.1.4.1溶液制備稱取×××樣品10mg，加入線性項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(10g/ml) 2.0ml, 再加入流動(dòng)相溶解并稀釋至10ml，混合均勻。3.1.4.2測(cè)定：取該溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，記錄各組分的出峰順序和保留時(shí)間，計(jì)算它們的相對(duì)保留時(shí)間(rrt)（×××為1.0）和相鄰組分

17、之間的分離度r，數(shù)據(jù)見(jiàn)表1-3。色譜圖見(jiàn)kp0-000026.d。表1-2 雜質(zhì)和×××分離度測(cè)試出峰順序名稱保留時(shí)間（min）分離度r1雜質(zhì)c2.218-2雜質(zhì)xa5.21621.03×××7.78612.44雜質(zhì)d11.47613.35雜質(zhì)a12.0691.8表1-3 ×××加入已知雜質(zhì)的分離度測(cè)試出峰順序名稱保留時(shí)間（min）rrt分離度r1雜質(zhì)c2.2120.28-2雜質(zhì)xa5.2100.6721.13×××7.7951.012.64雜質(zhì)d11.4751.4713.2

18、5雜質(zhì)a12.0661.551.83.1.6專屬性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)1) 溶劑對(duì)雜質(zhì)的測(cè)定無(wú)明顯干擾；2）雜質(zhì)a和雜質(zhì)d的分離度不小于1.0；其它每個(gè)相鄰組分之間的分離度r均應(yīng)大于1.5；3.1.7 驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià) 溶劑對(duì)雜質(zhì)的測(cè)定沒(méi)有干擾，×××與相鄰雜質(zhì)xa和雜質(zhì)d的分離度依次為21.1和13.2, 較相鄰的雜質(zhì)d和雜質(zhì)a的分離度為1.8，雜質(zhì)xb和xc的分離度為1.6，均大于1.5，表明×××與每個(gè)雜質(zhì)以及每個(gè)雜質(zhì)之間分離度均符合要求。方法的專屬性符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。3.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)3.2.1按照×××色譜純度

19、分析方法進(jìn)行：3.2.2分離度：系統(tǒng)平衡后，取系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，3-苯甲?；郊姿岷?#215;××的相對(duì)保留時(shí)間依次約為0.8和1.0；計(jì)算3-苯甲?；郊姿岷?#215;××的分離度。以×××峰計(jì)算色譜柱的理論塔板數(shù)n和拖尾因子t。色譜圖見(jiàn)kp0-000039.d。3.2.4重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計(jì)算主峰面積的rsd。測(cè)定數(shù)據(jù)和結(jié)果見(jiàn)表2-1。色譜圖見(jiàn)kp0-000040.dkp0-000045.d。3.2.3驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)1） 以×××峰計(jì)算色譜柱的理論塔板數(shù)

20、n，應(yīng)不少于2250；2） ×××峰的拖尾因子t，不大于2.0；3） 3-苯甲?；郊姿岷?#215;××的分離度r至少為4；4） 標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，其主峰面積的rsd5%。3.2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果及評(píng)價(jià)： 在系統(tǒng)適用性溶液的色譜圖中，3-苯甲?；郊姿岷?#215;××的分離度r為13.3，大于4；以×××峰計(jì)算色譜柱的理論塔板數(shù)n為20328，大于2250；×××峰的拖尾因子t為 0.83，小于2.0；標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，其主峰面積的rsd為0.51%

21、，小于5%。方法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。表2-1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)數(shù)據(jù)no.123456平均值峰面積67.9368.3867.7668.7568.1668.1268.18標(biāo)準(zhǔn)偏差s0.35rsd0.51%分離度r13.3理論塔板數(shù)n20328拖尾因子t0.833.3 精密度3.3.1 重復(fù)性3.3.1.1以方法規(guī)定的色譜條件，取線性項(xiàng)下no.5線性標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計(jì)算各組分峰面積的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差s和rsd。以rsd評(píng)價(jià)方法的重復(fù)性。數(shù)據(jù)及結(jié)果見(jiàn)表3-1。色譜圖見(jiàn)kp0-000014.dkp0-000019.d。3.3.1.2驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)重復(fù)6次進(jìn)樣，各組

22、分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 rsd5%。3.3.1.3重復(fù)性驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，雜質(zhì)c, 雜質(zhì)xa, ×××, 雜質(zhì)d, 雜質(zhì)a峰面積的rsd依次為0.24%, 0.41%, 0.51%, 0.54%, 0.21%, 1.6%和0.86%, 均小于5%, 方法的重復(fù)性符合標(biāo)準(zhǔn)。3.3.2 中間精密度另日，由另外一個(gè)化驗(yàn)員，按照線性項(xiàng)下no.5線性標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備方法配制相同濃度的溶液，在相同的儀器上連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。計(jì)算各組分峰面積的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差s和rsd，以rsd評(píng)價(jià)方法的中間精密度，數(shù)據(jù)及結(jié)果見(jiàn)表3-2。色譜圖見(jiàn)kp0-000014.dk

23、p0-000019.d。3.3.2.2驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)重復(fù)6次進(jìn)樣，各組分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 rsd5%。3.3.2.3中間精密度驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，雜質(zhì)c, 雜質(zhì)xa, ×××, 雜質(zhì)d, 雜質(zhì)a峰面積的rsd依次為0.20%, 0.23%, 0.60%, 0.60%, 0.24%, 1.1%和0.49%, 均小于5%；方法的中間精密度符合標(biāo)準(zhǔn)。3.3.3精密度的顯著性評(píng)價(jià)使用f-檢驗(yàn)的方法，評(píng)價(jià)在精密度方面，方法的重復(fù)性和中間精密度有無(wú)顯著性差異。3.3.3.1步驟(1) 取各組分重復(fù)性和中間精密度項(xiàng)下的峰面積的標(biāo)準(zhǔn)偏差s;(2)

24、選擇顯著性水平=0.05；(3) 從表3-1和表3-2獲得峰面積的標(biāo)準(zhǔn)偏差s，確定s1和s2（s1>s2）；(4) 計(jì)算 f 值， f = s12/s22；(5) 計(jì)算自由度 (n2-1,n1-1)=(5, 5)，n2n16；(6) 查閱在=0.05，自由度為(5,5)，單側(cè)檢驗(yàn)的f05.05；(7) 數(shù)據(jù)和結(jié)果見(jiàn)表3-3。3.3.3.2驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)每個(gè)組分的f應(yīng)小于f0，即表明方法的重復(fù)性和中間精密度之間無(wú)顯著性差異。3.3.3.3驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià)每個(gè)組分的f應(yīng)小于f0，表明方法中間精密度和重復(fù)性之間的精密度無(wú)顯著性差異。3.3.4精密度驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，在重復(fù)性項(xiàng)下，

25、雜質(zhì)c, 雜質(zhì)xa, ×××, 雜質(zhì)d, 雜質(zhì)a, 雜質(zhì)xb和雜質(zhì)xc峰面積的rsd依次為0.24%, 0.41%, 0.51%, 0.54%, 0.21%, 1.6%和0.86%, 均小于5%；在中間精密度項(xiàng)下測(cè)得的rsd依次為0.20%, 0.23%, 0.60%, 0.60%, 0.24%, 1.1%和0.49%, 均小于5%；f-test結(jié)果表明，每個(gè)組分的f值均小于f0值5.05, 表明方法的中間精密度和重復(fù)性之間的精密度無(wú)顯著性差異。方法的精密度符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。表3-1 重復(fù)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)組分峰面積平均值srsd123456雜質(zhì)c125.75126.0312

26、6.08126.63126.27125.99126.130.2970.24%雜質(zhì)xa 170.09170.75170.79170.99171.92169.98170.750.7010.41%×××72.3071.5871.8372.1872.6372.2272.120.3690.51%雜質(zhì)d55.7255.8155.8056.0155.9955.1855.750.3020.54%雜質(zhì)a308.44307.59308.16308.36307.76306.72307.840.6410.21%表3-2 中間精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)組分峰面積平均值s rsd123456雜質(zhì)c126

27、.28126.15126.07126.60126.30126.70126.350.2490.20%雜質(zhì)xa 170.92171.07171.30170.39171.52171.17171.060.3870.23%×××72.7072.1872.5871.6772.1571.6772.160.4360.60%雜質(zhì)d56.5756.3355.6156.3556.1256.4356.240.3400.60%雜質(zhì)a309.00308.71308.40309.97308.92310.23309.200.7280.24%表3-3 重復(fù)性和中間精密度有無(wú)顯著性差異的評(píng)價(jià)組分名稱

28、重復(fù)性的s中間精密度的sf=s12/s22（s1>s2）接受標(biāo)準(zhǔn)f0結(jié)論雜質(zhì)c0.2970.2491.425.05合格雜質(zhì)xa 0.7010.3873.285.05合格×××0.3690.4361.405.05合格雜質(zhì)d0.3020.3401.275.05合格雜質(zhì)a0.6410.7281.295.05合格3.4 線性及范圍3.4.1 溶液制備3.4.1.1標(biāo)準(zhǔn)貯備液分別精密稱取以下標(biāo)準(zhǔn)品：雜質(zhì)a、雜質(zhì)c、雜質(zhì)d、雜質(zhì)xa、雜質(zhì)xb、雜質(zhì)xc和×××標(biāo)準(zhǔn)品適量，分別至一個(gè)容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，混合均勻，得到每個(gè)組分的

29、標(biāo)準(zhǔn)貯備液。每個(gè)成分的濃度均約為0.10mg/ml。（備注：為保證線性范圍，濃度應(yīng)充分精確，并根據(jù)含量折純）。3.4.1.2標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(a)：分別量取每個(gè)雜質(zhì)和×××的標(biāo)準(zhǔn)貯備液各5.0ml,至一個(gè)50.0ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混合均勻。每個(gè)組分的濃度均約為10g/ml。3.4.1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液分別取標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(a) 0.5ml, 1.0ml, 2.0ml, 4.0ml, 5.0ml, 6.0ml各至一個(gè)25.0ml容量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混合均勻，得到no.1no.6標(biāo)準(zhǔn)溶液。每個(gè)雜質(zhì)和×××的濃度范圍均約為0.2

30、4 g/ml，相當(dāng)于雜質(zhì)含量在0.02%0.24%。3.4.2 測(cè)定分別取no.1no.6標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣，每個(gè)濃度連續(xù)進(jìn)2次，記錄色譜圖至最后一個(gè)組分出峰為止。濃度、峰面積及實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-1表4-7。3.4.3 線性回歸以各組分峰面積平均值對(duì)其濃度（g/ml），使用origin 5.0軟件進(jìn)行線性回歸，得到各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程及相關(guān)系數(shù)r。線性測(cè)試數(shù)據(jù)及結(jié)果見(jiàn)表4-14-7。3.4.4驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)：在每個(gè)組分的線性范圍內(nèi)，各組分峰面積與濃度均應(yīng)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.999。3.4.5線性驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià)雜質(zhì)a的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=153.

31、713x-0.214，相關(guān)系數(shù)為0.99996；雜質(zhì)c的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=62.854x-0.236，相關(guān)系數(shù)為0.9999; 雜質(zhì)d的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=27.520x-0.423，相關(guān)系數(shù)為0.9999; 雜質(zhì)xa的含量在0.02%0.24%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=86.007x-0.725，相關(guān)系數(shù)為0.9999; 代表其它雜質(zhì)的×××含量在0.02%0.25%的范圍時(shí)，它的線性方程為y=33.579x-0.558，相關(guān)系數(shù)為0.9998; 每個(gè)雜質(zhì)的相關(guān)系數(shù)均大于0.999, 表明它

32、們的峰面積與濃度均呈線性關(guān)系。方法的線性和范圍符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。表4-1 線性測(cè)試的數(shù)據(jù)和結(jié)果溶液no.雜質(zhì) a濃度(g/ml)峰面積平均峰面積1210.200031.0330.9631.0020.400062.7462.3362.5330.8000121.46120.51120.9941.600243.78245.15244.4552.000309.36306.51307.9462.400367.92370.63369.28范圍(g/ml)0.22.4范圍(%)0.020.24線性方程y=153.713x-0.214相關(guān)系數(shù)r0.99996回歸直線linear regression for da

33、ta of impurity a:y = a + b * xparametervalueerror-a-0.214131.00483b153.712810.67848-rsdnp-0.999961.362616<0.0001-表4-2 線性測(cè)試的數(shù)據(jù)和結(jié)果溶液no.雜質(zhì) c濃度(g/ml)峰面積平均峰面積1210.200012.7412.7212.7320.400025.6725.6325.6530.800048.7948.9948.8941.60099.3599.6499.5052.000126.15125.57125.8662.400150.63151.51151.07范圍(g/ml

34、)0.22.4范圍(%)0.020.24線性方程y=62.854x-0.236相關(guān)系數(shù)r0.9999回歸直線linear regression for data of impurity c:y = a + b * xparametervalueerror-a-0.236050.64896b62.853550.43819-rsdnp-0.99990.880036<0.0001-3.5 準(zhǔn)確度3.5.1 以中間精密度項(xiàng)下no.5線性標(biāo)準(zhǔn)溶液為標(biāo)準(zhǔn)，按照以下公式，計(jì)算線性項(xiàng)下no.2no.6溶液中每個(gè)組分的回收率，并計(jì)算平均回收率。未知雜質(zhì)的回收率以×××的進(jìn)行評(píng)

35、價(jià)。 回收率測(cè)試數(shù)據(jù)及結(jié)果見(jiàn)表5-15-7。3.5.2計(jì)算公式：回收率（%）=注：ai：no.2no.6線性標(biāo)準(zhǔn)溶液中每個(gè)組分的平均峰面積； asi：no.5線性標(biāo)準(zhǔn)溶液中每個(gè)組分的平均峰面積；ci：no.2no.6線性標(biāo)準(zhǔn)溶液中每個(gè)組分的濃度，g/ml.csi：no.5線性標(biāo)準(zhǔn)溶液中每個(gè)組分的濃度，g/ml.3.5.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：每個(gè)組分的平均回收率：95.0%105.0%。3.5.4準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià)雜質(zhì)a、雜質(zhì)c、雜質(zhì)d、雜質(zhì)xa、雜質(zhì)xb、雜質(zhì)xc和×××的回收率依次為99.4%, 99.2%, 98.5%, 99.0%, 98.7%, 98.5%和100.5%，回收率的rsd依次為1.2%, 1.8%, 1.4%, 1.8%, 2.9%, 2.5%和2.4%；每個(gè)雜質(zhì)的回收率均介于95.0%105.0%之間。方法的準(zhǔn)確度符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。表5-1雜質(zhì)a回收率測(cè)定數(shù)據(jù)和結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度csi (g/ml)2.000標(biāo)準(zhǔn)平均峰面積asi309.20溶液n