第六章__微生物的生長(zhǎng)繁殖與生存

1、 生生長(zhǎng)長(zhǎng)曲曲線線的的制制作作：接接種種適適溫溫培培養(yǎng)養(yǎng)定定時(shí)時(shí)取取樣樣測(cè)測(cè)定定生生長(zhǎng)長(zhǎng)量量細(xì)細(xì)菌菌數(shù)數(shù)目目的的對(duì)對(duì)數(shù)數(shù)值值時(shí)間時(shí)間t特征：特征： 不立即進(jìn)行細(xì)胞分裂、增殖，數(shù)量不不立即進(jìn)行細(xì)胞分裂、增殖，數(shù)量不變甚至減少變甚至減少停滯期停滯期v影響停滯期長(zhǎng)短的因素影響停滯期長(zhǎng)短的因素 繼靜止期后，由于營(yíng)養(yǎng)物被繼靜止期后，由于營(yíng)養(yǎng)物被耗盡，細(xì)菌因缺乏營(yíng)養(yǎng)而利用貯存物質(zhì)進(jìn)耗盡，細(xì)菌因缺乏營(yíng)養(yǎng)而利用貯存物質(zhì)進(jìn)行內(nèi)源呼吸，即自身溶解。行內(nèi)源呼吸，即自身溶解。特點(diǎn)：特點(diǎn)： p與菌種的遺傳特性有關(guān)與菌種的遺傳特性有關(guān): : 有些細(xì)菌的培養(yǎng)經(jīng)有些細(xì)菌的培養(yǎng)經(jīng)歷所有的各個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期，幾天以后死亡歷所有的各個(gè)生

2、長(zhǎng)時(shí)期，幾天以后死亡, ,有些細(xì)有些細(xì)菌培養(yǎng)幾個(gè)月乃至幾年以后仍然有一些活的細(xì)菌培養(yǎng)幾個(gè)月乃至幾年以后仍然有一些活的細(xì)胞；胞；p與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和有毒物質(zhì)有關(guān)：補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)和能與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和有毒物質(zhì)有關(guān)：補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)和能源，以及中和環(huán)境毒性，可以減緩死亡期細(xì)胞源，以及中和環(huán)境毒性，可以減緩死亡期細(xì)胞的死亡速率，延長(zhǎng)細(xì)菌培養(yǎng)物的存活時(shí)間。的死亡速率，延長(zhǎng)細(xì)菌培養(yǎng)物的存活時(shí)間。代謝活力比對(duì)數(shù)期差，但仍有相當(dāng)?shù)拇x活力，并代謝活力比對(duì)數(shù)期差，但仍有相當(dāng)?shù)拇x活力，并且微生物積累大量的貯存物，強(qiáng)化了生物吸附能力，且微生物積累大量的貯存物，強(qiáng)化了生物吸附能力，在二沉池中泥水分離效果好，出水水質(zhì)好。在二沉池中泥水分離效果

3、好，出水水質(zhì)好。v v 單批培養(yǎng)單批培養(yǎng) 恒濁法恒濁法恒化法恒化法 單 批 培 養(yǎng)單 批 培 養(yǎng)連 續(xù) 培 養(yǎng)連 續(xù) 培 養(yǎng)時(shí)間時(shí)間lg細(xì)胞數(shù)（個(gè)細(xì)胞數(shù)（個(gè)/ml）連續(xù)培養(yǎng)連續(xù)培養(yǎng) 裝置裝置控制對(duì)控制對(duì)象象培養(yǎng)培養(yǎng)基基培養(yǎng)培養(yǎng)基流基流速速生長(zhǎng)速生長(zhǎng)速率率產(chǎn)物產(chǎn)物應(yīng)用應(yīng)用范圍范圍恒濁恒濁器器菌體密菌體密度（度（內(nèi)內(nèi)控制控制）無限無限制生制生長(zhǎng)因長(zhǎng)因子子不恒不恒定定最高最高大量菌大量菌體或與體或與菌體形菌體形成相平成相平行的產(chǎn)行的產(chǎn)物物生產(chǎn)生產(chǎn)為主為主恒化恒化器器培養(yǎng)基培養(yǎng)基流速流速（外控外控制制）有限有限制生制生長(zhǎng)因長(zhǎng)因子子恒定恒定低于最低于最高高不同生不同生長(zhǎng)速率長(zhǎng)速率的菌體的菌體實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室為

4、室為主主n測(cè)定微生物總數(shù)：計(jì)數(shù)器直接計(jì)數(shù)；比測(cè)定微生物總數(shù)：計(jì)數(shù)器直接計(jì)數(shù)；比例計(jì)數(shù)法；比濁法例計(jì)數(shù)法；比濁法n測(cè)定活細(xì)菌數(shù)：平板菌落法（測(cè)定活細(xì)菌數(shù)：平板菌落法（CFU）計(jì)）計(jì)數(shù)；液體稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù)數(shù)；液體稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù)n計(jì)算生長(zhǎng)量：測(cè)細(xì)胞干重法；通過測(cè)細(xì)計(jì)算生長(zhǎng)量：測(cè)細(xì)胞干重法；通過測(cè)細(xì)胞含氮量確定細(xì)胞濃度胞含氮量確定細(xì)胞濃度平板菌落計(jì)數(shù)法平板菌落計(jì)數(shù)法(CFU)最常用的活菌計(jì)數(shù)法。將適當(dāng)稀釋的菌液傾注平板或涂布在平板表面，經(jīng)保溫培養(yǎng)后，以平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以稀釋度就可以計(jì)算出原菌液的含菌量。直徑9cm的培養(yǎng)皿平板上出現(xiàn)菌落數(shù)一般以50500為宜。按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品菌落總數(shù)測(cè)定的計(jì)數(shù)原則

5、，以平板菌落數(shù)在30300之間為報(bào)告依據(jù)。9ml 9ml9ml9ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml222液體稀釋法液體稀釋法對(duì)對(duì)樣品做樣品做10倍連續(xù)稀釋，從適宜的倍連續(xù)稀釋，從適宜的3個(gè)連續(xù)稀釋度個(gè)連續(xù)稀釋度中各取中各取5ml試樣，接種試樣，接種3組共組共9支裝有培養(yǎng)液的試支裝有培養(yǎng)液的試管中（每管接入管中（每管接入1ml）。）。經(jīng)培養(yǎng)后，記錄每個(gè)稀經(jīng)培養(yǎng)后，記錄每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長(zhǎng)的試管數(shù)，然后查釋度出現(xiàn)生長(zhǎng)的試管數(shù)，然后查M.P.N.表（表（most probable number，最大可能數(shù)），根據(jù)樣品稀釋最大可能數(shù)），根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)就可計(jì)算處其中的活菌含量。倍數(shù)就可計(jì)算處

6、其中的活菌含量。9ml 9ml9ml9ml1ml1ml1ml3331ml1ml1ml1ml首先將待分離的樣品進(jìn)行連續(xù)稀釋首先將待分離的樣品進(jìn)行連續(xù)稀釋, ,目的是得到高度稀釋目的是得到高度稀釋的效果的效果, ,使一支試管中分配不到一個(gè)微生物。如果經(jīng)過稀使一支試管中分配不到一個(gè)微生物。如果經(jīng)過稀釋后的大多數(shù)試管中沒有微生物生長(zhǎng)釋后的大多數(shù)試管中沒有微生物生長(zhǎng), ,那么有微生物生長(zhǎng)那么有微生物生長(zhǎng)的試管得到的培養(yǎng)物可能就是由一個(gè)微生物個(gè)體繁殖而的試管得到的培養(yǎng)物可能就是由一個(gè)微生物個(gè)體繁殖而來的純培養(yǎng)物。來的純培養(yǎng)物。這種方法適合于細(xì)胞較大的微生物。這種方法適合于細(xì)胞較大的微生物。液體稀釋法液體稀

7、釋法2n溫度溫度npHpHn溶解氧溶解氧n氧化還原電位氧化還原電位n水活度水活度n滲透壓滲透壓 p 類型類型與與O O2 2關(guān)系關(guān)系代謝類型代謝類型專性好氧專性好氧必須有氧必須有氧好氧呼吸好氧呼吸微好氧微好氧有氧，含量低有氧，含量低好氧呼吸好氧呼吸兼性兼性可有、可無可有、可無有氧呼吸或發(fā)酵有氧呼吸或發(fā)酵專性厭氧專性厭氧氧有毒害或致死氧有毒害或致死無氧呼吸無氧呼吸耐氧耐氧可在有氧下存活，可在有氧下存活，不用氧氣不用氧氣發(fā)酵發(fā)酵第三節(jié)第三節(jié) 其他不利環(huán)境因子對(duì)微生物其他不利環(huán)境因子對(duì)微生物的影響的影響消 毒（ 部 分 殺 滅 ）殺 菌溶 菌滅 菌（ 徹 底 殺 滅 ）殺 滅防 腐（ 抑 制 霉 腐

8、 微 生 物 ）化 療（ 抑 制 宿 主 體 內(nèi) 病 原 菌 ）抑 制除 菌控 制 有 害 菌 的 措 施X X射線和射線和 射線射線類型 名稱及使用方法 作用原理 應(yīng)用范圍鹵素及其化合物0.20.5mg/L氯氣10%20%漂白粉0.5%1%漂白粉2.5%碘酒破壞細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)飲水、游泳池水地面水、空氣等皮膚 染料2%4%龍膽紫與蛋白質(zhì)的羧基結(jié)合皮膚、傷口 酸類 0.1%苯甲酸 0.1%山梨酸食品防腐食品防腐極端極端溫度溫度影響影響消毒消毒巴斯德消毒法巴斯德消毒法煮沸消毒法煮沸消毒法滅菌滅菌灼燒灼燒烘箱熱空氣法烘箱熱空氣法 （160170）干熱滅菌法干熱滅菌法濕熱滅菌法濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌高

9、壓蒸汽滅菌（0.105MPa，121）牛奶、飲品牛奶、飲品常壓蒸汽滅菌常壓蒸汽滅菌（100） 菌菌 連續(xù)在培養(yǎng)基上（內(nèi)）移種連續(xù)在培養(yǎng)基上（內(nèi)）移種 種種 生活態(tài)生活態(tài) 傳代培養(yǎng)保藏法傳代培養(yǎng)保藏法 連續(xù)在活宿主上（內(nèi)）移種連續(xù)在活宿主上（內(nèi)）移種 保保 固體斜面固體斜面 藏藏 濕法濕法 半固體瓊脂柱半固體瓊脂柱 方方 休眠態(tài)休眠態(tài) 液體介質(zhì)（蒸餾水、糖液、其它溶液）液體介質(zhì)（蒸餾水、糖液、其它溶液） 法法 干法干法 藏在玻璃管內(nèi)藏在玻璃管內(nèi) 吸附在合適的載體上吸附在合適的載體上方法名稱方法名稱主要措施主要措施適宜菌種適宜菌種保藏期保藏期評(píng)評(píng)價(jià)價(jià)冰箱保藏法（斜冰箱保藏法（斜面）面）冰箱保藏法（半冰箱保藏法（半固體）固體）石蠟油封藏法石蠟油封藏法*沙土保藏法沙土保藏法冷凍干燥法冷凍干燥法低溫低溫低溫低溫低