植物生物學(xué)實驗_二_2根系活力的測定a-萘胺氧化法

1、實驗二、根系活力的測定實驗二、根系活力的測定 a a- -萘胺氧化法萘胺氧化法 植物生物學(xué)實驗(二)植物生理學(xué)基礎(chǔ)與綜合實驗一、實驗?zāi)康囊弧嶒災(zāi)康?了解根系活力的生理意義； 掌握a-萘胺氧化法, 測定根系活力的原理與方法。 掌握分光光度計的使用過程和注意事項二、實驗原理二、實驗原理（一）植物根系的生理功能: 輸導(dǎo) 固著 合成 貯藏根系吸收無機鹽的過程：根系吸收無機鹽的過程： 部位：根尖根尖，根毛區(qū)最活躍。 步驟1.呼吸釋放co2；2.形成h2co3；3.h+與hco3 -吸附在根表面。4.溶液中陰陽離子分別與hco3 -、 h+交換。5.吸收，進入根內(nèi)部。6.運輸。 根系活力即根的生長情況和

2、代謝水平。它直接影響植物地上部的生長和營養(yǎng)狀況以及產(chǎn)量。 植物根系中的過氧化物酶能氧化-萘胺，生成紅色的-羥基-1-萘胺，并沉淀于根表面，將根系染成紅色。 一般來說根呼吸強度越大，即該酶的活力越強，對-萘胺的氧化力也越強，染色也越深。 可以根據(jù)根系表面著色深淺，觀察并判斷根系活力大小，也可通過測定溶液中未被氧化的-萘胺的量，以測定根系活力。（二）根系活力的意義與測定方法（二）根系活力的意義與測定方法定性觀察定性觀察 根系表面紅色越深，說明根系活力越強。定量測定定量測定 剩余的-萘胺在中可與對氨基苯磺酸（sulfanil-amide）和亞硝酸鹽作用生成穩(wěn)定的紅色偶氮染料。定量測定定量測定對-苯磺

3、酸-偶氮-萘胺生成的紅色偶氮化合物在ph 7.0時在處有最大吸收峰，可用分光光度法測定光吸收值，從而利用此反應(yīng)來間接測定溶液中-萘胺的量。 注意：注意： od510越大-萘胺剩余越多根系活力越弱 反應(yīng)液的酸度大則增加重氮化作用的速度，但降低偶聯(lián)作用的速度，顏色比較穩(wěn)定。增加溫度可以增加反應(yīng)速度，但降低重氮鹽的穩(wěn)定度，所以反應(yīng)需要在相同條件下進行。三、實驗材料與儀器設(shè)備 （一）實驗材料 水稻(oryza sativa l.)等水生植物的須根系。 （二）儀器與用品 分光光度計、天平、恒溫培養(yǎng)箱、三角燒瓶、量筒、移液管、剪刀、玻棒。（三）試劑 -萘胺溶液：先用少量的95%，然后加水定容。分別配制50

4、 g/ml、25 g/ml溶液。 0.1 mol/l磷酸緩沖液，ph 7.0。 1%對氨基苯磺酸溶液：溶解于30%的溶液中。 0.01%亞硝酸鈉溶液。四、實驗步驟 ：處理：1. 挖取處于不同生長狀態(tài)的須根系植株（如水稻、豌豆苗根系等）數(shù)株，洗凈根部后再用濾紙吸去根上附著的水分。2.觀察觀察 將植株根系浸入盛有25 g/ml -萘胺溶液并用黑紙包裹的容器中，靜置24-36小時后觀察根系著色情況。 比較不同植株根系活力大小，并與植物生長勢比較，分析植物生長勢與根系活力之間的關(guān)系。 （二）定量測定（二）定量測定 取50 g/ml 的-萘胺溶液和0.1 mol/l ph 7.0的磷酸緩沖液各25 ml

5、，置于三角瓶中，混勻。 稱取根系2 g浸沒于三角瓶中的溶液中。 同樣地，取50 g/ml的-萘胺溶液和0.1 mol/l ph 7.0的磷酸緩沖液各25 ml，置于另一三角瓶中，混勻，不放根系作為對照。步驟步驟1、實驗處理、實驗處理步驟步驟2、實驗初始值測定、實驗初始值測定 5min后，分別從兩瓶中各取2 ml溶液，按照步驟4作。 記錄od（實驗組）與od0（對照組）。步驟步驟3、實驗終了值測定、實驗終了值測定 將兩三角瓶置于25恒溫箱中避光保溫60min后，各取2 ml ，按照步驟4作第二次測定。 記錄 od（實驗組）與od0（對照組）。步驟步驟4、a a-萘胺含量測定萘胺含量測定 取2 m

6、l培養(yǎng)液加10 ml水混勻，再加入1 ml對氨基苯磺酸溶液與1 ml亞硝酸鈉溶液，混勻，觀察溶液顏色變化，再定容至25 ml。 室溫25min后，于510nm處測定吸光度（od）值。步驟步驟5標(biāo)準曲線制作：標(biāo)準曲線制作： 以50 g/ml的-萘胺溶液為母液，配置40、30、20、10、5、0 g/ml的溶液各10 ml。 各取2 ml，按照步驟3分別反應(yīng)，并測定od值。以od值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制-萘胺溶液的標(biāo)準曲線?；蛘吒鶕?jù)濃度與od值關(guān)系直接計算回歸方程。6換算濃度換算濃度 分別查對標(biāo)準曲線，或利用回歸方程直接計算出實驗組與對照組溶液實驗前后對應(yīng)的-萘胺濃度（ c、c與 c0、c0 ）。7計算根系活力計算根系活力 根據(jù)實驗結(jié)果計算不同植株根系對-萘胺的生物氧化強度（mg -萘胺/gfwh），并與植物生長勢比較，分析它們之間的關(guān)系。 a-萘胺生物氧化強度= 48ml（c-c）-48ml（c0-c0） 2g1h 五、思考題五、思考題為什么利用a-萘胺氧化法測定植物的根系活